Chapitre n 5 : génétique bactérienne - PDF\nDownload "Chapitre n 5 : génétique bactérienne"\n1 Chapitre n 5 : génétique bactérienne 1. Structure et fonctions du génome bactérien 1.1. Organisation Le matériel génétique des Procaryotes est généralement constitué que d une seule molécule d ADN double-brin et circulaire * (figure 1). Sa longueur est de l ordre du mm (1,3 mm chez E. coli) : le chromosome bactérien est donc fortement compacté à l intérieur de la cellule, occupant une région délimitée irrégulièrement au contact du cytoplasme, le nucléoïde (le matériel génétique n est donc pas dans un noyau). Le nucléoïde présente un point d ancrage dans la membrane plasmique. Figure 1 Figure 2 * Chez les spirochètes (Treponema, Borrelia, Leptospira), le chromosome est linéaire. Les bactéries du genre Brucella possèdent deux chromosomes.\n2 L ADN est associé à des protéines basiques différentes des histones présents chez les Eucaryotes. Les bactéries possèdent un génome dont la taille est comprise entre 7, paires de bases chez Mycoplasma et 7, pb chez Streptomyces (4, pb chez E. coli), soit entre 3000 et 4000 gènes. Chez les Eubacteria, les gènes sont séparés les uns des autres par des séquences de quelques dizaines à quelques centaines de paires de bases appelées «spacers» (les gènes sont rarement chevauchants comme chez les virus). L information codante est continue (les gènes sont transcrits d un seul tenant : il n y a pas d introns, les ARN messagers ne sont pas épissés comme chez les Archaea et les Eucarya). Avant de se diviser, une bactérie doit répliquer son chromosome bactérien afin d en transmettre une copie à chacune de ses cellules filles. La réplication de l ADN est semi-conservative : chaque molécule fille contient un brin parental et un brin néosynthétisé. Chez les Procaryotes, lorsque le chromosome circulaire est copié, la réplication commence en un seul point appelé «origine de réplication», où se forme une petite zone de dénaturation de l ADN, afin que chacun des deux brins puisse servir de matrice. Deux fourches de réplication partent de part et d autre de cette origine jusqu à ce que toute la molécule d ADN soit copiée (figure 2). Le chromosome bactérien peut comporter de l ADN «étranger» : - des transposons (éléments génétiques mobiles) ; - des prophages (ADN provenant de virus bactériens appelés «bactériophages»). Les transposons (ou éléments transposables) n ont pas d origine de réplication. Les plus simples sont de courtes séquences de 750 à 1600 pb, contenant uniquement le gène de la transposase encadré par des séquences d insertion (séquences «répétées inversées»). La transposase est l enzyme nécessaire à la transposition : elle permet l insertion du transposon dans l ADN cible. Les transposons composites contiennent des gènes supplémentaires (gènes de résistance, codant pour des toxines ). Les bactéries possèdent également des éléments d ADN extrachromosomique, les plasmides. Ce sont de petites molécules d ADN double-brin circulaire de quelques µm (10 3 à 10 5 pb environ). Leur réplication est autonome : ils possèdent leur propre origine de réplication («ORI-R»). Ils portent un nombre réduit de gènes (<30) qui confèrent aux bactéries hôtes des propriétés non essentielles à leur survie : - gènes codant pour les pili sexuels et autres facteurs de conjugaison ; - gènes de résistance aux antibiotiques et aux métaux lourds ; - gènes de virulence (toxines, sidérophores ) ; - gènes codant pour des bactériocines. Certains plasmides possèdent des séquences d insertion permettant leur intégration au chromosome bactérien (cette propriété en fait des «épisomes»). Les plasmides sont transmis verticalement dans le clone bactérien, au fur et à mesure des divisions. Ils peuvent aussi être transmis horizontalement, même entre bactéries d espèces différentes, au cours du processus de conjugaison.\n3 1.2. Structure des gènes Les gènes codant pour les protéines présentent en amont de la région codante un site de régulation permettant la reconnaissance et la liaison de l ARN polymérase : le promoteur. - Le site de reconnaissance de l ARN polymérase comporte sur le brin non copié une séquence 5 -TTGACA-3 («boîte GACA») située à 35 paires de bases du point d initiation de la transcription (+1). - Le site de liaison de l ARN polymérase comporte sur le brin non copié une séquence 5 -TATAAT-3 («boîte TATA» ou «boîte de Pribnow») située à 10 paires de bases du point d initiation de la transcription. C est l endroit où l ARN polymérase provoque l ouverture de la double hélice d ADN. Les séquences de ces deux sites sont relativement constantes d une espèce bactérienne à une autre : elles sont appelées «séquences consensus». L ARN polymérase copie l ADN en ARN à partir du point d initiation de la transcription. Au début de l ARN messager (ARNm), il existe une séquence non traduite (comprise entre le point +1 et le codon initiateur AUG). Il s agit d une séquence de tête, qui contient également une séquence consensus 5 -AGGAGG-3 dite de Shine-Dalgarno. Celle-ci intervient comme un signal dans la fixation de la petite sous-unité du ribosome, par l intermédiaire de l ARNr 16S. La région codante commence par le triplet AUG (codant pour une méthionine) et se termine par l un des trois codons stop (UAA, UAG, UGA). A la fin de l ARN messager (du côté 3 ), on trouve un séquence de queue non traduite, au niveau de laquelle s arrête la transcription. Elle est constituée de régions auto-complémentaires riches en GC susceptibles de s apparier et de former une boucle permettant l expulsion de l ARN polymérase. Figure 3\n4 Chez les Procaryotes, la plupart des gènes sont organisés en unités structurales et fonctionnelles appelées opérons, succession de gènes codant chacun une chaîne polypeptidique. Un opéron rassemble des gènes intervenant dans un même domaine métabolique : - l opéron lactose rassemble les gènes permettant l utilisation du lactose (figure 5) ; - l opéron tryptophane rassemble les gènes permettant la synthèse du tryptophane (figure 6). Un opéron est transcrit en un seul ARNm polycistronique (ou polygénique). Certains gènes ne codent pas pour des protéines, mais pour les ARN de transfert (ARNt) et les ARN ribosomaux (ARNr). Chez les Procaryotes, le matériel génétique est directement au contact du cytoplasme, donc des ribosomes. De ce fait, la synthèse protéique peut démarrer sur un ARNm dont la synthèse n est pas terminée : transcription et traduction sont simultanées. De plus, un ARNm peut être lu simultanément par plusieurs ribosomes, formant ainsi une structure en «collier de perles» appelé polysome (figure 4). Figure Régulation de l'expression des gènes Pour transcrire leurs gènes, les bactéries possèdent une ARN polymérase. Il s agit d un complexe enzymatique de 450 kda, constitué de 5 sous-unités (α, α, β, β', σ). Le facteur σ est capable de reconnaître les séquences consensus des promoteurs qui permettent le démarrage de la transcription. Cependant, seuls les gènes codant pour les protéines constitutives sont exprimés de manière constante, les enzymes de la glycolyse par exemple. Il existe donc une régulation permettant à la cellule de ne synthétiser que les enzymes qui lui sont nécessaires, en fonction de la nature du milieu. Ce contrôle est effectué au niveau transcriptionnel selon deux modes principaux : l induction et la répression.