Construction and initial application of recombinant adenoviral expressed vector carrying EBV immediately early gene BZLF1
目的 构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用.方法 采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd-BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ.vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响.结果 PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLFl基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功.经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLFl基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期.结论 重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞。