ESSAIS AU CHAMP PLURIANNUELS DE MAIS GENETIQUEMENT MODIFIE EXPRIMANT UNE LIPASE GASTRIQUE POUR DES APPLICATIONS MEDICALES - PDF Free Download\nDownload "ESSAIS AU CHAMP PLURIANNUELS DE MAIS GENETIQUEMENT MODIFIE EXPRIMANT UNE LIPASE GASTRIQUE POUR DES APPLICATIONS MEDICALES"\n1 DEMANDE D AUTORISATION AUPRES DU MINISTERE DE L AGRICULTURE, DE L ALIMENTATION, DE LA PECHE ET DES AFFAIRES RURALES ESSAIS AU CHAMP PLURIANNUELS DE MAIS GENETIQUEMENT MODIFIE EXPRIMANT UNE LIPASE GASTRIQUE POUR DES APPLICATIONS MEDICALES AUTORISATION DEMANDEE POUR 2005 ET LES 3 ANNEES SUIVANTES DOSSIER DEPOSE PAR : MERISTEM Therapeutics 8, rue de Frères Lumière CLERMONT-FERRAND 1/39\n2 SOMMAIRE RESUME DES POINTS PRINCIPAUX... 5 INTRODUCTION... 7 A. INFORMATIONS GENERALES Nom et adresse du notifiant (société ou institut) Qualification et expériences des scientifiques responsables Titre du projet B. INFORMATIONS CONCERNANT LES PLANTES RECEPTRICES Nom complet a) Informations concernant la reproduction i) Mode(s) de reproduction ii) Facteurs spécifiques affectant la reproduction iii) Temps de génération b) Compatibilités sexuelles avec d autres espèces sauvages ou cultivées, y compris la répartition en Europe des espèces compatibles Capacité de survie a) Capacité à former des structures de survie ou de dormance b) Facteurs spécifiques affectant la capacité de survie Dissémination a) Voies et étendue de la dissémination b) Facteurs spécifiques affectant la dissémination Distribution géographique de la plante Pour les espèces qui ne poussent pas habituellement dans les Etats membres, description de l habitat naturel de la plante y compris les informations sur les prédateurs naturels, les parasites, les concurrents et les symbiotes Autres interactions potentielles, pertinentes pour l OGM, de la plante avec des organismes dans l écosystème habituel, ou ailleurs, y compris les informations sur sa toxicité pour les hommes, les animaux et d autres organismes C. INFORMATIONS CONCERNANT LA MODIFICATION GENETIQUE Description des méthodes utilisées pour la modification génétique Nature et source du vecteur utilisé Taille, origine (nom) des organismes donneurs et fonction recherchée de chaque fragment constituant de la région envisagée pour l insertion D. INFORMATIONS CONCERNANT LA PLANTE SUPERIEURE GENETIQUEMENT MODIFIEE Description du ou des caractères et des caractéristiques qui ont été introduits ou modifiés Informations sur les séquences réellement insérées ou délétées a) Taille et structure de l insert et méthodes utilisées pour sa caractérisation, avec indication des parties de vecteur introduites dans la plante supérieure génétiquement modifiée (PSGM) ou de tout ADN vecteur ou étranger restant dans la PSGM b) En cas de délétion, taille et fonction des régions supprimées c) Nombre de copies de l insert d) Localisation de l insert dans les cellules (intégré au génome nucléaire, chloroplastique ou mitochondrial, ou sous forme non intégrée) et méthodes utilisées pour sa détermination Informations concernant l expression de l insert a) Informations concernant l expression évolutive de l insert durant le cycle de vie de la plante et les méthodes utilisées pour sa caractérisation b) Parties de la plante où l insert est exprimé (Par exemple la racine, la tige, le pollen, etc.) Description des différences entre la plante génétiquement modifiée et la plante réceptrice a) Mode(s) et/ou vitesse de reproduction b) Dissémination c) Capacité de survie Stabilité génétique de l insert et stabilité phénotypique de la PSGM /39\n3 6. Toute Modification de la capacité de la PSGM à transférer du matériel génétique dans d autres organismes Information concernant les effets toxiques, allergisants ou autres effets nocifs résultant de la modification génétique sur la santé humaine Information concernant la sécurité de la PSGM pour la santé des animaux notamment en ce qui concerne tout effet toxique, allergisant ou autre effet nocif résultant de la modification génétique, lorsque la PSGM est destinée à être utilisée dans l alimentation des animaux Mécanisme d interaction entre la plante génétiquement modifiée et les organismes cibles (le cas échéant) Modifications potentielles des interactions de la PSGM avec les organismes non cibles résultant de la modification génétique Interactions potentielles avec l environnement abiotique Description des méthodes de détection et d identification de la plante génétiquement modifiée Information, le cas échéant, sur les précédentes disséminations de la plante génétiquement modifiée E. INFORMATIONS CONCERNANT LE SITE DE DISSEMINATION Localisation et étendue des sites de dissémination Description de l écosystème des sites de dissémination, y compris le climat, la flore et la faune Présence d espèces végétales apparentées sauvages sexuellement compatibles ou d espèces végétales cultivées sexuellement compatibles Proximité des sites de biotopes officiellement reconnus ou de zones protégées susceptibles d être affectées F. INFORMATIONS CONCERNANT LA DISSEMINATION Objectif de la dissémination Date(s) et durée prévues de l opération Méthode de dissémination envisagée Méthode de préparation et gestion du site avant, pendant et après la dissémination, y compris les pratiques culturales et modes de récolte Nombre approximatif de plantes (ou de plante par mètre carré)...31 G. INFORMATIONS SUR LES PLANS DE SURVEILLANCE, DE CONTROLE ET DE TRAITEMENT DU SITE ET DES DECHETS APRES DISSEMINATION Précautions prises a) Distance(s) des autres espèces végétales sexuellement compatibles, espèces parentales et cultivées b) Mesures visant à minimiser ou à empêcher la dissémination de tout organe reproducteur de la PSGM (par exemple pollen, graines, tubercules) Description des méthodes de traitement du site après dissémination Description des méthodes de traitement après dissémination pour le matériel issu de plantes génétiquement modifiées y compris les déchets Description des plans et des techniques de surveillance Description des plans d urgence Méthodes et procédures de protection du site H. CONCLUSIONS CONCERNANT LES INCIDENCES POTENTIELLES SUR L ENVIRONNEMENT DE LA DISSÉMINATION DES PLANTES SUPÉRIEURES GÉNÉTIQUEMENT MODIFIÉES (PSGM) Probabilité que les PSGM deviennent plus persistantes que les plantes parentales ou réceptrices dans les habitats agricoles ou se propagent plus rapidement dans les habitats naturels Avantages ou inconvénients sélectifs conférés aux PSGM Possibilité de transfert de gènes aux mêmes espèces ou à d autres espèces végétales sexuellement compatibles dans des conditions de plantation de la PSGM et avantages ou inconvénients sélectifs conférés à ces espèces végétales Incidences immédiates et/ou différées que les interactions directes ou indirectes entre les PSGM et les organismes cibles, tels que prédateurs, parasitoïdes et agents pathogènes peuvent avoir sur l environnement (le cas échéant) Incidences immédiates et/ou différées que les interactions directes ou indirectes entre les PSGM et les organismes non cibles (compte tenu également des interactions d organismes avec les organismes cibles), notamment les incidences sur les niveaux de population des concurrents, herbivores, symbiotes (le cas échéant), parasites et agents pathogènes /39\n4 6. Effets immédiats et/ou différés éventuels sur la santé humaine résultant des interactions directes ou indirectes potentielles entre les PSGM et les personnes travaillant ou entrant en contact avec la ou les PSGM disséminées ou se trouvant à proximité Effets immédiats et/ou différés éventuels sur la santé des animaux et conséquences pour la chaîne alimentaire résultant de la consommation de l OGM et des organismes cibles et non cibles à proximité du ou des OGM disséminés Incidences immédiates et/ou différées sur les processus biogéochimiques résultant des interactions directes et indirectes potentielles de l OGM et des organismes cibles et non cibles à proximité du ou des OGM disséminés Incidences immédiates et/ou différées, directes ou indirectes, que les techniques spécifiques de culture, de gestion et de récolte utilisées pour les PSGM peuvent avoir sur l environnement lorsqu elles sont différentes de celles utilisées pour des plantes supérieures non génétiquement modifiées /39\n5 RESUME DES POINTS PRINCIPAUX Notifiant : MERISTEM Therapeutics, 8 rue des frères Lumière, Clermont-Ferrand Partenaire : LIMAGRAIN, BP1, Chappes Titre : Essais au champ pluriannuels de maïs génétiquement modifié exprimant une lipase gastrique pour des applications médicales (pour l année 2005 et les 3 années suivantes). Objectif de la transformation : Obtenir l expression d une lipase gastrique dans des grains de maïs en vue de la production d un principe actif purifié destiné à des applications médicales. Cette enzyme recombinante est développée pour le traitement de la malabsorption des graisses chez les patients atteints d insuffisance pancréatique exocrine (IPE) notamment dans le cas de la mucoviscidose. Espèce végétale réceptrice : Maïs Gène(s) d intérêt introduit(s) et séquences de contrôle : - ADNc codant pour une lipase gastrique, - sous contrôle d un promoteur permettant une expression ciblée dans la graine. Autres séquences introduites : - Gène de sélection conférant une tolérance à un herbicide (glufosinate ammonium), - sous contrôle d un promoteur permettant une expression constitutive. Durée du projet : 4 ans. Localisation des disséminations (Pour l année 2005) : - Région Auvergne (Département du Puy de Dôme). Précautions envisagées : - Isolement de 400 m pour les parcelles de production de semences et de 200 m pour les productions de biomasse (maïs transgénique mâle stérile ou castré) par rapport à toute culture de maïs commercial. - Mise en place de 4 rangs de bordure de maïs non transgéniques autour des parcelles d essai. - Utilisation d un système de stérilité mâle cytoplasmique pour les parcelles de production de biomasse. - Destruction par broyage des résidus de culture en fin de récolte. - Surveillance des éventuelles repousses pendant un an après la récolte. - Aucune culture commerciale de maïs ne sera implantée sur les parcelles d essai l année suivante. - Le maïs obtenu ne sera pas utilisé pour l alimentation animale ou humaine. 