\n5 Systèmes inductibles : exemple de l opéron lactose (figure 5) Lorsqu une souche d E. coli est cultivée dans un milieu contenant du glucose puis transférée dans un milieu contenant du lactose, elle se met à synthétiser une enzyme jusqu alors indétectable : la β-galactosidase (qui catalyse l hydrolyse du lactose en glucose et galactose). On dit que le lactose est un inducteur : sa présence dans le milieu augmente la quantité de β-galactosidase, mais aussi de β-galactoside perméase * et de thiogalactoside transacétylase. Les trois gènes (respectivement appelés lac z, lac y et lac a) codant pour ces trois enzymes appartiennent à l opéron lactose (Jacob et Monod, 1960). - En amont de l opéron lactose, il existe un gène régulateur (lac i) qui code pour un répresseur capable de se fixer sur l opérateur en absence de lactose. Dans ce cas l ARN polymérase est bloquée et les gènes ne sont donc pas transcrits. - En présence de lactose, le répresseur fixe le lactose et devient alors incapable de se fixer sur l opérateur : l ARNm polycistronique est synthétisé par l ARN polymérase puis traduit. Figure 5 * Au laboratoire, le déficit en β-galactoside perméase est mis en évidence par le test ONPG : une souche bactérienne apparaissant lactose + sur milieu lactosé (Kligler-Hajna, BCP-lactose, Drigalski ) possède les deux enzymes (β-galactosidase et β-galactoside perméase), dans ce cas le test ONPG est inutile. Par contre, une souche bactérienne apparaissant lactose - sur milieu lactosé peut être soit ONPG + (β-galactosidase + et perméase -) ; soit ONPG - (β-galactosidase - et perméase -).\n6 Par ailleurs, il existe des β-lactamases (enzymes de résistance aux β-lactamines) constitutives, exprimées en permanence par la bactérie possédant le gène ; d autres sont inductibles et ne sont donc synthétisées que si l antibiotique est présent dans le milieu. Pour détecter une β-lactamase inductible par le test Céfinase, il faut donc prélever une colonie sur l antibiogramme à proximité d un disque imprégné de β-lactamine Systèmes répressibles : exemple de l opéron tryptophane (figure 6) Lorsqu une souche prototrophe d E. coli est cultivée dans un milieu minimum, elle fabrique tous ses constituants organiques à partir de la seule source de carbone disponible. Si du tryptophane est ajouté à ce milieu minimum, la cellule cesse de fabriquer les enzymes qui interviennent dans la synthèse de cet acide aminé. Les gènes codant pour ces enzymes font partie de l opéron tryptophane. Un gène régulateur commande la synthèse d un répresseur inactif qui n est capable de se fixer sur l opérateur qu en présence de tryptophane, qui constitue le corépresseur. La présence du complexe répresseur corépresseur sur l opérateur empêche la transcription des gènes intervenant dans la biosynthèse du tryptophane. Figure 6 : structure et fonctionnement de l opéron tryptophane\n7 2. La variabilité génétique des bactéries 2.1. Mutations Lorsque l enchaînement des nucléotides au sein de l ADN est modifié, les séquences des gènes peuvent varier : ce sont les mutations. Ces modifications sont stables et héréditaires, et elles peuvent s accompagner ou non de modifications phénotypiques. Les mutations spontanées apparaissent occasionnellement dans n importe quelle cellule : elle résultent d erreurs dans la réplication de l ADN ou de lésions de l ADN. Il existe différents types de mutations : les substitutions : une transition est un remplacement d une purine par une autre purine (A G) ou d une pyrimidine par une autre pyrimidine (C T) ; une transversion est un remplacement d une purine par une pyrimidine (ou l inverse). L addition ou la délétion d un ou plusieurs nucléotides entraîne un décalage du cadre de lecture. Ces mutations se produisent souvent lorsqu une courte séquence nucléotidique est répétée. Les erreurs commises lors de la réplication sont souvent corrigées par différents mécanismes (correction d épreuve, réparation par excision-resynthèse, réparation par recombinaison, réparation «SOS») Le taux de mutation peut être nettement augmenté en utilisant des agents mutagènes (substances ou rayonnements qui altèrent directement l ADN ou interfèrent avec ses mécanismes de réparation). Par exemple, les rayons X et ultra-violets sont de puissants agents mutagènes. A 260 nm (longueur d onde d absorption maximale de l ADN), les bactéries sont en majorité tuées, tandis que les rares survivantes sont souvent des mutantes. La modification chimique la plus fréquente dans ce cas est la formation de dimères de thymine lorsqu elles sont adjacentes Conséquences phénotypiques des mutations Les mutations sont soit silencieuses, soit elles modifient le phénotype du micro-organisme mutant. Les mutations morphologiques changent la forme ou la couleur de la colonie issue d une cellule mutante (exemple : variation type «S» type «R» due à une mutation affectant un gène de synthèse du LPS, au niveau de la chaîne latérale O). Ces mutations peuvent également affecter les flagelles, la spore (chez B. anthracis, il existe des mutants asporogènes) Certains mutants peuvent acquérir une résistance à un agent antimicrobien, tel qu un antibiotique. Si la cible de l antibiotique est une enzyme, la mutation au niveau du gène\n8 codant pour cette enzyme peut entraîner une diminution voire une suppression de l affinité de l antibiotique pour l enzyme (modification de cible). Ce phénomène est à l origine de la résistance des Staphylococcus aureus résistants à la méticilline (SARM) : une mutation entraîne un changement de structure de la PLP 2 (l enzyme «mutée» est appelée PLP 2a ) qui ne fixe plus l antibiotique (Cf. mise en évidence de la résistance hétérogène aux β-lactamines). Les mutations biochimiques inactivent fréquemment les voies de biosynthèse et engendrent des mutants auxotrophes, incapables de se développer sur un milieu minimum. Il existe également des mutations réverses, restaurant le type sauvage prototrophe (application : test de Ames, voir figure 7). Le test de Ames est un test de mutagenèse proprement dit. Il consiste à examiner si une substance chimique ou un agent physique est capable d'induire des mutations spécifiques chez différentes souches de Salmonella typhimurium. Les souches utilisées dans le test sont des souches porteuses d'une mutation dans un des gènes gouvernant la synthèse de l'acide aminé histidine. Cette mutation His - rend les souches incapables de pousser sur un milieu sans histidine. Avec une fréquence très faible, ces mutations His - reversent spontanément vers His + et donc les cellules retrouvent leur capacité à pousser sur un milieu dépourvu d'histidine. Cette fréquence de réversion peut augmenter en exposant les bactéries His - à des agents mutagènes. Ainsi, le test d'ames permet de quantifier l'induction de ces mutations réverses His +. Figure 7 : Test de Ames 2.3. Les transferts génétiques Chez les Procaryotes, les transferts génétiques sont unidirectionnels. Un fragment de matériel génétique exogène pénètre dans une cellule receveuse. Cet ADN peut persister dans le cytoplasme (cas de nombreux plasmides) ou être intégré au chromosome bactérien par recombinaison.