有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾液を減圧濃縮した。mmol)を白色結晶として得た。ml)に懸濁し、10%パラジウム炭素(1.50g)を加え、水素雰囲気下に55°Cで5時間還元反応を行った。mlの水を徐々に加えた。触媒を桐山ロートで濾過して除き、濾液を半分に減圧濃縮した。反応液を更にメンブランフィルターで濾過し、濾液を減圧濃縮した。mmol)を少しずつ加えた。mmol)を加え、密栓して室温で2時間撹拌した。ml)を加え冷蔵庫に一夜保存した。油状物が分離したので、上澄みを除いた。残った油状物を水に溶かしエタノールを徐々に加えると、一部結晶を伴う油状物が析出したので再度上澄みを除いた。ml)を充填したカラムに吸着させ、水洗した後に1N−酢酸水溶液で溶出した。【0039】<その他ペプチドの合成>γ−Glu−Met(O)、γ−Glu−Val−NH2、γ−Glu−Val−ol、γ−Glu−Ser、γ−Glu−Tau、γ−Glu−Cys(S−Me)(O)、γ−Glu−t−Leu、γ−Glu−Cys(S−allyl)−Gly、γ−Glu−Cys(S−Me)、は実施例3および実施例4に準じて合成した。【0040】<カルシウム受容体の活性化作用の評価>カルシウム受容体の活性化作用の評価には、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いたCa濃度イオン依存性Clイオン電流測定法を用いた。カルシウム受容体を発現させたアフリカツメガエル卵母細胞に、各活性化剤を添加すると、細胞内のCaイオンが増加する。この細胞内電流値の変化を測定することで、カルシウム受容体の活性化作用の有無を知り得ることができる。具体的には、アフリカツメガエル腹部を切開し、卵塊を取り出した後、1%コラゲナーゼ溶液により20°Cで2時間処理することで個々の卵母細胞を得た。1個あたりの卵母細胞に、マイクロガラスキャピラリーを用いて50nlの1μg/μl受容体cRNAもしくは50nlの滅菌水を導入し、18°Cで2〜3日培養した。培養時には、実施例2で示した溶液に2mMピルビン酸と10U/mlペニシリンと10μg/mlストレプトマイシンを加えたものを使用した。増幅器Geneclamp500(Axon社製)および記録用ソフトAxoScope9.0(Axon社製)を用いて行った。卵母細胞を2電極膜電位固定法により−70mVに膜電位固定し、Ca濃度イオン依存性Clイオンを介した細胞内電流を測定した。細胞内電流の最大値を応答電流値とした。【0042】<カルシウム受容体に対するカルシウムの活性化作用の評価>実施例6に記載した方法を用い、カルシウム受容体に対するカルシウムの活性化作用を評価した。カルシウム受容体のcRNAもしくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し、2電極膜電位固定法により−70mVに膜電位固定した。膜電位固定された卵母細胞に、カルシウム(2mM、5mM、10mM、20mM)を添加し、Ca濃度イオン依存性Cl応答電流を測定した。この結果より、卵母細胞に注入したカルシウム受容体のcRNAが機能的に発現していることが確認された。水を注入した卵母細胞は、高い濃度のカルシウムにも反応していないことから、卵母細胞自身にはカルシウム受容体が発現していないことが確認された。【0043】<カルシウム受容体に対するL型アミノ酸の活性化作用の評価>実施例6に記載した方法を用い、カルシウム受容体に対するL型アミノ酸の活性化作用を評価した。カルシウム受容体のcRNAもしくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し、2電極膜電位固定法により−70mVに膜電位固定した。膜電位固定された卵母細胞に、アラニン(10mM)、アルギニン(10mM)、アスパラギン(10mM)、アスパラギン酸(10mM)、システイン(10mM)、グルタミン(10mM)、グルタミン酸(10mM)、グリシン(10mM)、ヒスチジン(10mM)、イソロイシン(10mM)、ロイシン(10mM)、リジン(10mM)、メチオニン(10mM)、フェニルアラニン(10mM)、プロリン(10mM)、セリン(10mM)、トレオニン(10mM)、トリプトファン(10mM)、チロシン(10mM)、バリン(10mM)、オルニチン(10mM)、タウリン(10mM)、又はヒドロキシプロリン(10mM)を添加し、Ca濃度イオン依存性Cl応答電流を測定した。この結果より、システイン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンがカルシウム受容体に対する明瞭な活性化作用を有することが示された。25;97(9):4814-9で活性化作用が報告されている。【0044】<カルシウム受容体に対するD−システインの活性化作用の評価>実施例6に記載した方法を用い、カルシウム受容体に対するD−システインの活性化作用を評価した。