精子は生きている細胞であるため、体外に取り出した後はできるだけストレスのない環境に置いておかなければなりません。そのため採卵で卵胞を吸引してから、胚移植で患者さんの子宮に戻すまでの間、専用の培養液を使って培養する必要があります。向かって右からミネラルオイル(透明)、培養液1(赤色)、代替血清(黄色)、培養液2(赤色)、洗浄用培養液(透明)、培養液1と2には、卵へのストレスを減らすために代替血清を入れて使っています。採卵で卵胞液の中から卵をとり出すときにつかうシャーレです。4つの穴と真ん中の十字のくぼみに培養液1が入っています。4つの穴の上にはオイルがかぶせてあります。卵は顕微授精まで少し時間をおく必要があります。このシャーレの真ん中に卵を入れて2時間ほど培養します。くぼみが二重になっていて、どちらにも培養液1が入っていて真ん中にはオイルがかぶせてあります。採卵で得られた卵は、周りに卵の発育を助けてきた細胞がついています。この細胞は顕微受精をする場合には剥がす必要があります。このシャーレは卵のまわりについている細胞を剥がすときに使うシャーレです。培養液1の上にオイルをかぶせて培養液の蒸発やpHの変化を防ぎます。細胞を剥がした後に、卵を洗浄するためのシャーレです。12個の培養液1の上にオイルをのせています。顕微授精が終了したあとに受精卵をいれるシャーレです。12個の培養液2の上にオイルがのせてあります。卵子と精子に使う培養液と、受精卵につかう培養液が違うのは、必要とされる成分が異なるためです。紹介したシャーレに加え、精子調製用の培養液1と採卵でつかう洗浄用培養液をボトルに用意します。採卵前日に培養液を用意して、インキュベーターの中に一晩いれておきます。インキュベーターの中は37°Cになっており、O2が5%でCO2が6%と濃度が制御されています。これは卵管内の状態に近づけ、卵子や受精卵にストレスを与えないようにするためです。受精卵を入れるシャーレはタイムラプスインキュベーターの中に入れます。それ以外のシャーレは全てこちらのインキュベーターの中に入れます。このあと一晩かけて培養液と使用する器材はゆっくりとあたたまりながら患者様の卵子を受け入れる頃にちょうど良い状態になります。※実際に使用するシャーレ等は全て、取り違え防止のため患者様の情報の記入しています。体外受精当日朝におこないます。採取された精液には、卵との受精を妨げてしまう成分が含まれています。通常射精された精子は子宮頸管から卵管へと進むにつれて受精できる能力を会得していきます。そのため、体外で受精を行うIVFの場合は、精液中に含まれる白血球や細菌などの受精の妨げになるものを除去し、さらに、培養液で洗うことで、受精に用いることができる状態にします。動いていない精子や動いていても動きの鈍い精子、形の異常な精子、さらには精子以外の丸い細胞など多数の夾雑物を含んでいます。この中で形の良い動いている精子を選ぶ必要があります。精液の中から精子を分離するために、2つの密度の違う溶液を使います。この溶液は精子に悪影響を与えません。2つの密度の違う溶液を重ねて、その上に精液をのせます。精液の入ったチューブに遠心力をかけて精子を分離します。分離後には3つの層にわかれます。上の層は精漿といって、白血球や細菌などが含まれています。真ん中の層は、発育不十分な精子や死んでしまった精子などが含まれます。形の異常な精子の多くもこの層に含まれます。下の層には、良い状態の精子が多く集まります。分離に使った溶液を培養液で洗浄し、遠心力をかけて精子を下に集めます。最後に少量の培養液で精子を濃縮して精子調製が完了します。洗浄が終了したあとの精子です。精子が濃縮されており、白血球なども見られず、元気の良い形の良い精子が多く見られます。岩城産婦人科では午前中に採卵します。患者さんは採卵ベッドに横になります。院長が経膣超音波で卵胞の位置を確認しながら、卵子を卵胞液ごと吸引します。↑採卵室の隣に、培養室があります。●採取できた卵胞液は、胚培養士が受け取ります。●試験管が卵胞液にいっぱいになったら、その都度、看護師が奥の培養士に手渡します。●試験管を受け取ったら、ただちに培養士が卵胞液のなかの卵子を培養液に移します。●できるだけ早く移したほうが卵子をいためないので、できるだけ素早くおこなっています。卵子が受精しやすくなるまで培養を続けます。※2時間、前培養というものをします。酸素濃度や温度などが調節されています。卵子は受精しやすい状態になります。●顕微鏡で卵子の状態を確認します。●精子ふりかけ法(媒精)または顕微授精を行います。体外受精には、顕微授精と精子ふりかけ法があります。小さいサイズの針を使って、顕微鏡で観察しながら、精子を卵子に注入する方法が顕微授精です。↓1とても細い針で、精子を選ぶ自然妊娠で精子が卵子に受精するには、いくつかの障害が存在します。●精子が自ら泳いで卵子へたどり着かなければならない●卵子を囲う透明帯を通過しなければならないなど精子の数が少なかったり、運動性が低かったりすると、障害を突破することができません。動き・形の良い精子を卵子に直接注入することで、こういった障害がなくなります。卵子の入ったシャーレの中に精子を一緒に入れて、精子が自力で卵子の中へ泳いで入って受精します。採卵でとれた卵子に、精子調整をした精子をかけて受精させる方法が、精子ふりかけ法です。https://gamp.ameblo.jp/po4ku3chi2/entry-12420368321.html精子が自力で泳いで卵子へたどり着く必要があるので、精子の数や動きが良好でないといけません。精子をかけた後は、一晩培養して、翌朝に受精しているかどうかを確認します。その後は、顕微授精と同じように、最新の培養器(タイムラプスインキュベーター)で培養となります。顕微授精にするか、精子ふりかけ法にするか、選ぶ時の精子の状態の基準を、ミシガン大学と同じ基準にしています。患者様ご本人のご希望をおうかがいして決定します。顕微授精では、卵子に針を刺して、注射器で注入するみたいに精子をいれます。岩城産婦人科では、もっと弱い力で精子を注入する技術を、2013年に、全国的にも早い段階で導入しました。機械によって針先が非常に細かく震えます。細かく震える針先で卵子の膜に刺してゆっくりと精子を入れます。顕微授精の顕微鏡に、ピエゾの機械をつけます。針が震えるといいのか?顕微授精のときは針で卵子を傷つけてしまう可能性がありますが、ピエゾ顕微授精では卵子を傷つける可能性がかなり低くなります。ピエゾ顕微授精の流れ良い精子を選んでます。通常の顕微授精と同じです。ピエゾの機械の震えがあるので、とても弱い力で針を進められます。通常の顕微授精よりかなり優しい力です。