One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice | Protocol (Translated to French)\nNous décrivons ici un protocole détaillé pour la production simultanée de cultures de cellules de précurseur de neurones, soit comme des monocouches ou des neurosphères adhérentes, à partir de la zone sous-ventriculaire et le gyrus denté de souris individuels adultes.\nLe dosage de neurosphères et le système de culture en monocouche adhérente sont des outils précieux pour déterminer le potentiel (prolifération ou la différenciation) des cellules souches neurales adultes in vitro. Ces dosages peuvent être utilisés pour comparer le potentiel de précurseur de cellules isolées à partir d'animaux génétiquement différents ou de manière différentielle traités afin de déterminer les effets des facteurs exogènes sur la prolifération de cellules précurseurs neurales et de la différenciation et de générer des lignées de cellules précurseurs neurales qui peuvent être dosés au cours des passages continus. Le dosage de neurosphère est traditionnellement utilisé pour l'identification post-hoc de cellules souches, principalement en raison de l'absence de marqueurs définitifs avec laquelle ils peuvent être isolés à partir de tissu primaire et a le grand avantage de donner une estimation rapide du nombre de cellules de précurseur dans le tissu cérébral provenant d'animaux individuels. Cultures monocouches adhérentes, en revanche, ne sont pas traditionnellement utilisés pour comparer la prolifération entre les animaux individuels, Étant donné que chaque culture est généralement initiée à partir du tissu combinée comprise entre 5-8 animaux. Cependant, ils présentent l'avantage majeur que, à la différence des neurosphères, ils sont constitués d'une population essentiellement homogène de cellules précurseurs et sont utiles pour la suite du processus de différenciation dans des cellules individuelles. Ici, nous décrivons en détail la production de cultures de neurosphères et, pour la première fois, les cultures adhérentes provenant d'animaux individuels. Cela a de nombreuses implications importantes, y compris l'analyse appariée de la prolifération et / ou le potentiel de différenciation à la fois dans la zone sous-ventriculaire (SVZ) et gyrus denté (DG) des lignées de souris traitées ou génétiquement différentes, ainsi qu'une réduction significative de l'utilisation des animaux.\nLe dosage de neurosphère 1,2 et la culture monocouche adhérente 3,4, développés au début des années 1990, restent encore l'étalon-or dans des essais de cellules souches neurales in vitro. Dans ces essais, le tissu primaire est micro disséquée à partir d'une région particulière du cerveau, dissocié en une suspension de cellules isolées et mises en culture en présence du facteur mitogenes de croissance épidermique (EGF) et le facteur de croissance fibroblastique 2 (FGF2) pour former une ou l'autre flottant librement clusters (neurosphères) ou monocouches adhérentes. Les deux systèmes ont un certain nombre d'avantages et d'inconvénients et une attention particulière doit être accordée à la question qui doit être traitée avant l'un ou l'autre système est choisi.\nNeurosphères permettent une lecture directe du nombre des différences de précurseur et le potentiel cellulaire. En outre, les neurosphères sont aussi un outil utile pour étudier la spécification intrinsèque des cellules lorsqu'ils sont retirés de leur environnement externe normal. Extrinsic indices peuvent être étudiés en ajoutant simplement le facteur d'intérêt pour le milieu de croissance et de quantifier le nombre et la taille des neurosphères générées. Cependant, l'inconvénient majeur de neurosphères, c'est qu'ils forment leur propre créneau, avec les cellules au centre des neurosphères (en particulier les grandes neurosphères) étant plus différenciée que ceux sur la surface 5. Neurosphères contiennent un mélange de cellules souches, progéniteurs engagés et des cellules différenciées et les interactions cellule-cellule dans les neurosphères contrer le maintien des cellules souches. C'est pourquoi neurosphères contiennent seulement un petit nombre de véritables cellules souches 6-8.\nCultures monocouches adhérentes fournissent également un bon système in vitro pour modéliser la prolifération in vivo. Cultures adhérentes, dans lequel les cellules restent plus homogènes et isolées, peuvent éliminer le caractère hétérogène de la neurosphère. Dans ces conditions de croissance des cellules précurseurs prolifèrent rapidement et presque toutes les cellules se divisent et expriment les marqueurs caractéristiques précurseurs neurales Nestin, Sox2, et BLBP. L'inconvénient majeur du système de culture en monocouche par rapport à l'essai de neurosphères est que les clones dérivés de précurseurs individuels ne peuvent pas être surveillée et quantifiée.\nUn inconvénient de la plupart des protocoles pour les deux types de cultures a été la nécessité d'utiliser un nombre relativement important d'animaux, parce que le rendement des stratégies d'isolement a souvent été médiocre. Dans le même temps, il est devenu clair que la neurogenèse adulte contribue à l'individualisation du cerveau 9, d'où la nécessité pour les anciens modèles in vivo individualisés ainsi. Ces besoins peuvent être satisfaits par des protocoles "d'une souris une culture" comme décrit dans le présent rapport.\nLe protocole visuel ci-dessous décrit la production simultanée de cultures de précurseurs neurales à la fois de la SVZ et DG de chaque animal soit m comme adhérentonolayers ou comme neurosphères. La génération des cultures de chaque animal est particulièrement utile lorsque des comparaisons entre les animaux traités individuellement ou divers transgénique individu ou souris de type sauvage sont nécessaires. Ce protocole contient des instructions détaillées pour la microdissection simultanée des régions SVZ et DG de souris adultes, leur dissociation dans une suspension cellulaire unique, la culture in vitro, soit des cultures monocouches adhérentes ou neurosphères et analyse de multipotentialité et le potentiel à long terme, les deux cardinal propriétés d'une cellule souche fide osseuse.\nUne. Configuration de base et la préparation de milieu de culture\nAu moins deux jours avant le début de l'expérience, la préparation de poly-D-lysine (PDL) / laminine plaques revêtues de cultures monocouches adhérentes. Pour préparer les puits / flacons ajouter assez PDL (10 mg / ml en DH 2 O) pour revêtir la surface et incuber pendant une nuit à température ambiante. Retirer la solution de l'antenne et laver la capsule trois fois avec dH 2 O. Laisser sécher à l'air. Ajouter laminine (5 mg / ml dans du DMEM froid: F12) et incuber à 37 ° C pendant une nuit. Retirez la laminine et soit utiliser les plaques immédiatement ou conserver la laminine à -20 ° C jusqu'à utilisation.\nPréparer feu pipettes polies avec "moyen" et "petits" trous en tournant pipettes Pasteur en verre dans une flamme jusqu'à ce que les bords s'arrondissent. Autoclave pour stériliser.\nLe jour de la dissection, de préparer la quantité appropriée de milieu de culture en mélangeant Neural Milieu de base avec 2% de B27, 1x GlutaMAX, 2 mg / ml d'héparine, 50 unités / ml de pénicilline / streptomycine, 20 ng / ml de facteur purifié de croissance épidermique récepteur teneur souris (EGF), et 20 ng / facteur de croissance de fibroblaste bovine recombinée ml (FGF-2). Chauffer le milieu de culture à 37 ° C dans un bain d'eau.\nPour la dissociation SVZ, préparer à 0,05% de trypsine-EDTA et 0,125 mg / ml inhibiteur de trypsine contenant 0,01 mg / ml de DNase I. Équilibrer ces solutions à 37 ° C.\nMettre en place un microscope de dissection et de préparer les outils nécessaires pour enlever le cerveau (ciseaux et petite spatule) et pour SVZ et DG dissections (scalpel, 27 G aiguille fixée à seringue de 1 ml, 1 x # 7 forceps, 1 x # 5/45 forceps) par trempage dans l'éthanol à 70%.\n2. La récolte des cerveaux de souris adultes et SVZ / DG Microdissections\nAnesthésier adulte seul (8 semaines d'âge) chez la souris selon les directives institutionnelles appropriées. Effectuer dislocation cervicale.\nPulvériser la tête avec 70% d'éthanol pour stériliser la zone et de réduire au minimum la quantité de poils qui adHères les ciseaux et le cerveau. À l'aide de ciseaux décapitent l'animal à la base du tronc cérébral.\nTenant la tête à la base du crâne, couper le crâne entre les deux bulbes olfactifs en plaçant une lame d'une petite paire de ciseaux dans chaque cavité de l'œil et de coupe coronaire. Ensuite, faire deux coupes latérales à la base du crâne, suivie par une coupe longitudinale à travers le crâne le long de la suture sagittale Attention:. Assurent l'angle des ciseaux est aussi faible que possible pour éviter d'endommager le cerveau sous-jacent.\nExposer le cerveau en enlevant le crâne soit avec la lame de ciseaux ou une paire de pinces courbes. Libérer le cerveau du crâne à l'aide d'une petite spatule et le lieu dans PBS froid.\nRincer cerveau avec du PBS pour éliminer le sang et de la fourrure.\nTransfert cerveau à une boîte de Pétri de 10 cm en plastique contenant du PBS\nPlacez boîte de Pétri contenant le cerveau sous un microscope de dissection à faible grossissement et positionner le brain sur sa face ventrale. Utilisation de fines pinces courbes enlever les bulbes olfactifs tout en maintenant le cerveau en position par le cervelet.\nTourner le cerveau sur la face dorsale et l'aide d'un scalpel faire une coupe coronale par le cerveau au niveau du chiasma optique\nPour microdissect la SVZ (pour des instructions plus détaillées, voir aussi Azari et al. 10), placer la partie rostrale du cerveau de sorte que la surface coronale couper tourné vers le haut et de se concentrer le microscope sur un plus fort grossissement. Retirer et jeter le septum à l'aide de fines pinces courbes.\nDisséquer la SVZ (la fine couche de tissu entourant le ventricule) en plaçant l'extrémité d'une pale d'une paire de fines pinces incurvées dans l'angle latéral du ventricule latéral immédiatement sous le corps calleux et les autres d'environ 1 mm immédiatement dans le tissu adjacent au ventricule. Presser vers le bas la pince vers la base de la capsule et vers la face ventrale de la VentRicle pour enlever un petit morceau de tissu triangulaire. Placez le SVZ disséqué dans une boîte de Pétri sur de la glace.\nPour microdissect la DG (pour des instructions plus détaillées, voir aussi Hagihara et al. 11), placer la partie caudale du cerveau dans la boîte de Pétri et couper le long de la fissure longitudinale à l'aide d'un scalpel.\nSous un microscope de dissection, retirez le cervelet et le diencéphale l'aide de pinces.\nRecentrer le microscope de sorte que les frontières autour de la DG sont maintenant visibles. Pour supprimer le gyrus denté, insérez la pointe d'une aiguille 27 G et glissent le long de la frontière entre la DG et la corne d'Ammon. En utilisant les pince fine, libérer le DG du tissu environnant.\n3. La dissociation des tissus SVZ\nHacher le tissu en utilisant une lame de scalpel pendant environ 1 minute jusqu'à ce que aucun gros morceaux restent.\nTransférer le tissu haché à un tube de 15 ml en utilisant 1 ml d'préchauffé 0,05% de trypsine-EDTA et laisser incuber pendant 7 min àun bain-marie réglé à 37 ° C.