\n9 La conjugaison La conjugaison est un mécanisme de transfert unidirectionnel de matériel génétique par contact entre deux cellules bactériennes (figure 8). Figure 8 Mise en évidence (Lederberg et Tatum, 1946) On utilise deux souches d Escherichia coli auxotrophes ( ) pour plusieurs facteurs de croissance : Facteur de croissance SOUCHE 1 SOUCHE 2 Biotine + Phénylalanine + Cystéine + Thréonine + Leucine + Thiamine + Ces souches «triples auxotrophes» sont incapables de se développer sur milieu minimum. Par contre, si on incube un mélange de ces deux souches pendant plusieurs heures dans un milieu nutritif, et qu on les transfère ensuite sur un milieu minimum, des colonies prototrophes apparaissent après incubation. Les bactéries formant ces colonies sont donc Biotine +, Phe +, Cys +, Thr +, Leu + et Thiamine +. Ces bactéries sont dites recombinantes car il y a obligatoirement eu transfert d information génétique entre les deux souches initiales. L exemple du facteur F A la suite des expériences de Lederberg et Tatum, Hayes montra en 1952 que le transfert de gènes s effectue dans un sens déterminé, d une cellule donneuse à une cellule receveuse. Le facteur F, ou facteur de fertilité, est un plasmide portant les gènes nécessaires à l attachement cellulaire et au transfert de matériel génétique. Certains de ces gènes sont impliqués dans la formation des pili sexuels, responsables de la première étape de la conjugaison. La souche donneuse est dite «F +» car\n10 elle possède ce facteur F. La souche receveuse est dite «F» car elle ne le possède pas (et ne produit donc pas de pili sexuels). Au cours de la conjugaison (c est à dire le croisement F + x F ), le facteur F est répliqué et c est une copie du plasmide qui est transférée (sous forme simple-brin) dans la cellule receveuse. Au terme de ce transfert (après réplication et recircularisation du plasmide), la cellule receveuse est devenue à son tour F +. Dans ces conditions, la fréquence de recombinaison des gènes chromosomiques est faible, car le chromosome bactérien n est que très rarement transféré dans la cellule receveuse. Le facteur F contient des séquences d insertion permettant l intégration du plasmide dans le chromosome de la cellule hôte (ce qui fait du facteur F un épisome). Dans le cas ou le facteur F est intégré au chromosome bactérien, la cellule hôte est dite «Hfr», pour haute fréquence de recombinaison. Cette cellule possède en effet un grand pouvoir de transfert de gènes chromosomiques. Au cours du croisement Hfr x F, l intégralité de la copie du chromosome de la cellule Hfr est rarement transférée à la souche F, car le temps de contact nécessaire est trop important (100 minutes chez d Escherichia coli). Le contact entre cellules est souvent rompu (rupture du pont cytoplasmique permettant le transfert) avant la fin du processus. L origine de transfert (ORI-T) étant située au sein du facteur F, la cellule receveuse reste F si le transfert n est pas complet. Par contre, des gènes chromosomiques («gènes marqueurs») de la souche Hfr peuvent être intégrés dans le chromosome de la souche F La transformation (figure 9) La transformation est l entrée dans la cellule d un fragment d ADN «nu» présent dans l environnement (et son intégration dans le chromosome receveur, l endogénote, s il ne s agit pas d un plasmide). Une bactérie capable d effectuer une telle opération est dite compétente. L état de compétence est un phénomène transitoire, qui intervient chez certaines bactéries pendant 15 à 30 minutes à la fin de la phase exponentielle de croissance. Les pneumocoques, par exemple, sécrètent une protéine appelée facteur de compétence qui active la production d autres protéines requises pour la transformation. La transformation artificielle en laboratoire fait appel à des agents rendant perméable la membrane la membrane à l ADN (chlorure de calcium), à des traitements thermiques ou électriques (électroporation). Les cellules transformées ne deviennent recombinantes que si le(s) gène(s) porté(s) par l ADN exogène s exprime(nt). La transformation des bactéries est plus efficace avec de l ADN plasmidique, moins facilement dégradé que des fragments linéaires et se répliquant de façon autonome.\n11 Figure 9\n12 La transduction Cycle lytique et cycle lysogénique (figure 10) Les bactériophages (virus bactériens) participent à ce mode de transfert de gènes bactériens. Ils possèdent une capside protéique qui protège leur génome. Lorsqu un phage infecte une bactérie, il introduit uniquement son matériel génétique dans le cytoplasme de celle-ci. Le génome viral a la capacité de forcer la bactérie à synthétiser de nouveaux constituants viraux (acides nucléiques et protéines) qui s assemblent en nouveaux phages. La lyse de la bactérie libère les nombreux phages produits au cours de ce cycle lytique. Ces phages sont dits virulents. Au cours du cycle lysogénique par contre, le génome viral reste dans le chromosome de la cellule hôte sans s exprimer et il est reproduit en même temps que le chromosome bactérien. Ces phages sont dits tempérés car ils résident dans leur hôte sans le détruire, à l état de prophage. Cependant, les conditions de l environnement (ex : UV) peuvent modifier cet état et déclencher la multiplication du phage (induction). Figure 10\n13 Transduction généralisée et transduction spécialisée Transduction généralisée La transduction généralisée a lieu au cours du cycle lytique d un phage et transfère n importe quelle partie du génome bactérien. Pendant l assemblage des nouveaux virus, des fragments de chromosome bactérien partiellement dégradé sont incorporés dans la capside par erreur. Ces phages contenant de l ADN bactérien sont appelés particules de transduction généralisée. Lorsqu ils infectent de nouvelles cellules, ils injectent cet ADN qui peut être intégré ou non au génome bactérien. Dans le cas négatif, on parle de transduction abortive. Figure 11 Transduction spécialisée La transduction spécialisée ou restreinte résulte d une erreur dans le cycle lysogènique. Les gènes bactériens qui entourent le génome viral incorporé au nucléoïde, peuvent être incorporés dans les nouvelles capsides phagiques après induction. Ces nouveaux virus vont alors transporter ces gènes d une bactérie à une autre : ce sont des transducteurs. Au moment de l induction, l excision du prophage est erronée et une partie adjacente du chromosome bactérien (5 à 10 % de l ADN bactérien) est excisée également. Ce sont des phages transducteurs incomplets, car ils ne transportent qu une partie du génome viral. De ce fait, ils perdent une ou plusieurs propriétés : il sont donc défectifs. Une particule transductrice injectera les gènes bactériens dans une autre bactérie, où ils pourront être intégrés au nucléoïde de manière stable. L acquisition de propriétés nouvelles chez les bactéries infectées par un bactériophage est appelée conversion lysogènique (exemple : synthèse d une exotoxine). Figure 12\n14 3. L identification génotypique (ou moléculaire) des bactéries Les techniques de biologie moléculaire ont bouleversé l identification des bactéries, notamment par leur capacité de détection des bactéries dont la culture au laboratoire est impossible, fastidieuse ou lente. Elles ont également montré les limites de l identification phénotypique traditionnelle. Il est désormais possible de détecter des bactéries responsables de maladies infectieuses directement dans les prélèvements cliniques. D une part, des méthodes de détection standardisées sont commercialisées sous forme de kits (ou de «trousses») ; d autre part, des laboratoires ont mis au point des méthodes internes (plus ou moins fiables). D un point de vue organisationnel, l unité de biologie moléculaire doit être séparée du laboratoire de microbiologie classique, afin de réduire les risques de contamination des échantillons, les résultats faussement positifs constituant le problème