SchoolTweetPocketChIP-qPCRは、クロマチン免疫沈降で得られたDNAをqPCRを用いて定量することにより、既知のゲノム上のタンパク質結合部位でのタンパク質-DNA相互作用の有無を定量的に評価できる手法です。クロマチン免疫沈降では細胞や組織のクロマチンや転写因子をDNAと結合し、免疫沈降によって共沈させます。共沈して得られたDNA断片を精製し、qPCRで定量することによってクロマチンや転写因子に結合した特定の塩基配列のDNA断片の量の変化を調べることができます。ChIP-qPCR(グローバルサイトにリンクします)は、異なる実験条件にわたって特定の遺伝子および調節領域に焦点を当てた研究に有利な実験法です。ChIP-qPCRで得られるクロマチンDNAの定量データは、クロマチンの量、免疫沈降の効率、およびDNA回収の手順上などで生じるバックグラウンドを適切に処理することによって、正規化し比較可能なデータにする必要があります。ここでは、ChIP-qPCRデータを正規化するために使用される一般的な方法、すなわちパーセントインプット法について説明します。パーセントインプット(%input)法パーセントインプット(%input)とは、基本的に実験で使用した抗体によって沈殿したクロマチンDNAの割合を示します。ChIPにおけるインプット(input)サンプルとは、全てのChIP手順から免疫沈降のセレクションを除いた手順を経て調製したトータルDNAです。インプットサンプルは、ChIPで使用されたクロマチンの量を表し、パーセントインプットを計算するためのコントロールとして使用されます。パーセントインプット法では、ChIPから得られたシグナルをインプットサンプルから得られたシグナルによって除算します。ChIP-qPCRを行う際は、qPCRデータを常にインプットと比較し、得られた収量データを免疫沈降による回収率として分析するほうが好ましい結果が得られます。これは、インプットと比較することによって、目的外の物質によるバックグラウンドとChIP処理したクロマチン自身に起因する誤差の双方に対する補正・正規化を含むからです。パーセントインプット法が適しているのでしょうか。enrichment法があります。例を挙げてこれらを比較します:異なるサンプル中のDNA量を絶対定量した結果を以下の通りとします。enrichment法の問題は、生物学的意味を持たないノイズが過大に結果に影響を与え、結論が変わってしまうことがこれでわかります。パーセントインプット法は、計測するDNAの量を増やせることにより、偽陽性が出にくい正規化方法であることがわかります。enrichment法を並行して使用することを検討してください。有意なデータが得られるよう、正規化の手段として適切な方法を選択して実験を計画することが重要です。qPCRは最低2回以上、潜在的な外れ値を同定することができるようにするために3重測定を実行することをお勧めします。ChIP-qPCR法によってDNAを定量する際、実験系によって適切なコントロールを置くことが不可欠です。...結果の図示についてChIP実験結果はネガティブコントロール抗体およびプライマーで測定されたバックグラウンドと、標準誤差とを共に図示されることをお勧めします。品質、およびプロトコルです。実験で検証済のプロトコル/キットを用いることに留意して実験を行うことが重要です。このような点を考慮しても、既存キットを使用して実験系を立ち上げることは有用です。アッセイ用に最適化されています。高度に検証されたChIPグレード抗体と一緒に使用することで、優れた再現性のある結果を提供します。ChIP-qPCRキットは、ネガティブコントロールとなるウサギIgGを添付していますので、目的のエピトープに対する抗体とプライマーを準備するだけで実験を開始していただくことが可能です。Customizer(グローバルサイトにリンクします)で無くなった試薬だけを補充することができ、大変経済的にご利用いただけます。qPCRキットをご用意しており、簡単に実験に取り掛かっていただけます。こちらからマニュアルをダウンロードしていただけます。マニュアルChIPで精製したDNAから次世代シーケンス用ChIP-seqのキットもご用意しております。本キットはヒストンの分析に最適のキットです。こちらからマニュアルをダウンロードしていただけます。クロマチン免疫沈降(ChIP)とは?こちらもご覧ください。(5)キーワードタグはサイト内の記事のキーワードをリンク化したものです。リンクしている記事数をキーワードの後に記しています。記事中のキーワードに素早くアクセスしたい場合にご使用ください。...今すぐチェックお客様へ本ウェブサイト(diagenode.co.jp)はDiagenode社のウェブサイト(Diagenode.com)のポータルサイトです。本ウェブサイトは、日本のお客様によりよくDiagenode社製品を知っていただくことを目的に、Diagenode社の日本法人である株式会社ダイアジェノードが運営しています。本ウェブサイトは、Diagenode社のウェブサイトとリンクしております。Diagenode社のウェブサイトへリンクされる場合は、あるいはその旨文章にて表記しております。本ウェブサイト(diagenode.co.jp)はDiagenode社のウェブサイト(Diagenode.com)のポータルサイトです。WordPress.ページトップ。