\nPour arrêter la réaction enzymatique, ajouter 1 ml d'inhibiteur de trypsine contenant DNaseI et mélanger le contenu en feuilletant le tube.\nPellet la suspension par centrifugation à 300 g pendant 5 min et jeter le surnageant\nReprendre le culot dans 1 ml de milieu de croissance et dissocier par pipetage de haut en bas environ 7 à 10 fois à l'aide d'une pipette P1000 Attention:. Sur trituration peut conduire à la mort cellulaire accrue et aura un impact négatif sur la croissance cellulaire ultérieure.\nAjouter milieu de croissance pour un volume total de 5 ml et passer la suspension de cellules à travers un tamis de 40 mm pour enlever les débris et amas de tissus non dissociés.\nCentrifugeuse à 300 g pendant 5 min, jeter le surnageant et remettre en suspension le culot obtenu dans 200 ml de milieu de croissance.\n4. DG dissociation tissulaire\nHacher le tissu en utilisant une lame de scalpel pendant environ 1 minute jusqu'à ce que aucun gros morceaux restent transfert eten mélange préchauffé PDD enzyme papaïne (2,5 U / ml de dispase, 1 U / ml, la DNase I 250 U / ml). Incuber pendant 20 min à 37 ° C, le mélange en inversant le tube tout 3-5 min.\nDissocier le tissu mécaniquement à l'aide d'un alésage moyen, feu poli, pipette Pasteur par aspiration et doucement 10x.\nIncuber pendant 10 minutes supplémentaires à 37 ° C, le mélange en inversant le tube tout 3-5 min.\nDissocier davantage le tissu mécaniquement à l'aide d'un petit trou, le feu poli pipette Pasteur par aspiration et doucement 10x.\nCentrifuger à 130 g pendant 5 min.\nEliminer le surnageant et remettre en suspension le culot dans une solution de tampon ml (1 x HBSS, 30 mM de glucose, 2 mM de HEPES (pH 7,4), 26 mM NaHCO 3). Compléter à 10 ml avec la solution tampon.\nRetirer le surnageant et remettre le culot dans 5 ml de 20% de Percoll. (Pour la préparation de Percoll à 90%, ajouter 4,5 ml de 100% de Percoll à 0,5 ml de PBS puis diluer 10 fois plus loin à 20%en ajoutant 1,1 ml de Percoll 90% à 3,9 ml 1x PBS).\nCentrifuger 450 g pendant 15 min.\nEnlever le surnageant et remettre en suspension le culot dans 10 ml de tampon.\nRemettre en suspension le culot dans du milieu de croissance de 200 ul.\n5. Génération des cultures monocouches adhérentes\nPlaque la SVZ dissocié ou DG tissu en un seul PDL / laminine ainsi revêtu d'une plaque de 96 puits et incuber à 37 ° C avec 5% de CO 2.\nEnviron 24 heures après l'étalement, une fois que les cellules ont adhéré à la surface revêtue, échanger le milieu de culture pour éliminer encore des débris en excès.\nTous les 3-4 jours suivants, l'échange de la moitié du milieu de culture par du milieu frais pour reconstituer les facteurs de croissance.\nRépétez jusqu'à ce que les cellules atteignent environ 80% de confluence et sont prêts à être repiquées. Remarque: le temps entre le placage et le premier passage peut prendre jusqu'à 2-3 semaines.\nLorsque les cultures atteignent environ 80% de confluence éliminer le milieu du puits et laver avec du PBS.\nNote: Ne pas laisser les cellules dépassent 90% de confluence, car cela peut conduire à un détachement des cellules et la formation de neurosphères et en plus, l'augmentation des niveaux de la mort cellulaire.\nAjouter 50 ml Accutase et incuber à 37 ° C pendant 2-3 min (vérifier si les cellules sont arrondis et détaché).\nÉliminer les cellules à un tube de 15 ml et on lave le puits une fois avec du PBS et transférer dans le même tube.\nDiluer les cellules à 5 ml avec du PBS et centrifuger à 300 g pendant 5 min.\nPour le premier passage, diluer les cellules à 1 ml et de la plaque dans un PDL / laminine bien revêtue d'une plaque à 24 puits.\nPour les passages ultérieurs, remettre les cellules dans 200 ml de milieu de croissance et de comptage en utilisant un hémocytomètre. Plaque à 1 x 10 4 cellules / cm 2 dans le puits revêtu de taille appropriée ou le flacon. i>\n7. Différenciation des cultures monocouches adhérentes\nPour différencier les cultures monocouches adhérentes, des cellules proliférantes de la plaque sur PDL / laminine lamelles couvre-objet enduites à une densité de 1 x 10 4 cellules / cm 2 dans un milieu de croissance contenant 20 ng / ml d'EGF et 10 ng ml de bFGF /.\nLorsque les cellules atteignent une confluence d'environ 80% (généralement de 2 jours), remplacer le milieu de croissance avec du milieu contenant 5 ng / ml de bFGF et 0 ng / ml d'EGF.\nAprès 2 jours de 5 ng / ml de bFGF, remplacer le milieu par du milieu de croissance en l'absence des deux mitogènes pendant encore 3 jours. Remarque: au cours de cette période une quantité significative de la mort cellulaire se produit.\nAprès un total de 5 jours, laver les cellules différenciées avec du PBS pour éliminer toutes les cellules mortes puis fixer avec du paraformaldéhyde 4% (PFA) pendant 20 min à température ambiante.\nLaver ensuite avec PBS pour enlever les lamelles PFA et magasins dans les puits dans 1 ml de PBS à 4 ° C.\njove_title "> 8. Neurosphère Culture et quantification\nDiluer la SVZ dissocié ou DG tissus d'un animal dans 20 ml de milieu de culture et de la plaque 200 ml / puits dans une plaque à 96 puits en utilisant une pipette Multidoser 10 ml.\nIncuber à 37 ° C avec 5% de CO 2 pendant 6-7 jours pour neurosphères dérivées SVZ et de 10 à 12 jours pour les neurosphères dérivées DG.\nRemarque: la croissance pendant plus de ces temps d'incubation recommandées va entraîner la prolifération et va conduire à la mort cellulaire dans le centre de neurosphères et / ou de fixation, et la différenciation spontanée.\nCompter et mesurer le diamètre des neurosphères l'aide d'un réticule de l'oculaire monté sur un microscope optique verticale\n9. Repiquer les Neurosphères\nAprès les neurosphères primaires ont été comptés et leur taille enregistrée ils peuvent être étendus sur plusieurs passages commençant par soit un seul neurosphère ou une culture en masse.\nL'expansion de la culture de neurosphères en vrac\nPour passage neurosphères combinés comme une culture en masse, retirez le support contenant les neurosphères de la plaque, transférer à un tube de 15 ml et centrifuger à 300 g pendant 5 min.\nJeter le surnageant et remettre en suspension les neurosphères dans 1 ml d'préchauffé 0,05% de trypsine-EDTA et incuber à température ambiante pendant 3 min.\nAjouter un volume égal d'inhibiteur de trypsine contenant DNaseI et bien mélanger.\nCentrifugeuse pendant 5 min à 300 g, éliminer le surnageant et ajouter 1 ml de milieu de croissance.\nTriturer et une baisse d'environ 10x avec une pipette P1000 de dissocier les neurosphères.\nRetirer 10 ml de la suspension cellulaire et de mélange avec un volume égal de bleu trypan et effectuer un comptage des cellules vivantes l'aide d'un hématimètre.\nRéensemencer les cellules à une densité de 1 x 10 4 cellules / cm 2 dans la culture de cellules de taille appropriée ou bien ballon.\nIncuber à 37 ° Cavec 5% de CO 2 jusqu'à neurosphères secondaires forme.\nL'expansion de neurosphère unique\nPour le passage des neurosphères individuelles choisir les puits qui contiennent une seule neurosphères et soigneusement retirer et jeter environ 160 ul de milieu de croissance de chaque puits, sans perturber le neurosphères.\nAjouter 100 ml de 0,05% de trypsine-EDTA à chaque puits pour être repiquées et incuber à température ambiante pendant 3 min.\nAjouter 100 ul d'inhibiteur de trypsine contenant ADNase I pour arrêter la réaction.\nTriturer environ 10 fois haut et bas avec une pipette P200 pour briser la neurosphère.\nTransférer les 200 ml contenant le neurosphères dissocié à un nouveau puits d'une plaque à 24 puits contenant 1,5 ml de milieu de croissance. Incuber à 37 ° C avec 5% de CO 2 jusqu'à neurosphères secondaires forme.\nRemarque: pour déterminer le potentiel à long terme, l'une des propriétés cardinales d'un vrai s neuronauxcellule TEM, neurosphères doivent être repiquées pendant au moins 5 à 10 passages. Voir aussi la littérature sur la partie interprétation controversée de ces résultats 12-14.\n10. Différenciation des cultures neurosphère\nNeurosphères primaires ou à des passages peuvent être différenciées pour déterminer multipotentialité.\nRetirer neurosphères en suspension de leur plaque de culture ou ballon et de les transférer à une boîte de Pétri de 10 cm en plastique.\nSous un microscope de dissection supprimer environ 15-20 neurosphères à partir du milieu à l'aide d'une pipette P20 et transférer sur une plaque de 24 puits contenant le milieu de culture sans facteurs de croissance et une lamelle enduit PDL / laminine.\nDifférencier pendant environ 7 jours à 37 ° C avec 5% de CO 2.\nLaver les neurosphères différenciés avec du PBS pour éliminer les cellules mortes, puis fixer avec 4% de PFA pendant 20 min à température ambiante.\nLaver ensuite avec PBS à rEDéplacez des lamelles PFA et magasins dans les puits dans 1 ml de PBS à 4 ° C\n11. Immunomarquage de Neurosphère et cultures adhérentes\nRemarque: Pour la coloration avec l'anticorps O4 omettre le Triton du blocage et de coloration étapes et n'oubliez pas d'utiliser un anticorps IgM secondaire approprié.\nIncuber les lamelles contenant les neurosphères différenciées ou des cultures monocouches adhérentes en solution (10% de sérum d'âne normal dans du PBS contenant 0,2% de Triton X-100) de blocage pendant 60 min à température ambiante.\nIncuber dans une solution de blocage frais contenant primaire bIII-tubuline, MAP2a + b, protéine acide fibrillaire gliale (GFAP) ou des anticorps O4 pour 60min à température ambiante.\nLaver 3 fois avec PBS.\nIncuber dans une solution de blocage frais contenant fluorescence des anticorps secondaires conjugués appropriés et 4,6-diamidino-2-phénylindole (DAPI; 1:5000) pendant 30 min à température ambiante dans l'obscurité.\nMonter les lamelles sur des lames de microscope utilisant la fluorescence milieu de montage et de l'air sec dans l'obscurité pendant une nuit\nVoir et de l'image en utilisant un microscope à fluorescence.\nBien que les deux régions neurogènes du cerveau de souris adulte contiennent à la fois des cellules précurseurs neurales, ces cellules peuvent se comporter très différemment lorsqu'elles sont cultivées in vitro. Les cultures monocouches adhérentes générés à partir des deux régions apparaissent morphologiquement indiscernables (figure 1A), cependant, les cultures adhérentes SVZ dérivés prolifèrent plus rapidement et doivent être repiquées, en moyenne, 1 à 2 jours plus tôt que ceux dérivés de la DG. Comme neurosphères, les cellules précurseurs dérivées de SVZ prolifèrent plus rapidement et forment également des neurosphères plus grandes (Figure 1B) que les cellules précurseurs dérivées de DG (Figure 1C). Alors que neurosphères dérivées SVZ sont généralement comptées après 6-7 jours de culture, les neurosphères dérivées DG sont généralement quantifiés après 10 à 12 jours. En outre, un plus grand nombre de cellules précurseurs neurales résident dans la SVZ par rapport à la direction générale, comme en témoigne la presque dix fois plus grand nombre de neurosphères qui peuvent être genrested de cette région (SVZ: 1173 ± 74,9 vs DG: 145,3 ± 26,4, p = <0,0001, n = 10 animaux par groupe; figure 2A).