Nonsurgical transfer and survival of frozen thawed bovine embryos by one step straw method using sucrose.
1.A(極めて良質),B(良質),C(不良)の3つのランクに分類したウシ受精卵を室温でグリセロール平衡(3%,6%,10%の各段階を10分間)し,0.25ml容量のストローに0.3または0.6モル荒糖液層(下層),空気層,受精卵を含む10%グリセロール液層(中間層),0.3または0.6モル庶糖液層(上層)の順に注入した。次いで上層と中間層とを混和し10分間置いたのち,Ham's F-10+20%BSで炭酸ガス条件下24~72時間培養した。その結果,AとBランク別に0.3モル蕨糖液では10/10,2/2卵,0.6モル蕨糖液では2/2,3/3卵のいずれもが胚盤胞~脱殻した胚盤胞に発育した。2.-196°Cで1~300日間保存したウシ凍結受精卵を38°Cの水で急速融解し,実験Iの要領で上層と中間層とを混和し 20% BS 加 Ham'sF-10で24~72時間培養した。その結果Aランクの受精卵では0.3,0.6モル群の95%,100%が,またBランクのものでは66.7%,50.0%がそれぞれ胚盤胞~脱殻した胚盤胞に発育した。3.実験2の要領で融解した受精卵をストローから直接移植したところ,ホルスタイン9頭では5頭(58.6%)が,和牛では15頭中5頭(33.3%)が受胎した。受胎率の平均は41.6%となった。近年,凍結融解したウシ受精卵を庶糖液に1段階で浸漬したのち,直接移植する1段階ストロー法による受胎成功例がRENARDら6),LEIBO11)によって報告されているが,これらの方法は庶糖をリン酸緩衝食塩水(PBS)に溶解して用いたものであり,著者ら4)が庶糖を蒸留水に溶解して用いた方法と基本的に異なっている。前報8)では,庶糖のDW溶液とPBS溶液を用い,これらの液に凍結融解したマウス受精卵をそれぞれ1段階で浸漬してその生存性を比較し,庶糖のDW溶液の方がPBS溶液に比べて高い生存性を示したことを報告した。本報では,グリセリン平衡した庶糖液のグリセリン除去効果を評価する目的で,未凍結,または凍結融解したウシ受精卵を直接庶糖液に浸漬した後培養をおこない,その生存性を調査した。また,凍結融解した受精卵を直接ストローから移植し受胎性を調べた。