majeur de l utilisation de ces techniques. Il est donc fondamental de réaliser des témoins négatifs d extraction et d amplification afin de valider les résultats d une analyse moléculaire. Les protocoles seront rédigés dans le cadre du GBEA (guide de bonne exécution des analyses) Les étapes de l analyse Figure 13 : identification ou typage moléculaire des bactéries Extraction de l ADN Dans tous les cas, il est nécessaire de procéder à l extraction de l ADN bactérien (chromosomique et/ou plasmidique) afin de le rendre disponible pour les opérations suivantes. Cela comprend la destruction des enveloppes cellulaires (capsule, paroi, membrane plasmique) par chauffage à 70 C, utilisation de lysozyme, action du SDS (sodium dodécyl sulfate) ; ainsi qu une élimination des protéines par la protéinase K. La purification de l ADN se poursuit par sa précipitation à froid par un mélange phénol/chloroforme puis une solution d éthanol. Il existe également des colonnes de purification de\n15 l ADN et des automates de purification de l ADN. Une fois purifié, l ADN peut être conservé à 20 C Amplification de l ADN Pour faciliter la détection de l ADN cible (c est à dire l ADN appartenant à l espèce bactérienne recherchée), celui-ci est amplifié in vitro par réaction enzymatique (Polymerase Chain Reaction ou PCR * ). Lors de la détection directe des bactéries dans les prélèvements cliniques, cette étape peut être rendue difficile par la présence d inhibiteurs qui diminuent la sensibilité de la méthode et par l éventuelle contamination de l échantillon par des micro-organismes exogènes rendant les résultats faussement positifs. Par contre, la sensibilité et la spécificité sont nettement améliorées si la réaction d amplification de l ADN est réalisée sur une souche isolée sur milieu solide ou cultivée en milieu liquide. Cette méthode peut être utilisée pour l identification des souches bactériennes, pour la mise en évidence des gènes de résistance aux antibiotiques, ou pour le génotypage des bactéries à des fins taxonomiques. * : le principe et le protocole de la PCR sont détaillés en cours de biologie moléculaire Analyse de l ADN amplifié L amplification par PCR n étant qu une étape permettant d obtenir suffisamment d ADN bactérien, il est nécessaire d utiliser une méthode permettant de caractériser cet ADN. Migration sur gel d agarose Le produit d amplification peut être détecté par électrophorèse et action du bromure d éthidium * (BET, substance intercalante fluorescente). La migration d un marqueur de taille à chaque extrémité du gel permet la détection de l ADN amplifié. L ADN amplifié peut alors faire l objet d une étude de profil de restriction : il s agit d une nouvelle migration sur gel d agarose (ou de polyacrylamide * ), cette fois après action d une ou plusieurs endonucléases de restriction. Le profil électrophorétique obtenu est caractéristique de la séquence amplifiée : il peut être utilisé pour identifier une souche bactérienne inconnue. * le bromure d éthidium et le polyacrylamide sont des substances cancérigènes qui doivent être manipulées en respectant scrupuleusement les consignes de sécurité, notamment le port des gants. Hybridation avec des sondes marquées Cette détection peut être faite sur des bandelettes de nitrocellulose comportant des sondes complémentaires de l ADN recherché. La mise en contact du produit d amplification avec la bandelette permet de déterminer si la souche étudiée correspond à l espèce recherchée. Ce type de test est disponible pour l identification des mycobactéries. L hybridation peut également être réalisée directement dans l appareil chargé de la PCR (thermocycleur). La formation du produit d amplification est suivie en temps réel grâce à l utilisation d amorces oligonucléotidiques fluorescentes lorsqu elles sont hybridées à leur cible. L intensité de la fluorescence\n16 émise est alors proportionnelle à la quantité d amorces hybridées. Séquençage Il s agit d une méthode permettant d obtenir l intégralité de la séquence nucléotidique du fragment amplifié. La comparaison de la séquence obtenue avec des séquences disponibles dans des bases de données informatiques (GenBank) permet l identification de souches inconnues. Ce séquençage est généralement réalisé par la technique de Sanger, et automatisée dans des séquenceurs capillaires (700 à 800 pb séquencées en quelques heures) Gènes couramment utilisés pour l identification moléculaire des bactéries Le gène codant pour l ARNr 16 S L ARNr 16 S est l acide ribonucléique constitutif de la petite sous-unité du ribosome procaryote. Son coefficient de sédimentation est de 16 Svedberg (la grande sous-unité du ribosome procaryote contient un ARNr 23 S et un ARNr 5 S). L ARN ribosomal 16 S est codé par un gène chromosomique d environ 1500 paires de bases dont les extrémités 5 et 3 sont conservées chez un grand nombre d espèces bactériennes. Ces séquences universelles ont permis la fabrication d amorces complémentaires de ces extrémités. Ainsi, presque tous les gènes ARNr 16S peuvent être amplifiés avec ces amorces universelles, tandis que la spécificité de la séquence de ces gènes permet par la suite l identification des bactéries. Si la technique d analyse utilisée est le séquençage, l interprétation des résultats est conduite de la manière suivante : - s il y a entre 99 et 100 % de similarité entre une séquence expérimentale et une séquence de référence, la souche étudiée appartient à la même espèce que la souche de référence ; - s il y a entre 97 et 98 % de similarité entre une séquence expérimentale et une séquence de référence, la souche étudiée appartient au même genre que la souche de référence ; - si la similarité de séquence est inférieure à 97 %, il s agit d un genre bactérien qui n est pas encore décrit (ou publié dans la base de données). Les résultats des études portant sur les gènes ARNr 16 S ont engendré de nombreuses modifications de la classification du monde vivant, tout particulièrement la séparation entre Archaea et Bacteria (C. Woese) Le gène rpob Le gène rpob code pour la sous-unité β de l ARN polymérase bactérienne. Il s agit également d un gène chromosomique de 4000 à 4500 paires de bases. Certaines régions de ce gène contiennent des séquences conservées (permettant l obtention d amorces complémentaires) séparant des régions variables utiles pour l identification des espèces.\n17 3.3. Exemples d applications Parmi les kits de détection moléculaire commercialisés ou développés «en interne», on peut citer la mise en évidence : - de Neisseria meningitidis dans le liquide céphalo-rachidien (LCR) en trois heures seulement (figure 14), - de Chlamydia trachomatis dans les prélèvements génitaux, - de Sreptococcus agalactiae (groupe B) dans le prélèvement vaginal chez la femme enceinte, - de Bordetella pertussis (coqueluche) dans l aspiration naso-pharyngée chez les enfants, - de Mycobacterium tuberculosis dans les expectorations (en cas de coloration de Ziehl positive). Figure 14 Il est également possible détecter : - des gènes codant pour des résistances aux antibiotiques, comme le gène meca responsable de la résistance à l oxacilline chez Staphylococcus aureus ; - des mutations dans les gènes codant pour les cibles des antibiotiques, telles que les mutations du gène rpob (codant pour la sous-unité β de l ARN polymérase) associées à la résistance à la rifampicine chez Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Rickettsia et certaines entérobactéries.


