gizyutsusya_thTweet2018年03月17日17:06カテゴリよもやま話まったく最近のぬるいSDS-PAGEときたら。タンパク質の実験の話を続けている訳ですが、最近のSDS-PAGEって、ずいぶん簡単になったと思いませんか?私たちの学生時代、SDS-PAGEといえば職人技で、ゲル作りから全部手作業でやっていたものです。いう実験用試薬キットを作る専門のメーカーがあって、色々改良したんだと思います。そのせいで最近の若い子達は、正しいSDS-PAGEを知らないと思うのですよ。「アクリルアミドとBISとTEMEDとAPSを混ぜて、グリセリンで比重つけて、グラジエンターで混ぜながらガラス板の間に注ぎ込む。アクリルアミドは有毒だから手袋必須。手早くしないと固まる。Gを入れておいて泳動の目印にする。グリセリンで比重をつけてサンプルが沈むようにしておく。メルカプトエタノールが入っているのですごく臭い。→「サンプルバッファーも買ってますよ。そもそもマーカーに最初から色着いてるし。「バンドがスメアーになるのを防ぐため、泳動後はすぐにメタノールと酢酸で固定。CBBで染色するときも、脱色するときも基本はメタノール・酢酸。臭いのでドラフトをつけっぱなしにして中で作業。→「買ってきた染色液に浸けて、脱色は水だけ。キムワイプ入れておくと速いですよ。「論文にするやつは一眼レフで写真を撮る。その後ゲルドライヤーで乾燥して保存。均一に温めないとゲルが割れる。→「スマホで写真撮ってゴミ箱にポイです。ゲルドライヤー?何それ美味しいの?」わかる人だけ分かってくれれば良いです。昔は苦労していたんですよ。臭くて手間が掛かり、廃液処理も大変。それでも鮮明な泳動像を残す、SDS-PAGEは職人技でした。gizyutsusya_thTweet2018年03月04日11:11カテゴリよもやま話ピペット自己流(要注意!)久しぶりに実験の話を。「ピペットの正しい使い方を教わったことがなかった」とおっしゃる方が意外と多いです。ELISAの実験で「再現性が悪いんですよー」とか悩んでいる人がいて、ちょっとやってみて、と言って観察してみると、確かに手慣れた手つきでテキパキとピペットで分注している。ピペットを斜めに持っていたり、タンパク質溶液なのにフォワード法を使っていたり、ツッコミ所がいっぱいの自己流。「おいおいちょっと待って。学生時代からずっとこうしていました。「いや、正しい使い方はこう。垂直にして、粘性溶媒の場合は...」ここでおさらい。エッペンドルフ社によるピペッティングのコツメスピペットなんかと同じで、エアークッション式ピペットも垂直にして使うこと前提で設計されています。チップ内の液体に重力が均等にかかるように。液体の特性によっても配慮が必要です。フォワード法、リバース法、リピート法を使い分けます。知らないの?とバカにされないための正しいピペッティング操作とテクニック私たちがフォワード法を使うのは、精製水、バッファー溶液、基質液ぐらいです。ELISAで使う抗体溶液や、界面活性剤が入った洗浄液には、リバース法とかリピート法を使っています。自己流にも難敵がおりまして、頑なにピペットを斜めに使う奴。なんでそんな使い方するの?と聞いてみたら、培養の実験室出身らしくて、ピペットを垂直に持つと培地に菌が落ちる。このため必ず斜めにして使う。培養で増えるので、分注精度は関係ない。メスピペットなども同じで、ピペットとは斜めにして使うものである(えっへん)。清々しいほど呆れましたけど、実話です。あとよくいるのが、チップを付けるときにガンガン叩きつける奴。どこの実験室にもいるでしょう。心の中で「削岩機」って呼んでます。力加減ってものを考えましょうよ。釘を打つのとは違うんです。フィットさせるのに必要十分な力で、軽く「コツン」と突けば良いし、不安なら手でキュッと締めてやれば良いのです。