カルシウム受容体のcRNAもしくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し、2電極膜電位固定法により−70mVに膜電位固定した。性Cl応答電流を測定した。この結果より、D−システインがカルシウム受容体に対する明瞭な活性化作用を有することが示された。【0045】<カルシウム受容体に対するペプチドの活性化作用の評価>実施例6に記載した方法を用い、カルシウム受容体に対するペプチドの活性化作用を評価した。カルシウム受容体のcRNAもしくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し、2電極膜電位固定法により−70mVに膜電位固定した。膜電位固定された卵母細胞に、γ−Glu−Cys−Gly(50μM)、γ−Glu−Cys(SNO)−Gly(50μM)、γ−Glu−Ala(50μM)、γ−Glu−Gly(500μM)、γ−Glu−Cys(50μM)、γ−Glu−Met(500μM)、γ−Glu−Thr(50μM)、γ−Glu−Val(50μM)、γ−Glu−Orn(500μM)、Asp−Gly(1mM)、Cys−Gly(1mM)、Cys−Met(1mM)、Glu−Cys(50μM)、Gly−Cys(500μM)、Leu−Asp(1mM)を添加し、Ca濃度イオン依存性Cl応答電流を測定した。この結果より、上記ペプチドは、カルシウム受容体に対する活性化作用を有することが示された。【0046】<カルシウム受容体に対するペプチドの活性化作用の評価>実施例10と同様に、カルシウム受容体に対するペプチドの活性化作用を評価した。膜に電位固定された卵母細胞に、表2の各ペプチドについて、1000μM、300μM、100μM、30μM、10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μMを添加し、Ca濃度イオン依存性Cl応答電流を測定した。電流が検出された最低濃度を表2に活性として示した。この結果より、これら32種類のペプチドは、カルシウム受容体に対する活性化作用を有することが明らかとなった。【0048】<カルシウム受容体の生体内分布>カルシウム受容体の生体内分布を示すために、ラットから得たRNAを材料として、定量的RT−PCR法を用い、カルシウム受容体の組織発現を以下のように調べた。ラット組織からのRNA調製は以下のように行った。RNAの調製はIsogen(日本ジーン社製)を用いて行った。逆転写酵素(Invitrogen社製)を用いてcDNA合成を行った。カルシウム受容体のRT−PCRは、表1に示すプライマー(rCASR_f:配列番号3及びrCASR_r:配列番号4)を合成し、以下のように行った。Detectorを用いた定量PCR法により、カルシウム受容体遺伝子の発現量を解析した。組織発現分布を表3に示した。膵臓のみヒトトータルRNA(Stratagene社製)を用いた。現していることが確認された。様々な生理機能に関わっていることが示唆された。【0050】<カルシウム受容体活性化剤の動物薬理試験>ペプチドの薬理効果を動物実験で確認した。PTH)は、カルシウムホメオスタシスに関与する主要なタンパク質である。PTHは副甲状腺のC細胞より分泌されるが、カルシウム受容体が活性化されると、PTHの分泌阻害が起こることが知られている。動物は、Sprague-Dawley系統ラットの10週齢の雄を用いた。Kit」を用い、使用手順書に従って実施した。生理的食塩水にγGlu-Val-Glyペプチドを100mg/mlに溶解し、ラット体重100g当り0.1mlを尾静脈より注入した。比較には、生理的食塩水をラット体重100g当り0.1mlを尾静脈より注入した。右鎖骨下静脈より採血し、遠心分離によりラット血清を得た。投与前が89.4±49.5pg/ml、投与15分後が41.1±11.6pg/mlであった。この結果、ペプチド投与によってPTHが減少する事が認められた。【0051】GPCR(Gタンパク質共役型受容体)に対する受容体活性化剤は各種疾患の治療薬として普遍的に応用できる。)、オピオイド受容体活性化剤(疼痛病治療)、受容体活性化剤(疼痛病治療)、カルシトニン受容体活性化剤(骨粗鬆症治療)、コレシストキニン受容体活性化剤(糖尿病治療)、セロチニン受容体活性化剤(片頭痛治療)、ドーパミン受容体活性化剤(パーキンソン病治療、鎮静剤)、メラトニン受容体活性化剤(原発性不眠症治療)、メラノコルチン受容体活性化剤(肥満治療)などがある。GPCRに属するカルシウム受容体の活性化剤の治療薬応用の範囲は、実施例12、表3に示すように、カルシウム受容体が広範な組織に分布していることから、幅広い疾患に対して適用可能であることが予見される。本発明は、好ましい実施形態を参照して詳細に説明されているが、本発明の範囲から逸脱しないかぎり、多様な変更、均等物の使用が可能であることは当業者にとって明らかである。本明細書における全ての引用文献は本明細書の一部として参考のために示す。請求項1〜3のいずれか1項に記載のカルシウム受容体活性化剤を用いることを特徴とする、カルシウム受容体の活性化阻害物質をスクリーニングする方法。ekouhou.net。