\nDes études ont montré que les cellules précurseurs au sein de la SVZ et DG répondent à différents stimuli. Les cellules précurseurs dans le DG sont activés par des types spécifiques de l'apprentissage spatial et par des stimuli tels que l'enrichissement du milieu et l'activité physique, tandis que les cellules précurseur sont activées par SVZ apprentissage olfactif et enrichissement olfactif. Conformément à cela, l'un de nous (BLT) précédemment démontré que la DG contient une population de souches latente et les cellules progénitrices qui peut être activé par l'excitation neuronale 15-18. En revanche, nous avons trouvé que les cellules précurseurs SVZ répondent tout à fait différemment de ce stimulus, avec une diminution du nombre de neurosphères en réponse à des niveaux de dépolarisation de KCl 17. Ici, nous avons répété cette expérience, le placage de la moitié des cellules isolées provenant de la SVZ et DG d'individual animaux dans les niveaux de dépolarisation de KCl et l'autre moitié à des niveaux de contrôle de KCl. Nous démontrons, comme précédemment, que tandis que les cellules précurseurs DG sont activés par la dépolarisation (101,2 ± 17,4 vs 184,8 ± 12,5, p = 0,005, n = 5 animaux), la prolifération des cellules SVZ dérivés est en fait diminué de manière significative ( 368,0 ± 62,9 vs 266,6 ± 41,6, p = 0,02, n = 5 animaux; Figure 2B).\nPour confirmer le potentiel à long terme, l'un des traits essentiels d'une véritable cellule souche, neurosphères simples ou des cultures monocouches adhérentes doit être capable d'expansion prolongée dire sur au moins 10 passages. A chaque passage, suite à la préparation d'une suspension à cellule unique, le nombre de cellules est compté et l'expansion de pliage est calculée. Le total théorique de la cellule est alors calculé en multipliant le pli pendant l'expansion de ce passage par le total théorique du passage précédent. C'est disp étaient posées comme un graphique linéaire avec le nombre de passage comploté contre le log10 du nombre total de cellules théorique (voir par exemple la figure 3). Pour confirmer multipotentialité, deux cultures et neurosphères monocouches peuvent être différenciés par le retrait de mitogène et seront affichés pour donner naissance à deux neurones, les cellules gliales et (figure 4).\n. Cellules précurseurs de souris Figure 1 adultes peuvent être cultivées comme cultures monocouches adhérentes (A) ou (B neurosphères: SVZ, C: DG).. Barre d'échelle est de 50 mm Cliquez ici pour agrandir l'image.\nFigure 2. Significativement plus neurosphères sont générés à partir de la SVZ par rapport à la DG de souris unique (A). Les cellules précurseurs SVZ et DG répondent différemment à la dépolarisation in vitro (B).\nFigure 3. Pour confirmer la potentialisation à long terme, neurosphères sont étendues depuis plus de 10 passages.\nFigure 4. Neurosphères peuvent être différenciées en bIII-tubuneurones lin + (A: rouge), GFAP + astrocytes (A: vert), O4 + oligodendrocytes (B: rouge) et Map2ab + neurones (C: rouge). Cliquez ici pour agrandir l'image.\nCet article présente un protocole détaillé pour l'initiation des cultures de précurseurs neurales, les deux monocouches et neurosphères comme adhérentes, des deux grandes régions neurogènes du cerveau de souris adulte. Il ya un certain nombre de points importants qui doivent être gardés à l'esprit lorsque l'on tente un de ces systèmes de culture in vitro en. Tout d'abord, le choix de la méthode de dissociation est très important et est dépendante du tissu. En nos mains, 0,05% de trypsine-EDTA est très efficace pour la dissociation du tissu SVZ, et se traduit par un plus grand nombre de neurosphères que lors de l'utilisation d'une technique de dissociation à base de papaïne. Pour la dissociation de la DG tissu Cependant, nous recommandons fortement une approche de dissociation en fonction de la papaïne. Lorsque l'on compare directement les deux méthodes de dissociation sur DG tissu, nous avons observé un rendement significativement plus faible de cellules viables et environ 10 fois moins de neurosphères lors de l'utilisation de la trypsine. Cette différence de dissociation peut être dû à la différence de compositio tissulairen entre les deux régions. Le tissu compact de la DG est entouré d'un vaste neuropil et des dégâts de processus cellulaires peut se produire lors de la dissociation.\nUn deuxième point important à noter est que, tandis que le dosage de neurosphère peut être utile de faire des déclarations quantitatives sur le nombre de cellules précurseurs présents dans un échantillon de tissu donné, une certaine prudence doit cependant être utilisé dans l'interprétation de ces chiffres absolus. Fusion de neurosphères peut être un facteur confondant important. Plusieurs études ont montré que les neurones sont très mobiles et peuvent fusionner, même dans ce soi-disant conditions sont «clones» 7,19. La fréquence de neurosphères en résulte peut être très dépendantes de facteurs, y compris les composants du milieu, la procédure de dissection et le processus de dissociation. Même entre gestionnaires expérimentés certaine variation dans le nombre de neurosphères générées à partir d'échantillons supposés identiques est évidente (voir la figure 1A.) Plus utile, est une comparaison directe de la fréquence de précurseur entre deux échantillons donnés (par exemple le contrôle vs traité ou de type sauvage contre knock-out) traités par la même personne au sein d'une seule expérience, plutôt que d'une déclaration quantitative du total nombre de cellules précurseurs.\nAu moment de décider lequel des deux procédés de culture est le plus adapté pour un essai particulier, il est important de noter que ces deux systèmes de culture diffèrent dans l'homogénéité des types de cellules produites. En comparaison avec la prolifération des cultures de cellules adhérentes, qui montrent un pool de cellules précurseurs assez homogènes (~ 98% des cellules sont Sox2 +) 20, neurosphères sont plus hétérogènes et contiennent, ainsi que la prolifération des cellules précurseurs, les neurones différenciés, et les astrocytes 21,22. Il est important que les neurosphères sont pas cultivées pendant de longues périodes entre les passages que plus la neurosphère devenir le plus il est probable de trouver des types de cellules différenciées dans leur noyau.\nNous initions traditionnellement monocouches adhérentes neurones cultures de précurseurs de la DG tissu entre 5-8 souris. Par conséquent, lorsque l'on tente d'établir les cultures monocouches adhérentes de la DG ou SVZ d'un simple clic de souris, le plus grand soin doit être pris lors de la procédure de dissociation des tissus afin d'éviter la mort cellulaire excessive causée par la trituration du tissu, ou prenant étendu périodes de temps entre la dissection et les étapes finales de culture. Ce protocole décrit, pour la première fois, la production de cultures adhérentes de précurseur de la monocouche à partir de à la fois la SVZ et DG des animaux individuels. Il existe de nombreux cas où la comparaison de la prolifération et de la différenciation des précurseurs doit être faite sur la base d'un seul animal. Il s'agit notamment de la possibilité de comparer directement le DG et SVZ des animaux individuels en utilisant statistiques par paires et de coupler les données de culture avec des données comportementales ou physiologiques individuelles 9. Cultures animales simples aussi albas l'utilisation d'animaux transgéniques rares, où l'âge correspondant à un bassin de donneurs par 5-8 culture n'est pas possible, ainsi que des animaux uniques (par exemple croix F2 ou d'animaux élevés sur) pour les études d'association génétique.\nBLT a été soutenu par une Marie Curie international entrant bourse. Ce travail a également été financé par un financement institutionnel de base, Bundesministerium für Bildung et Forschung (BMBF) et le financement en partie avec l'appui du Programme de recherche prioritaire (SFB) 655 à GK. Les auteurs tiennent à remercier Anne Karasinsky pour les soins et l'entretien de tous les animaux utilisés dans cette étude et Odette Leiter, Susann Ruhwald, Fanny Boehme, et Richard Wetzel pour la culture cellulaire et l'aide de la microscopie.


2017_12_19_Raphael Marulier expo lego - le-thillot.com : l'actualité gratuite du Thillot et Environs le-thillot.com - le thillot, vosges, tourisme vosges, tourisme le thillot\n2017_12_19_Raphael Marulier expo lego - le-thillot.com : l'actualité gratuite du Thillot et Environs\nRaphaël Marulier : « Legoman » pleinement assumé !\nDans l’appartement où loge Raphaël Marulier, le moindre espace est occupé par des… Lego. Maquettes d’engins de chantiers par ici, vaisseaux Star Wars par là, sans compter les motos, voitures et autres tracteurs. Et l’espace est d’autant mieux occupé par les assemblages de petites briques que Raphaël met la dernière main à l’exposition qui accueillera le fruit de ses longues heures de travail-plaisir à la médiathèque. Trois ans après une première exposition qui a séduit le public, il « remet le couvert » avec un enthousiasme sans limite. « Cela fait maintenant une dizaine d’années que j’ai mis le doigt dans l’engrenage » raconte-t-il « J’étais allé en vacances chez un copain dans le Sud de la France. C’est lui qui m’a montré ce qu’on pouvait faire avec des Lego Technic. J’ai eu envie d’essayer. Résultat : c’est particulièrement addictif » se marre-t-il. Personne ne pourra d’ailleurs s’étonner quand on sait que Raphaël est titulaire d’un bac pro en productique mécanique.\nDepuis sa première maquette, un bulldozer pousseur Caterpillar « Un modèle emblématique de la marque » commente-t-il, nombre de nouvelles constructions ont envahi son espace. Dernière en date, un « monstre » de 4000 pièces sur lequel il a planché une bonne trentaine d’heures : une pelle à godets du type de celles employées dans les mines à ciel ouvert. « C’est tellement prenant qu’un soir, ou plutôt une nuit, je me suis arrêté à 1h30 en me disant que ce n’était pas le moment de poursuivre, sous peine de me planter ». Ayant déjà vécu ce type de situation avec une autre maquette, « Legoman » sait qu’elle se paie « cash » : un démontage quasi-total avec, à la clé, un temps qui est au moins aussi long que pour le montage.\nCette maquette de la pelle à godet sera bien évidemment présente à l’exposition avec une cinquantaine d’autres, dont certaines lui ont été prêtées par ses neveux Lorenzo et Killian, et par Alexis L’Huillier. Il y aura de la matière à voir donc ! « En espérant qu’on pourra tout mettre ! » confie-t-il avec un large sourire. Protégés dans une vitrine, Raphaël a également prévu d’exposer quelques personnages de la saga « Star Wars ». Là encore une passion pour celui qui est allé jusqu’à baptiser son chat « Ioda », sans maître » tout de même, faut pas exagérer !\nDurant l’exposition qui se tiendra du 20 décembre au 20 janvier à la médiathèque, Raphaël a prévu le montage d’un morceau de bravoure : une Porsche 911 GT3 RS, une maquette au 1/8ème qui, au terme de l’assemblage de plus de 2700 pièces, mesurera 57 cm. Pour cette construction, Raphaël invite le public à le suivre. Il a en effet prévu de la faire en zone ouverte à tous les samedis. Première étape prévue samedi 23 décembre à partir de 9h30. « L’objectif serait qu’elle soit terminée en 15 jours pour être exposée ensuite » confie-t-il avant de conclure « On verra bien ».


