論文よくあるご質問お問合わせよくある質問お客様より寄せられるよくある質問を掲載しております。プログラムフリーザーを使用しなくても凍結保存できます。滅菌クライオチューブをご使用ください。ご使用していただいても問題なく保存できます。コンタミネーションに注意しながら、冷蔵で保存し、お早めにご使用ください。ガラス化凍結法は,細胞を液体窒素に直接急速浸漬するなどして水の結晶化を防ぎ,非晶質のガラス状態で凍結する方法です。水の体積膨張がないため,細胞へのダメージが少ないという利点があります。iPS細胞は,通常の凍結法では解凍後の生存率が非常に低いため,ガラス化凍結法が推奨されています。ガラス化には高い溶質濃度を必要とするため,溶質による細胞毒性が高くなりやすいという問題があり,毒性の低い凍結保存液の登場が待ち望まれていました。iPS細胞の場合、106以上の細胞を200uLでガラス化保存できます。従って105個程度のガン細胞なら小分けせずに200ulで保存できるモノと考えております。細胞によって生存率は異なりますので、確実なことは言えない点ご注意ください。DAP213とEG+スクロース、EG+スクロース+PLLを用い、30秒と120秒で細胞毒性を検証しております(文献:2011Cryobiology)。細胞毒性が低いとはいえ、凍結するまでの間隔は短いほうが良いですので、生存率を高められたいようでしたら、1分を目安に、できるだけ早く凍結していただくことをお勧めいたします。完全に培地上清を取り除いたほうが良いと思われますが、SNLフィーダー細胞にまいたiPS細胞を凍結する時に、上清を吸引するとペレットの粘性で吸い込まれることがありますので、5~10μLくらいは残す場合もあります。絶対必要ではありません。お勧めするという意味です。Keepと細胞をよく混和とあるが、ピペッティングで良く混ぜて良いのか。Keepが細胞とまんべんなく混和するようによくピペッティングしてください。コロニーをばらばらにしてしまわないように緩やかにピペッティングしてください。ガラス化に失敗すると溶液が白く濁る原因について詳しく教えてください。ガラス化は水の結晶化を抑えたまま固化する現象ですので、透明な固体となります。ガラス化に失敗した場合は結晶化しますので、白濁します。Keepでは極端な量(例えば0.5mL以上など)や液体窒素を使用しないでフリーザーで凍結するといった間違った使用法を取らない限り、ガラス化に失敗して白濁するようなことは恐らくないと思われます。抗生物質の添加は問題ないと考えられます。冷蔵(4~10°C)であれば、問題ないと考えられます。mlを無菌的に入れて溶解し、全量をセリオキープのボトルに戻して撹拌する。』とありあますが、溶解させる際はマイクロチューブを軽く振る程度で溶解しますでしょうか。それとも、何か器具等が必要でしょうか。軽く振っていただくか、ピペッティングするだけで、容易に溶解します。新しく論文を掲載しました。