本発明者らにより、遺伝的あるいは環境的な要因によりCdkal1の発現量や活性が低下すると、リジンtRNAのチオメチル化が低下し、その結果、インスリンの翻訳精度が低下し、2型糖尿病が発症するというメカニズムが示され、リジンtRNAのチオメチル化は糖尿病発症と密接に関連することが判った。ミトコンドリアDNAがコードするミトコンドリアtRNAにもチオメチル化が存在する。6235-6240(2012))。このようにtRNAのチオメチル化は疾患の新たなバイオマーカーとして注目されている。質量分析法では、まず、組織や細胞からtRNAを精製したのち、ヌクレアーゼによりtRNAを数個のオリゴヌクレオチドまで消化する。その後、消化されたオリゴヌクレオチドを精製し、逆相液体クロマトグラフィ及び質量分析機にて分析することによりチオメチル化を検出する。この質量分析によるチオメチル化の検出は、多量のRNA(mg単位)を必要とするが、臨床サンプルは量が一般的に限られ、mg単位のサンプルを入手することが困難である。そのため、臨床サンプルを用いて、質量分析によりチオメチル化を検出することは困難である。質量分析によるチオメチル化検出法は、上述したように多くの前処理が必要であるため、チオメチル化を検出するまでに数日かかり、迅速な検出ができないばかりか、コストが嵩むという問題がある。多くの試料を同時に扱うことは困難である。その上、質量分析機は非常に高価であり、また、使用するためには熟練した経験が必要とされるため、一般的な医療機関や研究室で分析を行うのは困難であるという問題がある。上記したように、質量分析法は時間及びコストがかかり、更には、多量の臨床サンプルを入手することは困難であるという問題のため、RNAのチオメチル化の検出法として質量分析法は臨床応用に対応できない。従って、RNAのチオメチル化を効率よく、つまり迅速にそして安価に検出でき、更には、少ないサンプルを用いて検出できる、新しい検出法が望まれていた。Japanese)本発明は、逆転写法を用いてRNA修飾を検出する方法に関する。本発明はまた、逆転写法と核酸増幅法、例えばPCR法を組み合わせて、RNAにおける修飾を検出するとともに、修飾の程度を定量する方法に関する。詳しくは、RNAの修飾部位を含む領域と結合するプライマー、及びRNAの修飾部位を含まない領域と相補的に結合するプライマーを含む、少なくとも2種類のプライマーを用いて逆転写を行い、次いで核酸増幅、例えばPCRを行うことにより、該修飾を検出及び/又は定量する方法に関する。本発明はまた、該検出方法を用いた、2型糖尿病に対する遺伝的感受性の検査方法に関する。以下の2つの工程:a.第1プライマーを用いて、該tRNAから逆転写によりcDNAを生成する工程、ここで、該第1プライマーは、該tRNA上の該RNA修飾を有する部位を含む領域と相補的に結合するように設計されたオリゴヌクレオチドである、b.第2プライマーを用いて、該tRNAから逆転写によりcDNAを生成する工程、ここで、該第2プライマーは、該tRNA上の該RNA修飾を有する部位より3’側の領域と相補的に結合するように設計されたオリゴヌクレオチドである、をそれぞれ別々又は同時に行い、それぞれの工程から生成されたcDNA量の差を測定することにより該RNA修飾を検出する方法。前記工程aとbを別々に行う請求項1に記載の方法。前記cDNA量の差を核酸増幅反応又は蛍光法により測定する請求項1又は2に記載の方法。定量PCR法又はリアルタイム定量PCR法を用いて行われる、請求項3に記載の方法。前記cDNA量の差を、核酸増幅反応における核酸の増幅速度の差として測定する、請求項4に記載の方法。前記tRNAに存在するチオメチル化が、Lysに対応するtRNA、Trpに対するtRNA、Pheに対するtRNA、又はSer(UCN)に対するtRNAのいずれかの37番目のアデノシンのチオメチル化である、請求項1に記載の方法。前記tRNAに存在するチオメチル化が、Lysに対応するtRNAの37番目のアデノシンのチオメチル化である、請求項6に記載の方法。前記tRNAがヒト組織又はヒト血液由来のtRNAを含む、請求項1~7のいずれか一つに記載の方法。前記tRNAがヒト末梢血由来のtRNAを含む請求項8に記載の方法。【請求項10】tRNAに存在するRNA修飾率が既知の少なくとも2つの試料、及びRNA修飾率が未知の試料、のそれぞれについて請求項1~9のいずれか一つに記載の方法を行い、それぞれの試料について測定されたcDNA量の差を示すパラメーターを比較することにより、未知の試料中のRNA修飾率を測定する方法。cycle)の差である、請求項10に記載の方法。【請求項12】tRNAに存在するRNA修飾率が未知の試料について請求項1~9のいずれか一つに記載の方法を行い、該試料について測定されたcDNA量の差を示すパラメーターを予め決められている検量線と比較することにより、未知の試料中のRNA修飾率を測定する方法。cycle)の差である、請求項12に記載の方法。該tRNA上の該RNA修飾を有する部位を含む領域と相補的に結合するように設計されたオリゴヌクレオチドである第1のプライマー、および該tRNA上の該RNA修飾を有する部位より3’側の領域と相補的に結合するように設計されたオリゴヌクレオチドである第2のプライマー、を含むキット。前記RNA修飾が、tRNAに存在するチオメチル化である、請求項14に記載のキット。前記tRNAに存在するチオメチル化が、Lysに対応するtRNA、Trpに対するtRNA、Pheに対するtRNA、又はSer(UCN)に対するtRNAのいずれかの37番目のアデノシンのチオメチル化である、請求項15に記載のキット。【請求項17】さらに、PCRを行うための別のプライマーを含む、請求項14~16のいずれか一つに記載のキット。請求項7に記載の方法を用いて、前記tRNAが由来する被験者が2型糖尿病又はそのリスクがあるか否かを判定する方法(但し、医師による診断行為を除く)。前記tRNAは、被験者の組織又は血液に由来するtRNAである請求項18に記載の方法。請求項7に記載の方法を用いて、前記tRNAが由来する被験者のインスリン分泌能を検定する方法(但し、医師による診断行為を除く)。前記tRNAは、被験者の組織又は血液に由来するtRNAである請求項20に記載の方法。