5/39\n6 Résumé des expériences antérieures : - Ce projet a fait l objet de plusieurs demandes d autorisations pluriannuelles depuis 1995, toutes accordées après les avis favorables de la Commission du Génie Biomoléculaire (CGB). Le projet a été initié en 1995 avec du tabac puis est rapidement passé au maïs pour des raisons techniques de stabilité du produit (dossier 97/11/02 et B/FR/ ). Suite à l obtention de nouveaux événements de transformation mieux adaptés à une production à grande échelle (ne possédant pas de séquences dites extra bordures) un nouveau dossier a été déposé (B/FR/ ). Cette demande est la continuation de ce dossier. - L ensemble des essais déjà réalisés a permis de faire la preuve de la faisabilité de la production de lipase gastrique dans des grains de maïs à l échelle pilote (plusieurs kilogrammes de protéines obtenus) et de l intérêt thérapeutique de cette enzyme recombinante pour l absorption des graisses chez des malades atteints d insuffisance pancréatique exocrine. - Les essais ont permis de décider du choix de l évènement de transformation et des conditions de culture et de séchage du maïs adaptées à la production de la protéine recombinante. - Les essais ont permis de mettre en place un procédé d extraction et de purification à l échelle pilote. - Les essais ont permis de montrer l innocuité et l efficacité de cette lipase recombinante à travers des études de toxicité chez l animal, de pharmacodynamie et d études pré-cliniques et cliniques Phases I et IIa "Preuve de principe" chez l homme. Des études sur la stabilité du principe actif ont également été réalisées. Objectifs des essais en 2005 et pour les 3 années suivantes : Produire des grains de maïs (biomasse) exprimant la lipase gastrique pour : - réaliser les études galéniques, - terminer l ensemble des tests cliniques nécessaires à l obtention de l Autorisation de Mise sur le Marché (AMM) avec la lipase gastrique recombinante purifiée produite à l échelle industrielle, - tester le procédé d extraction / purification à une échelle quart de grand, - optimiser nos travaux sur la mise en place d une filière dédiée compatible avec les exigences réglementaires applicables à la production de principes actifs à usages thérapeutiques. Produire des graines de maïs (semence) exprimant la lipase gastrique pour : - continuer les productions de biomasse, - poursuivre les introgressions dans deux nouvelles lignées par sélection au champ, - développer deux nouveaux hybrides pour pouvoir diversifier les zones de productions. Nombre et surface des essais (Pour l année 2005) : - 2 à 3 essais totalisant environ 20 hectares pour une production de grains de maïs biomasse destinés à poursuivre les études cliniques, - 1 essai d environ 0.5 ha pour la production de semences hybrides, - 1 essai d environ 3000 m² pour la production de semences de base femelle de l hybride, - 1 essai d environ 3000 m² pour la production de semences de base mâle. 6/39\n7 INTRODUCTION Au terme de l autorisation pluriannuelle accordée pour le dossier B/FR/ autorisée sous le n 00/011, d autres essais en champ qui sont la suite logique des essais réalisés depuis 1997 (dans le cadre des autorisations obtenues après les avis favorables de la CGB pour les dossiers , B/FR/ et B/FR/ ), font l objet de cette notification. Les plantes de maïs utilisées dans ces essais produisent dans leurs grains, une lipase gastrique utilisée à des fins médicales, pour traiter en particulier les troubles digestifs des patients atteints de la mucoviscidose. La pathologie que l on souhaite traiter Les lipides, principalement les triglycérides à chaînes longues, constituent le principal apport calorique de l alimentation humaine. La digestion de ces lipides dans le tube digestif (ou lipolyse) est assurée par deux enzymes naturellement produites au moment du repas, la lipase gastrique et la lipase pancréatique. Ces enzymes sont indispensables à la libération des acides gras et à leur assimilation au niveau de l intestin grêle. Certaines affections de l estomac et du pancréas peuvent être responsables d une réduction, voire d une absence, de sécrétion de ces enzymes digestives et être à l origine de troubles nutritionnels sévères. C est le cas notamment chez les personnes atteintes de mucoviscidose et de pancréatite chronique. L apport d enzymes exogènes sous forme d extraits pancréatiques d origine animale représente actuellement le seul traitement possible de ces maladies. La mucoviscidose est la maladie génétique la plus fréquente dans les pays occidentaux. On estime à près de le nombre de personnes atteintes de cette maladie dans le monde (source «Cystic Fibrosis Foundation»). Le mode de production de la lipase gastrique par les plantes pourrait être une alternative totale ou partielle aux extraits pancréatiques de porc actuellement utilisés et inefficaces chez environ 15% des patients atteints de mucoviscidose. MERISTEM souhaite développer cette lipase gastrique pour le traitement de la malabsorption des graisses chez les patients atteints de mucoviscidose. Le principe de production de lipase gastrique dans le maïs L information génétique, permettant la production de la lipase gastrique, a été introduite dans des cellules de maïs à partir desquelles de nouvelles plantes ont été produites. L une de ces plantes a été sélectionnée pour ses performances à produire la lipase gastrique dans les graines et a permis d obtenir la descendance qui fait l objet de ce dossier. Les maïs utilisés sont également tolérants à un herbicide, ce qui a permis de réaliser facilement leur sélection pendant les premières phases de développement. Les plantes de maïs exprimant cette lipase gastrique sont cultivées comme des maïs traditionnels sauf en ce qui concerne les mesures qui sont prises pour éviter toute dissémination incontrôlée. Les conditions de productions en plein champ seront telles que les risques de dissémination incontrôlée sont extrêmement faibles. 7/39\n8 Il faut notamment remarquer que les productions de biomasse de maïs destinées à l obtention de lipase gastrique se feront sans production de pollen transgénique puisque les hybrides transgéniques utilisés sont mâles stériles. Pollen non transgénique Plantes femelles qui expriment la lipase gastrique ET mâles stériles ou castrées Pollen non transgénique Plantes non transgéniques Production de la biomasse Grains de maïs Plantes non transgéniques Rangées de plantes non transgéniques Lorsque les grains de maïs arrivent à maturité, ils sont récoltés puis, après transfert sur un site agréé, séchés à basse température, nettoyés et stockés. Si le grain n est pas séché ou stocké correctement la lipase gastrique se dégrade. 8/39\n9 Pour pouvoir être utilisée en tant que principe actif thérapeutique, la lipase gastrique recombinante de maïs doit être extraite de la graine puis purifiée : Grains de maïs secs stockés Broyage EXTRACTION Macération dans une solution saline Elimination des fragments solides Concentration des protéines extraites Chromatographie(s) PURIFICATION Concentration finale Lipase gastrique recombinante purifiée GALENIQUE Formulation pour utilisation médicale Lot de lipase gastrique recombinante purifiée lyophilisée 9/39\n10 L avancement du projet Les lipases et la lipase gastrique en particulier sont des protéines naturellement présentes en grande quantité dans le système digestif de tous les animaux. On trouve également des lipases chez les plantes où elles ont des fonctions métaboliques variées. La lipase gastrique à la particularité d être active dans l estomac, c'est-à-dire à ph acide et aux alentours de 37 C. Pour notre projet, la lipase gastrique est exprimée dans les grains de maïs. A notre connaissance et sur la base de nos observations sur le terrain, elle ne confère pas aux plantes des capacités nouvelles de multiplication et d adaptation à l environnement. Les essais en champ réalisés depuis 1997 n ont montré aucun comportement particulier de ce maïs. Ces essais en champs ont permis les productions de lipase nécessaires à la réalisation des essais de toxicologie, de pharmacodynamie ainsi que des essais cliniques de phase I et IIa. Ces études réglementaires sont conduites dans le but d obtenir à terme une autorisation de mise sur le marché du médicament. Plusieurs études de toxicité ont été réalisées avec des doses uniques ou répétées de cette lipase : - Des rats ont reçu par voie orale, tous les jours pendant 4 semaines, jusqu à 0.5 g de lipase / kg de poids corporel ; soit la quantité de lipase contenue dans une demi fois leur poids en maïs, tous les jours pendant 4 semaines. - Des rats ont reçu par voie orale, en dose unique, jusqu à 5 g de lipase / kg de poids corporel ; soit la quantité de lipase contenue dans cinq fois leur poids en maïs. - D autres essais de toxicité ont été menés avec des mini-porcs, des chiens et des singes. Dans aucun cas, quelque soit la dose utilisée il n a été constaté de toxicité. En ce qui concerne les essais de pharmacodynamie et les premières phases d essais cliniques, plus de soixante patients volontaires (sains ou atteints d insuffisance pancréatique exocrine) ont été traités par voie orale avec de la lipase gastrique recombinante. Certains sujets ont été traités avec des doses de lipase équivalant à 3 kg de maïs (dose unique), d autres ont reçu l équivalent de 900 g de maïs par jour pendant 10 jours. Aucun effet indésirable sévère n a été détecté. La lipase gastrique recombinante a été bien tolérée et a fait la preuve de son efficacité pour la digestion des graisses que ce soit en complément des extraits pancréatiques utilisés en pratique courante, ou en monothérapie. Les expérimentations envisagées Les essais cliniques doivent être poursuivis avec la lipase gastrique dans sa forme galénique définitive en vue d optimiser son efficacité clinique. Le procédé d extraction / purification doit être développé au niveau semi industriel. Environ 5 tonnes de maïs sont nécessaires à l obtention d un kilogramme de lipase gastrique purifiée. Les essais de mise au point industrielle et les essais de galénique nécessitent chacun à eux seuls plusieurs kilogrammes de lipase gastrique recombinante. L essai clinique de Phase III destiné à évaluer sur le long terme la tolérance et l efficacité de la lipase gastrique demandera plusieurs dizaines de kilogrammes de principe actif. C est pourquoi le développement de ce projet passe par des productions de biomasse de plusieurs dizaines d hectares : environ 20 en 2005 jusqu à une centaine en /39\n11 Les études prévisionnelles de marché montrent un besoin d environ une tonne de principe actif par an, soit environ 5000 tonnes de maïs à produire au champ chaque année, ce qui, compte tenu des dispositifs de culture, devrait correspondre à une surface de maïs cultivée d environ 1000 hectares. Les productions en plein champ sont donc indispensables si l on veut disposer d un produit à un coût compétitif pour les patients et les organismes de santé publique. Les biomasses produites au cours de ces différents essais permettront également d acquérir des données sur la fiabilité du système de production et de la reproductibilité de la qualité du principe actif extrait et purifié. En parallèle, des productions de semences seront réalisées afin d être en mesure de poursuivre les essais de production de biomasse sur plusieurs années. Ces parcelles de multiplication de semences avec production de pollen porteur de l évènement de transformation sont indispensables à l obtention d une biomasse de qualité. Ces parcelles représentent au plus quelques pourcents des surfaces de production de biomasse et sont réalisées avec des mesures d isolement géographique strictes. Deux nouveaux hybrides de maïs seront testés avec le même événement de transformation afin de pouvoir diversifier les zones de culture possibles et d avoir plusieurs alternatives si l une des lignées devait être abandonnée. Il faut rappeler que la lipase gastrique n a montré aucune toxicité à des doses bien supérieures aux quantités de maïs habituellement consommées. En outre, la lipase gastrique est une protéine qui perd son activité lorsqu elle est amenée à des températures élevées comme celles qui sont habituellement utilisées pour le séchage de maïs grain ou sa cuisson (> 100 C). L environnement réglementaire médical Les instances réglementaires européennes et américaines s intéressent à ce mode de production et ont initié une réglementation relative à la production de protéines recombinantes à usage thérapeutique dans les plantes : - Points to consider for production of recombinant proteins in transgenic plants (draft). EMEA. - Draft guidance for industry: medicinal products from bioengineered plants for use in humans and animals. USDA-FDA. En juillet 2003, la lipase gastrique recombinante produite dans le maïs a reçu le statut de médicament orphelin pour l Europe. Les médicaments orphelins sont des médicaments utilisés pour le diagnostic, la prévention ou le traitement de maladies létales ou très graves qui atteignent un nombre réduit de patients de la communauté européenne. 