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Les albums les plus chelous du rap US jamais sortis [DOSSIER]\nVous n’allez pas en croire vos oreilles…\nDans l’art et plus particulièrement dans le monde la musique, il n’y au fond rien de mal à vouloir être différent. Bien au contraire, il s’agit souvent même d’un excellent moyen de s’affirmer tout en se démarquant de la concurrence.\nMalgré son côté parfois un peu trop rigide sur les bords, le rap n’échappe pas à cette règle – il y échappe d’ailleurs peut-être encore moins justement en raison de « ce côté parfois un peu trop rigide sur les bords » qui accentue les tentatives d’excursion en dehors des sentiers battus.\nOutre les habituels « weirdos » du game à la Madlib, Flying Lotus et Danny Brown qui ont fait de l’expérimentation leur marque de fabrique, ou de ces collaborations d’un jour dont on se demande toujours après coup si elles ont réellement eu lieu (les featurings asiatiques de Snoop Dogg, le duo entre les Bones Thugs-N-Harmony et Phil Collins, celui entre DMX et Marilyn Manson…), il existe des albums entiers de rap qui sans forcément être mauvais (certains le sont, d’autres pas) ont fait exploser les compteurs de la wtfuckerie.\nEn voici une petite dizaine dont il est fort possible que vous ignoriez quant à leur existence même.\nDr. Dre qui s’en est allé produire un joueur de flûte\nRemise récemment au goût du jour par le carton Mask Off du duo Future/Metro Boomin et toute la vague d’instrus copycat qui ont suivi (Get Right Witcha des Migos, Broccoli de D.R.A.M., Portland de Drake…), la flûte n’en a pas moins depuis toujours accompagné discrètement l’histoire du rap.\nQuand dès les années 80 Eric B & Rakim la samplent pour leur hit Paid In Full, sur la côte ouest elle se fait une place de choix parmi les instruments favoris des producteurs de gangsta funk qui apprécient tout particulièrement ce son extrêmement proche de la voix humaine (aucun embout, bec ou hanche n’interfére avec le souffle).\nLe label Ruthless Records qui n’a pas produit que des albums de N.W.A avait d’ailleurs à ce titre signé dans ses rangs un certain James Zavalan. Initialement embauché comme musicien de studio, il se voit ensuite offrir la possibilité d’enregistrer son propre album solo. Mieux, celui qui est rebaptisé Jimmy Z pour l’occasion bénéfice des services de Dr. Dre qui non-content de venir rapper sur quelques titres produit l’intégralité du disque !\nLe résultat s’appelle Muzical Madness et sort le 1er octobre 1991.\nSi l’épisode reste à ce jour méconnu, c’est qu’aucune de deux parties n’a particulièrement de quoi en être fière.\nUnique témoignage vidéo de cette « folie », le clip du lead single Funky Flute vaut d’ailleurs son pesant de cacahuètes entre les lyrics cucul la praline du docteur (« On the F-L-U-T-E yeaaah ») et les jeux de mots des plus lourdingues de l’ami Jimmy autour du double sens du mot « blow » (« souffler/tailler une pipe »), tout cela devant un parterre de demoiselles gémissant à n’en plus finir et les homeboys de Easy-E qui la jouent au plus-constipé-tu-meurs dans le fond.\nSi Zavalan s’en est allé ensuite poursuivre sa carrière comme si de rien n’était, Dre a quant à lui semble-t-il pas mal appris de l’expérience puisque pour son premier solo The Chronic enregistré dans la foulée, il va privilégier, à contre-courant de ce qui se faisait à l’époque, l’orchestration live au sampling.\nKool Keith qui a joué au gynécologue de l’an 3000\nSorte de cousin éloigné d’Alkpote et des dadaïstes, Kool Keith, déjà reconnu pour la bizarrerie de ses rimes au sein du collectif Ultramagnetic MCs, a franchi un nouveau cap en 1996 lorsqu’il s’est inventé l’alter ego Dr. Octagon et a sorti l’album Dr. Octagonecologyst qui va avec.\nLe picth ? Le rappeur interprète un médecin gynécologue obsédé sexuel né sur Jupiter qui voyage dans le temps.\nEnfin, ça, c’est la version simple, tant l’album part ensuite dans des délires tellement poussés qu’à chaque mesure s’en est à marquer une pause et se demander si l’on vraiment entendu ce que l’on a entendu – entre chimpanzés qui ont de l’acné, cirrhose de l’œil, cerveau fluorescent qui change de couleur, chaussures lames de rasoir et cheval errant en salle d’opération…\nEt pour ne rien arranger, ses deux architectes sonores Dan The Automator et DJ Qbert lui ont concocté une ambiance au diapason à base d’effets électroniques à glacer le sang et autres amples des plus malsains.\nSi Kool Keith ne s’est évidemment pas attiré ici une rangée de nomination aux MTV Award, il n’en est pas moins depuis à la tête d’une solide base fan. Poussé par cette dernière, il va ainsi continuer de faire vivre le docteur Octagon malgré le meurtre dont il est victime en 1999 sur l’album First Come, First Served de son comparse le Dr. Dooom.\nRessuscité en 2008 avec The Return of Dr. Octagon, 22 ans après sa création le personnage continue de faire la joie des auditeurs de rap alternatif avec la sortie d’un troisième acte au mois d’avril dernier intitulé Moosebumps: An Exploration Into Modern Day Horripilation.\nLil Wayne qui s’est pris pour un rockeur alors que personne ne lui avait rien demandé\nSurfant sur la vague du raz-de-marée Tha Carter III de 2008, celui qui s’autoproclame le « best rapper alive » sans souffrir de la moindre contestation annonce contre toute logique vouloir se lancer dans le rock.\nÀ l’époque défoncé au sizzurp toute la journée, personne ne prend véritablement ses déclarations au premier degré, sauf que le P’tit Weezy est lui bien sérieux. Non content de s’habiller désormais comme Avril Lavigne et de s’entourer de yes men qui avalent jusqu’à la dernière goutte, il finit vraiment par le faire.\nC’est ainsi que sort en février 2010 Rebirth, son disque rock, ou plutôt son disque « rock », dont la simple évocation donne hier comme aujourd’hui un frisson de malaise.\nCertes, les deux genres partagent à l’occasion quelques atomes crochus (dans le milieu des années 80 les piges des Run DMC ou des Beasties Boys, dans les années 90 les Rage Against The Machine), mais encore faut-il y aller mollo sur l’auto-tune mal réglé, la poésie adolescente et les riffs de guitare copiés-collés aux « pointures » Blink-182 et Limp Bizkit.\nAu final la question ne sera même pas de trouver un rockeur qui a apprécié l’album, mais de trouver quelqu’un qui a réussi à l’écouter en entier.\nDevant l’ampleur du désastre, Birdman essayera d’ailleurs de convaincre son poulain de coupler la sortie de Rebirth avec son Carter suivant histoire de limiter la casse…\nHuit ans plus tard, le monde attend toujours que Lil Wayne confirme que toute cette séquence tenait du canular.\nCommon qui est parti loin dans le délire néo-hippie\nAprès son classique Like Water for Chocolate de 2000, plutôt que de reproduire sa formule rap/soul savamment mise au point, pour son second album en major le emcee Chicagoan prend le hip hop à rebours en allant lorgner du côté des Pink Floyd et de Jimi Hendrix avec Electric Circus.\nEt si vous vous demandiez quelle mouche a bien pu le piquer, les témoignages s’accordent unanimement pour faire de sa compagne d’alors Erykha Badu la principale responsable de cette expérimentation à ciel ouvert – ou pour reprendre le célèbre mot de Questlove et Raphael Saadiq « Ne jamais la regarder plus de cinq secondes dans les yeux, sinon elle prend le contrôle de ton esprit ».\nComplètement possédé, Common concocte en collaboration avec son équipe de all stars (Jay Dee, James Poyser et Questlove côté prod’, Bilal, Mary J.Blige, Jil Scott, Cee-Lo, Marie Daulne de Zap Mama et la française Laetitia Sadier côté chant) treize pistes jamais entendues auparavant où s’entrelacent à n’en plus finir des sonorités rock, folk, électro, new wave et psychédéliques.\nLe produit fini est tel, qu’à un single mainstreeam près (l’enamouré Come Close), sitôt la première écoute terminée une seule question se pose : est-ce du génie pure ou de la folie douce ?\nTour à tour agressif et entraînant, abrasif et vaporeux, si le disque rate parfois sa cible notamment en raison de son côté un peu trop brouillon, c’est aussi ce qui fait tout son charme.\nJoliment imparfait donc. Pour peu que vous soyez un brin mélomane, il mérite toute votre l’attention.\nLes Little Brother qui ont parodié les minstrel shows du 19ème siècle\nSi The Minstrel Show sorti en 2005 n’est clairement pas l’album le plus déglingo de la liste, il n’en reste pas moins un excellent prétexte de parler des Little Brother, ce groupe composé au moment des faits des deux emcees Phonte (le rappeur préféré de Drake) et Big Pooh (dans le genre pseudo chelou), plus le génial beatmaker 9th Wonder.\nAprès un premier effort adoubé par la critique (The Listenning en 2003), le trio est vu par beaucoup comme le meilleur espoir de la scène US.\nPas très branchés gloire et millions faciles, plutôt que donner à leur musique une tournure grand public, les LB conçoivent leur second essai comme une satire du monde du rap et de l’industrie du disque en général.\nDécoupé à la façon d’un programme télévisé diffusé sur le réseau fictionnel UBN (You Black Ni**as Network), The Minstrel Show tourne ainsi en dérision tous les poncifs de la scène mainstream (nivellement par le bas, matérialisme, éloge de l’inculture…), Pooh allant jusqu’à pousser la chansonnette via son alter ego Percy Miracles pour moquer les chanteurs r&b mielleux qui pullulaient alors sur les ondes.\nTout cela sans bien sûr oublier cette pochette sur laquelle les trois larrons n’ont pas hésité à se noircir le visage et adopter des gimmicks d’une autre époque.\nJugé un peu trop intello (mais aussi disons-le nous franchement, parfois un peu trop répétitif), le disque divise la critique (même si globalement les avis sont positifs) et ne connaîtra qu’un succès d’estime.\nJay Z qui a vu son Black Album fusionné avec le White Album des Beatles\nEn octobre 2003, comme Prince et Metallica avant lui, Shawn Carter y va lui aussi de son Album Noir.\nDeux mois plus tard, histoire de continuer d’alimenter son buzz en donnant de la matière aux DJ et aux producteurs, il sort (comme Nas avant lui avec Stillmatic et God’s Son), une version a capella du projet disponible exclusivement en vinyle.\nC’est alors que vient à l’idée Danger Mouse (qui n’est pas encore la moitié de Gnarls Barkley ou le producteur d’Adele, A$AP Rocky, Red Hot Chili Peppers et tant d’autres) de remixer le neuvième et dernier album des Beatles avec le huitième album de Jay (lui aussi annoncé comme le dernier de sa carrière) pour en faire le Grey Album.\n« Pour moi, cela tombait sous le sens. J’étais un grand fan des deux… Par contre une fois le concept en tête, il fallait que je le sorte au plus vite » déclarera DM.\nIl passe alors 15 jours enfermé dans sa chambre à décomposer le chef d’œuvre des quatre garçons dans le vent à l’aide d’Acid Pro, un logiciel permettant d’isoler les différentes couches de musique d’une même chanson.\n« Les gens s’imaginent que j’ai juste pris des chansons des Beatles et que j’ai rajouté les paroles de Jay Z par-dessus, mais c’est en réalité beaucoup plus complexe à faire, c’est un vrai travail de déconstruction. »\nQuand sort enfin L’Album Gris, l’enthousiasme est immédiat et les 3 000 premiers exemplaires mis en vente s’écoulent en moins de 24 heures.\nCe succès d’estime attire cependant l’attention d’EMI. Connue pour négocier très chèrement la musique des Beatles (en 2012 il en par exemple coûté 250 000 dollars à la série Mad Men pour que soit joué un extrait de Tomorrow Never Knows), la maison de disques envoie dès le lendemain (!) une lettre de mise en demeure à Danger Mouse.\nFort heureusement pour lui le producteur sera tout d’abord soutenu par le site internet Downhill Battle qui va organiser en collaboration avec 170 autres sites le Grey Tuesday, une journée de résistance proposant le disque en téléchargement gratuit ; puis par Paul McCartney qui va contacter les hautes instances d’EMI pour leur demander de se calmer un peu (« Take it easy guys, it’s a tribute »).\nEt Jay Z dans tout ça ? Interrogé sur le sujet en 2010, il a non seulement trouvé l’idée « géniale » et le résultat « très fort », mais il s’est dit « honoré » de partager l’affiche avec les Beatles.\nNotez enfin qu’en 2012 un clip a été réalisé, la Grey Video, où l’on peut notamment voir John Lennon breaker sur What More Can I Say.\nMF Doom qui n’a parlé que de bouffe 15 pistes durant\nSchizophrène notoire sur disque, le new-yorkais d’origine britannique Daniel Dumile multiplie à n’en plus finir les alias depuis ses débuts au sein du groupe KMD.\nC’est ainsi qu’au gré de ses collaborations, on le retrouve crédité sous le nom de Madvillain (avec Madlib), Danger Doom (avec Danger Mouse), Doomstarks (avec Ghostface Killah), JJ Doom (avec Jneiro Jarel), NehruvianDoom (avec Bishop Nehru), ou encore Czarface Meets Metal Face (avec Czarface).\nEn 2004 pour son second album en tant que MF DOOM, le super villain du hip hop décide une bonne fois pour toute qu’il existe « d’autres thèmes sur lesquels rapper en dehors de tuer tout le monde ».