CanPL : L’Heure du Bilan – Culture Soccer\n26 November 2019 by Daniel Cameron\nLancée en grande pompe le 27 avril 2019, la nouvelle ligue canadienne de première division, la CanPL vient de compléter sa première saison. Beaucoup de premières pour cette année inaugurale, avec des surprises, des déceptions et beaucoup d’espoirs pour les années à venir. Difficile de savoir quelles étaient les attentes des dirigeants de la ligue mais celles des fans ont été largement dépassées! Après la fête, c’est l’heure du bilan!\nUn calendrier atypique\nPour cette première saison, la CanPL a voulu s’offrir un format différent des autres ligues sportives nord-américaines : un classement unique, sans conférences régionales, avec une saison séparée en deux phases( Printemps et Automne) et une finale entre les champions de ces deux phases. Bien que le format actuel ait permis aux clubs d’avoir un nombre de confrontations presque équivalent avec les six autres adversaires, le nombre impair d’équipes a donné lieu à un grand nombre de confrontations en milieu de semaine. Ce calendrier parfois surchargé, jumelé à de longs voyages, a eu le don de fatiguer les joueurs et de les soumettre à de nombreuses blessures. D’ailleurs, les Wanderers, basés à Halifax, ont terminé au dernier rang de la saison d’Automne et leur isolement géographique (le plus proche adversaire, le York 9 FC, est situé à 1276 km) pourrait ne pas y être étranger. Les contraintes climatiques ont également été au rendez-vous avec plusieurs épisodes de neige à Calgary au début et à la fin de la saison. Par ailleurs, alors que le calendrier en deux phases se voulait l’occasion de maintenir le suspense en remettant les compteurs à zéro, la réalité du terrain a fait en sorte que la fin de saison a perdu de son intérêt pour les équipes ne pouvant aspirer à la finale.\nLa Domination Cavalry-Forge\nEn effet, deux équipes se sont partagées la lutte pour le titre, le Cavalry FC, représentant de Calgary, et le Forge FC, basé à Hamilton. Ces deux clubs ont offert un beau spectacle à leurs fans tout au long de la saison et ont régalé les observateurs. Une rivalité a même vu le jour en raison de l’animosité entre ces deux géants. Malgré que le classement soit reparti à zéro après la fin de la saison de Printemps, le 1er juillet 2019, le suspense a duré quelques semaines avant que Forge et Cavalry distancent leurs poursuivants. Cependant, le Cavalry FC a continué à viser la victoire lors de la saison d’Automne, malgré une place assurée en finale après son titre de champion de Printemps. En contrepartie, les cinq autres clubs ont eu davantage de difficultés à enchaîner les bonnes performances, en raison des blessures, des erreurs de recrutement ou du manque d’expérience de leurs joueurs. Le AlClasico, le derby albertain, a été dominé sans partage par le Cavalry FC contre son frère ennemi, le FC Edmonton. Le York 9 FC a dû attendre le dernier 905 derby pour battre son voisin d’Hamilton. Les longs voyages ont également rendu difficiles les victoires à l’extérieur puisque les Wanderers ont dû attendre le dernier match de la saison pour prendre les trois points au York Lions Stadium. Bien que le Cavalry a été champion des deux phases, Printemps et Automne, le Forge FC a été couronné champion grâce à sa victoire en finale. Un tel scénario, bien que possible en début de saison, a pu irriter les fans de Cavalry qui ont pu sentir une forme d’injustice sportive.\nIl est évident que le meilleur moyen d’évaluer le niveau de la ligue est de juger les performances des clubs contre des adversaires externes. Heureusement, il y a eu la Voyageurs Cup (ou Championnat canadien) et la Concacaf League pour offrir cette opportunité. En Voyageurs Cup, les clubs de CanPL ont réussi à éliminer les deux clubs semi-professionnels en compétition, l’AS Blainville et Vaughan Azurri. Ces victoires, qui peuvent maintenant paraître anecdotiques, ont démontré que la CanPL était bien plus qu’une ligue semi-professionnelle à l’échelle nationale. Par la suite, le Cavalry FC a réalisé l’exploit en éliminant le Whitecaps de Vancouver, club de MLS avant se faire éliminer par un autre club du circuit Garber, l’Impact de Montréal. Le club montréalais, qui fut sacré champion par la suite, avait d’ailleurs dû s’employer pour éliminer le York 9 FC au tour précédent. Les HFX Wanderers, quant à eux, ont pu se mesurer au seul club canadien en USL, le Fury d’Ottawa et ont chèrement vendu leur peau malgré l’élimination. Le Forge FC a également été le premier club canadien à participer à la Concacaf League et le premier club de CanPL à participer à une compétition continentale. Après avoir éliminé le club guatémaltèque Antigua GFC en ronde préliminaire, le club basé à Hamilton a vu son rêve s’éteindre au match retour contre un club hondurien habitué aux compétitions continentales, le CD Olimpia. Malgré ces éliminations, ces différentes confrontations ont permis aux joueurs de se forger de l’expérience et à la ligue de montrer son niveau, en espérant que les résultats s’améliorent d’année en année.\nUn Vent de Jeunesse et une Forte Présence Canadienne\nLe principal élément positif après cette saison inaugurale est le rôle joué par les jeunes joueurs, en particulier canadiens. Il est important de rappeler que les clubs avaient l’obligation d’offrir au moins 1000 minutes de jeu durant toute la saison à des joueurs âgés de 21 ans ou moins. Loin d’être une corvée, la barre des 1000 minutes a été dépassée par la totalité des équipes avant la fin du mois d’août. Le club s’étant le plus distingué à cet effet était le Pacific FC, avec un total de 13 532 minutes, malgré que ses résultats n’aient pas suivi et aient entraîné le congédiement de son entraîneur danois Michael Silberbauer. Sur les cinq meilleurs buteurs de la ligue, trois sont des Canadiens âgés de 21 ans (Tristan Borges, Easton Ongaro, Terran Campbell). Les meilleurs passeurs sont également des joueurs canadiens (Borges, Ben Fisk, Michael Petrasso, Kwame Awuah, Kyle Bekker), à l’exception de Blake Smith. Au niveau des gardiens, il y a également eu des révélations intéressantes avec Marco Carducci et Nathan Ingham, alors que le vétéran Jan Michael Williams (35 ans)en a déçu plusieurs. D’ailleurs, plusieurs joueurs issus du repêchage universitaire U-Sport se sont démarqués en gagnant des places de titulaires comme Peter Schaale (qui a dû retourné aux études pendant à la reprise des cours), André Bona ou Connor James. Évidemment, si les jeunes joueurs ont pu se démarquer, c’est aussi parce que les joueurs plus âgés n’ont pas répondu aux attentes, laissant leur place à la relève tout en offrant un rôle de mentor pour les encadrer.