11/39\n12 A. INFORMATIONS GENERALES 1. Nom et adresse du notifiant (société ou institut) Société MERISTEM Therapeutics 8, rue des frères Lumière Clermont-Ferrand 2. Qualification et expériences des scientifiques responsables - Directeur Bio Industriel, Ingénieur INSA Toulouse, Docteur Ingénieur en Fermentation, plus de 20 ans d expérience en production biotechnologique dont 15 ans au sein du Groupe Roussel Uclaf. - Directeur Recherche, Docteur en Physiologie et Biochimie, 17 ans d expérience en biotechnologie. - Directeur des Affaires Médicales et Réglementaires, Docteur en Médecine, 15 ans d expérience sur le développement et l enregistrement de médicaments en particulier au sein du groupe Dolisos. - Responsable Production Végétale, D.E.A. Biologie et Physiologie Végétale, 17 ans d expérience en biotechnologie végétale. Chaque essai est mené par des ingénieurs et techniciens qualifiés ayant déjà mis en place et suivi différents essais en champ du même type et de types différents en France et à l étranger et cela pendant plusieurs années. Les agriculteurs intervenants sont formés et encadrés par du personnel de MERISTEM Therapeutics. 3. Titre du projet Essais au champ pluriannuels de maïs génétiquement modifié exprimant une lipase gastrique pour des applications médicales (Pour l année 2005 et les 3 années suivantes). B. INFORMATIONS CONCERNANT LES PLANTES RECEPTRICES 1. Nom complet Zea mays ssp. mays a) Nom de famille : Poaceae b) Genre : Zea c) Espèce : mays d) Sous-espèce : mays e) Cultivar/lignée : Hybride présentant une stérilité mâle cytoplasmique Lignées parentales mâles, mâles fertiles mainteneuses de stérilité cytoplasmique 12/39\n13 Lignées parentales femelles, mâle stérile et mâle fertile mainteneuse de stérilité cytoplasmique f) Nom usuel : maïs 2a) Informations concernant la reproduction i) Mode(s) de reproduction Le maïs est une plante monoïque possédant deux inflorescences (mâle et femelle) distinctes : Les fleurs mâles, groupées en panicule au sommet de la tige, ne portent que des étamines entourées de glumelles. Elles apparaissent avant les fleurs femelles (protandrie). Les fleurs femelles, groupées en un ou plusieurs épis à l'aisselle des feuilles, n'apparaissent que par leurs longs styles appelés "soies" sortant des bractées ou spathes entourant chaque épi. Chaque fleur contient un ovaire unique. Selon les variétés, un épi de maïs comprend 300 à 500 fleurs. La reproduction est assurée par la libération du pollen contenu dans les étamines par ouverture des sacs polliniques (ou anthères). Le pollen libéré tombe de la panicule par simple gravité et est transporté par le vent. Il arrive ainsi sur les soies, permettant la fécondation. Dans les minutes qui suivent son arrivée sur la soie, le grain de pollen émet un tube pollinique. Celui-ci progresse rapidement dans la soie et arrive en moins de 24 heures jusqu'à l'ovule. Plusieurs dizaines de grains de pollen peuvent "germer" dans une même soie, mais un seul parviendra à l'ovule et assurera la fécondation. Pour une seule panicule, la libération totale du pollen dure 8 à 10 jours. L'émission du pollen se fait surtout le jour mais débute très peu de temps après le lever du soleil. Elle passe par un maximum au milieu de la matinée. En cas de pluie ou d'irrigation, la déhiscence des anthères est limitée et le pollen reste enfermé dans les loges des étamines. La durée de vie du pollen est généralement de quelques dizaines de minutes à quelques heures seulement. Le mode de reproduction est dit allogame (se dit d'un individu ou une population dont le mode préférentiel de reproduction est l'allogamie, mode de reproduction sexuée dans lequel la fécondation d'un gamète femelle est assurée par un gamète mâle d'un autre individu) anémophile (pollinisation par le vent). ii) Facteurs spécifiques affectant la reproduction Du fait de la monœcie et du décalage dans le temps de la maturité mâle et femelle, la fécondation croisée est favorisée (allogamie). En conditions naturelles la fécondation croisée est supérieure à 95%. Un faible taux d'autofécondation est tout de même possible (inférieur à 5%). Néanmoins, dans le cas des productions de sélection de semences classiques, l homme peut diriger ces croisements dans un sens comme dans l autre et ainsi favoriser les autofécondations par exemple. Donc l homme peut être un facteur important affectant la reproduction. Le principal mode de transport du pollen étant le vent et le pouvoir de fertilité et la viabilité du pollen étant relativement fragiles et courts, les conditions climatiques ont un rôle important pouvant affecter la reproduction. En général la viabilité du pollen est de 10 à 30 minutes, mais elle peut être plus longue lorsque les conditions sont favorables (Coe et al., (1988) The Genetics of Maize). Dans 13/39\n14 des conditions de températures élevées et de dessiccation, la viabilité du pollen est de l ordre de quelques minutes ; ces conditions peuvent même abîmer la panicule avant que du pollen viable soit émis. Il est également important d avoir du pollen en quantité suffisante, bien réparti et au bon moment pour avoir une bonne fécondation. Les pratiques culturales sont également un facteur important pouvant affecter la reproduction. iii) Temps de génération Le maïs est une plante annuelle avec un temps de génération (cycle de culture) court. Généralement, le cycle de culture, du semis à la récolte des grains, peut être estimé à environ 7 mois. Le semis, en France, a lieu à partir du mois d'avril et la récolte en octobre-novembre. Le cycle de culture dépend des variétés utilisées (plus ou moins précoces) et de l utilisation de la culture (maïs fourrage, maïs grain ). 2b) Compatibilités sexuelles avec d autres espèces sauvages ou cultivées, y compris la répartition en Europe des espèces compatibles Le maïs est une plante graminée sub-tropicale annuelle originaire d Amérique centrale et n a pas d habitat naturel en France. Les espèces les plus proches du maïs sont la Téosinte, graminée sauvage d Amérique centrale (Mexique essentiellement) et le genre apparenté Tripsacum. Les espèces voisines de Zea sont limitées sur le plan géographique et se trouvent au Mexique et au Guatemala. Seule la Téosinte peut se croiser avec le maïs dans des conditions naturelles. Il n y a donc pas d hybridation interspécifique possible en France du fait de l'absence d'espèces voisines ou apparentées se développant spontanément sur le territoire français. 3. Capacité de survie a) Capacité à former des structures de survie ou de dormance Le maïs est une plante annuelle qui se reproduit par ses graines et ne présente pas de moyens de reproduction végétative en conditions naturelles. Les semences sont nombreuses mais leur viabilité est fortement limitée car elles sont très sensibles aux maladies et au froid. En règle générale, seuls les épis non battus peuvent permettre aux grains de conserver éventuellement une capacité de germination l année suivante. Il n y a donc en général pas ou très peu de repousses à la suite d une culture de maïs et si des repousses apparaissent dans les jours suivant la récolte, les plantules sont détruites par le froid et n atteignent pas le stade reproductif. b) Facteurs spécifiques affectant la capacité de survie Les facteurs affectant la capacité de survie sont nombreux pour le maïs ; la survie des graines dépend des conditions climatiques (température, humidité), de l humidité de la graine, de la protection de l enveloppe, du stade de développement et des pathogènes en présence. Les conditions climatiques hivernales de manière générale ne permettent pas la repousse de cette plante. Le gel a un effet très négatif sur le pouvoir germinatif des graines. Les pratiques agricoles courantes conduisent également à la destruction des graines. 14/39\n15 4. Dissémination a) Voies et étendue de la dissémination Les deux formes de dissémination sont les graines et le pollen. Au cours de sa domestication à partir de la Téosinte, le maïs a gagné de nombreux attributs importants sur le plan agronomique. Sa domestication est telle que les grains ne peuvent tomber de l'épi et se disséminer sans intervention extérieure. Les grains de maïs sont peu résistants au froid. Les plants croissent parfois dans des champs non cultivés, en bordure des routes ou spontanément dans les cultures l'année qui suit une récolte de maïs, mais ce dernier est incapable de se reproduire de façon soutenue s'il n'est pas cultivé, et il n'envahit pas les habitats naturels (Gould, F.W. (1968) Grass systematics, p Mc Grow Hill ; N.Y.). En Europe, le maïs n est qu une espèce de grande culture, sa dissémination n intervient que dans les espaces agricoles par semis. Si du pollen viable de maïs est apporté par le vent sur des stigmates réceptifs d un autre maïs, une fécondation croisée peut se faire. Ce transfert potentiel devient de plus en plus improbable quand : - La période de viabilité du pollen (30 minutes en moyenne) est affectée par de mauvaises conditions climatiques, - La distance entre les deux maïs augmente. Une distance de séparation de 200 m est reconnue comme permettant de produire des semences aux normes de pureté internationalement autorisées (normes de certification OCDE). - La masse pollinique est importante (phénomène de dilution). b) Facteurs spécifiques affectant la dissémination Les facteurs affectant la dissémination par l intermédiaire des graines sont : - Les conditions climatiques : les graines sont très sensibles au froid (gel hivernal notamment), - La physiologie de la graine : très peu de capacité de survie en milieu naturel, - La morphologie de l épi : les graines, fortement liées à la rafle, et les spathes, protégeant les graines, rendent la dissémination des graines difficile sans l intervention humaine, - Les maladies et faune pathogène de la graine, - L homme qui est le facteur le plus déterminant. Il réalise les semis dans un espace agricole déterminé. Les facteurs affectant la dissémination par l intermédiaire du pollen sont : - Les conditions climatiques : Le pollen provenant de l'inflorescence mâle est dispersé par gravité et par le vent. Sa dissémination est liée à la présence du vent, - La physiologie du pollen : Le pollen a une durée de vie naturellement faible. Celle-ci diminue avec des conditions climatiques défavorables (forte température, humidité ambiante élevée). Le début de la libération du pollen a lieu généralement deux ou trois jours avant l'apparition des soies des épis (protandrie). La durée de floraison des fleurs mâles est d environ 6 à 10 jours. La libération du pollen se fait principalement dans la matinée. La présence de soies réceptives au moment de la pollinisation est également un facteur de dissémination, - L homme : dans le cas de croisements contrôlés lors des productions de semences, l homme réalise la dissémination du pollen de manière contrôlée. 