\nMM.. FOOD (l’anagramme de son blaze) prend par conséquent le parti de faire des joies de la table son fil conducteur. S’il n’est évidemment pas le premier emcee à revendiquer son obsession de la bouffe, il est le seul à étendre le concept à ce point.\nHoe Cake, Fillet-O-Rapper, Vomitspit, Beef Rap… tandis que chaque moreau référence un plat ou un ingrédient, le masque de fer du rap accumule jusqu’à n’en plus finir les métaphores culinaires et jeux de mots sucrés/salés.\nEt si de prime abord, il est légitime de craindre l’indigestion, rassurez-vous : les talents de producteur et de rimeur de Doom sont tels que s’en est presque à demander du rab une fois le service terminé.\nDeath Row qui a sorti un album de chansons de Noël\nOui, vous avez bien lu. Le label pris pour cible par le FBI pour meurtre, trafic et extorsion, le label dont le PDG Suge Knight est au moment des faits sur le point de partir en taule pour cinq ans et dont le franchise player 2Pac est décédé par balles quelques mois auparavant, ce même label donc a sorti en décembre 1996 un disque dénué de la moindre insulte, où personne n’utilise le n-word et dont les profits ont été officiellement reversés à des associations caritatives.\nDernier témoignage du line-up originel (moins Dr. Dre), ce Christmas on Death Row propose ainsi entre autres joyeusetés un lead single intitulé Santa Claus Goes Straight to the Ghetto, un I Wish des Dogg Pound qui appelle à une trêve dans la guerre que se mènent Crips et Bloods (seule et unique référence aux gangs de tout le projet) ou encore des reprise de classiques du genre comme Silver Bells de Michel’le ou Peaceful Christmas de Danny Boy.\nÉtonnamment, sans être un chef d’œuvre ou même un bon disque, tout n’est ici pas à jeter, l’onctuosité du son G-funk (merci Daz Dillinger à la prod’) et la nostalgie d’une période révolue aidant à faire passer le tout.\nEt puis bon, quitte à le comparer avec le calamiteux (et le mot est faible) Dipset Xmas de Jim Jones sorti en 2006, il n’y a clairement pas photo pour savoir lequel des deux crews a vraiment l’esprit de Noël.\nJay Electronica qui a freestylé sur du Jim Carrey et du Michel Gondry\nEn 2004, le Frenchie Michel Gondry réalise Eternal Sunshine of the Spotless Mind, une comédie romantique de science-fiction (appelons-la comme ça) dans laquelle Kate Winslet et Jim Carrey effacent tout souvenir de leur relation passée.\nTrès bien reçu, le film marque également les esprits pour la finesse de sa bande originale. Composée par Jon Brion, cette dernière est alors samplée à tour de bras par des artistes indies désireux de s’inspirer de l’ambiance éthérée et rêveuse du métrage (Memoryhouse, XXYYXX, Yuna…).\nParticulièrement admiratif du travail de Brion, Kanye West fait lui directement appel à ses services et l’intronise carrément co-producteur de son second album Late Registration sorti en 2005.\nDeux ans plus tard, un autre rappeur complétement inconnu au bataillon se branche sur Eternal Sunshine : il s’appelle Jay Electronica et propose sur sa page MySpace ce qui reste son seul et unique projet à ce jour, la mixtape Act I: The Eternal Sunshine (The Pledge).\nLongue de 15 minutes à peine, dénuée de la moindre batterie ou du moindre refrain, elle reprend intégralement les éléments musicaux clefs du film à partir d’une scène bien particulière, celle où le personnage de Jim Carrey rencontre celui de Kate Winslet et où elle l’invite à prendre un verre.\n« C’est la première fois où il se sent transporté. C’est l’un des tournants du film, mais la musique entendue dans le fond (‘do-do-do-do-do-do-do’) provoque un sentiment de malaise. C’est ce contraste que je voulais reproduire sur disque » a ainsi expliqué l’intéressé.\nÀ l’aide de Just Blaze et Erykah Badu (avec qui il fera un enfant au passage), Jay E. renoue cinq « actes » durant les plus belles heures des illustres Nas, Pharoahe Monch et Andre 3000.\nEt histoire accentuer son statut de légende urbaine, ce coup d’essai considéré comme un coup de maître restera sans suite.\nAndre 3000 qui a brouillé à jamais les frontières entre rap et chant\nTentés l’un et l’autre par une échappée solo, les deux compères d’Outkast coupent en 2003 la poire en deux en sortant le double album Speakerboxxx/The Love Below sur lequel chacun fait ce qu’il lui plaît sur sa partie dédiée, façon John Lennon et Paul McCartney à leur retour d’Inde.\nReste que là où Big Boi continue de sonner comme Outkast, Three Stacks laisse voguer sa créativité vers d’autres horizons.\nNe cachant déjà plus depuis quelque temps sa lassitude face à un rap qui refuse d’évoluer, celui qui a remplacé les jerseys et baggys de ses débuts par des turbans et jupettes couleur fuchsia en fait tousser plus d’uns en poussant la chansonnette quasi 20 pistes durant.\nSi de Warren G à 50 Cent, Trois Mille (alias « la version homme de Lauryn Hill » comme le surnomme Big Boi sur A Star is Born de Jay Z) n’est pas le premier rappeur à jouer la carte de la mélodie, le fait qu’il soit le premier rappeur à le faire aussi ouvertement plonge le reste du monde dans un profond désarroi\nEst-ce toujours du rap ? Est-ce du rap chanté ? De la pop ?\nAujourd’hui banale, la chose est il y a quinze ans révolutionnaire et ce d’autant plus que le disque cartonne (11 millions de copies vendues). Porté aux nues par la critique, The Love Below ouvre ainsi le chemin à une nouvelle ère dans le rap, l’auto-tune se chargeant une décennie plus tard de parachever cette évolution.\nOu quant à trop réussir leur coup, les avant-gardistes deviennent les précurseurs de la tradition.


Commenter la réponse de griffinger. Bonjour davesolo, non aucun problème si bien sûr tu choisis le plus cher et donc non lié à un opérateur! Commenter la réponse de David. Lg Ku – viewty. Signaler Commenter la réponse de laurent Celui-ci est vendu sur le site « rueducom\nCommenter la réponse de abdolah. Quitter ce monde dans un orgasme Damien Bonsoir Damien, as tu trouver se dont tu avais besoin? Page 15 sur 15 Première Travailler, jusqu’à devenir assez jeune pour profiter de la vie. Quelqu’un a t il deja cracké son lg afin d’y mettre de nouveau themes etc? Signaler Commenter la réponse de amine.\nSignaler Commenter la réponse de salim. Passer 9 mois tranquille à flotter.\nIl faudra peut être que grathit effs tape la lecture de quelques topics mais tu trouveras. Commenter la buildfr de laurent Signaler Commenter la réponse de abdolah. Il est en très bon état très peu utilisé gratiut est garantit jusqu’en avril Commenter la réponse de FalCow. Signaler Commenter la réponse de vik. Commenter la réponse de salim. Damien Bonsoir Damien, as tu trouver se dont tu avais besoin?\nLa pluspart des version sont infectées par un virus mais j’en aie trouver une sans à dll ici: Très simple à manipuler, le logiciel est gratuit pour un usage privé.\nSignaler Commenter la réponse de FalCow. Shinigami Voir le profil Voir les messages.\nQuelqu’un a t il deja cracké son lg afin d’y mettre de nouveau themes etc? Bonjour j’ai une question: Merci de lire la charte du forum avant de poster n’importe où et n’importe quoi Bienvenue quand même.\nSignaler Commenter la réponse de kev Quelqu’un a des infos sur des sites de thémes, apps, etc pour mon petit nouveau Viewty a me suggérer??? Commenter la réponse de kezo. Commenter la réponse de byco.\nLg Ku – viewty. Up pr l’ami de Nicomy!!! Commenter la réponse de abdolah. Quelqu’un peut me donner les infos de config wap Base pour le viewty?\nY’ pas que la téléphonie dans la vie MisTer – 21 févr. Commande et suivi 3. Piom Voir le profil Voir les messages. Commenter la réponse de amine.\nJ’en désirerais Euros mais on peut en parler: Signaler Commenter la réponse de amine. Appareils photos, technique photo, etc.


zakaryclassefrancois | Classe à François 2013-2014\nAuthor Archives: zakaryclassefrancois\nPosted by zakaryclassefrancois\nFrançois j’ai beaucoup aimer les activités que tu nous a fait voir tout l’année .J’espère que toi aussi tu a aimer ces activités.\nFRANÇOIS JE TE\nVendredi le 16 mai ,tout l’école Mon-St- Louis est aller voir la pièce de théâtre Grease.\nJ’ai beaucoup aimé cette pièce parce que les personnage jouais bien leur rôle.\nJ’ai moins aimé le coté technique parce que quand il fermait les lumière ,on vois les gens qui déplace les objets.\nFiche de lecture – The David Beckham Academy\nTon nom : Zakary Gauthier\nTitre du livre : THE DAVID BECKHAM ACADEMI\nNom de l’auteur : Jason Lorborik\nTon résumé du livre : Ces l’histoire d’un garçon nommé Luke.Il est un excellent défenseur de soccer.Il est très déterminé et solide comme de la roche.Luke est un bon défenseur,mes il mest son équipe dans le pétrin.\nTa critique du livre : J’ai beaucoup aimé ce livre parce que les jeune dans ce livre son beaucoup déterminé dans leur sport.\nLa conférence avec VORO!!!!!!!!!!!!\nJeudi le 8 mai nous sommes aller voir la conférence de VOVO!!\nJ’ai vu que VORO était un très très très bon bédéiste.\nUn vent de changement avec Rafale!!!!!\nJeudi le 24 avril nous sommes aller voir la pièce de théâtre un vent changement avec Rafale.\nJe n’ai pas beaucoup aimé cette pièce de théâtre parce que c’était trop bébé.\nMais j’ai retenu qu’il faillais recyclé et qu’il faillais gardé notre terre propre.\nLa petite vérité inventée\nMardi le 15 avril nous sommes aller le spectacle la petite vérité inventée.\nPresque tous le spectacle était ennuient sauf qu’an elle dansait.\nMais c’était incroyable 2 personnes qui fait 20 personnes ces vraiment impressionnent.\nFiche de lecture – Les Simpsons – Trop top pour la télé\nTitre du livre : Les Simpson trop top pour la télé\nNom de l’auteur : Matt Groening\nTon résumé du livre : Histoire 1= Lisa et Bart décide de créer leur propre émission de télévision. Ils auront beaucoup de succès, mais plus le temps passera et plus il sera difficile pour eux de satisfaire les téléspectateurs. Histoire 2 = Le maire de Sprigfield exige que tous les citoyens soient en meilleur forme. Tous devront perdre du poid sans exeption, ce qui sera très difficile pour Homer Simpson.\nTa critique du livre : J’ai beaucoup aimé ce livre parce que les images sont belle, et les personnages sont très réussi! J’ai trouvé les histoires comiques.\nMoi et ma classe on a fait une expérience sur les danger d’internet.\nOn a mi une photo de François sur Facebook et on a demander de la partager.\nEn un jour il y a eu 1939 partage et 22400 visionnement.\nEn trois jours il y a eu 4663 partage et 55600 visionnement.\nEn six jours il y a eu 6500 partage et 200354 visionnement.\nSa a été une bonne expérience sur les réseaux sociaux .\nIl faux faire attention sur internet ou sur Facebook etc…\nPRENNER VOTRE TEMPS!!!!\nFiche de lecture – Une sale affaire de dentifrice\nCe roman t’a-t-il appris du vocabulaire?\nTon résumé du livre :\nAujourd’hui Gustave doit faire un stage à l’usine de dentifrice radodent.Alors qu’il croiyait mourir d’ennui,le garçon est propulsé dans une intrigante affaire puisque Jérome Radodent ,le propriétaire de la compagnie,disparaît au lendemain de sa première visite. Non seulement le garçon est le dernier à avoir vu le vieil homme vivant,mais celui-ci a confié une mystérieuse mallette avant de se volatililiser.Aider de ses ami, Gustave démêlera les fils de cette curieuse et hilarante affaire de disparrition dans le monde,pas toujours propre,de l’hygiène dentaire.\nTa critique du livre :\nMa semaine de relâche!!!!!!!!:)\nLundi à mercredi j’ai rester à la maison et j’ai relacer.\nJeudi à 9 heure mois et ma sœur et mon grand-père nous somme parti à Rivière du loup pour aller au chalet de mon grand-père.\nJeudi à samedi j’ai coucher au chalet de mon grand-père.\nMais samedi mes parent son venu coucher au chalet.\nSamedi soir on a manger de la fondu au chocolat et c’était délicieux.\nDimanche nous somme reparti au Bic mois ma sœur et mes parent ,mon grand-père a rester à son chalet


