11と直接髄腔内投与LPAのを誘導する能力を有していますげっ歯類における慢性疼痛反応12。環状ホスファチジン酸(cPA)およびその安定な類似体であるカルバ環ホスファチジン酸(ccPA)はオートタキシンの阻害剤であり、それらは動物モデルにおいて急性および慢性疼痛を阻害することが示されています13。オートタキシンの小分子阻害剤は、LPAの局所的産生を阻害しそしてそれを阻害することが示されている。炎症性疼痛の代理尺度。これらのデータは、炎症性および神経因性疼痛におけるオートタキシンおよびLPAの役割についての証拠を提供しています。最近、オートタキシンの血漿および滑液レベルが膝OAの重症度と相関することが報告されています17。そのオートタキシン阻害はOAおよび他の炎症状態の治療上の利点を持っている可能性が示唆され、。オートタキシン阻害が筋骨格痛のモデルにおいて有効であるかどうかは現在知られていない化学的および外科的に誘発されたOAまたは骨折に起因するものなど。この研究の目的は、改良された薬物動態プロファイルを有する、新規で非常に強力で経口的に利用可能なオートタキシンの阻害剤を開発し、筋骨格痛の動物モデルにおける有効性を決定することであった。本稿では、ラットにおける血漿LPAレベルの用量依存的阻害および筋骨格疼痛の様々なモデルにおける疼痛反応の同時阻害を示す、オートタキシンの強力な阻害剤としての化合物-1の開発と特徴付けについて述べる。関節痛のヨード酢酸ナトリウム(MIA)と半月板涙液モデルおよび骨折痛の骨切り術モデル。方法オートタキシン活性測定法(コリン放出測定法)試薬:Hisタグ付きヒトおよびラットオートタキシンを293E細胞で発現させ、Lillyのニッケル親和性およびサイズ排除カラムを使用して精製した。Lipids、855675P、最終30μM)と共に37°Cで1時間インキュベートした。この反応へのコリンオキシダーゼ(Sigma、C5896)、西洋ワサビペルオキシダーゼ(Sigma、P8125)およびamplexウルトラレッド(Invitrogen、A36006)の添加は、オートタキシンによって遊離されたコリンの測定を可能にする。放出されたコリンはコリンオキシダーゼによって酸化され、ベタインと過酸化水素を生じる。EM蛍光光度計で測定した。50は、OLOと呼ばれる内部Lilly曲線適合ソフトウェアを用いた4パラメーター曲線適合を使用して計算した。蛍光シグナルを非特異的に阻害する化合物を、塩化コリン(Sigma、C7017)(最終1.33μM)を使用し、かつオートタキシンを添加せずに、アッセイの改変型でスクリーニングした。Biologicals(Pipersville、PA)から購入した。血漿を様々な濃度の化合物と共に37°Cで3時間インキュベートした。3時間のインキュベーション後、内因性オートタキシンをキレート化するためにEDTAを添加した。プレートを密封し、そして-80°Cで貯蔵した。LPAレベルを測定するために、プレートを氷上で解凍し、200μlの抽出緩衝液(メタノール、LPA内部標準を含む)を添加することによって抽出し、質量分析による全LPA分析にかけた。50値は、OLO曲線当てはめソフトウェアを用いた4パラメータ曲線当てはめを用いて計算した。MS法14を用いて測定した。20:4)の連続希釈によって得られた検量線によって定量した。動物研究MIA試験および半月板裂傷試験については、それぞれ約8週および15週の雄のルイスラット(ハーラン、インディアナポリス、IN)を使用した。ラット骨切り術モデルでは、8週間前に卵巣摘出した33〜34週齢の雌ラットを使用した。12時間の暗のサイクルで維持した。データ収集中を除いて、動物は常に食料と水に自由にアクセスできた。よって承認されたプロトコルに従って実施した。疼痛測定は、無力試験を用いて盲検法で行った。MIAと食塩水を注入した膝との間、または外科的膝と非外科的膝との間(半月板裂傷モデルおよび骨切り術モデル)。各値は、ラット1匹あたり1秒間に得られた3つの別々の測定値の平均を表す。kgであり、動物は体重に基づいてブロックランダム化割当ツール(BRAT)を用いて実験群に無作為化された。関節痛のMIAモデル標準MIAモデルでは、各ラットの右膝に50μlの生理食塩水中の0.3mg(低用量)のMIAを注射し、左膝に50μlの生理食塩水を注射した。