Effects of LPS on the expression on SSeCKS at endothelial cell
目的 研究细菌脂多糖(LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)表达和细胞内定位的影响,探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制.方法 用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞,用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定.LPS刺激体外培养的RPMVEC,用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况;用0.05 μmol/L蛋白激酶C(PKC)抑制剂(Calphostin C)预处理RPMVEC 30 min后再用LPS刺激6 h,免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白(filamentous-actin,F-actin)细胞内定位和结构改变的影响.结果 定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC 1 h后SSeCKS表达水平达到最高,Western blot结果与定量PCR结果相一致,同时,LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加.免疫荧光结果显示LPS刺激后,F-actin发生重构,细胞内形成应力纤维,SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集;Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响.结论 LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变,PKC参与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布;提示SSeCDS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。