CS134,其中人bFGF中的26、88和93位Cys已被Ser所取代。AF-pakHR-894肝素装填的柱(8mmID×5cm,日本ShowaDenko公司生产)。NaCl以线性梯度(60ml体积,1.0ml/min流速)进行洗脱。在这些图中,纵坐标代表OD280吸光率和梯度中的NaCl浓度。横坐标代表时间,梯度洗脱在时间0点开始。收集峰组分,测定它们的FGF活性。H2O2),氧化于37°C进行30分钟。be.这表明CS3和CS23对氧化作用稳定。BSA/20mM二硫苏糖醇),还原反应于37°C下进行30分钟。这就是说,这一图形支持实例25中提及的稳定性。bFGF和突变蛋白具有FGF活性。DNA的生成(1)克隆用于人bFGF基因的M13载体:用限制性酶EcoRI和BamHI消化参考实施例2得到的质粒pTB669。DNA片段混合(它们预先用EcoRI和BalnHI消化)。EcoRI识别位点并进而使Pro-14变为Met的引物,参见图38(2))处理1小时。于37°C下反应3小时,再于25°C反应2小时,然后加入2μl0.2mMEDTA以终止反应。Ncol的识别位点,并同时将Gly-9变为Thr,将Ser-10变为Met(见图38(1))。AflII的识别位点,并同时将密码子Lys-87变为终止密码(参见图38(3))。HpaI的识别位点,并同时将Asp-42变为Asn(见图38(4))。HpaII的识别位点,并同时将Arg-45变为Gln(见图38(5))。使第1滤膜保留5分钟,第2滤膜保留15分钟。4×Denhardt氏溶液(聚乙烯吡咯烷酮、Ficoll和牛血清白蛋白,1×=0.02%)、0.1%SDS、50mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)和100μg/ml变性的鲑鱼精子DNA。与105cpm/ml的寡核苷酸引物在42°C下杂交24小时。50°C洗涤30分钟,该洗涤缓冲液含有0.1%SDS和数量减少了的SSC。所用SSC的最小浓度为0.1×SSC。而有3-10个突变的M13-PO空斑与探针杂交。probe.选取一个突变的M13-PO空斑,接种于JM105培养基上。ssDNA.其结果是,分别证实了GGC(Gly-9)密码子已变为ACC(Thr)密码子;AGC(Ser-10)密码子已变为ATG(Met)密码子;CCG(Pro-14)密码子变为ATG(Met)密码子;AAA(Lys-87)密码子变为TAA(终止)密码子;GAC(Asp-42)密码子变为AAC(Asn-42)密码子;CGG(Arg-45)密码子变为CAG(Gln-45)密码子。HpaI之识别位点并继而Asn-42变为Arg的引物,见图38(6))于37°C处理1小时。67°C保持5分钟,然后42°C保持25分钟,从而使引物与5μg单链(ss)M3-PDN42DNA杂交。于37°C下反应3小时,再于25°C反应下2小时,然后加入2μl0.2mMEDTA以终止反应。使第1滤膜保留5分钟,第2滤膜保留15分钟。4×Denhardt氏溶液(聚乙烯吡咯烷酮、Ficoll和牛血清白蛋白,1×=0.02%)、0.1%SDS、50mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)和100μg/ml变性的鲑鱼精子DNA。与105cpm/ml的寡核苷酸引物于42°C下杂交24小时。50°C洗涤30分钟,该洗涤缓冲液含有0.1%SDS和数量减少的SSC。所用SSC的最小浓度为0.1×SSC。而有3-10个突变的M13-PDN42空斑与探针杂交。probe.选取一个突变的M13-P14空斑,接种于JM105培养基上。ssDNA.结果证实AAC(Asn-42)密码子已变为AGA(Arg)密码子。