15/39\n16 5. Distribution géographique de la plante Le maïs est dépendant de l'homme pour sa dispersion géographique. Le maïs est une plante cultivée utilisée, soit comme ensilage, soit pour sa production de grains (Maïs consommation, semence et doux). Il s'agit d une des plus importantes cultures céréalières du monde. L Union Européenne est le 4 éme producteur mondial de maïs. La France est un des principaux producteurs de maïs en Europe : La production française de maïs (fourrage et grain) est localisée principalement dans les régions suivantes : Façade atlantique (de la Normandie jusque dans le Midi Pyrénées) Les régions Grand Ouest avec notamment les régions Centre et Poitou- Charentes L'Est avec notamment les régions Rhône-Alpes et Alsace La zone Nord-Loire (Centre, Ile-de-France, Picardie, Champagne-Ardenne ) 6. Pour les espèces qui ne poussent pas habituellement dans les Etats membres, description de l habitat naturel de la plante y compris les informations sur les prédateurs naturels, les parasites, les concurrents et les symbiotes Vieux de plusieurs milliers d années, le «mahiz», ramené par Christophe Colomb d Amérique centrale, a beaucoup voyagé et a été adapté sous des latitudes variées. Il est aujourd hui présent sur les cinq continents, à travers des milliers de variétés différentes, poussant aussi bien en Europe que dans les régions semi-arides d Amérique Centrale ou dans les zones humides d Asie du Sud-Est. Cependant, les exigences climatiques du maïs ne lui permettent pas une aire de culture dans le monde aussi étendue que celle du blé, sa production étant plutôt concentrée dans l'hémisphère nord. En climat continental (Canada, URSS), le maïs est cultivé jusqu'au 60ème parallèle. Le maïs est une plante sub-tropicale originaire d Amérique centrale qui ne se développe pas en dessous de 9-10 C. Son habitat naturel étant chaud et humide, le maïs a une température optimale de croissance de C et des besoins hydriques importants à certains stades de son développement. Le maïs est sensible à de nombreux parasites et ravageurs. Les plus importants sont les parasites fongiques (Fusarium spp., Ustilago maydis, Sphacelothecia reliana), les insectes (Taupins, Pyrale, Sésamie, Chrysomèle, Pucerons du maïs, Mouche des semis, Noctuelle Ipsilon, Scutigérelle) et les vers (Heliothis zea, Elaterid spp.). Les cultures de maïs peuvent également être attaquées par des oiseaux (corneilles) et animaux sauvages (cerfs, sangliers). 7. Autres interactions potentielles, pertinentes pour l OGM, de la plante avec des organismes dans l écosystème habituel, ou ailleurs, y compris les informations sur sa toxicité pour les hommes, les animaux et d autres organismes Le maïs avec le blé et le riz est l une des plantes les plus cultivées au monde. Récolté en grain ou en fourrage, il a une très grande part dans l alimentation animale et humaine. La plante n est pas considérée comme étant dangereuse ou ayant des effets toxiques pour les hommes, les animaux et autres organismes. Dans l environnement, le maïs a des interactions avec des insectes, des oiseaux et des mammifères. Le maïs est également sensible à certaines maladies dues essentiellement à des champignons (anthracnose, helminthosporiose, fusariose, charbon, mildiou). 16/39\n17 En ce qui concerne les organismes végétaux, l interaction est très limitée par les techniques agricoles puisque le maïs est présent sur des terres cultivées. Les mauvaises herbes (liseron, Imperata cylindrica) sont généralement en compétition avec les plantes en cultures surtout avec les jeunes plantes et sont source d appauvrissement du sol ce qui explique leur élimination dans les grandes cultures. C. INFORMATIONS CONCERNANT LA MODIFICATION GENETIQUE 1. Description des méthodes utilisées pour la modification génétique La méthode utilisée est la transformation biologique par Agrobacterium tumefaciens. Cette bactérie a la propriété de réaliser naturellement la transformation génétique d'une plante, afin de la parasiter. Une construction génétique est introduite dans la bactérie, rendue avirulente au préalable. La bactérie transfère cette construction (partie ADN-T, pour ADN Transféré qui comprend le gène d intérêt, le gène marqueur et les séquences contrôlant leur expression, cf. paragraphe D.1) dans la plante qui l intègre à son génome. C'est une technique couramment utilisée. Cette technique est décrite par Ishida et al. (Nature Biotechnology (1996) 14 : ). Elle est connue pour générer un faible nombre de copies (le plus souvent de 1 à 5 copies) et un faible nombre de sites d insertion. Des embryons immatures d une lignée de maïs dont l aptitude à la régénération en milieu artificiel est élevée, sont mis en co-culture in vitro avec Agrobacterium tumefaciens pour être transformés. Après quelques jours, les embryons sont transférés dans un autre milieu de culture contenant un herbicide (glufosinate ammonium) utilisé comme agent sélectif. Seuls les cellules ayant été transformées tolèrent cet herbicide et forment des cals. Dans des conditions appropriées, les cals se développent en plantules. Celles-ci sont acclimatées en chambre de culture puis en serre. Lors de la transformation génétique, une ou plusieurs copies de l'adn-t peuvent s'insérer à différents endroits du patrimoine génétique de la cellule végétale. Afin de s'assurer que le gène introduit s'exprime et produit la protéine désirée, en quantité suffisante et avec la qualité requise, des analyses biochimiques sont réalisées sur les graines. Pour caractériser les événements de transformation retenus des analyses moléculaires sont effectuées. Au cours de précédentes expérimentations (dossier B/FR/ ), un évènement de transformation, T019H2 a été sélectionné. La descendance de cet événement de transformation sera utilisée pour les expérimentations proposées dans ce dossier. 2. Nature et source du vecteur utilisé Evénement de transformation T019H2 Plasmide pmrt1075 Le plasmide pmrt1075 diffère de psb1 (Komari et al., 1996, Plant J. 10 : ) par l introduction entre les bordures droite et gauche de 2 cassettes d expression, à savoir : - la cassette d expression de l ADNc codant la lipase gastrique canine. Le promoteur du gène γzéine du maïs contrôle l expression de l ADNc codant la lipase gastrique canine fusionné à la séquence codant le peptide signal de lipase gastrique de lapin. La séquence se termine par l extrémité 3 du gène de la nopaline synthase d Agrobacterium tumefaciens. 17/39\n18 - la cassette d expression du gène bar. Le promoteur et l intron 1 du gène de l actine du riz contrôlent le gène bar de Streptomyces hygroscopicus. La séquence se termine par l extrémité 3 du gène de la nopaline synthase d Agrobacterium tumefaciens. Les informations détaillées, concernant la nature et la source du vecteur utilisé, sont fournies aux experts de la Commission du Génie Biomoléculaire (CGB), chargée de l évaluation des risques pour la santé publique et l environnement, dans l annexe confidentielle jointe à cette notification. La confidentialité de ces informations est liée aux obligations de protection du secret industriel. 3. Taille, origine (nom) des organismes donneurs et fonction recherchée de chaque fragment constituant de la région envisagée pour l insertion La construction génétique utilisée confère aux plantes la capacité à produire une lipase gastrique spécifiquement dans l albumen de la graine et la tolérance à un herbicide (glufosinate ammonium) exprimée dans toute la plante et utilisée comme marqueur de sélection des cellules transformées. L expression de ces deux caractères est sous contrôle par des séquences promotrices et terminatrices. Les informations détaillées, concernant la taille, l origine des organismes donneurs et la fonction recherchée de chaque fragment constituant de la région envisagée pour l insertion, sont fournies aux experts de la Commission du Génie Biomoléculaire (CGB), chargée de l évaluation des risques pour la santé publique et l environnement, dans l annexe confidentielle jointe à cette notification. La confidentialité de ces informations est liée aux obligations de protection du secret industriel. D. INFORMATIONS CONCERNANT LA PLANTE SUPERIEURE GENETIQUEMENT MODIFIEE 1. Description du ou des caractères et des caractéristiques qui ont été introduits ou modifiés Une construction génétique a été introduite. Gène Fonction Caractéristique Lipase (LGC) Lipase gastrique (= protéine intérêt) Enzyme qui hydrolyse in vivo les glycérides à chaînes longues qui représentent la majorité des graisses consommées par l homme. Sur la base de nos connaissances, cette protéine ne confère aucune propriété particulière à la plante. L enzyme reste stockée dans le grain. C est cette protéine qui sera extraite et purifiée. bar Phosphinothricine N-acétyltransférase qui détoxifie la phosphinothricine (substance active de l herbicide glufosinate ammonium) par acétylation. Enzyme qui induit une tolérance de la plante à l herbicide glufosinate ammonium. L expression de cette protéine est utilisée pour la sélection des plantes transformées. 18/39\n19 2. Informations sur les séquences réellement insérées ou délétées a) Taille et structure de l insert et méthodes utilisées pour sa caractérisation, avec indication des parties de vecteur introduites dans la plante supérieure génétiquement modifiée (PSGM) ou de tout ADN vecteur ou étranger restant dans la PSGM Les résultats obtenus montrent qu aucune séquence plasmidique située hors de l ADN-T n est présente dans le génome du transformant primaire T019H2. Les informations détaillées, concernant la taille et structure de l insert et les méthodes utilisées pour sa caractérisation, sont fournies aux experts de la Commission du Génie Biomoléculaire (CGB), chargée de l évaluation des risques pour la santé publique et l environnement, dans l annexe confidentielle jointe à cette notification. La confidentialité de ces informations est liée aux obligations de protection du secret industriel. b) En cas de délétion, taille et fonction des régions supprimées Non applicable dans ce dossier. c) Nombre de copies de l insert Les résultats obtenus montrent qu au moins 2 copies de l ADNc codant pour la lipase gastrique sont présentes dans les descendants du transformant primaire T019H2. Les informations détaillées sont fournies aux experts de la Commission du Génie Biomoléculaire (CGB), chargée de l évaluation des risques pour la santé publique et l environnement, dans l annexe confidentielle jointe à cette notification. La confidentialité de ces informations est liée aux obligations de protection du secret industriel. d) Localisation de l insert dans les cellules (intégré au génome nucléaire, chloroplastique ou mitochondrial, ou sous forme non intégrée) et méthodes utilisées pour sa détermination L insert est intégré au génome nucléaire par la technique de transformation par Agrobacterium tumefaciens. L insert est transmis de manière mendélienne dans la descendance (cf. paragraphe D5). 