×この技術を簡単クリック査定この機能をご利用いただくには、会員登録(無料)が必要です。出願した特許の牽制数、引用された数などを知る事ができます。気になる技術や特許をブックマークしておけば、いつでも後から読むことができます。後で印刷するために、公報をPDFでダウンロードできます。会員登録してastamuseを使えば、もっと簡単に便利にお使いいただけます。会員登録(無料)「astamuse」は世界中の挑戦したい社会課題に挑戦し、未来を創る人のプラットフォームです。関連する未来課題-重要な関連分野-※この項目の情報は公開日時点(2007年8月23日)のものです。高リン酸化リソソーム酵素の組成物、それらの医薬組成物、そのような化合物及び組成物の製造、及び精製方法、並びに特にリソソーム蓄積症を含む、疾患、及び症状の診断、予防又は治療におけるそれらの使用を提供する。技術背景リソソーム蓄積症(LSDs)は、リソソーム内における細胞廃棄物の分解に必須である細胞内の特定のリソソーム酵素の欠損に起因する。そのようなリソソーム酵素の欠損は、当該リソソーム内の分解されない“貯蔵物質”の蓄積を導き、そしてその事態は、リソソームの膨張及び機能不全、そして最終的には細胞及び組織の損傷を引き起こす。多くのリソソーム酵素が同定され、そしてそれらの関連疾患と相互に関連付けられる。欠損酵素が同定されると、治療は、患者の病気に冒された組織へ補充酵素を効果的にデリバリーする単独問題に限定される。11(5):675−85(2002))。ERTは、投与の単一箇所から多くの組織へ酵素を運ぶための脈管構造をうまく利用する。酵素が、広範囲に分配されれば、細胞内に取り込まれなければならない。細胞内への吸収の根拠は、リソソーム酵素の独特な特徴に見出され:リソソーム酵素は、末端マンノース残基の6−位でリン酸塩により特徴付けられる糖蛋白質の別クラスを構成する。al.,J.Cell.Biol.99(6):1907−16(1984))。6−リン酸塩受容体(MPR)は、血液から組織への酵素吸収を方向付け、そして次いでリソソームへの細胞内経路を仲介する。リソソーム酵素製剤の治療有効性は、その製剤におけるマンノース6−リン酸塩の値に決定的に依存する。リン酸塩は、小胞体及び初期ゴルジ体において、翻訳後修飾により糖蛋白質に添加される。折りたたまれたリソソーム酵素は、オリゴ糖修飾酵素により認識される唯一の第3の決定基を示す。当該決定基は、特に間隔のあいた1組のリジンからなり、そして、主要な配列相同性がないにもかかわらず、たいていのリソソーム酵素に見出される。当該修飾酵素である、UDP−GlcNAcホスホトランスフェラーゼは、蛋白質決定基と結合し、そしてGlcNAc−1−リン酸塩を、結合部位に最も近いオリゴ糖の末端マンノース残基の6−位へ添加する。6−リン酸塩末端オリゴ糖を与える。6−リン酸塩の修飾の目的は、細胞内の分泌経路からリソソーム酵素経路へのリソソーム酵素の転用のためである。リン酸塩結合酵素は、トランスゴルジ体内のMPRにより結合させられ、そして当該細胞表面の代わりにリソソームへ送られる。リソソーム酵素のラージスケール生産は、哺乳類細胞系内の発現を含む。当目的は、収穫及びプロセッシングの下流として、周囲の成長培地内への組換え酵素の主要な分泌である。リソソーム酵素の当該ラージスケール生産のための理想的なシステムにおいて、酵素は、効果的にリン酸化され、そして次いで、主にリソソームへ向かうよりもむしろ、主に細胞表面(分泌)へ向かうように方向付けるであろう。上記のように、このリン酸化酵素の割合は、正常細胞中に生ずることのまさに正反対である。リソソーム酵素製造のためにしばしば使用される製造ラインは、酵素1モルあたりのマンノース6−リン酸の値を最大化することに焦点を置き、そして低い特異的生産性により特徴付けられる。マンノース−6−リン酸塩の高い値、並びに非修飾末端マンノースの高いレベルを示す。当該マンノース−6−リン酸塩と酵素のためのマンノース受容体との競合は、有効性のために高用量酵素の必要性をもたらし、そして治療に供される患者に被害を与えるまでにより多くの免疫原性を導き得る。このように、リソソーム蓄積障害の治療技術として、治療効果のあるリソソーム酵素のラージスケール生産のための効果的な及び生産性のあるシステムについての、本分野中における必要性がある。