\nBien que plusieurs joueurs recrutés par la ligue étaient des internationaux canadiens, certains ont pu découvrir le soccer international via des équipes nationales grâce à leurs performances en CanPL. Auteur d’un bon début de saison avec le Pacific FC, Noah Verhoeven a été invité au camp d’entraînement de l’équipe nationale canadienne avant la Gold Cup à Los Angeles. Quillan Roberts a obtenu sa première convocation et en bonus, une participation à la Gold Cup avec l’équipe nationale de Guyana, lui qui avait déjà joué un match amical avec l’équipe canadienne. Malgré plusieurs joueurs dans les listes préliminaires, Emery Welshman et Quillan Roberts, tous deux du Forge FC, ont été les seuls représentants de la CanPL dans la compétition continentale, sous les couleurs des Golden Jaguars. Ryan Telfer, prêté par le Toronto FC au York 9 a reçu sa première convocation (qui a été couronnée par son premier but) avec l’équipe de Trinité-et-Tobago, malgré l’intérêt de John Herdman avec le Canada. Ses coéquipiers du York 9, Emilio Estevez Tsai (Taipei chinois) et Justin Springer (Saint-Christophe-et-Niévès) ont poursuivi leur carrière internationale dans différentes compétitions. Pr contre, du côté du club d’Halifax, malgré son fort contingent de joueurs trinitéens, seul Akeem Garcia a été convoqué par les Soca Warriors depuis le début de la CanPL. Assez surprenant, le jeune Abd-El-Aziz Yousef (19 ans) a fait ses débuts avec l’équipe nationale somalienne alors qu’il n’a joué aucune minute sous les ordres de Stephen Hart. Il a participé aux 90 minutes de la première victoire somalienne en match de qualification de Coupe du Monde, contre le Zimbabwe. Du côté canadien, Marco Carducci (Cavalry FC) a été convoquée par l’équipe nationale canadienne pour la double confrontation contre Cuba en septembre 2019. Amer Didic, auteur de bonnes performances avec le FC Edmonton, a pu être convoqué à nouveau par l’équipe nationale canadienne Senior, mais il est toujours en attente de ses premières minutes. Le défenseur du Cavalry Dominick Zator a lui aussi été appelé pour le match du 15 novembre 2019 contre les États-Unis, sans fouler le terrain. Malgré ce trio albertain sélectionné en équipe nationale canadienne via la CanPL, la jeune ligue est en attente de son premier joueur à faire son entrée sur le terrain avec la tunique des Rouges. Du côté des équipes de jeunes, Aribim Pepple (16 ans) a signé son premier contrat professionnel en août 2019 avec le Cavalry FC avant de recevoir une convocation avec l’équipe canadienne U-17, sans être sélectionné à la Coupe du Monde de la FIFA U-17 qui a suivi. Un autre jeune, Ahmed Alghamdi (Pacific FC), âgé de 17 ans, a été sélectionné avec l’équipe nationale U-20 d’Arabie saoudite. Les sélections nationales sont souvent une vitrine intéressante sur le monde pour les joueurs. C’est de cette façon qu’ils peuvent également se comparer à leurs coéquipiers qui jouent dans d’autres ligues. Il ne serait pas surprenant que davantage de joueurs de la CanPL soient sélectionnés au sein de différentes équipes nationales dans les prochaines années.\nMalgré quelques problèmes techniques pendant la saison, la plateforme OneSoccer créée par le diffuseur MediaPro pour le marché canadien, s’est révélée bien efficace. Évidemment, bien que présentant bien des avantages, cette plateforme offre aussi un problème d’accessibilité dans un pays où une frange de la population n’a pas accès à de l’internet haute vitesse. Cependant, le réseau national CBC a diffusé dix matchs à la télévision (en plus des finales) ce qui a pu faire découvrir la ligue gratuitement aux intéressés et aux curieux. Au niveau de l’affluence aux stades, la comparaison est difficile en raison de la capacité nettement plus élevée du côté de Hamilton (Tim Horton Field, 40 000 sièges) et Winnipeg (Investor Group Field, 33 422 sièges). Le coup de cœur au niveau du public est visiblement du côté d’Halifax avec un stade (Wanderers Ground) presque rempli en permanence et une ambiance organisée par les supporters des Privateers (dont un des membres nous a été invité à notre podcast). Par contre, comme les sceptiques le prédisaient avant la saison, en raison de la proximité du Toronto FC (MLS), le York 9 FC a eu bien de la difficulté à remplir le York Lions Stadium, avec une moyenne de 2565 spectateurs par match.\nLa ligue a aussi offert une exposition à des joueurs habitués à la scène semi‑professionnelle locale (LeagueOne Ontario, PLSQ), aux divisions inférieures américaines (USL Championship, USL League Two) ou à diverses ligues peu médiatisées à travers le monde. Bien que l’expérience n’ait pas toujours été concluante, plusieurs joueurs ont profité de l’occasion pour se relancer ou pour se faire connaître. Certains joueurs formés dans les académies des clubs de MLS ont profité de la CanPL pour prouver qu’ils avaient le niveau professionnel comme Terran Campbell (Pacific FC), David Choinière (Forge FC) ou encore Louis Béland-Goyette (Valour FC). Des clubs de MLS n’ont pas hésité à prêter des joueurs en CanPL et l’expérience s’est plutôt montrée concluante avec Emery Welshman (prêté du FC Cincinnati au Forge FC) qui a signé dans le championnat israélien en cours de saison. Ryan Telfer (York 9) a même été rappelé par le Toronto FC le temps d’un match en juin 2019, l’occasion pour lui d’offrir une passe décisive. L’américain Blake Smith, prêté par le FC Cincinnati au Pacific FC a également été un joueur important de cette jeune équipe, prenant part à 24 matchs de CanPL. Le club de l’île de Vancouver s’est également fait prêter David Norman Jr en fin de saison, par la prochaine équipe d’expansion en MLS; l’Inter de Miami. Tout porte à croire que ce genre de prêts pourraient devenir plus fréquents, notamment en provenance des clubs canadiens de MLS.\nBien que cette première saison de CanPL est loin d’être parfaite, plusieurs signes encourageants laissent croire qu’un avenir radieux s’offre au soccer professionnel canadien. Pour ce faire, une croissance de la ligue est plus que nécessaire alors que le commissaire David Clanachan proclame toujours rêver d’instaurer un système de promotion et relégation à long terme. En attendant, nous pouvons savourer les succès de 2019 en attendant avec impatience la prochaine saison! Il faudra être attentifs aux annonces des prochains mois qui nous donneront une idée sur l’édition 2020 de cette ligue excitante. Soyez prêts et si vous voulez en savoir davantage, n’hésitez pas écouter notre podcast hebdomadaire consacré au soccer canadien, Cs à l’érable!\nTags: Bilan Canada Canadian Premier League CanPL Cavalry FC Forge FC Hamilton Première Ligue Canadienne Soccer\nPrevious Post Le Rêve Américain de Simon Sebbah, entre College et Indoor Soccer\nNext Post NWSL : Des Nouvelles Expansions en Approche ?