3. Informations concernant l expression de l insert a) Informations concernant l expression évolutive de l insert durant le cycle de vie de la plante et les méthodes utilisées pour sa caractérisation L expression de l insert a été suivie régulièrement depuis l obtention de cet événement de transformation en Concernant l expression de la partie codante de la lipase gastrique : Le promoteur du gène γzéine de maïs qui contrôle l expression de l ADNc codant la lipase gastrique, est spécifique de l albumen du grain. Des essais préliminaires avec un gène rapporteur 19/39\n20 placé sous contrôle de ce même promoteur n ont permis de détecter aucune expression significative dans d autres organes. La lipase gastrique peut être détectée par la technique de Western blot au moyen d anticorps spécifiques. L activité de cette protéine est également régulièrement déterminée par une technique de titrimétrie. La technique employée est fondée sur celle de Gargouri et al. (Gastro-enterology 1986, 91, ) et Carrière et al. (Eur.J.Biochem, 202, (1991)). En présence d un substrat (la tributyrine), la lipase provoque la libération d ions H La quantité de soude nécessaire pour neutraliser les ions H ainsi libérés est directement liée à l activité lipasique du produit à tester. Des études ont montré que la quantité de lipase extractible avait tendance à diminuer avec la dessiccation du grain. Concernant l expression de la partie codante de la Phosphinothricine N-acétyl-transférase (PAT) : Le promoteur du gène actine 1 de riz qui contrôle l expression du gène bar, codant pour la protéine PAT, est constitutif. L expression de cette protéine est montrée en observant le phénotype de la plante après une application de glufosinate ammonium. Ce test de sélection est réalisé en laboratoire et en serre. La détection de la protéine PAT est également recherchée à l aide de «Strip Test» permettant d avoir une réponse rapide (quelques minutes) sur sa présence ou non. Ce moyen d analyse est basé sur les techniques immuno-enzymatiques. b) Parties de la plante où l insert est exprimé (Par exemple la racine, la tige, le pollen, etc.) La partie codante de la PAT conférant la tolérance au glufosinate ammonium est sous contrôle d un promoteur constitutif. La partie codante de la lipase gastrique est sous contrôle d un promoteur permettant une expression ciblée dans l albumen des grains. Des analyses par western blot n'ont pas permis de mettre en évidence de lipase gastrique dans la tige, la feuille, la racine et le pollen (seuil de détection 0.01% des protéines solubles totales). 4. Description des différences entre la plante génétiquement modifiée et la plante réceptrice a) Mode(s) et/ou vitesse de reproduction Au cours des nombreuses cultures en serre et en plein champ effectuées avec des maïs ayant intégré cet événement de transformation, aucune modification de mode, ou de vitesse de reproduction n a été observé par rapport aux plantes non modifiées. Régulièrement, des plantes non transformées sont cultivées dans les parcelles expérimentales, en tant que témoins pour les parcelles de production de semences ou en tant que pollinisatrices pour les parcelles de production de biomasse. Au cours de ces essais, aucune différence ou anomalie particulière n a été relevée par le personnel en charge de ces opérations. b) Dissémination Au cours des différents essais réalisés en serre et en plein champ, aucune différence sur la capacité de reproduction des plantes transformées et en particulier sur le pollen ou sur les grains, n a été relevée par le personnel en charge des cultures. De même, aucun effet sur la capacité de dissémination n'a été constaté. 20/39\n21 c) Capacité de survie De nombreux essais ont été réalisés en serre et en plein champ afin de produire des semences exprimant cette protéine intérêt. Aucune modification de la faculté germinative des semences récoltées n a été observée par rapport à des semences de même variété et non transgéniques. En ce qui concerne la tolérance au glufosinate ammonium, cette caractéristique de la plante transformée ne lui confère aucun avantage sélectif si l herbicide n est pas appliqué. Or l application de cet herbicide à large spectre n est pas communément réalisée en dehors de l environnement agricole et il n est pas homologué en France pour des applications sur des cultures commerciales de céréales. De nombreux essais ont montré que la plante transformée ne présente pas une capacité de survie modifiée par rapport aux plantes non transformées. 5. Stabilité génétique de l insert et stabilité phénotypique de la PSGM L évènement de transformation T019H2 a été introgressé par croisements sexuels successifs dans des lignées parentales mâle et femelle d un hybride commercial. Une fois l introgression terminée, ces lignées ont été rendues homozygotes pour l évènement de transformation T019H2 par autofécondations successives. Puis ces lignées ont été multipliées et croisées de façon à obtenir des semences hybrides. Au cours de ces croisements, cet évènement de transformation s est comporté comme un caractère monogénique classique du point de vue des lois de Mendel. Il a été choisi d introgresser cet événement de transformation dans un hybride présentant une mâle stérilité cytoplasmique, c'est-à-dire que les plantes hybrides transgéniques ne produisent pas de pollen. Enfin ces semences hybrides ont été semées et croisées avec des plantes hybrides non transgéniques pour produire la biomasse. Treize générations de plantes ont été produites depuis l obtention de l évènement de transformation primaire, jusqu aux lots de biomasse utilisés actuellement. Les analyses Southern blot ne montrent pas de différence de profil de l insert entre la plante de première génération (T1) et des plantes de génération T 13. Par ailleurs la quantité de lipase présente dans les graines reste sensiblement constante au travers des générations (de l ordre de 1 mg de protéine recombinante par gramme de grains secs et propres). Les tests en serre montrent que la protéine PAT est toujours exprimée et active. Jusqu à présent nous avons observé une bonne stabilité de l insert, de l expression de la lipase gastrique et de la protéine PAT. 6. Toute Modification de la capacité de la PSGM à transférer du matériel génétique dans d autres organismes Transfert horizontal (Transfert de matériel génétique depuis la PSGM vers microorganisme) : Dans le cas de cet événement de transformation, seules les séquences d ADN situées entre deux régions particulières, bordures droite et gauche, ont été transférées au noyau de la cellule végétale. Ces séquences contiennent le gène de l'enzyme PAT et le gène de la lipase gastrique. Or ces deux gènes sont déjà naturellement présents dans la nature : l enzyme PAT est présente naturellement dans le sol, le gène utilisé ayant été isolé d une bactérie du sol et la lipase gastrique est sécrétée dans l'estomac de tous les mammifères. 21/39\n22 En outre, si un transfert horizontal avait lieu, ce qui à notre connaissance n a jamais été montré en conditions naturelles, le promoteur utilisé ne permettrait pas a priori une expression de la lipase chez les bactéries (Cf. paragraphe C.2). De plus, «Il a été estimé que les publications scientifiques les plus sérieuses et les avis de nombreux experts indépendants de l O.C.D.E., de l O.M.S. ou de l Union européenne ont fait apparaître les faits suivants : - Aucun transfert horizontal de gènes depuis les végétaux vers les bactéries n a été jusqu ici documenté dans la nature d après l ensemble de la bibliographie des travaux publiés : (1) impossibilité de mettre en évidence des gènes de résistance transférés aux bactéries du sol à partir de cultures de plantes transgéniques ; (2) impossibilité de mettre en évidence un transfert dans le sol en ajoutant des bactéries hyper-transformables dans le sol et de l A.D.N. de gènes de résistance ; - Le transfert horizontal de gène de résistance depuis les végétaux vers les bactéries est théoriquement possible avec une probabilité très faible et il existe quelques suggestions indirectes que de tels transferts puissent survenir. Dans les conditions optimales de laboratoire, la fréquence de transfert peut être estimée à environ 1 bactérie receveuse sur à 10 18, c est-à-dire une probabilité quasi nulle, à quoi il faut ajouter que les gènes de résistance associés à des plantes transgéniques ne représentent dans le cas du maïs que 1 gène sur , soit 1/40 000ème d A.D.N. ; - Même si le transfert d un gène de résistance d une plante à une bactérie du sol survenait, la très faible pression de sélection du sol ou chez l homme en bonne santé fait que cette bactérie n a aucune chance d être sélectionnée et de propager ainsi son gène de façon horizontale à d autres bactéries.» (Source : extrait du rapport sur la connaissance des gènes à leur utilisation Juin 1998). Transfert interspécifique ou intergénérique (Transfert de matériel génétique depuis la PSGM vers une autre espèce sexuellement compatible autre que le maïs) : Ces types de transferts ne sont pas possibles dans le cas du maïs en France car aucun genre ou espèce ne peut être fécondé par le pollen de maïs, à l exception, très rare, de plantes des genres Tripsacum et Téosinte or ces plantes d'espèces voisines ou apparentées, originaire d Amérique centrale, ne se développent pas spontanément sur le territoire français (Cf. paragraphe B.2.b). Transfert intraspécifique (Transfert de matériel génétique depuis la PSGM vers une plante de maïs non transformée) : Ce cas de transfert est possible dans des champs contigus ou très proches étant donné que la présence de l insert ne modifie pas les capacités de reproduction ni les modes de dissémination et en particulier par le pollen (Cf. paragraphe D.4). Néanmoins, ce type de problème peut être résolu par l adoption à minima de méthodes culturales adéquates, à l instar des règles utilisées pour la production de semences. D autres méthodes, telles que la présence de pièges à pollen (rangs de bordure), la castration, l utilisation de lignées mâles stériles non productrices de pollen transgénique, l ensachage des panicules, peuvent être utilisées afin de réduire au maximum les risques de transfert intraspécifique. 22/39\n23 Dans le cadre des essais faisant l objet de cette demande d autorisation, les méthodes utilisées seront : - une distance d isolement d au moins 400 m pour les parcelles de production de semences et de 200 m pour les productions de biomasse (plantes transgéniques non productrices de pollen), - l utilisation d un système de stérilité mâle cytoplasmique ou d une castration pour les plantes hybrides produisant la biomasse, - la mise en place d au moins 4 rangs de bordure. La stérilité mâle cytoplasmique est une des techniques utilisées pour la production de semences hybrides de maïs : la lignée femelle, non productrice de pollen est fécondée par la lignée mâle et, à maturité, les semences hybrides sont récoltées sur les pieds femelles (Cf. schéma en introduction). Les stérilités mâles cytoplasmiques ont, par définition, une hérédité maternelle. Elles trouvent leur origine dans des mutations de l ADN mitochondrial. Parmi les différents types de stérilité cytoplasmique existant chez le maïs, la «c» a été utilisée pour ce projet. Pour pouvoir multiplier les lignées mâles stériles, non productrices de pollen, il est nécessaire de disposer de lignées isogéniques, ayant le même patrimoine génétique nucléaire, mais dont les mitochondries ne présentent pas de mutation conférant une stérilité mâle. En récoltant les semences produites par fécondation croisée sur les pieds mâles stériles, on parvient à multiplier ces lignées ne produisant pas de pollen. Il faut veiller à ce que les lignées utilisées pour féconder les plantes ne produisant pas de pollen, soient mainteneuses de stérilité, c'est-à-dire qu elles ne possèdent pas de gène nucléaire de restoration de la fertilité. Avant toute dissémination la stérilité des lots de semences hybrides est testée à petite échelle en milieu confiné. En ce qui concerne la production de biomasse, la mesure d isolement mise en œuvre est destinée à éviter l entrée de pollens dans la parcelle, comme il est pratiqué pour la production de semences traditionnelles (Cf. paragraphe B.4.a), et non la sortie de pollen transgénique puisque les plantes transgéniques sont mâles stériles. En effet, il est nécessaire pour la traçabilité de la production du principe actif d éviter les fécondations croisées avec des maïs extérieurs à la parcelle. 