Ver.2正確性No.1(弊社比)〔Taqの約80倍〕。polymeraseをベースに開発された高正確性PCR酵素です。弊社PCR酵素中、最高の正確性を示します。本酵素は、バッファー組成の改良やホットスタート法の採用により、従来品に比べ、正確性、及びPCR性能が格段に向上しています。-Plus-のバッファーをさらに改良し、PCR成功率が向上しています。Polymeraseの約80倍の正確性を示します。DNAクローニングに最適です。●ホットスタートでPCRパフォーマンス向上2種類の抗KOD抗体を酵素に混合することによって、非特異反応の原因となる常温下でのPolymerase活性と3'→5'Exonuclease活性を抑制しています。Polymeraseよりも伸長性・増幅効率が向上しています。Polymeraseよりも耐熱性が優れているため、変性ステップの温度を高く設定することができ、GC-richな高次構造を形成するようなターゲットに有効です。-Plus-より向上しています。逆転写反応液の持込みによる阻害も低減されています。polymeraseと増幅度の比較を実施しました。サイクルは、伸長温度以外は同一の条件で行いました。polymeraseでは5%DMSOもしくはA社PCRエンハンサーを添加した条件でのみ増幅を確認することができました。-Plus-、及び他社高正確性PCR酵素を用いて増幅し、比較を行いました。Fidelity酵素に比べ良好な増幅を示しました。RNAより逆転写したcDNAを鋳型として、4種類のターゲットについてPCR効率の比較を行いました。Ver.2は、他の酵素に比べて良好な増幅を示しました。増幅の難しい6.8kbのターゲットにおいても明瞭な増幅がみられました。1mL×1本*KOD抗体を1.6μg/μLの濃度で含んでいます。Glycerol活性の定義:75°Cにおいて、30分間に10nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性画分に取り込む酵素量を1Uとします。[NTP-201]をご使用ください。50μL*ワンポイントアドバイスのRT反応液をサンプルとする場合、をご確認ください。cycles*通常は3ステップのサイクルを行います。Tm値が72°C以上のプライマーを用い、3ステップサイクルでスメアーが認められた場合、2ステップサイクルを行なうとスメアーが解消される場合があります。method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードいただけます。Bufferは各製品専用です。PolymeraseのBufferとは組成が異なります。ワンポイントアドバイス●PCR産物のクローニング本酵素のPCR産物は平滑化されており、平滑末端クローニング法によってクローニングできます。その際ベクター側を脱リン酸化処理している場合、PCR産物のリン酸化を行うか、5'リン酸基のついたプライマーを使用する必要があります。本酵素のPCR産物は平滑化されているため、直接TAクローニングすることはできません。CloneTM-Plus-」をご使用ください。●PCR条件の設定について酵素の標準使用量は、50μLの系に対して1Uとしてください。伸長反応は、68°Cで行い、ターゲット1kbに対して1min.を標準とします。スメアリングが起こっている場合はMgSO4の濃度を下げ、増幅が見られない場合はMgSO4濃度を上げて検討します。反応液にDMSOを最終濃度2〜5%程度添加することにより、改善される場合があります。●RT反応液を鋳型とする場合RT反応液の大量の持ち込みは、本酵素によるPCR反応を阻害する場合があります。RT反応液のPCRへの持ち込みは、PCR反応液の1/25以下(好ましくは1/50以下)をお勧めします。この場合、RT反応液からのMg2+やdNTPsの持ち込みについては考慮する必要はなく、基本反応条件に沿って、本酵素の添付のdNTPsとMgSO4を添加していただければ問題ありません。3'側にミスマッチのあるプライマーは、本酵素によって校正を受ける場合があります。method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードいただけます。イノシンを含むプライマーのTm値はこの方法では計算できません。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。消防法に基づく危険物です。御購入時に申込書の提出が必要な製品です。(カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。