CS4,其中,人bFGF93位上的Cys已由Ser所取代。第1滤膜保留5分钟,第2滤膜保留15分钟。NaCl中的滤纸上再放置5分钟使之中性化。4×Denhardt氏溶液(聚乙烯吡咯烷酮、Ficoll和牛血清白蛋白,1X=0.02%)、0.1%SDS、50mM磷酸钠缓冲液(PH7.0)和100μg/ml变性的鲑鱼精子DNA。与105cpm/ml的寡核苷酸引物于42°C下杂交24小时。50°C洗涤30分钟(该缓冲液含有0.1%SDS和其量渐为减少的SSC)。所用SSC的最小浓度为0.1×SSC。而有3—10个突变的M13-P2空斑与探针杂交。mutations.选取一个突变的M13-P2空斑,接种于JM105培养基上。ssDNA.其结果是,分别证实了TGC(Cys-26)密码子已变为TCT(Ser)密码子;TGT(Cys-88)密码子已变为TCT(Ser)密码子;以及TGT(Cys-93)密码子已变为TCT(Ser)密码子。6得到的复制型(RF)M13-P23,以构建用于表达人bFGF突变蛋白的质粒pTB762(图12)。