7. Information concernant les effets toxiques, allergisants ou autres effets nocifs résultant de la modification génétique sur la santé humaine Dans le cadre des essais déjà réalisés, aucune anomalie particulière n a été relevée par le personnel en charge des cultures. Le personnel n a pas eu non plus de problèmes de santé (allergies ou autres) pouvant avoir un lien avec la manipulation de ce maïs. L'enzyme PAT est très spécifique aux substrats. Les acétyl-transférases sont très présentes dans la nature et ont une très faible stabilité protéolytique et thermique. Une étude de toxicité orale, menée pendant 14 jours, n'a révélé aucune indication de toxicité de la protéine PAT ingérée par des souris à des concentrations pouvant atteindre environ 5000 mg/kg de poids corporel (Source : Consensus document on general information concerning the genes and their enzymes that confere tolerance to phosphinothricin herbicide - ENV/JM/MONO(99)13 Juin 99 OECD). Les essais en champs réalisés depuis 1997 avec la même séquence codante pour une lipase gastrique à travers différents événements de transformation, ont permis de réaliser des essais de 23/39\n24 toxicologie, de pharmacodynamie ainsi que des essais cliniques phase I et IIa. Ces études réglementaires sont conduites dans le but d obtenir à terme une autorisation de mise sur le marché (AMM) de la lipase gastrique. Plusieurs études de toxicité ont été réalisées avec des doses uniques ou répétées de cette lipase : - Des rats ont reçu par voie orale, tous les jours pendant 4 semaines, jusqu à 0.5 g de lipase / kg de poids corporel ; soit la quantité de lipase contenue dans une demi fois leur poids en maïs, tous les jours pendant 4 semaines. - Des rats ont reçu par voie orale, en dose unique, jusqu à 5 g de lipase / kg de poids corporel ; soit la quantité de lipase contenue dans cinq fois leur poids en maïs. - D autres essais de toxicité ont été menés avec des mini-porcs, des chiens et des singes. Dans aucun cas, quelque soit la dose utilisée il n a été constaté de toxicité. En ce qui concerne les essais de pharmacodynamie et les premières phases d essais cliniques, plus de soixante patients volontaires (sains ou atteints d insuffisance pancréatique exocrine) ont été traités par voie orale avec de la lipase gastrique recombinante. Certains sujets ont été traités avec des doses de lipase équivalant à 3 kg de maïs (dose unique), d autres ont reçu l équivalent de 900 g de maïs par jour pendant 10 jours. Aucun effet indésirable sévère n a été détecté. 8. Information concernant la sécurité de la PSGM pour la santé des animaux notamment en ce qui concerne tout effet toxique, allergisant ou autre effet nocif résultant de la modification génétique, lorsque la PSGM est destinée à être utilisée dans l alimentation des animaux Non applicable dans ce dossier. La PSGM n est pas destinée à être utilisée dans l alimentation des animaux. 9. Mécanisme d interaction entre la plante génétiquement modifiée et les organismes cibles (le cas échéant) Non applicable dans ce dossier. 10. Modifications potentielles des interactions de la PSGM avec les organismes non cibles résultant de la modification génétique Aucune interaction particulière n est attendue avec les organismes non cibles. La protéine PAT n est pas connue pour présenter de toxicité. La lipase gastrique exprimée n a, a priori, aucune raison d entraîner des modifications d interaction avec les organismes non cibles. Les diverses études de toxicité aiguë à partir des extraits obtenus sur des plantes transformées (jusqu à plusieurs grammes de lipase recombinante purifiée par kg d animal), n ont montré aucune toxicité. Il faudrait qu un animal consomme plusieurs fois son poids en maïs pour atteindre les doses testées (sans toxicité observée). Cette hypothèse étant peu probable, il y a donc peu d interactions potentielles avec les organismes non cibles. 24/39\n25 De plus, au cours des nombreux essais déjà réalisés, il n y a pas eu d anomalie particulière relevée par le personnel en charge des cultures qui est vigilant sur la faune et la flore à proximité de chaque site. 11. Interactions potentielles avec l environnement abiotique Aucun effet négatif n est attendu sur l environnement abiotique des sites d essais. Les essais seront menés comme n importe quelle culture de maïs non génétiquement modifié. Les techniques culturales utilisées seront également les mêmes que pour du maïs commun. La protéine PAT est une enzyme issue d une bactérie commune des sols. La lipase gastrique est une enzyme active à ph très acide à des températures de C. Par conséquent aucune interaction potentielle avec l environnement abiotique n est attendue. 12. Description des méthodes de détection et d identification de la plante génétiquement modifiée L événement T019H2 est facilement détectable par de nombreuses techniques : Techniques basées sur l ADN : Ces techniques basées sur l ADN et non sur l expression des protéines peuvent être réalisées à partir de toutes les cellules somatiques de la plante puisqu elles ont le même patrimoine génétique (Bien que portées par la plante, les graines sont issues d une fécondation et peuvent ne pas avoir le même patrimoine génétique). Pour des raisons techniques, ces analyses sont le plus souvent réalisées à partir de feuilles. - Le «Southern blot» : Cette technique d analyse moléculaire, permet d identifier spécifiquement par l hybridation d une sonde la présence de chaque fragment de l insert et leur taille respective. Elle permet d identifier l événement de transformation. - La PCR (Polymerase Chain Reaction) : Cette technique de biologie moléculaire permet également l identification des gènes introduits. Elle est basée sur l amplification de l ADN suite à des réactions de polymérisation en chaîne à partir de séquences spécifiques. Selon les séquences choisies on pourra détecter le gène d intérêt et/ou le gène marqueur. Cette technique peut être utilisée pour avoir une information qualitative (présence ou non) ou quantitative. Techniques basées sur l expression des protéines : Expression de la lipase gastrique : - Ce sont les techniques classiques de laboratoires pour l analyse des protéines qui sont basées soit sur la structure (Western blot, ELISA, ), soit sur l activité enzymatique (dosage par titrimétrie tel que décrit dans le paragraphe D.3.a). Ces analyses doivent être réalisées à partir de grains puisque c est là que la lipase est exprimée. Le grain ne doit pas avoir été porté à des températures élevées, telles que celles utilisées habituellement pour le séchage ou la cuisson du maïs, car cela entraîne l'inactivation de la lipase qui, comme beaucoup de protéines, commence à être dégradée dès que l'on dépasse 50 C. Ces techniques sont spécifiques de la lipase gastrique produite, et donc de la séquence codante insérée dans le génome de la plante, mais pas d un évènement de transformation. 25/39\n26 Expression de la protéine PAT : Ces techniques permettent de détecter l évènement de transformation T019H2 puisqu il contient un gène codant pour une protéine PAT, mais ne sont pas spécifiques de cet évènement de transformation. - Le «Leaf painting assay» : Les plantes transgéniques utilisées sont tolérantes au glufosinate ammonium, principe actif d un herbicide, c est-à-dire qu elles ne meurent pas au contact d un tel herbicide. Un test qualitatif de tolérance à l herbicide permet donc de détecter ces plantes transgéniques : - Si les cellules de la plante meurent au contact du glufosinate ammonium, cela signifie que la plante ne produit pas de PAT. - Si les cellules de la plante ne meurent pas au contact du glufosinate ammonium, cela signifie que la plante produit la PAT. Le test est réalisé en appliquant localement en bout de feuille avec un pinceau imbibé, une solution herbicide de glufosinate ammonium. Au bout de quelques jours, une simple observation visuelle permet de conclure : Résultat négatif : La feuille est sèche, jaunie et racornie. La plante n est pas tolérante. Résultat positif : La feuille n a aucune trace. La plante est tolérante. - Le «Strip test» : Cette technique, basée sur une réaction immuno-enzymatique, permet également la détection de la PAT. Des bandelettes imprégnées d anticorps spécifiquement dirigés contre la PAT et couplés à un agent coloré permettent de mettre en évidence la présence de la PAT par une simple observation visuelle d une bandelette mise à tremper quelques minutes dans un broyat d un fragment de feuille ou de grain(s). L avantage est que la méthode peut être utilisée au champ et que le résultat est obtenu rapidement. 13. Information, le cas échéant, sur les précédentes disséminations de la plante génétiquement modifiée De nombreux essais ont déjà été réalisés avec l événement de transformation faisant l objet de ce dossier. Ces essais (production de semences et de biomasse) ont été réalisés en France et à l étranger durant les années 2000, 2001, 2002 et 2003 sur des parcelles allant de quelques centaines de m² à une dizaine d hectares. 26/39