本発明は、高リン酸化リソソーム酵素の組成物、それらの医薬組成物、そのような化合物及び組成物の製造、及び精製方法、並びに特にリソソーム蓄積症を含む、疾患、及び症状の診断、予防又は治療におけるそれらの使用を提供する。請求項1END3相補群CHO細胞において産生される、高レベルのリン酸化、及び低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖を有する、ヒト組換えリソソーム酵素又はその変異体、あるいは当該酵素又は変異体の誘導体。請求項2前記酵素が、酸性αグルコシダーゼ、アスパルチルグルコサミニダーゼ、酸性リパーゼ、システイン輸送体、Lamp−2、α−ガラクトシダーゼA、酸性セラミダーゼ、α−L−フコシダーゼ、β−ヘキソサミニダーゼA、GM2−活性因子欠損、α−D−マンノシダーゼ、β−D−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼA、サポシンB、ノイラミニダーゼ、α−N−アセチルグルコサミニダーゼ、ホスホトランスフェラーゼ、ホスホトランスフェラーゼγ−サブユニット、L−イズロニダーゼ、イズロネート−2−スルファターゼ、ヘパラン−N−スルファターゼ、α−N−アセチルグルコサミニダーゼ、アセチルCoA:N−アセチルトランスフェラーゼ、N−アセチルグルコサミン6−スルファターゼ、ガラクトース6−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、N−アセチルガラクトサミン4−スルファターゼ、ヒアルロノグルコサミニダーゼ、多発性スルファターゼ、パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼI、酸性スフィンゴミエリナーゼ、コレステロール輸送、カテプシンK、α−ガラクトシダーゼB、及びシアル酸輸送体からなる群より選択される、請求項1に記載の酵素。請求項3END3相補群CHO細胞において産生される、高レベルのリン酸化、及び低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖を有する、ヒト組換え酸性αグルコシダーゼ(rhGAA)又はその変異体、あるいは当該酵素又は変異体の誘導体。請求項4前記END3相補群CHO細胞が、G71細胞系又はその誘導体である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の酵素。請求項5高リン酸化ヒト組換えリソソーム酵素群又はそれらの変異体の製造方法であって、以下のステップ:(a)チャイニーズハムスター卵巣(CHO)由来のEND3相補群細胞を培養する;(b)前記END3相補群細胞に好適な哺乳類発現ベクターを製造する;(c)前記発現ベクターで前記END3相補群細胞をトランスフェクションする;(d)END3相補群の形質転換体の選択、及びクローニング;及び(e)生産のための細胞培養プロセス法の最適化、を含む前記方法。請求項6前記酵素が、低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖を有する、請求項5に記載の方法。請求項7請求項5に記載の方法により製造される、リソソーム酵素、その変異体又は誘導体。請求項8請求項7に記載のリソソーム酵素、変異体又は誘導体、及び医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤、を含む組成物。請求項9前記END3相補群CHO細胞が、G71細胞系又はその誘導体である、請求項5又は6に記載の方法。請求項10高リン酸化ヒト組換え酸性αグルコシダーゼ(hrGAA)又はその変異体の製造方法であって、以下のステップ:(a)チャイニーズハムスター卵巣(CHO)由来のEND3相補群細胞を培養する;(b)前記END3相補群細胞に好適な哺乳類発現ベクターを製造する;(c)前記発現ベクターで前記END3相補群細胞をトランスフェクションする;(d)END3相補群の形質転換体の選択、及びクローニング;及び(e)生産のための細胞培養プロセス法の最適化、を含む前記方法。