Avertisseur de radar | controleradar.org\nUn geste citoyen accepté par les autorités\nAlors que le gouvernement tergiverse sur le retour des panneaux avertissant de la présence des radars, après l'échec de la politique des panneaux pédagogiques du gouvernement précédent, des motards de la Fédération Française des Motards en Colère (FFMC 04) ont pris les choses en main. Ils protestent par ce geste civique contre le retrait de 3 panneaux avertisseurs de radars dans leur département.\nRead more about Un geste citoyen accepté par les autorités\nL'échec de l'interdiction des avertisseurs radar\nSouvenez-vous, en mai 2011, le gouvernement Fillon avait pour projet d'interdire purement et simplement les avertisseurs de radar. Sous la pression des constructeurs, qui s'étaient alors regroupés au sein d'un association, l'AFFTAC (Association Française des Fournisseurs et utilisateurs de Technologies d’Aide à la Conduite), le gouvernement a reculé dans son projet, et après réflexion, a décidé de transformer les avertisseurs en "assistants d'aide à la conduite".\nRead more about L'échec de l'interdiction des avertisseurs radar\nAnnulation de l'interdiction des avertisseurs de radars?\nL'interdiction des avertisseurs de radars pourrait-elle être annulée? C'est bien ce qui pourrait se passer si le Conseil d'Etat accepte la requête d'une entreprise fournissant des services et contenus pour GPS.\nRead more about Annulation de l'interdiction des avertisseurs de radars?\nMise à jour de votre avertisseur de radar\nC'est officiel, les avertisseurs de radars sont désormais interdits. Dorénavant, seuls les outils d'aide à la conduite sont autorisés. Mais les deux appareils sont identiques, et une simple mise à jour de votre ancien avertisseur (interdit) peut le transformer en un outil d'aide à la conduite (autorisé). Quels appareils sont concernés?\nRead more about Mise à jour de votre avertisseur de radar\nProtocole relatif aux outils technologiques d’aide à la conduite de véhicules terrestres à moteur.\nVoici l'intégralité du protocole signé le 28 juillet 2011 par l'AFFTAC (Avertinoo, Coyote, Eklaireur, Wikango, Takara, Inforad, Ecologic) et le ministère de l’intérieur.\nRead more about Protocole relatif aux outils technologiques d’aide à la conduite de véhicules terrestres à moteur.\nAvertisseur de radar : que dit la loi\nLes nouveaux appareils s'appellent désormais des outils d'aide à la conduite, et restent 100% légaux. Ce sont les mêmes appareils qu'auparavant, mais moins précis, et avec des "fausses" alertes qui ne sont pas des alertes radar. Pour que votre ancien avertisseur reste légal, il faut le mettre à jour. Certains fabricants proposent la reprise de votre ancien avertisseur contre un avertisseur (outil d'aide à la conduite) neuf.\nRead more about Avertisseur de radar : que dit la loi\nNouveau type d'avertisseur de radar\nLa répression a ses limites. Plus on réprime, plus il faut s'attendre à des comportements de révolte. La dernière histoire sur l'interdiction fumeuse des avertisseurs de radar a en énervé certains...\nDes avertisseurs de radar d'un nouveau type\nL'action est belle. Elle va au-delà des mots. Il s'agit de peindre sur la chaussée, à quelques dizaines de mètres avant un radar, en grandes lettres blanches, le mot "RADAR". Ainsi, tout usager de la route pourra être prévenu de la présence d'un radar tout proche. Efficace. Propre. Pas de dégâts. Une action citoyenne. Sauf si la loi l'interdit (est-ce le cas?).\nRead more about Nouveau type d'avertisseur de radar\nAvertisseurs radars autorisés\nLa nouvelle est officielle, les avertisseurs radars ne sont plus interdits. Ils sont 100% autorisés. Quel revirement du gouvernement face à la pression des élus (donc des électeurs), des usagers et des fabricants de d'avertisseurs.\nN'oublions pas non plus la pression technologique qui faisait de cette interdiction un combat perdu contre les smartphones et technologies mobiles.\nBien sûr, les détecteurs de radars restent interdits.\nL'astuce pour autoriser les avertisseurs\nRead more about Avertisseurs radars autorisés\nAvertisseurs de zones dangeureuses\nLes avertisseurs de zones dangereuses sont la nouvelle dénomination des avertisseurs radars. Pour résumé, à part le nom de l'appareil, rien ne change, sauf la précision : l'appareil ne vous préviendra plus précisément de la localisation d'un radar mais vous dira que vous êtes dans une zone "à danger" c'est à dire avec radar à proximité.\nRead more about Avertisseurs de zones dangeureuses\nLa société Coyote a enfin ouvert son magasin à Paris. Vous y trouverez toute la gamme de produits et d'accessoires Coyote ainsi que les conseils des vendeurs.\nRead more about Boutique Coyote\nDétecteurs de radars : la gendarmerie les recheche\nLa gendarmerie a procédé à un vaste coup de filet contre les conducteurs propriétaires de détecteurs de radar. Au mois de mars 2010, plus de 600 personnes ont été interpellées. Pourquoi, comment?\nRead more about Détecteurs de radars : la gendarmerie les recheche\nL'Inforad K1 est un avertisseur de radar datant des années 2010 environ. Ce type d'avertisseur radar qui donnait précisément la position des contrôles routier en direct a depuis été interdit. A l'époque, Inforad proposait de reprendre les appareils. Cette proposition n'est évidemment plus d'actualité en 2021. Vous pouvez cependant toujours trouver chez inforad et ailleurs (ebay ou aliexpress par exemple) des pièces de rechange, clips de fixation, câbles et autres objets liés à votre Inforad K1.\nRead more about Inforad K1 : avertisseur de radar\nDetecteur radar GPS\nUn détecteur de radar GPS...efficace, abordable et 100% légal\nUn appareil détecteur de radar est un objet tout simple qui utilise:\n- une technologie légale : le GPS, qui permet à l'avertisseur de radar de connaitre à chaque instant la position du véhicule, sa vitesse, sa direction etc.\nRead more about Detecteur radar GPS\nALERTE GPS GRATUIT, ALERTE RADAR\nMettez à jour votre fichier indiquant les radars fixes, les zones à radars mobiles et les zones dangeureuses en téléchargeant les fichiers d'alerte radar Avec vos alertes radar (à jour), roulez confiant!.\nRead more about ALERTE GPS GRATUIT, ALERTE RADAR\nLes nouveaux appareils s'appellent désormais des outils d'aide à la conduite, et restent 100% légaux. Ce sont les mêmes appareils qu'auparavant, mais moins précis, et avec des "fausses" alertes qui ne sont pas des alertes radar. Pour que votre ancien avertisseur reste légal, il faut le mettre à jour. Toutes les infos sont disponibles en cliquant ici\nUn avertisseur de radar est devenu un simple objet banal, 100% légal, mais dont l'utilisation est quasi indispensable à tout conducteur! Généralement sous la forme d'un boîtier tout intégré, mais aussi disponible sous la forme d'un PDA ou téléphone portable, un avertisseur de radar placé sur votre tableau de bord vous permettra d’éviter les excès de vitesse, de préserver les points de votre permis de conduire et de renforcer votre sécurité. Des modèles d'avertisseurs de radars spécialement développés et étudiés pour un usage en moto sont bien sûr disponibles.\nPour acheter un avertisseur de radar, rendez-vous dans la boutique avertisseur de radar.\nL'avertisseur radar au meilleur rapport qualité prix est actuellement l'inforad K1. Très accessible à moins de 40 euros. Le système Coyote est lui aussi très intéressant.\nRead more about Avertisseur radar


Je suis uniquement désireuse de prendre du plaisir virtuellement, cela afin de sortir de la routine du quotidien | Rencontre sexe\nJe suis uniquement désireuse de prendre du plaisir virtuellement, cela afin de sortir de la routine du quotidien\nJe suis seule. Je suis en manque de tendresse. Je me sens désireuse de prendre du plaisir, mais je n’ai clairement pas envie de prendre du plaisir toute seule. Je me retrouve donc là pour essayer de trouver un homme étant prêt à partager du plaisir avec moi, mais virtuellement uniquement. Je ne sais pas pour vous, mais me concernant, le sexe virtuel, c’est franchement une chose que j’adore. Je recherche un homme qui aime de prendre du plaisir devant la webcam, en toute simplicité. Si jamais vous êtes celui que je recherche, attrapez votre clavier, et laissez-moi vite un message pour que nous puissions prendre le temps de faire connaissance. Je vous embrasse bien fort.


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Forum francophone de permaculture • Consulter le sujet - lefab vous salut.\nlefab vous salut.\npar lefab » 19 Nov 2017 15:45\nje me présente, Fabien dit "lefab", la cinquantaine, technicien dans l'audio visuel et évènementiel.\ndepuis peu j'habite un charment village du 64 ou je dispose d'une parcelle de terrain (une première pour moi qui suit d'origine "citadine")\nje suis donc totalement débutant dans le jardinage, en dehors de l'entretient de mes plantes vert d'intérieur en pot,\nce qui ma permit depuis un bon moment déjà, de m’intéresser de près aux principes de la culture organique (sans être devenue un expert, loin de la).\nj'ai pu par ce biais, constaté l’intérêt et l'efficacité du vivant,\nc'est donc "naturellement" que j'envisage une approche organique et permaculturel de mon jardin,\nun mode contemplatif a minima d'interventions me conviendrais pas mal\nmon terrain est une friche a l’abandon depuis quelque années, cette friche est haute et extrêmement dense (le terrain est quasiment impénétrable en été)\nune grande variété d’Espèces (que je ne connais pas) s'y développe .\nne sachant pas trop par ou commencer,\nla semaine dernière, j'ai manuellement défricher un espace d'une dizaine de mettre carré (ce fut physique )\nj'ai laissé les produits de la fauche sur place et recouvert tout ça d'une bâche.\nj'ignore si c'est réellement une bonne idée mais cela constitue pour moi l'acte fondateur du jardin ...\nRe: lefab vous salut.\npar Sebctop » 19 Nov 2017 22:03\nSalut Lefab et bienvenue à toi ici!!!\nTu trouveras toutes les infos que tu souhaites sur ce forum!... et même celles que tu ne souhaites peut être pas ?!!...\nN'hésites pas à aller dans l'onglet Ressources.\nPour ta friche, je te conseille l'achat d'une machette! Mon terrain est un peu de ce type et c'est super efficace. Je coupe des troncs gros comme mon bras sans trop d'efforts! La tramontina (que j'ai) est d'un très très bon rapport qual/prix de mon point de vue...\nPour les ronces, opte pour la faux (à lame courte) et/ou la cisaille.\nOk pour laisser sur place... mais la bâche n'est peut être pas nécessaire? Si tu veux favoriser la vie qui est dans et sous ton tas, elle aura besoin d'eau!\nSauf si tu as une idée derrière la tête?...\npar lefab » 20 Nov 2017 01:07\nmerci pour ton accueille.\npour la bâche, c'est un truc vendu en jardinerie, un simple "polyane" micro perforé, c'est censé laissé passer l'air et l'eau ...\ndes idées j'en ai plein la tête, mais j'avoue qu'elles sont plutôt en vrac pour le moment ...\nla, j'ai installer cette bâche surtout pour faire "place net" en privant cette surface de lumière,\net aussi pour "marquer le coup" (la psychologie du jardiner, c'est important ! )\nmaintenant ben je réfléchis a ce que je vais pouvoir faire la dessus,\nfaire pousser quelque chose évidement, mais je ne suis pas encore fixé sur quoi et de quel façon ...\nvoila je suis encore dans la phase "découverte" et évaluation de mes conditions et "problématiques".\npar Sebctop » 20 Nov 2017 22:16\nTjs dubitatif pour ta bache... surtout qu'il n'y a pas gd chose qui pousse en ce moment... enfin chez toi j'sais pas?!...\nL'intérêt que je pourrais y trouver c'est de mettre dessous tes déchets organiques de cuisine à la rigueur? Ca se décomposerait tranquilloux pour te faire un sol super pour tes plantations du printemps.\nSi ton carré est proche de ta maison, place y les aromatiques. C'est du 100% garanti ou presque! Ca sera bon pour ta cuisine et ta santé... Et çà te gardera le moral au beau fixe !!!\npar lefab » 20 Nov 2017 22:55\nTjs dubitatif pour ta bache... surtout qu'il n'y a pas gd chose qui pousse en ce moment... enfin chez toi j'sais pas?!..\nben on a encore de belles journées ensoleiller par ici ...\nbon cette bâche elle a surtout un aspect "symbolique", j'ai pensé a ça, parce ce que je ne dispose pas encore de matière pour pailler ...\nje ne pense pas la laisser très longtemps de toute façon, c’était une tentative visant a préservé un peu mon boulot,\nje la remplacerais des que j'aurais la possibilité de faucher la parcelle pour me fournir un peu de matière .\npar 0tyugh » 21 Nov 2017 14:17\nEn repère, on dit que 6 semaines de bâche suffit à "mettre au tapis" momentanément même le chiendent (qui reviendra ensuite, mais y a le temps de faire une culture).\nJe viens d'écouter un exposé où un maraîcher à un mécanisme comme ça d'utiliser les adventices comme engrais vert, et utiliser la bâche pour préparer (désherber) ses planches. Il dit que ça marche pour tout sauf avec les plantes appréciées des rongeurs (sans labour, ils ont tendance à kiffer habiter dans les plantations) - comme la carotte.\nAlors le monsieur précise qu'il est en terrain sablonneux et qu'il commence à voir les limites de cette technique vu qu'ils sent que le sol s'épuise faute de ne pas apporter assez de "miam miam" au sol (surtout sur ce genre de sol, tu m'étonnes).\npar Sebctop » 21 Nov 2017 15:44\nPour rebondir sur toi Grand 0tyugh ! J'ai déplacé une bache que j'avais mis dans le milieu de mon terrain (pour y faire un abreuvoir pour les oiseaux surtout...) et pour replanter des trucs... et ho joie que d'y voir en dessous... moultes galeries et un bon gros campagnol tout surpris de me voir lui enlever son toit !\npar lefab » 21 Nov 2017 18:14\nBonjour 0tyugh, Sebctop\nmerci pour l'info 0tyugh, oui mon idée de base et commencer dans l'esprit de ce que fait ce maraicher.\nici la terre est plutôt argileuse, elle me semble riche au regard de la masse et densité du couver végétal.\nmon voisin (qui exploite une parcelle voisine en maraichage bio) me dit aussi quelle est acide .