Le remords : psychanalyse d'un meurtrier - Gérard Bonnet - Librairie Mollat Bordeaux\nPage générée le : 24/06/2021 15:19:17\nLe remords : psychanalyse d'un meurtrier\nCollection(s) : Psychanalyses\nLa psychanalyse s'est très tôt intéressée aux criminels dangereux en leur offrant la possibilité d'entreprendre un véritable travail sur eux-mêmes. Le récit détaillé de la cure de Didier en est une illustration. Grâce au transfert, à la mise à jour de l'affect à l'origine de l'acte, grâce au travail théorique mené en parallèle par l'analyste, ce meurtrier est parvenu à assumer son acte. ©Electre 2021\nA l'heure où l'on préconise la prise en charge thérapeutique des délinquants considérés dangereux, ce livre rappelle que la psychanalyse s'est intéressée très tôt à cette question cruciale et qu'elle offre aujourd'hui encore aux criminels qui le désirent vraiment la possibilité d'un véritable travail sur eux-même pourvu qu'on leur en donne la possibilité. Le récit détaillé de la cure psychanalytique de Didier en est une illustration saisissante. Grâce au transfert, au réveil dans la cure de l'affect qui a été à l'origine et à l'aboutissement de l'acte ; grâce à l'écoute patiente et au décodage des histoires qu'il s'était construites pour se donner une contenance ; grâce surtout à un travail théorique rigoureux, approfondi, mené en parallèle par l'analyste ; Didier est parvenu à assumer son acte dans toutes ses composantes. Un acte horrible en soi, inacceptable à tous égards, qui s'est révélé pourtant être un appel, un message, venu des zones de notre esprit ou la pulsion règne en maître et croit pouvoir régler les choses sans tenir compte de la réalité.\nISBN : 2-13-050973-8\nEAN13 : 9782130509738


Vers le lac de Saint Cricq - Office de Tourisme de Gascogne Toulousaine\nLac de Saint Cricq / photo Base de loisirs de Saint Cricq\nChâteau de Roquelaure / photo Château de Rquelaure\nTracé Vers le lac de Saint-Cricq\nDeux options pour ce parcours de 31 km : en demie journée pour cyclistes avertis, ou sur une journée entière avec halte déjeuner ou pause fraîcheur – maillot de bain, au Lac de Saint Cricq, pour cyclistes moins confirmés. Le parcours sur petites routes traverse Clermont-Savès, Razengues, Beaupuy et leurs églises accolées d’un porche en vous offrant une vue jusqu’aux Pyrénées . Puis vous profitez de la campagne tranquille jusqu’au village de Thoux. Attention à la traversée de la D654 pour rejoindre le lac de baignade. Le retour vous mène devant le Château de Monbrun puis emprunte le circuit cyclotouriste 7 départemental.\nAu départ de la base de loisirs, empruntez la piste cyclable qui longe la N124. (Attention passage d’une voie ferrée). Au rond-point, prenez la 3ème sortie. Tournez à droite « chemin de Maniou ».\nA l’église de Clermont-Savès, tournez à droite. Au stop, tournez à gauche. A l’intersection, tournez à droite direction Razengues (D 161). Au rond-point, prenez à la 2 nd sortie. A l’intersection, allez tout droit, direction Roquelaure Saint-Aubin.\nAu village tournez à gauche et de suite à droite direction Thoux. Continuez tout droit jusqu’à l’intersection de la D 654. Tournez à gauche. Vous êtes à la base de loisirs de Saint-Cricq.\nRevenez sur vos pas jusqu’à l’intersection du moulin dans Thoux. Tournez à gauche, direction Monbrun.\nA l’intersection tournez à droite direction Razengues (D 39). A l’intersection tournez à gauche, direction L’Isle-Jourdain. A l’intersection de la D 654, tournez à droite. Retour à la base de loisirs.\nPotier Le Figulus : artisans potiers, père et fils. Ouvert tous les jours de 11h à 19h juillet et août ; du mercredi au samedi de septembre à juin de 14h à 18h30. Fermé les jours fériés.\nEglise de Razengues : l’église dédiée à Notre Dame Saint-Blaise des Voyageurs est inscrite aux Monuments Historiques\nLe château de Roquelaure Saint-Aubin est une propriété privée.\nBase de loisirs de Thoux Saint-Cricq : baignade (lac et piscine), club de voile, jeux, camping, restaurant et buvette\nJardin et potager BABER : Venez cueillir vos légumes ! Ouvert mercredi,vendredi et samedi de 9h30 à 12h et de 14h à 18h.\nBase de loisirs de l’Isle-Jourdain : nombreuses activités aquatiques et de pleine-nature\nVers le lac de Saint-Cricq - L'Isle-Jourdain - parcours de 31 km


Non classé Archives - Page 9 sur 9 - Femme et réalités\nUne jeune femme de24 ans a dû être opérée d'urgence, après s'être enfoncé un vibrateur de 18cm trop profondément dans l'anus. Celui est resté coincé dans le derrière. Emma Phillips, vivant à Liverpool, s'am...\nUne rescapée de l’esclavage sexuel de Daech gagne un prix\nLe prix des droits de l'Homme Vaclav Havel 2016 du Conseil de l'Europe a été décerné à la jeune militante irakienne des droits de l'Homme, Nadia Murad, rescapée yazidie du groupe terroriste Daech. Ce prix, d...\nAttention, votre célibat perpétuel pourrait être génétique!\nSi vous avez du mal à tomber amoureuse, à être en couple ou encore à quitter votre état de célibat contrairement à vos amis, sachez que c’est peut être dû à vos gènes ! Selon une nouvelle étude publiée, dan...\nOptez pour des tresses pour changer de tête\nBandeau, XL, mono, en duo ou mini multiples... en matière de tresses, le moins que l'on puisse dire c'est qu'on à l'embarras du choix pour changer de tête. Il suffit parfois de petites choses toutes simples p...