Vu les évènements passés dans le 3e tome, je n’ai pas pu m’empêcher de lire 19 Lunes pour savoir ce qu’il en était parce qu’il faut dire que cette fin…. Mais j’avoue qu’avant de le commencer, j’avais un peu peur étant donné les avis sur ce dernier tome. Beaucoup ont été déçus, mitigés, etc. rien de très rassurant en soi, mais bon, je me suis lancée quand même parce que je voulais savoir et qui sait, peut-être aurai-je un avis différent ?\nBah c’est le cas, je n’ai pas eu de coup de cœur pour ce tome (je pense que le 1er tome restera le meilleur pour moi) mais je trouve que ça conclut assez bien la série et je suis satisfaite du résultat. Ça reste une série très sympathique à lire, que j’ai adoré suivre. l’univers est tel qu’elle avait tout pour plaire et je ne regrette pas un seul instant de m’être lancée dans l’aventure, même si j’ai mis du temps à la lire, etc. une fois remise en rail, tout a été très rapide, et la future présence des deux auteurs a largement contribué à la sortie de la série de ma PAL. J’ai dévoré ce tome une fois encore, mais en même temps c’est si facile à lire et fluide (même si parfois j’ai vu des coquilles et sûrement des soucis de traduction mais ça c’est un autre problème).\nJe ne ferai pas de résumé de l’histoire, étant donné que c’est le dernier tome, on sait un peu à quoi s’attendre et je pense qu’il faut aussi le savourer et pour ça le mieux est de ne rien savoir. Du coup je m’attarderai davantage sur mon avis, tout en donnant un avis général sur la série, tant qu’à faire. J’ai trouvé l’intrigue plutôt bonne et bien menée, franchement c’était très sympathique à lire et j’avais hâte de voir comment ça allait aboutir parce que ça n’est pas gagné d’avance ! Alors certes, on pourrait dire que c’est un peu « facile » à certains moments, plutôt arrangeant, mais je trouve que ça fonctionne quand même plutôt bien. Il y a de bonnes surprises, un peu de suspense et de difficulté pour agrément le tout.\nLes réponses à nos questions sont là, mises à part quelques unes, j’avoue être un peu plus sceptique, notamment autour du personnage de John. Mais bon, après ça n’est pas son histoire personnelle donc je comprends qu’on ne s’y attarde pas plus que ça, mais je trouve ça un peu dommage de ne pas en savoir plus sur lui quand même parce qu’il y a des incohérences si on y regarde de plus près. Et vu tout le pataquès fait autour de lui, j’avoue que j’aurai aimé en avoir plus, donc un peu « déçue » à ce niveau là, mais c’est un détail, ce n’est pas ce qui prévaut dans cette histoire, donc on peut laisser cet aspect là de côté.\nCe tome est vraiment différent des autres tomes, déjà il est plus court (j’avoue, ça m’a surprise lorsque je l’ai vu à sa sortie) mais l’intrigue est également plus centrée, ça « s’éparpille » un petit peu moins que les autres, j’y ai également trouvé moins de longueurs (surtout par rapport au tome précédent), après les détails c’est ce qui faisait la richesse des livres et je n’en suis pas avare en général, peut-être qu’il aurait fallu plus d’explications à certains moments, mais ça va, ça reste quand même bien. Les actions s’enchaînent, on ne perd pas de temps, on file droit au but même s’il y a des embuches diverses pour rendre ce tome plus intéressant. Les révélations sont encore de mises et les surprises nombreuses, même si pour la fin je m’y attendais un peu, mais bon, je le comprends parfaitement. On voit que le dénouement approche à grand pas. Si ce tome paraît si différent c’est surtout dû à la situation, c’est normal qu’on n’ait pas le même type d’ambiance que dans les précédents tomes et personnellement, ça ne m’a pas dérangé.\nIci on est vraiment centré sur le personnage d’Ethan (beaucoup plus qu’auparavant quand bien même il était le seul narrateur), plutôt que d’avoir tout le temps « toute la clique ». C’est un détail qui a été reproché : que les personnages secondaires ne soient pas aussi présents, etc., mais vu la situation ça me paraît plus logique que ça se passe comme ça. Après c’est vrai qu’ils peuvent un peu manquer.\nJ’ai trouvé ça intéressant aussi d’avoir deux points de vue dans le livre, deux parties sur Ethan (la première et la troisième) et sur Lena (la deuxième partie). Ça sert complètement l’histoire et on comprend pourquoi les auteurs ont choisi de faire ça. C’était intéressant d’avoir pour une fois la « voix » de Lena, de s’ancrer un peu plus dans ce personnage si changeant, mystérieux et problématique, après tout, tout est « de sa faute » si on peut dire ça comme ça.\nDans ce tome on voit un autre monde ce qui permet de voir un peu plus l’univers créé par les deux auteurs et j’avoue l’aimer encore un peu plus. Elles ont une telle imagination que c’est toujours un plaisir de s’y plonger, j’espère avoir la chance un jour de les relire. J’adhère totalement (et cela depuis le premier tome) mais on voit que rien n’est tout noir ou tout blanc, nos convictions sont mises à rude épreuve, tout peut être encore chamboulé, et c’est ça qui est vraiment intéressant. Un univers sombre mais qui laisse passer parfois la lumière et redonner un peu d’espoir, même s’il y a toujours un prix à payer…\nLes personnages sont toujours aussi attachants et touchants, ils se dévoilent encore un peu plus lorsqu’on lest voit. Certaines convictions peuvent être mises à rude épreuve comme je l’ai dit et c’est en ça que cette série est géniale, on n’est jamais sûr de rien. Cette petite bande, cette grande famille va me manquer je l’avoue parce qu’ils avaient tous leur particularité qui font qu’on les apprécie.\nEn bref, j’ai beaucoup aimé ce dernier tome, je trouve qu’il conclut bien la série. J’ai pris beaucoup de plaisir à lire ce livre et j’avoue avoir retardé autant que possible sa fin tant je n’avais pas envie de quitter tout ça. L’histoire était intéressante et bien menée, et ça a été le cas à chaque tome. C’est une très belle histoire, l’univers est vraiment riche et complexe, j’ai adoré, les personnages sont très attachants tous autant qu’ils sont, ils sont intéressants et complexes aussi, chacun a sa part d’ombre et de lumière, ce qui les rend plus crédible, plus humain quelque part en dépit de leur nature. Voilà une bonne série que j’ai beaucoup apprécié et c’est avec un petit pincement au cœur que je lui dis au revoir.\nAnne-C 18 mars 2013 à 13:12\nAh la la franchement quand je lis tes avis ça me donne envie de m'y remettre ^^\nKarine:) 18 mars 2013 à 16:21\ntu es plus convaincue que moi... ce dernier tome m'a un peu déçue.\nAccrocdeslivres 18 mars 2013 à 16:24\nbeaucoup ont été déçue du dernier tome, moi je le trouve logique et dans la lignée des autres malgré tout donc bon ^^


Studio Maret Création\nChambres parentale - Margencel\nChambre d'amis - Margencel\nUn appartement zen - Thonon\nNatibox - Thonon\nLéman5 - Perrignier\nAtelier Sakr - Thonon\nSlow living, Décoration intérieur,\nNous entendons souvent ce therme, tantôt pour qualifier un espace, tantôt pour parler d'un état d'esprit. Mais qu'est-ce donc exactement? Nous allons voir dans cet article les origines et les grands principes de cette discipline.\nLe Feng-Shui est un art ancestral d'origine chinoise s'appuyant sur les mouvements des 5 éléments naturels : l'eau, la terre, le feu, le bois et le métal. Les premières tribus considéraient que ces différents mouvements constituaient des énergies nourricières appelé "Chi" ou "Qi". C'est pourquoi le choix de l'emplacement d'un site dépendait de plusieurs facteurs géologiques tel que les reliefs montagneux ou encore la proximité d'un cours d'eau, considérés comme chargé d'énergie vitale.\nAinsi, si la capitale d'un royaume était installée sur un site propice et nourricier, ceci profitait à l'ensemble du royaume. L'étude de la circulation du Chi était réservé au palais de l'empereur, puis s'est peu à peu démocratisé.\nLa bonne circulation du Chi dans une habitation dépendra de plusieurs facteurs : sa situation géographique, son architecture ( sa forme, la présence de poutres, escaliers, etc...), la disposition des pièces, l'emplacement des meubles principalement.\nNous avons souvent tendance à penser à tord qu'un espace minimaliste est Feng-shui, et même si ces thermes ne sont pas incompatibles, ils ne sont pourtant pas des synonymes.\nPar exemple, la présence d'un couloir trop long et trop étroit entrainera une circulation trop rapide du Chi, source de stresse pour les habitants du lieu.\nCi-dessous un espace épuré qui semble Feng-shui mais qui pourtant ne l'est pas\nL'espace est devenu Feng-Shui suite à plusieurs aménagements : un tapis pour ralentir le Chi, une plante verte pour "contrer" le coin appelé "onde de forme".\nEnsuite, l'intérieur de l'habitation sera divisé en 9 secteurs (appelé carré Lo Shu): les 4 points cardinaux (Nord/Sud, Est/Ouest), les 4 points collatéraux (Sud-Est/Nord-Est, Sud-Ouest/Nord-Ouest) et le centre. A chaque secteur correspondra un élément et un "rôle"(travail, renommé, amour, etc...):\n- Sud : Feu\n-Sud-Ouest : Terre\n- Ouest : Métal\n- Nord-Ouest : Métal\n- Nord : Eau\n-Nord -Est : Terre\n- Est : Bois\n- Sud-est : Bois\n- Centre : Terre\nA ces éléments correspondra certaines couleurs et formes.\nAfin que l'espace soit équilibré, il faut également que celui-ci comporte 1 part de ce qu'il représente (par exemple, des murs bleu pour un secteur nord) mais également 1/2 part de ce qui le nourrit ( le métal pour le secteur nord) et 1/4 de part qui le tempère (le bois, toujours pour le secteur nord)\nEnsuite, il faudra faire attention aux éléments opposés qui risqueraient d'engendrer des contradictions dans votre espaces, et par conséquents des conflits.\nPas de panique, "destruction" ne signifie ps que votre maison prendra feu mais seulement que si plusieurs éléments opposés sont en conflit dans un même secteur, il sera probable que vous ne vous sentiez ps bien dans la pièce ou que vous aurez du mal à communiquer avec le reste de votre famille ou encore que vous ne vous sentirez pas reposé à cet endroit (un peu comme lorsque l'on rentre dans une pièce en désordre).\nEnfin, il faut faire attention aux stéréotypes tel que "dormir la tête au nord" (le principe le plus répandu). En effet, l'orientation du lit (même du canapé ou encore du bureau) sera propre à chaque personnes selon son année de naissance et la place qu'elle occupe dans la famille : à partir de la date de naissance, sera calculé le chiffre Kua de la personne (son chiffre personnel représentant ses propres énergies), et à partir de la place qu'elle occcupe son trigramme (père, mère, enfant).\nPar exemple : La troisième fille d'une famille sera bien installé dans une chambre situé dans le secteur ouest de la maison (secteur de son trigramme), mais si son chiffre kua est 2, il faudra à tout prix éviter d'orienter sa tête de lit au nord car les énergies de cette directions représenteront ses préoccupations et par conséquent, son sommeil ne sera pas réparateur. Le Feng chui permet donc d'organiser un espace afin de favoriser la bonne circulation des énergies propices à votre habitation, mais également à "placer" chaque personnes dans le secteur qui lui est le plus favorable et ainsi obtenir une certaine harmonie pour que vous vous sentiez bien une fois franchi le seuil de la porte.\nPourquoi le Feng-Shui et la décoration d'intérieur? Parce qu' il est nécéssaire si l'on souhaite habiter un lieu qui nous ressemble et dans lequel on se sent bien.\nDIY - Un tableau texturé minimaliste\nDonnez un coup de neuf Hygge à votre terrasse!\nUne rentrée Stylée et locale!\n223 Impasse du Pompage,\nTel. 06 24 91 09 39\nE-mail : info@maret-creation.com


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Waxexpress.com • Afficher le sujet - Avengers : Ultron forever\nSujet du message: Avengers : Ultron forever\nSujet du message: Re: Avengers : Ultron forever\nAh je me suis fait avoir, je pensais que c'était un GN qui suivait la rage d'Ultron, d'autant plus qu'il y avait Davis qui officie aussi sur les histoires de Thanos sous le mêm format. Du coup j'ai acheté sans chercher à comprendre, et n'ai vu qu'après coup que j'avais déjà l'histoire en kiosque.\nBon c'est pas grave, ça reste du Davis, probablement l'un des artistes que j'affectionne le plus avec Romita Jr.\nPosté: Lun 16 Avr 2018 07:42\nBen c'était très bien, Ultron Forever.\nL'histoire est fun et bien ficelée, les personnages plutôt bien campés et bien exploités, le tout magnifiquement servi par un Alan Davis au top. Assez old school finalement dans l'esprit, donc parfait pour moi.\nJe n'ai pas encore lu la seconde partie, qui s'intègre dans Secret Wars et n'a rien à voir avec Ultron. Je me suis d'ailleurs demandé ce qu'elle foutait là, finalement, avant de comprendre qu'elle avait été réalisée par la même équipe créative, ce qui rend ce choix éditorial assez logique.\nPosté: Lun 16 Avr 2018 09:37\nC'est typiquement le genre de récit que j'aurai adoré, mais qui reste finalement juste sympathique. Ça manque de folie je trouve, surtout à cause d'un Davis qui n'est plus aussi génial qu'avant. J'ai relu récemment FF la Fin, et c'est autre chose.