請求項11前記hrGAAが、低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖を有する、請求項10に記載の方法。請求項12請求項10に記載の方法により製造される、高リン酸化組換え酸性αグルコシダーゼ(hrGAA)、その変異体又は誘導体。請求項13請求項12に記載の組換え酸性αグルコシダーゼ(hrGAA)、その変異体又は誘導体、及び医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤、を含む組成物。請求項14前記END3相補群CHO細胞が、G71細胞系又はその誘導体である、請求項10又は11に記載の方法。ムコリピドーシスI型、シアリドーシスI/II型、ムコリピドーシスII/III型I−細胞病、ムコリピドーシスIIIC型偽性ハーラーポリジストロフィー、ムコ多糖症I型、ムコ多糖症II型、ハンター症候群、ムコ多糖症IIIA型、サンフィリポ症候群、ムコ多糖症IIIB型、ムコ多糖症IIIC型、ムコ多糖症IIID型、ムコ多糖症IVA型、モルキオ症候群、ムコ多糖症IVB型のモルキオ症候群、ムコ多糖症VI型、ムコ多糖症VII型、スライ症候群、ムコ多糖症IX型、多発性スルファターゼ欠損症、神経セロイドリポフスチノーシス、CLN1バッテン病、ニーマン−ピック病A/B型、ニーマン−ピック病、ニーマン−ピック病C1型、ニーマン−ピック病C2型、ピクノディスオストーシス、シンドラー病I/II型、シンドラー病、及びシアル酸蓄積病からなる群より選択される、請求項15に記載の方法。技術分野0001本出願は、2004年2月6日に出願された米国仮出願番号60/542,586号に基づく優先権の利益を主張する。本出願は、細胞、及び分子生物学、及び医学の技術分野に関し、特に高リン酸化リソソーム酵素製剤、及びリソソーム蓄積症の治療技術におけるそれらの使用に関する。背景技術0003技術背景リソソーム蓄積症(LSDs)は、リソソーム内における細胞廃棄物の分解に必須である細胞内の特定のリソソーム酵素の欠損に起因する。そのようなリソソーム酵素の欠損は、当該リソソーム内の分解されない“貯蔵物質”の蓄積を導き、そしてその事態は、リソソームの膨張及び機能不全、そして最終的には細胞及び組織の損傷を引き起こす。多くのリソソーム酵素が同定され、そしてそれらの関連疾患と相互に関連付けられる。欠損酵素が同定されると、治療は、患者の病気に冒された組織へ補充酵素を効果的にデリバリーする単独問題に限定される。11(5):675−85(2002))。ERTは、投与の単一箇所から多くの組織へ酵素を運ぶための脈管構造をうまく利用する。酵素が、広範囲に分配されれば、細胞内に取り込まれなければならない。細胞内への吸収の根拠は、リソソーム酵素の独特な特徴に見出され:リソソーム酵素は、末端マンノース残基の6−位でリン酸塩により特徴付けられる糖蛋白質の別クラスを構成する。al.,J.Cell.Biol.99(6):1907−16(1984))。6−リン酸塩受容体(MPR)は、血液から組織への酵素吸収を方向付け、そして次いでリソソームへの細胞内経路を仲介する。0005リソソーム酵素製剤の治療有効性は、その製剤におけるマンノース6−リン酸塩の値に決定的に依存する。リン酸塩は、小胞体及び初期ゴルジ体において、翻訳後修飾により糖蛋白質に添加される。折りたたまれたリソソーム酵素は、オリゴ糖修飾酵素により認識される唯一の第3の決定基を示す。当該決定基は、特に間隔のあいた1組のリジンからなり、そして、主要な配列相同性がないにもかかわらず、たいていのリソソーム酵素に見出される。当該修飾酵素である、UDP−GlcNAcホスホトランスフェラーゼは、蛋白質決定基と結合し、そしてGlcNAc−1−リン酸塩を、結合部位に最も近いオリゴ糖の末端マンノース残基の6−位へ添加する。6−リン酸塩末端オリゴ糖を与える。6−リン酸塩の修飾の目的は、細胞内の分泌経路からリソソーム酵素経路へのリソソーム酵素の転用のためである。リン酸塩結合酵素は、トランスゴルジ体内のMPRにより結合させられ、そして当該細胞表面の代わりにリソソームへ送られる。0006リソソーム酵素のラージスケール生産は、哺乳類細胞系内の発現を含む。