¥32,500製品説明[α-32P]、[3H]dCTPを用いてDNAをラベルし、ハイブリダイゼーション用のDNAプローブを作製するためのキットである。FeinbergとVogelsteinの方法に改良を加えたもので、簡単な操作で高比放射活性のDNAプローブが作製できる。Primerを用いて、50~55°Cで反応させることにより、高次構造を持つようなDNAを鋳型としても10分以内で高比活性の標識DNAを得ることができる。Fragmentを用いる場合より長いプローブが合成される。Polymeraseは5'→3'exonuclease活性を欠失させているため、長時間反応しても取り込みは低下しない。bp以下の鋳型DNAを使用すると取り込み率が低下したり、十分な長さのプローブが得られない場合があります。6070)を用いた末端標識をお勧めします。primerのアニーリング効率が低くなり、取り込み率が低下する懸念があります。6045)の使用をお勧めします。ランダムプライマーDNAラベリング法についてハイブリダイゼーション法によりDNA中に存在する特異的配列を検出する際には、非常に高い比放射活性を持つDNAプローブが必要である。このDNAプローブ作製のために用いられるDNA標識法としては、従来はニックトランスレーション法が主に用いられていたが、このニックトランスレーション法には、次のような欠点があることが知られている。1.放射性物質の取り込み率が比較的低い。exonuclease活性によりすでに取り込まれた放射性物質が遊離し、取り込み率が低下する。3.鋳型となるDNAが高純度であることが必要である。4.反応後に未反応の放射性dNTPを除去する必要がある。Fragmentを用いてDNAの標識を行う方法は、これらの欠点を持たないDNA標識法である(表1)。その原理を図1に示した。Fragmentを用いて相補鎖合成を行う。このとき、dNTPの一つあるいは複数に〔α-32P〕〔α-35S〕〔3H〕等の標識化合物を用いると、合成される相補鎖が標識される。この相補鎖を熱変性により一本鎖とし、ハイブリダイゼーションプローブとして用いることができる。長時間の反応により取り込み率が低下する。短時間で高非活性プローブが得られる。長時間の反応を行っても取り込み率は低下しない。アガロース等の混入によって反応が阻害される。アガロース等の混入によってほとんど阻害されない。ゲルろ過による未反応dNTPの除去が必要。反応液から未反応dNTPの除去をすることなくハイブリダイゼーションに用いることができる。ランダムプライマーによるDNA標識の原理この製品を見た人は、こんな製品も見ています。弊社の取扱い製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。して使用しないでください。ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。