2018/11/20TwitterFacebookGoogle+はてブ一昔前までは、DNAコンストラクションと言えば、同じ制限酵素で切断したDNA断片(あるいは異なる制限酵素であっても切り口が同一の断片)を、DNAリガーゼで結合させるというのが一般的でした。そのため、DNAコンストラクションを考えるときには、どんな制限酵素が使えるかというのは大問題だったわけです。テクノロジーの進歩により時代はすっかり様変わりしました。GeneArtなど、短いホモロジーをもつDNA断片をひとつにする方法が相次いで開発され、手軽に使えるキットが市場に出回った結果、DNAのコンストラクトを作成するときに制限酵素サイトが不要になったからです。今となっては、DNAコンストラクションを行うための適当な制限酵素サイトで知恵を絞るのは、自分が昔学んだやり方にこだわり続ける、一部の高齢の研究者だけなのでしょうか。最先端の研究を行うためには新しいテクノロジーをいち早く自分の研究に取り入れる必要があるわけですが、その一方で、研究者というのは、ある部分非常に保守的で、自分が過去にうまくいったやり方に固執してしまうものです。それがすっかり時代遅れなものになっていたとしても。各メーカーからいくつかのキットが発売されており、一般的に使われていますが、制限酵素サイトで悩む必要がないということをわかりやすく伝える動画(2010年)をまずは見てみましょう。原理が歌に乗せて説明されています。アッセンブリー」という製品を推奨しているようです。AssemblyIn-FusionNEBのギブソンアセンブリーと並んで、人気を二分するのが、クローンテックのIn-Fusion(販売:Takara)。kitなどの名称で様々なメーカーから商品化されていますが、その多くが高価で、資金の乏しい研究室では購入を躊躇しているかもしれません。そのような方に、ぜひ試していただきたいのがこのSLiCE法です。iVECiVEC大腸菌株(AQ3625株)は、PCR増幅した挿入DNA断片とベクターDNAを同時にトランスフォームするだけでシームレスクローニングができるという大腸菌株です。価格:\44,000で、結局、どのキットがいいの?似たような原理にもとづいて同じことができるキットが複数のメーカーから発売されているため、どれが一番いいの?という疑問が生じます。同じラボ内でも研究者ごとに選択肢が異なっていたりもしますので、実験目的、好み、最初にうまくいったからといった理由で決まるのかもしれません。ちなみに自分はIn-Fusionしか使った経験がありません。知り合いが使っていて、初めて知ったのがたまたまIn-Fusionだったからというだけの理由です。ラボ内の同僚は違うキットを愛用しているようです。高い試薬キットを使うときに、メーカーによって推奨される容量よりもスケールダウンすることにより使用量を節約して、使う回数を増やすということがラボではよく行なわれています。1/10スケールで、Gibsonは1/5スケールで。2014年10月11日まだ制限酵素使ってんの?今の状況がわかるツイートを紹介。Assemblyが一般的となった今、もう制限酵素を使ってクローニングしているラボなんて、世界中どこを探してもないだろう」と同僚が説明していて、いやまだ使ってるところ絶対あるよ!たぶん結構あるよ!と思ったのは内緒。時代がすっかり変わったねという認識を促すレビュー記事をいくつか紹介。Cloning:GRCがinvitrogenからkit化されて発売されています。Assemblyという名前です。views座長の英語:「次の発表者は~さんです。