当目的は、収穫及びプロセッシングの下流として、周囲の成長培地内への組換え酵素の主要な分泌である。リソソーム酵素の当該ラージスケール生産のための理想的なシステムにおいて、酵素は、効果的にリン酸化され、そして次いで、主にリソソームへ向かうよりもむしろ、主に細胞表面(分泌)へ向かうように方向付けるであろう。上記のように、このリン酸化酵素の割合は、正常細胞中に生ずることのまさに正反対である。リソソーム酵素製造のためにしばしば使用される製造ラインは、酵素1モルあたりのマンノース6−リン酸の値を最大化することに焦点を置き、そして低い特異的生産性により特徴付けられる。マンノース−6−リン酸塩の高い値、並びに非修飾末端マンノースの高いレベルを示す。当該マンノース−6−リン酸塩と酵素のためのマンノース受容体との競合は、有効性のために高用量酵素の必要性をもたらし、そして治療に供される患者に被害を与えるまでにより多くの免疫原性を導き得る。0007このように、リソソーム蓄積障害の治療技術として、治療効果のあるリソソーム酵素のラージスケール生産のための効果的な及び生産性のあるシステムについての、本分野中における必要性がある。本発明は、エンドソーム酸性化において欠陥があり、G71と指定される、CHO−K1誘導体が、生産細胞系自体のリソソーム区画への材料の損失を阻害することにより、リン酸化、組換え酵素の高い収率で産生することの発見に関する。そのような酵素は、好ましくは、低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖もまた有する。ある態様において、本発明は、ヒト組換え酸性αグルコシダーゼ(GAA)を過剰発現するEND3相補群細胞系であって、結果的に高リン酸化酵素の高収率をもたらす当該細胞系を提供する。例示的な細胞系は、G71又はG71の所望の特性を保持するその誘導体であって、ここで当該特性とは、すなわち高リン酸化組換え酵素の高収率を産生する能力であって、好ましくは、低レベルの非リン酸化高マンノース型オリゴ糖を伴うものをいう。END3相補群改良CHO−K1系のこの適用は、酵素補充療法(ERT)によるリソソーム蓄積疾患の治療技術として使用されるためのリソソーム酵素の生産について特に有効であろう。0009第1態様において、本発明は、治療上の使用が可能な量で高リン酸化リソソーム酵素を産生する新規方法を特徴とする。広範な態様において、当該方法は、それらの発現のために好適な細胞内に、リソソーム酵素の全部又は一部をコードするcDNAをトランスフェクトするステップを含む。その変異体をコードするcDNAが使用され得る。他の好ましい態様において、発現ベクターは、当該cDNAを好適な細胞系又はそれらの発現のための細胞系の中へトランスファーするため使用される。好ましい態様において、当該方法は、エンドソームの輸送に障害を有する細胞系から高リン酸化リソソーム酵素を産生するステップを含む。好ましい態様において、当該方法は、END3相補群CHO細胞系から高リン酸化組換えヒト酸性αグルコシダーゼ(rhGAA)を産生するステップを含む。END3相補群細胞系は、欠点のあるエンドソーム酸性化の如きEND3相補群細胞の特性を保持する改良CHO細胞系のいずれかである。関連態様において、当該END3相補群細胞系は、G71、G715、及びG71GAA2を含む。G715、及びG71GAA2の双方は、GAAの発現ベクターが誘導されるG71細胞系由来である。0010第2態様において、本発明は、治療的な酵素の使用を可能とする量のリソソーム酵素を産生する、その能力により特徴付けられる酸性化欠損エンドソーム細胞系を提供する。好ましい態様において、本発明は、高リン酸化リソソーム酵素の高収率の産生を可能とし、それ故、治療上リソソーム酵素のラージスケール産生を可能とするCHO−K1−由来END3相補群細胞系であって、指定されたG71、G715、及びG71GAA2を提供する。好ましい態様において、当該細胞系は、約1ピコグラム/細胞/日、又はそれ以上の量の組換えリソソーム酵素を発現し、及び分泌する。0011第3態様において、本発明は、本発明の方法に応じて産生される新規リソソーム酵素を提供し、及びそれ故、治療的な酵素の使用を可能とする量で存在する。