2.上样:将粗酶液上柱。EDTA),预先将DE-52柱进行平衡。EDTA)洗脱杂蛋白。EDTA)进行梯度洗脱。pH9.0硼酸缓冲液(母液为0.8M,用时稀释一倍)、Tris、硫酸铵。(按1g组织相当于1ml体积计算,以此类推)。检查提取液中PH,若高于PH3.0时应及时用10%乙酸调节,使提取液维持PH2.5-3.0之间。收集滤液,量其总体积,弃去沉淀物。5MNaOH溶液调PH至8.0。使其溶液达40%饱和度(每升滤液加242g硫酸铵)。加完后最终PH约3.5,再继续搅拌30min,然后在4°C冰箱中放置过夜。下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀。5%K2CO3,以维持pH的稳定。5h,pH维持在6.5-7.5,洗涤。7000定量PCR仪。