本方法では、プラスミドDNAを鋳型として背中合わせに設計したプライマーを用いてプラスミド全周を増幅し、変異導入を行います。通常の変異導入に加え、数10bpの挿入(Tagの挿入)や数100bpの欠失にも対応可能です。混合塩基を導入したアミノ酸点変異ライブラリーの作成などにも応用可能です。最大95%の変異導入効率が得られます。mutation(目的とする変異以外の変異)の可能性を最小限にしています。最大で11kbのプラスミドで変異導入を確認済みです。●簡便なプロトコール形質転換まで3ステップの簡単なプロトコールになっています。リン酸化したプライマーを準備する必要はありません。拡大する+本キットでは、以下の手順に従って、変異導入を行います。欠失変異体を取得したい場合には、その欠失させたい領域の外側にプライマーを設計します。Iは、認識サイト(GATC)中のアデニンがメチル化されている時のみ切断を行います。Iにより切断を受けます)。最後に、3直鎖状プラスミドであるPCR産物をSelf-ligationすることにより環状化し、大腸菌の形質転換に供します。実施例1.欠失、及び挿入変異における効率比較7.3kbのプラスミドFLJ32066を対象に、本製品と、A社non-PCR法キットを用いて90塩基の欠失、および6xHisに対応する18塩基の導入を行いました。その結果、他社のキットが苦手とするような欠失や挿入などの変異導入に対しても、本製品では高い効率で変異体を取得することができました。mutation)の挿入頻度の評価キット付属のコントロールプラスミド(4.3kb)を鋳型として変異導入を行い(PCRは8サイクルにて実施)、得られた変異体から24クローンについて各々2000bpの領域のシーケンシングを行いました。その結果、本製品では、実際に解析した合計48,000塩基の内、目的以外の変異はわずか1塩基でした。これは、A社non-PCR法キットと比較しても、同等以上の結果でした。#225μL125μL125μL50μL50μL250μL10μL10μL10μL<活性の定義>75°C活性測定条件で30分間に10nmolesの全ヌクレオチドを酸不溶性画分に取り込む酵素量を1Uとします。-Plus-と同等です。iPCRは、本キット用に至適化されています。水溶性液体に該当するグリセロールが50%含まれますが、引火点測定試験で危険物に該当しないことを確認しております。コチラからご覧いただけます。使用するプライマーはリン酸化しておく必要はありません。一般的に用いられているJM109やDH5αなどの大腸菌で調製したプラスミドを使用することができます。Damメチラーゼ(-)株で調製したプラスミドは使用できません。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。消防法に基づく危険物です。御購入時に申込書の提出が必要な製品です。(カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。