入力中の回答があります。ページを離れますか?※ページを離れると、回答が消えてしまいますページを離れるA回答を続ける入力中のお礼があります。緑藻クラミドモナスのcDNAライブラリーを作成しようと思い、羊土社の遺伝子工学実験ノート上を参考にして操作を行なったところ1stストランドの段階で逆転写反応がうまくいっていないようです。クラミドモナスのmRNAはGCリッチで高次構造をとりやすいのでそういったことも関係しているかもしれません。どなたかこのような問題を解決するよい方法やクラミドモナスのcDNAライブラリーはこのように作ったらいいなどのアドバイスがありましたら教えてください。通報するこの質問への回答は締め切られました。15:19クラミドモナスを扱った経験が無いので、あくまで一般論としてお聞きください。私はマウスやヒトのGC-rich領域を解析対象にすることが多いのですが、高次構造を避けるためには様々な添加試薬(グリセロールやベタイン、DMSO等、検索してみるといろいろ書かれていると思います)を加えることが有ります。productのTm値を下げることにあります。そのため、単純にRT反応の温度を上げるなどで解決できるかもしれません.ただ、最初に書きました通りマウス等が専門で、RT反応に添加試薬を入れたり温度を変えたりしたことはありません。ご参考程度になればよいのですが。あ、あとRT反応も含めKitを使う際は実験本よりも付属のマニュアルを参考にされた方がいいと思いますよ。通報するこの回答へのお礼さっそく回答していただき、ありがとうございます。温度が大事なんですね。使ってる酵素の説明書をみるとRT反応の温度をもうすこしあげてもだいじょううぶそうなので検討してみます。あと高次構造を回避する試薬も検索してみます。ありがとうございました。08:24補足します。BRL)で販売している逆転写酵素で、SuperScriptIIIであれば50度、ThermoScriptなら70度で反応できます。RNAの2次構造を回避することを主目的に開発されたのもです。通報するこの回答へのお礼ありがとうございます。目的に合わせた酵素を選ぶことも大事ですよね。検討していきたいと思います。プライマー等の入れ方9Lowry法の原理について10ペプシンの買い方11ELISAの洗いについて12ピペットマンのチップのつけ方...13マイクロピペットの洗浄方法14DNAの電気泳動の際に使うバッフ...15生物系の研究をしているものです。Inc.Q質問する(無料)Q&A検索goo検索gooIDで新規登録・ログイン新規登録する(無料)会員の方はこちら外部サービスのアカウントで新規登録・ログインYahoo!で新規登録・ログインGoogleで新規登録・ログインTwitterで新規登録・ログインFacebookで新規登録・ログインdアカウントで新規登録・ログイン※各種外部サービスのアカウントをお持ちの方はこちらから簡単に登録できます。お客様の許可なしに外部サービスに投稿することはございませんのでご安心ください。会員でない方、会員になるとあなたも質問や回答ができるようになります!!親切・丁寧な回答が集まる場30分以内に回答がもらえ回答数は平均3件!匿名(ニックネーム)での投稿なので。