Test : Dark Souls : RPG, Aventure, Survival & Cie\n« Test : Red Dead Redemption | Page d'accueil | Test : The Elder Scrolls V : Skyrim »\nSynopsis : Tout commence dans une espèce de prison, apparemment au sein d’un asile hanté. Le personnage que l’on contrôle, un prisonnier mort-vivant, va quitter sa cage et s’enfuir.\nDescription : Dark Souls, suite spirituelle de Demon’s Souls, est un Action-RPG en 3D à la 3ème personne.\nLe titre reprend les principaux codes de Demon’s Souls, dont le système d’évolution de l’avatar via des âmes récupérées en tuant les ennemis.\nLa difficulté globale du jeu est toujours aussi élevée, mais un nouvel élément viendra aider le joueur dans sa progression : il s’agit de feux de camps qui serviront de check-points.\nLe système de hub central de Demon’s Souls a, d’ailleurs, disparu. Dark Souls propose désormais un monde totalement ouvert.\nL’univers tire vers le mediévalo-fantastique occidental glauque, et présente des lieux variés (château fort, marais, cathédrale, forêt, catacombes). Les zones de jeu seront tantôt étroites, sombres et labyrinthiques, tantôt un peu plus spacieuses et lumineuses.\nEnfin, tout comme dans Demon’s Souls, 99% des êtres croisés durant l’aventure seront des ennemis. On ne rencontra que peu de PNJ ; tous servant d’ailleurs à quelque chose (vendeurs, forgerons…). Le monde de Dark Souls est donc aussi hostile que fonctionnel.\nAvis : Au jour d’aujourd’hui, si on me demandait d’élire mon meilleur jeu sur next-gen, je choisirais Dark Souls.\nDemon’s Souls, son prédécesseur, m’avait déjà enchanté. Dark Souls va encore plus loin, en améliorant les principes instaurés par son aîné, notamment avec le système des feux de camp qui rendent l’aventure moins décourageante sans baisser la difficulté globale.\nEn outre, le principe du monde ouvert colle vraiment bien à Dark Souls, car il renforce le sentiment d’avoir un univers immense et bourré de surprises à explorer.\nD’ailleurs, le level design déjà fantastique sur Demon’s Souls, prend ici une dimension supérieure. Chaque passage a été imaginé pour offrir quelque chose de spécial au joueur en termes d’exploration et/ou de combat. Chaque lieu a une identité propre. Chaque environnement de ce monde ouvert s’interconnecte avec les autres de manière aussi intelligente que surprenante. A l’heure ou les open-world dans le jeu vidéo sont souvent synonymes de répétitivité et/ou d’approximation (GTA, Red Dead Redemption, Batman Arkham City, Oblivion…), Dark Souls montre la voie en offrant un monde varié, précis, intelligent et sadique.\nBonne transition pour (re)aborder le thème de la difficulté du titre. Oui elle est élevée ! Que ce soit lors des phases d’exploration où absolument rien n’est indiqué sur la direction à prendre et l’emplacement des zones dangereuses (ennemis, pièges), ou lors des combats, surtout contre certains boss.\nMais, finalement, quand on sait être patient et rusé, on y arrive toujours. Et le sentiment d’accomplissement en cas de réussite est incomparable avec ce que l’on trouve aujourd’hui sur console.\nDark Souls c’est le genre de jeu où il faut avancer et mourir pour comprendre ensuite comment ne plus mourir. Dark Souls c’est le genre de jeu où l’équipement, le niveau de l’avatar et les skills du joueur sont des éléments d’importance égale pour espérer progresser dans l’aventure. D‘ailleurs, soit dit en passant, le gameplay est un modèle de précision et d’intelligence.\nLe dernier gros point fort de Dark Souls, concerne évidemment l’ambiance, oppressante, flippante, parfois digne d’un Survival Horror !\nD’ailleurs, en y réfléchissant, je me rends compte que Dark Souls -tout comme Demon’s Souls- est un Hack & Slash reprenant finalement certains des grands codes du Survival Horror : l’ambiance est oppressante et le level design est pensé au millimètre près pour créer un sentiment de panique à chaque intersection de couloir. Le résultat est que Dark Souls invite souvent à s’enfoncer dans des univers qu’on a envie de fuir instinctivement.\nA l’inverse, on aura droit à quelques paysages de toute beauté, reposants, permettant de souffler comme on soufflerait dans une salle de machine à écrire de Resident Evil.\nEt je crois que c’est ce cocktail, ce mélange, qui rend aussi le titre si happant.\nLe jeu présente quand même quelques points noirs. Oubliez les menus critiques faites par la Presse concernant la technique un peu vieillotte pour aujourd’hui, et les quelques rares soucis de caméra. Ces défauts sont tellement désuets face à la puissance du jeu, qu’ils sont mis à la trappe très rapidement.\nNon, le vrai souci avec Dark Souls concerne quelques passages précis de l’aventure, où le manque d’indications verbales ou écrites est vraiment abusé. Exemple typique : le boss qui est invincible dans une salle et pas dans une autre. Comment savoir qu’il est vraiment invincible dans la 1ère salle quand on n’a pas connaissance de la seconde ?\nVoilà, c’est vraiment le seul petit grief que j’ai contre Dark Souls ; petit grief qui incitera peut-être parfois à consulter une soluce. Le reste en fait un titre indispensable, et plus encore.\nVerdict : Demon’s Souls m’avait mis une claque à l’époque. Dark Souls m’en a mis deux, en frôlant la perfection.\nExcellent test pour un jeu exceptionnel.Dark Souls procure tellement d'émotions...Autant la joie et la jouissance que le désespoir ^^\nJ'ai même transpiré devant deux boss que je n'arrivais pas à battre (Smough et Ornstein).Contrairement à Demon's Souls j'ai eu de la pitié en tuant certains boss et j'ai trouvé le combat final excellent mais triste aussi (peut-être à cause de la musique).\nSinon tu es intéressé par la sortie de Kingdoms of Amalur : Reckoning le mois prochain ? JIl me semble que l'univers ressemble un peu à celui de Dark Souls.\nDevant Smough et Ornstein j'ai eu les mains qui tremblaient. 1ère fois que ça m'arrive dans un jeu. Et j'avais regardé la vidéo de Exserv sur ce passage, idem pour lui.\nCe boss est un truc de fou.\nMon coeur battait encore fort 2 heures après l'avoir (les avoir) mis à terre (suite à mes 10 tentatives, avec un bon paquet d'xp et d'équipement entre les 8 premières et les 2 dernières).\nLe boss e fin m'a bien fait chier aussi étant donné que j'ai pas trop pris de temps de maîtriser les contre.\nJ'ai donc monté ma pyro quasiment à fond et utilisé la même technique que contre Smough en mode électrique (avec un pilier/rocher entre moi et lui). Et même comme ça il faut vraiment être intelligent et rapide.\nPar contre, genre, les 4 Roi, Seath et Nito ne m'ont pas trop posé trop de problèmes une fois que j'avais le niveau/équipement pour.\nPour Kingdom of Amalur, je vais me renseigner. Merci de l'info.\nÉcrit par : zivaboy | 18/01/2012\nPour Kingdom of amalur, de ce que j'ai vu dans la vidéo trailer sur JVC, ça à l'air légèrement orienté Beat Them All (dans le sens nerveux du terme) et l'univers ne m'a pas l'air extra. Je parle en comparaison de Dm/DkS. Après, impossible de juegr comme ça.\n2ème soucis, mon PC est trop vieux pour jouer à des jeux récents dessus. Résultat, aujourd'hui je suis beaucoup plus un joueur console. Il est loin le temps de Myst, Diablo 2 et Starcraft 1er du nom !\nOulà oui j'avais pas vu le dernier trailer de ce jeu, l'univers ressemble plus à Fable qu'a Dks en fait.Par contre le jeu sort aussi sur PS3 et 360, les consoleux comme nous pourront aussi en profiter :)\nPour DKs, comme toi je n'ai pas trop galéré pour Nito (je l'ai eu au bout de ma 2ème tentative) ou Seath.Mais alors c'est clair que Smough et Ornstein étaient horribles, ces deux monstres m'ont traumatisé.T'as pas une seconde de répit, lorsque tu t'éloignes tu as Ornstein qui t'envoie ses espèces de rayons avec sa lance, l'autre fou qui te court après avec son marteau de 3km de long...C'est des véritables psychopathes surpuissants ces deux là.\nLe boss de fin aussi est bien chiant, comme je n'avais aucune magie j'ai dû me le faire au corps à corps en utilisant aussi les piliers/rochers entre lui et moi.Comme il m'a bien défoncé lors des premières tentatives, j'ai dû booster mon endurance et ça a fini par marcher.\nAlala, ce jeu est vraiment une tuerie, c'est le cas de le dire !\nSinon est-ce que tu t'es fait Alice : Retour au pays de la Folie l'année dernière ? Franchement je l'ai fini hier et je ne sais pas quoi en penser : gameplay vieillot mais décors esthétiquement incroyables, répétitif mais scénario accrocheur et malsain...Très étrange ce jeu, un OVNI de l'année 2011.\nD'ailleurs pour moi, Anor Londo (et donc le boss principal), est le point culminant de l'aventure en terme de difficulté rapportée au niveau de l'avatar à ce stade de jeu. Le suite est pas non plus facile, mais je trouve que la pression descent d'un cran après s'être débarrassé des 2 compères. Le fait d'avoir le pouvoir de téléportation juste après, ça aide aussi.\nSinon pour Alice, je pense que j'en ferai une note quand je l'aurai terminé. Mais à ce stade de jeu, j'ai un peu le même avis que toi. J'aime bien le style, mais je me fait chier.\nÉcrit par : zivaboy | 19/01/2012\nOui, il y a vraiment un avant et un après Anor Londo, c'est vrai.J'imagine même pas la difficulté de ce passage du jeu en mode new game +...Rien que pour ça j'ai pas le courage de refaire le jeu avec une difficulté encore plus élevée.\nT'as vu, Alice est spécial, il a des qualités mais il est souvent chiant.Hâte de lire ton test en tout cas !\nÉcrit par : EBE | 19/01/2012\nCa ne sera pas le prochain test à priori, mais peut-être celui d'après, je ne sais pas !\nTrès sympa ce test.\nDark Souls est, à mon sens, ce qui s'est fait de mieux dans le domaine du RPG depuis des années. Je suis en plein NG+, de nouveau vers la fin du jeu. J'adore, vraiment.\nÉcrit par : Sylvain | 31/01/2012\nEffectivement, je crois qu'avec ce titre nous sommes en train de vivre la "naissance" (entamé avec Demon's Souls, mais qui avait quelques défauts) d'une saga culte.\nÉcrit par : zivaboy | 31/01/2012


Du temps et de "la liberté de conscience". Voici les deux grandes concessions qu'a accordé François Hollande mardi sur des sujets actuellement polémiques. A la demande du président de l'Association des maires de France, Jacques Pélissard (UMP), le chef de l'Etat s'est en effet exprimé sur les modalités d'application du mariage pour tous et sur la mise en place de l'aménagement des rythmes scolaires. Devant un parterre composé de plusieurs milliers d'élus municipaux, le président de la République a notamment annoncé que la réforme concernant l'éducation nationale "s'étalera sur deux". Affirmant être "d'accord" avec les maires qui avaient réclamé un délai, François Hollande a déclaré que les communes volontaires pourront mettre en place dès la prochaine rentrée 2013 l'aménagement des temps scolaires dans le primaire, tandis que les autres pourront attendre "la rentrée 2014".\nEt alors que Jacque Pélissard a souligné que cette réforme coûterait près de 650 millions d'euros, le président de la République a assuré avoir demandé au gouvernement de mettre en place à la rentrée 2013 un fonds spécifique de 250 millions d'euros pour "accompagner" les collectivités qui mettront en oeuvre cette réforme, notamment "les communes les plus pauvres" ou "rurales".\nLa loi sera appliquée mais...Répondant à la fronde de certains maires qui refusent catégoriquement de célébrer des mariages entre deux personnes de même sexe si la loi l'autorisant venait à être votée, François Hollande a évoqué la "liberté de conscience" et a souligné que des possibilités de délégation d'un maire à ses adjoints "peuvent être élargies". Estimant que "les débats" sur le "mariage pour tous" sont "légitimes", il a par ailleurs insisté sur le fait que les maires "auront, si la loi est votée, à la faire appliquer".\nUne source proche de l'entourage du chef de l'Etat a, quant à elle, estimé qu'il sera possible pour tout couple, homosexuel ou hétérosexuel, de se marier dans sa commune de rattachement et il n'y aura pas de dérogation à cette règle. Toujours d'après cette source, il s'agit, aussi bien pour le mariage homosexuel que pour les rythmes scolaires, de faire preuve d'"une forme de réalisme". "Il faut écouter les partenaires que sont les maires et prendre en compte la spécificité des situations (...) Réussir une réforme, ce n'est pas diviser, mais réunir un maximum d'adhésion".


