保有するキメラマウスを樹立し、椎間板変性モデル作出に供し、変性で発生するイベントを検証し、霊長類化椎間板の有用性を明確にすることである。実験動物モデルの研究において霊長類と齧歯類の椎間板髄核の性状に大きな相違が存在する問題があるため、霊長類化椎間板を持つ実験動物の樹立を考えた。霊長類ES細胞や人工多能性幹細胞(iPS細胞)の樹立技術の誕生と胚発生技術を融合させることによる霊長類化臓器を持つキメラマウスの誕生が理論的に可能となったため、この先駆的技術を椎間板変性研究に応用することが特徴である。Genet.9:e1003204.2013.)の受精卵に対して本大学で樹立されたチンパンジーiPS細胞をマイクロインジェクション法で投与して子宮内移植をおこない後期胚を採取した。その胚サンプルに対してマウス胚発生に移植霊長類細胞が貢献しているか検討した。現時点で臓器特異的欠損をきたす変異マウスの受精卵に対して霊長類細胞を移植しても発生期間において移植霊長類細胞の生着と臓器発生への貢献を認めることが出来なかった。モニタリングマウスであるPax1-lacZマウスを準備完了している。移植後に生着し臓器発生への貢献をするための方法を模索している。持つキメラマウスの作製と椎間板変性実験への応用を主な目的とする。ES細胞とアグリゲーション法によってキメラマウスの作製を行う。適性にキメラマウス内で椎間板髄核が霊長類由来細胞で構築されているか確認を行う。上記のため、平成25年度の実験を行った。Genet.9:e1003204.2013.)の受精卵に対して本大学で樹立されたチンパンジーiPS細胞をマイクロインジェクション法で投与して子宮内移植をおこない後期胚を採取したが、臓器特異的欠損をきたす変異マウス内で移植霊長類細胞の生着と臓器発生への貢献を認めることが出来なかった。この原因として、1ホストの変異マウス受精卵の状態が悪い(未分化を維持できていない等)、2マイクロインジェクション法で投与した霊長類iPS細胞の状態が悪い(未分化を維持できていない等)、3マイクロインジェクション法の手技が適正でない、上記を考えたが、1移植された変異マウス受精卵は後期胚まで発生可能であり、同時に行ったキメラマウスは予想通り適正に作出が来ている、2チンパンジーiPS細胞は樹立者チームで多能性が維持できていることが確認されている、3同時にマイクロインジェクション法により作出したキメラマウスは適正に出生したことより、全ての実験操作は適正に行われたと考えられる。きたす変異マウスの受精卵に対して霊長類細胞を移植しても発生期間において移植霊長類細胞の生着と臓器発生への貢献を認めることが出来なかった」理由として、「霊長類ES細胞/iPS細胞がナイーブ化していない」ことが原因であると推測した。キメラマウスを作出することにした。充実しており汎用性が高く、申請者の専門分野であるというだけでなく、現在、本研究に理想的な環境とサンプルを有しているので選択した。一連の病理現象として解析し理解する事が出来ると考えている。Genet.9:e1003204.2013.)の受精卵内にチンパンジーiPS細胞をマイクロインジェクション法で投与して子宮内移植をおこない後期胚を採取したが、変異マウス胚は得られたが、既にこの変異マウスの表現型で認めていた特異的臓器欠損は遺残しており、霊長類細胞を移植しても発生期間において移植霊長類細胞の生着と臓器発生への貢献を認めることが出来なかった。現在、これを克服するための対策が必要となっている。その方針として、1霊長類ES細胞、霊長類iPS細胞のナイーブ化操作を行い再度移植実験、2チンパンジーiPS細胞だけでなくその他の霊長類の万能/多能生幹細胞を入手/移植実験に使用、3移植ホストである変異マウスの受精卵の条件を変更、上記を考えている。センター・センター長・佐々木えりか先生とその樹立されたマーモセットES細胞が寄託されている理化学研究所・バイオリソースセンター(BRC)に既に連絡、マーモセットES細胞の提供承諾済であり、3変異マウスの受精卵への移植の際に、移植時期の検討、補助細胞を同時移植の検討を行う。Funding58,891円残額があることを失念し、既に全額使用済みと考え最終確認をしていなかったため。