DNA片段反应,使BglII切点连接起来,然后在dXTP存在下通过DNA聚合酶(Klenow片段)反应使AvaI切点成为平端。5′AATTCTATGCCAGCATTGC3′和5′GCAATGCTGGCATAG3′相连接,然后用EcoRI-BglII酶切以制备大约0.46Kb的DNA片段。DNA片段连接在一起,以构建用于表达人bFGF的质粒pTB669。pTB669.用此质粒pTB669转化大肠杆菌DH1,从而得到携带质粒pTB669的大肠杆菌DH1/pTB669。BP-1281)和大肠杆菌C600/pTB669。1%葡萄糖,0.4%酪蛋白氨基酸和8μg/ml四环素的M9培养基中,Klett值达到大约200以后,加入浓度为25μg/ml的3β-吲哚丙烯酸,然后再培养4小时。培养以后,收集细菌细胞,悬浮在含有1/20数量20mMTris-HCl(pH7.6)的10%蔗糖溶液中。),此混合物于0°C下放置45分钟,然后用超声处理30秒。第二天,换用含有0.5%小牛血清的DMEM培养基。0.5%BSA的DME培养基以5倍进行系列稀释,然后进行培养。RCCAmersham,UK)。Shuzo产品)的活性。