Ce qui cause la perte de poids et les bouffées de chaleur - Bibliographie\nMénopause : la fin des bouffées de chaleur ? la perte de poids peut-elle guérir les ovaires polykystiques\nGain ou perte de poids de geodon perdre du poids édition, comment éliminer la graisse thoracique chez les hommes brûleur de graisse de ventre de tisane. Bobs hamburgers minceur spa de perte de poids portugal, gain de poids après brûleurs de graisse perdre du poids en été.\nConseils en Naturopathie pour les bouffées de chaleur. peut provigil vous aider à perdre du poids\n3 ERREURS ALIMENTAIRES QUI CAUSENT LES BOUFFEES DE CHALEUR!!! agent de perte de poids\nBrûler les graisses pipi scout willis perte de poids, perte de poids steele creek maman me dit de perdre du poids. Bouillon dos enlever la graisse ou non jai 40 ans et jai du mal à perdre du poids, Avis des clients sur la perte de poids truvision julie minceur.\n5 Remèdes Naturels Pour Réduire Les Bouffées De Chaleur Pendant La Ménopause le paragard peut-il entraîner une perte de poids\nPublié le 13 juillet Des changements alimentaires et une perte de poids pourraient aider à réduire les bouffées de chaleur et les sueurs nocturnesselon une étude américaine publiée dans la revue Menopause Candyce Kroenke et Bette Caan du Kaiser Permanente en Californie ont analysé les données concernant environ 17 femmes qui participaient, pendant un an, à un programme d'intervention alimentaire visant à réduire la consommation de gras et augmenter celle de grains entiers, de fruits et de légumes. Bien que la perte de poids n'était pas un objectif du programme, plusieurs participantes en ont perdu. Les mécanismes physiologiques des bouffées de chaleur, qui sont liées à la baisse de l'hormone estrogène, ne sont pas bien compris. Elles résultent d'interactions complexes qui impliquent les niveaux d'hormones et les mécanismes de l'hypothalamus région du cerveau régulant la température corporellede neurotransmetteurs du cerveaux, des vaisseaux sanguins et des glandes sudoripares.\nQu'est ce qui cause les bouffées de chaleur chez les jeunes femmes? critiques de brûleur de graisse quadralean\nBrûleur de graisse klean perte de poids lisa haydon, atteindre la perte de poids jackson tn perte de graisse rochester ny. Perte de poids zombie liv 52 ds perte de poids, lartichaut vous fait perdre du poids trente dix perte de poids pour la vie.\n10 Symptômes de la Ménopause Qu’il Est Préférable de Connaître Quand on Est Jeune critiques de perte de poids homéopathie\nBarres granola brûle les graisses résultats dun mois de perte de graisse, mode de vie sain pour perdre du poids comment mincir votre enfant. 2 livres par mois de perte de poids comment enlever la graisse pour faire de la sauce, expérience de perte de poids quora brûleur de graisse H2.\n5 remèdes naturels pour réduire les bouffées de chaleur pendant la ménopause est-ce que tu perds du poids sur vyvanse\n3 ALIMENTS PUISSANTS CONTRE LES BOUFFÉES DE CHALEUR ! 💥💥💥 perte de graisse jalapenos\n🌿 Ménopause et prise de poids - Dr Y. Rougier - S02E10 tabac à chiquer pour perte de poids\nUn truc magique de Médecine Chinoise contre les bouffées de chaleur de la ménopause comment amincir la veste de costume\n5 aliments pour diminuer les bouffées de chaleur perdre de la graisse dans le ventre rapidement\n11 conseils simples pour perdre du poids comment perdre du gras rapidement, comment lallaitement peut-il vous faire perdre du poids histoires de perte de poids chez les adolescentes. Perdre du poids apk perdre du poids irrigation colique, le lactosérum isole-t-il les graisses perdre du poids juste avant de peser.\nBouffée de chaleur #5? Vite du Sérélys ! est-ce que k spécial vous fait perdre du poids\nMénopause - COMMENT COMBATTRE LES BOUFFÉES DE CHALEUR PENDANT LA MÉNOPAUSE NATURELLEMENT comment perdre du poids en 13 semaines\nSoins infirmiers pour perdre du poids perdre du poids 10 livres par mois, enveloppement corporel pour perdre du poids à proximité perdre du poids rapidement et rapidement. Perte de poids moitié-moitié fungsi suplemen brûleur de graisse, perdre du poids perte dappétit tg 2021 perte de poids.\nQuelles sont les causes courantes des bouffées de chaleur et des sueurs nocturnes 6 kg de perte de poids en 20 jours\nS4 sarm pour perdre du poids fée de la perte de poids, concept 2 rameur brûleur de graisse api brûleur de graisse. Le thé Lipton Yellow Label brûle-t-il les graisses perte de poids karne ki dawa, comment utiliser hgh pour perdre du poids 75 conseils pour perdre du poids.


« Les Petites Mains Invisibles » : un film sur la lutte exemplaire et victorieuse des salariés d'ONET\nFin 2017, au nord de Paris, les agents du nettoyage des gares de la sous-traitante H. Reinier-Onet mènent une lutte exemplaire. En 45 jours de grève, une de plus longues de l’histoire du rail en France, ces femmes et ces hommes ont réussi à arracher la victoire contre deux géants, Onet et la SNCF. Les salariés d’Onet représentent un des secteurs les plus précaires du chemin de fer et qui n’a quasiment pas de tradition de lutte et d’organisation. Comment ont-ils fait pour construire la victoire ? Leur détermination à se battre est sans doute la clé de leur réussite, mais aussi les liens tissés avec des militants révolutionnaires, porteurs d’une culture de la lutte contre le patronat.\nCrédit Photo : Louiz’Art\nLes Petites Mains Invisibles, film documentaire, 1h06min.\nRéalisé par Révolution Permanente, en partenariat avec Communard.e.s, nous sommes fiers de pouvoir vous présenter le film de la grève des Onet Les Petites Mains Invisibles , que nous avons pensé comme un outil de transmission de l’expérience de lutte de notre classe.\nCe film nous fait revivre ou découvrir les 45 jours d’une lutte acharnée de ces femmes et ces hommes d’origine immigrée, qui « ne sont rien », et qui se sont dressés et transformés en militants et militantes de la grève. « On ne se connaissait pas, et grâce à la lutte, on est devenu une famille » dit Fernande Bagou. Avec Oumou Gueye et Ami Keita, elles ont émergé comme figures de la grève, et nous racontent, tout au long du film, comment cette lutte les a transformées profondément, en leur donnant confiance dans leurs propres forces, et les poussant à lutter pour leur émancipation et à militer aujourd’hui au-delà de leur propre entreprise.\nDans les assemblées générales quotidiennes, les 84 grévistes d’Onet décidaient, jour après jour, à main levée, de la continuité de la grève, ainsi que des actions à mener. Ce protagonisme des grévistes explique l’unité sans faille acquise tout au long de la lutte, et a été à la base de la longévité de l’intersyndicale, qui devait se soumettre aux décisions prises par les grévistes dans ces assemblées.\nUn outil a été particulièrement précieux pour permettre de construire la victoire : la caisse de grève, qui, récoltant 80 000 €, a permis de répondre aux besoins des grévistes, assurant ainsi leur disponibilité et leur implication dans la lutte.\nLes liens qui ont été tissés entre les grévistes et les cheminots, les étudiants, les collectifs féministes, contre les violences policières, les militants et habitants du territoire, les artistes, etc. ont montré la potentialité de ces alliances, souvent incantées et rarement atteintes avec une telle coordination, ce qui a permis de cimenter la victoire.\nCe film raconte également l’histoire de ces femmes, comme Fernande ou Ami, qui ont été aux avant-postes de cette lutte. L’expérience de ces vraies battantes est un exemple pour toutes les femmes qui cherchent aujourd’hui à relever la tête et à se battre pour leur respect et leur dignité.\nA ce titre, des projections-débat sont d’ores et déjà organisées à Toulouse et Montpellier, dont nous transmettons les informations plus bas, et d’autres seront organisées, notamment à Paris en présence des grévistes, dont nous vous donnerons les informations prochainement.\nQue la lutte victorieuse des grévistes d’H. Reinier Onet, ces « Petites mains invisibles » devenues bien visibles, porte conseil, force et confiance à leurs frères et sœurs de classe !\nProjections déjà programmées :\n– Mercredi 27 mars, 18h00, Université Toulouse - Jean Jaurès, Amphi du Gai Savoir.\n– Jeudi 28 mars, Université de Sciences-Politiques de Toulouse, 17h00, Amphi Jaurès.\n– Lundi 22 avril, Café le Dôme, Montpellier, 19h00.\nPetites Mains Invisibles / Onet / Féminisme / Lutte des classes / Histoires de femmes / Grève / Du Pain et des Roses / Culture et Sport