J'utilise la même technique depuis bien avant la naissance d'Internet. Elle ne nécessite pas de matériel spécifique et m'a donné satisfaction, à chaque fois. Je la détaille ci-dessous en prenant l'exemple d'une magnéto d'allumage pour moteurs 4 temps, 4 cylindres de la Société (française) des Magnétos R.B. Il s'agit, précisément de ce modèle : Type N 10/4 (source : CNAM).\nJ'ouvre une petite parenthèse pour préciser que, dans son utilisation normale, l'aiguille aimantée de la boussole pointe son pôle Nord (celui qui est coloré en foncé) vers le Pôle Nord terrestre. Comme les pôles de nom contraire s'attirent, on en déduit que le Pôle Nord terrestre est, en réalité, un pôle Sud magnétique !\nCompte tenu de ce qui précède, on voit que la polarité des bornes de la batterie doit être conforme à la photo ci-contre ( "-" à gauche et "+" à droite) :


Nice : cinq nouvelles gardes à vue dans l’enquête sur l’enlèvement de Jacqueline Veyrac - Le Parisien\nNice : cinq nouvelles gardes à vue dans l’enquête sur l’enlèvement de Jacqueline Veyrac\nQuatre hommes et une femme ont été interpellés dans ce dossier où 16 personnes ont déjà été mises en cause, dont neuf sont écrouées.\nPendant deux jours, Jacqueline Veyrac, la propriétaire du restaurant la Réserve à Nice, avait été kidnappée Capture Google maps.\nLe 11 décembre 2017 à 14h55\nCinq personnes ont été placées en garde à vue à Nice, ce lundi, dans l'enquête sur le rapt de Jacqueline Veyrac, la riche hôtelière de la Côte d'Azur kidnappée en 2016.\nLes enquêteurs tentent d'établir si ces personnes, quatre hommes et une femme, étaient dans l'équipe des ravisseurs. A ce jour, 16 personnes ont été mises en cause dans ce dossier et neuf d'entre elles sont écrouées.\nDepuis 2000 et le décès de son mari, Jacqueline Veyrac, 76 ans, contrôle un petit empire immobilier avec notamment le Grand Hôtel, un cinq-étoiles sur la Croisette de Cannes (Alpes-Maritimes) et la Réserve, un restaurant huppé de Nice.\nVers midi le 24 octobre 2016, dans le centre de Nice, la retraitée s'installe au volant de son 4 x 4 noir. Au même moment, plusieurs hommes cagoulés surgissent. L'hôtelière est extirpée de l'habitacle de sa voiture et est jetée à l'arrière d'une fourgonnette Renault Kangoo.\nLa septuagénaire est bâillonnée avec du ruban adhésif et les mains liées par des serre-joints en plastique. La voiture va alors rouler pendant une demi-heure avant de stationner.\nPlusieurs heures dans la fourgonnette\nLa police judiciaire est en état d'alerte pour la retrouver. Ses ravisseurs entrent en contact avec son fil, un coup de fil très bref passé par un interlocuteur qui s'exprime en anglais. « Vous allez avoir des problèmes », menace-t-il. Aucune demande de rançon n'est formulée. Curieusement, un SMS demandant 2 M€ contre la libération de la septuagénaire sera rédigé mais jamais envoyé.\nDans la fourgonnette, les heures passent. Ses geôliers refusent de la laisser sortir pour faire ses besoins. Elle refuse de s'alimenter. Elle arrive un instant à s'échapper en défaisant ses liens, mais est vite rattrapée et rejetée dans la voiture.\nAprès deux nuits de séquestration, la septuagénaire profite de l'absence de ses ravisseurs pour taper de toutes ses forces contre la carrosserie. Un riverain qui promène son chien est alerté. Il s'approche, entend du bruit, regarde à l'intérieur et l'aperçoit entravée à l'arrière. Il donnera l'alerte pour la faire libérer.\nL'enquête de la PJ de Nice a rapidement avancé. Les policiers suivent la piste d'un différend qui oppose depuis plusieurs années Jacqueline Veyrac à Giuseppe Serena, un de ses anciens employés, de nationalité italienne. Il a été le gérant de la Réserve avant de laisser le restaurant en liquidation. Depuis, il peine à remonter la pente et voue une rancune tenace à son ancienne patronne. Les policiers le soupçonnent d'avoir déjà tenté d'enlever Jacqueline Veyrac en 2013.


14 dirigeants des principales sociétés européennes du secteur des communications mobiles ont présenté jeudi 8 janvier 2004 à Bruxelles leur vision commune pour l'avenir.\nLe groupe*, dont font partie les présidents de l'équipementier français Alcatel, du fabricant finlandais Nokia et de l'opérateur britannique Vodafone, a exposé 20 recommandations dans le but « de soutenir et d'encourager le déploiement de réseaux et services mobiles à travers l'Europe. »\nDestinées à l'industrie, la Commission européenne et les Etats membres, ces recommandations font l'objet d'un rapport Intitulé « La 3ème vague de communications mobiles pour l'Europe. »\nCe rapport concerne la recherche, les normes, le contenu, la sécurité, le spectre, la coopération internationale et la réglementation en matière de téléphonie mobile.\nCette collaboration des acteurs européens du mobile est liée à la « plate-forme technologique » instaurée en octobre 2003, dans le cadre d'une initiative pour la croissance initiée par Erkki LIIKANEN, commissaire européen chargé des entreprises et de la société de l'information.\nLa plate-forme réunit des acteurs télécoms du secteur privé, opérateurs, fabricants d'équipements et de composants, fournisseurs de contenu.\nA Bruxelles, 'le groupe des 14' a confirmé sa foi dans la téléphonie mobile de troisième génération européenne (3G/UMTS). Il s'est également engagé à préparer un programme stratégique de recherche « pour un monde sans fil » dans le cadre du 7ème programme-cadre de recherche communautaire.\nDésormais, 81% des citoyens de l'Union européenne possèdent un téléphone mobile. Par ailleurs, plus de 500 000 clients sont abonnés aux services 3G en Europe, ces services étant disponibles dans 5 des 15 Etats membres (avec la Suède et le Danemark, plus le Royaume-Uni, l'Italie, l'Autriche).\nEnfin, selon GSM Europe, plus de 40 réseaux 3G seront lancés sur le continent au cours des 12 prochains mois.\nAlcatel, Bertelsmann, LM Ericsson, Orange, Hutchison 3G, Nokia, Royal Philips Electronics, Siemens, , Telefónica Móviles, Telecom Italia Mobile, T-Mobile International, Vivendi Universal, Vodafone Group.


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Entreprises pharmaceutiques : jackpot avec la grippe ! - Commun COMMUNE [le blog d'El Diablo]\nLe groupe pharmaceutique Sanofi-Aventis annonce pour 2009 un bénéfice net de 7,8 milliards d'euros (+11 %) et un chiffre d'affaires de 29,3 milliards (+6,3 %), grâce notamment à des ventes "record" de vaccins antigrippaux. Sur l'ensemble de l'année, le chiffre d'affaires des vaccins antigrippaux (H1N1 et grippe saisonnière) du groupe a crû de 46,7 %, à 1,062 milliard d’euros.\nLe groupe évoque "une année record" pour ces ventes. Le seul vaccin contre la grippe H1N1 a généré un chiffre d'affaires de 465 millions d'euros en 2009, dont 362 millions au quatrième trimestre. "Nous prévoyons des ventes à peu près similaires de vaccins anti-H1N1 en 2010 par rapport à 2009", a estimé le directeur général de Sanofi-Aventis.\nDans la foulée il confirme 3000 suppressions de postes. Assurer le profit maximum en réduisant encore plus les salaires, les emplois…\nIl n’y a pas d’autre choix que d’en finir avec ce système. Comme le confirme ce petit voyage dans le pays de la santé :\nL’OMS : un organisme devenu privatisé\nL’OMS (Organisation Mondiale de la Santé) fait la pluie et le beau temps sur notre planète en matière de santé publique. L’OMS a mis en place un « partenariat privé » qui lui permet de recevoir des aides financières d’industries privées.\nMais quelles industries ?\nLes preuves scientifiques montrent sa collusion avec les multinationales industrielles.\nAlison Katz, chercheuse à l’OMS accusait en 2007 l’organisation de « corruption, népotisme, violation des statuts et inefficacité du contrôle interne. Elle dénonçait : « la commercialisation de la science et les liens étroits entre l’industrie et les institutions académiques ».\nDes responsables interchangeables :\nExemple, le Pr. Albert Osterhaus, de l’université Erasme à Rotterdam, conseiller de l’OMS pour la grippe A. Il était bien placé à l’OMS pour faire la promotion de cette pandémie. Jugez-en, il est également le directeur de l’ESWI (Groupe scientifique européen de la grippe). Les fondateurs de l’ESWI sont les groupes Novartis, Baxter Vaccines, GlaxoSmithKline, Sanofi Pasteur, fabricants du vaccin, Hofmann-La Roche, distributeur du Tamiflu, et MedImmune, racheté par AstraZeneca.\nCes entreprises pharmaceutiques géantes vont engranger entre 7,5 et 10 milliards de dollars de bénéfices.\nTrente pays ont commandé du Tamiflu, le plus nouveau et le plus cher des médicaments antiviraux. Sous couvert de prévention, l’administration US avait alors réalisé des achats massifs de ce fameuse Tamiflu par l’entremise d’un bien connu Donald Rumsfeld secrétaire d’Etat. Avant sa nomination, ce Rumsfeld était président du directoire du groupe Gilead Sciences qui, avec Roche, la multinationale suisse, produit le… Tamiflu. Vu ?\nLe chef du programme de vaccination de l’OMS est un certain Klaus Stöhr. Ce spécialiste passe à la direction du groupe Novartis et se trouve chargé aujourd’hui de la diffusion sur le marché du vaccin Optaflu contre… la grippe porcine. Il a naturellement gardé tous ses relais au sein de l’OMS.\nContrats et restructurations\nLe laboratoire Sanofi-Pasteur, du groupe Sanofi-Aventis, a discuté « avec les gouvernements et autorités européennes pour la production de vaccin H5N1 et d’options de production de vaccin pandémique ». Il a conclu un contrat de 100 millions de dollars avec le ministère de la santé américain pour la production d’un vaccin pré-pandémique, servant à prévenir une éventuelle grippe aviaire.\nPour sa part, le laboratoire suisse Novartis veut s’emparer de la firme californienne Chiron et de ses usines. Quant à la firme britannique Glaxo-SmithKline, elle a acheté le laboratoire canadien ID Biomedical, afin de « répondre à la demande croissante de vaccins antigrippes » et de « préparer la menace d’une pandémie ».\nRépandre la peur pour mieux vendre\nNous l’avons sans doute oublié, mais les « experts de l’OMS » nous avaient annoncé 320 millions de morts en un an, avec la « pandémie aviaire », imputée aux oiseaux migrateurs.\nDu point de vue des actionnaires des labos, les commandes publiques massives de vaccins sont une mine d’or.\nL’industrie pharmaceutique a la capacité d’actionner de multiples courroies de transmissions dans le monde politique pour obtenir les décisions sur lesquelles elle va pouvoir faire jouer ses relais.\nAvec le capitalisme, tout se vend, tout s’achète.\nIl serait possible d’en finir avec tous les grands fléaux actuels à une condition. Il faut abattre ce régime une bonne fois pour toutes.\nTous ceux et celles qui parlent de l’ « améliorer » défendent en réalité son maintien… moyennant leur accession au pouvoir à la place des équipes actuellement en place.\nUne fois les uns, une fois les autres, l’alternance au service du capital.\nOn vote le mois prochain, les joutes verbales vont prendre encore plus d’ampleur. Choisir entre ceux qui sont en place et une opposition feinte ? Il faut en finir avec tout ça.\nNous ne paierons pas la crise du capitalisme ! Répression McCarthyste et résistance communiste: le Parti Communiste des Etats-Unis de 1949 à 1959