最新ブラウザでの閲覧を推奨します。私たちはウェブサイトをできるだけ使いやすくするために、クッキーを使用しています。クッキー・ポリシーでは、使用するクッキーをオプトアウトする方法について説明しています。クッキーの設定を変更しないままでいる場合、このポリシーに同意しているとみなされます。application.選ぶべき標識物の種類はアプリケーションによって異なります。多く使用される二次抗体は、酵素標識抗体です。免疫組織染色も酵素をベースとした発色系を行うことが多いですが、感度を高めるためアビジン-ビオチン反応を応用したシグナル増幅系を採用する場合には、ビオチン標識抗体を用います。フローサイトメトリーや蛍光細胞染色など、複数のターゲットを同時かつ個別に検出するアプリケーションにおいては、蛍光標識抗体を使用するのが一般的です。種類の標識抗体について、解説します。アルカリフォスファターゼ)があります。安価、安定性が高い、反応が早い、などといった特長が多く、標識酵素として最も広く用いられています。分子上の糖鎖を介して抗体に標識しやすいのも広く用いられている理由のひとつです。サンプルの内在性物質の影響を受けにくい、特異性が高いなどといった特長があります。酵素反応によって呈色や発光などのシグナルを生ずる物質を基質・発色剤といいます。ELISA、後者はウエスタン・ブロッティングや免疫組織染色で広く用いられています。蛍光や化学発光を生ずる基質・発色剤による検出系は非常に感度が高く、ウエスタン・ブロッティングなどで用いられています。低分子化合物で、卵白由来のタンパク質アビジン(Avidin)、あるいはバクテリア由来のタンパク質ストレプトアビジン(Streptavidin)と特異的に結合します。分子結合することを利用し、抗体上に酵素を複数標識する、いわゆる増幅系を構築することができます。)、アビジンによって、抗体分子上に酵素の複合体を作らせるもので、主に高感度を必要とする免疫組織染色で用いられます(下図)。法については各種キットが市販されていますので、詳細は各キットのデータシートをご参照ください。ある波長の光(励起光)を照射されると別の波長の光(蛍光)を出します(蛍光の原理について詳しくは「蛍光について」をご参照ください)。励起光と蛍光の波長は蛍光色素ごとに固有で、蛍光標識抗体など蛍光色素をプローブとして用いた実験においては、その蛍光色素固有の励起波長に近い光を照射し、得られた蛍光をシグナルとして検出します。励起波長と蛍光波長の差(ストークシフト)が小さい蛍光色素では、蛍光の検出に励起光が入り込みやすく、バックグラウンドが高くなります。790784814260,000蛍光色素名をクリックすると、その色素を標識した二次抗体製品のリストのページに飛びます。蛍光波長が離れた蛍光色素を使用すると、同一検体に対して二重あるいは三重に染色することも可能です。このような多重染色を行うに当たっては、以下の点を考慮してください。使用する機器のフィルターに適した蛍光色素を選択してください。nm)を選択してください*2。発現量の低いタンパク質に対して、最も明るい蛍光色素を割り当ててください。複数の二次抗体を使用する際は、異なった動物種由来の一次抗体を使用してください。)のモノクローナル抗体を使用し、それぞれのサブタイプに対応した適切な二次抗体を選択してください。非特異的な交差反応を抑える血清吸着済み二次抗体は、多重染色に特にお勧めです蛍光色素を選択するに当たっては、サンプルの自家蛍光も考慮してください。肝臓の自家蛍光は赤チャンネルで検出されるので、肝臓をサンプルとする際にはこの付近の波長の標識物質は避けてください。蛍光強度(蛍光色素の明るさ)はモル吸光係数に比例します。量子収率など他の要素もあるため、モル吸光係数が高い色素ほど蛍光強度が高いというわけではありません。