4 Seasons Outdoor | Tout sur l'acier\nNotre matière préférée pour de nombreux meubles de jardin est l'aluminium. Dans certains cas, nous avons besoin de plus de rigidité pouvant supporter une charge plus lourde. Dans ce cas, nous arrivons à l'acier. Nous proposons également un revêtement en poudre, comme l'aluminium et l'acier inoxydable. Il est souvent difficile de voir de l'extérieur quel métal a été utilisé.\nDe bons exemples d'utilisation de l'acier dans nos meubles de jardin sont les éléments de dossier en tôle d'acier. En raison de la résistance de la tôle, nous garantissons que les dossiers peuvent supporter une bonne charge. De cette façon, nous sommes sûrs que vous pourrez vous asseoir longtemps dans votre salon .\nL'acier a la propriété d'être lourd et robuste, mais il présente le petit inconvénient de pouvoir rouiller s'il entre en contact avec l'air extérieur sans protection. L'oxydation a lieu et avec cela vous voyez finalement la formation de rouille.\nPour contrer cela, tous les éléments en acier de nos meubles de jardin sont enduits de poudre . Cela fournit la couche de protection nécessaire pour éviter la rouille. Nous recommandons donc de vérifier régulièrement les éléments en acier pour les rayures. Si le revêtement en poudre provoque une rayure après utilisation, veuillez contacter votre point de vente. Dans la plupart des cas, une griffe est facile à réparer.\nNous donnons une garantie de 5 ans sur nos meubles de jardin contre les défauts de construction et de fabrication. Cela vaut également pour nos éléments en acier. La condition pour bénéficier de cette garantie est d'effectuer une maintenance périodique à l'aide des produits de maintenance 4SO.\nCes produits de maintenance conviennent à la maintenance des meubles de jardin Acier.


Grand Sud Médiéval • Consulter le sujet - PROVINS, la grosse boule qui enfle, qui enfle....\nPROVINS, la grosse boule qui enfle, qui enfle....\n22 Juin 2011, 07:07\n450 exposants, d'après les orgas; de tout, avec un peu de médiéval au milieu, pour donner un air de. Il en faudrait 250 maxi pour qu'ils puissent tous bien travailler; entre ce foisonnement et la fréquentation en baisse ( due au mauvais temps?), les porte-monnaie en berne, les exposants qui sont " passé à travers" sont légion; bonjour les grincements de dents;\nUne chose désolante: à peine la fête finie, les employés municipaux ont enlevé les toilettes; les exposants ( et surtout les filles) qui avaient besoin, rien à cirer; circulez, on se retient! d'ou peut-être cette odeur d'urine persistante un peu partout le dimanche soir, parceque les gars, eux, ne se sont pas privés; les murs et les arbres, quand il y en avait, tout a été allègrement baptisé; ça peut paraitre anecdotique, mais c'est surtout révélateur de l'estime qu'à la mairie pour les exposants\n--Message edité par Fée Bleue le 2011-06-22 09:42:19--\n22 Juin 2011, 07:30\nJ'ai fait Provins 1 fois.\n22 Juin 2011, 14:55\nyoupi, moi qui me demandais si ça continuait à valoir le coup ou pas... Car pas donné pour s'inscrire et assez loin pour moi Merci !\nProvins est plus en vue mais depuis3 ans, c'est aussi le bordel Chevreuse (qui tente le méd. sans prévenir), Vincennes (qui supprime une travée d'artisans pour raison de "sécurité"), Saclay (qui fait payer et qui est loin des transports), la palme revient à Argenteuil qui subit la vindicte d'un élu arrivé brutalement suite à mutation...disciplinaire !\n24 Juin 2011, 06:51\nQué Chevreuse ? DAns le 78 ?\nSaclay n'est pas payant !\n28 Juin 2011, 17:47\nGrand Inqui a dit : Une chose désolante: à peine la fête finie, les employés municipaux ont enlevé les toilettes; les exposants ( et surtout les filles) qui avaient besoin, rien à cirer; circulez, on se retient!\nMerci KIKI de le préciser, je confirme, dur dur de devoir se retenir et je plainds également les arbres et les murs bien qu'ils ne soient pas toujours épargnés.Il a fallu se retenir encore suite au barrage des pompiers ou plutot de la voiture de police... aucune pitié, pauvres pêcheurs que nous sommes...\n29 Juin 2011, 08:22\nprevoyez donc votre cabane "toilettes sèches"\n02 Juil 2011, 09:17\nL' accès aux toilettes n' est pas précisé dans vos contrats/conventions avec l' orga?\n05 Juil 2011, 08:40\nJe suis d'accord avec toi grand inqui, la qualité des revendeurs laisse a désiré, mais la qualité des artisans est bien présente heuresement.\n17 Juil 2011, 09:02\nProvins n'a jamais caché que les médiévistes de tous poils n'attirent pas autant que les spectacles medfant et que les vrais artisans sont moins rentables que les revendeurs. Quand aux fonctionnaires municipaux, ils sont payés en heures sups, et la municipalité les presse de faire vite pour ne pas les payer trop.\n18 Juil 2011, 01:06\nBonsoir à tous et merci pour l'existence de blog dont je découvre l'existence.\nÉtant provinois et médiéviste acharné, je me permettrait quelques précisions sur les médiévales.\n1°) la mairie dit a qui veut l'entendre qu'elle accueuille 1 million de touristes par an : faux ! les chiffres officiels déclaré au Dpt pour fin de statistiques étaient de 650 000 visiteurs pour 2010 incluant seulement 210 000 payants.\n2°) les médiévales sont en chute libre :\n2009 : 100 000 visiteurs\n2010 : 80 000 visiteurs\n2011 : on a pas encore les chiffres mais il se chuchotte que si on atteind les 60 000 visiteurs ce sera déjà beau\nConclusions : - 40% en 3 ans\nL'équation de la mairie semble être simple : moins de visiteurs = moins de rentrée d'argent donc on doit se compenser par plus d'exposants qui eux payent à coup sur pour être là.\n3°) la mairie tente de faire de Provins une sorte de Disney du Médiéval en carton pâte alors que les visiteurs réclament de l'authentique, du vrai, de la passion médiévale, pas des stroumph déguisés avec deux bouts de cartons.\n4°) Il règne une ambiance épouventable dans cette ville où si vous êtes dans les petits papiers de la Mairie vous avez tout les droits si vous n'y êtes pas on vous fait emm.....de autant que possible.\nJe connais à Provins des tas de gens qui participait aux médiévales avec bonne volonté et passion il y a encore 4/5 ans et qui ont totalement laissé tombé à cause de la mairie qui veut contrôler (et faire payer) pour tout.\nConcernant les médiévales : j'y étais bien entendu et j'y ai vu des choses allucinantes !\n- les distributeurs de billets qui sont vides dès le samedi 16h00... du coup les visiteurs ne peuvent plus retirer d'argent pour acheter. Mais personne à la mairie n'a pensé à prévoir une recharge de billets entre samedi et dimenche.\n- les toilettes : sujet déjà traité ici... 100% d'accord avec vous.\n- on m'a parlé un stand sur lequel la police est intervenu en masse le samedi matin et à tenté de les faire partir (en dehors de tout cadre légal) alors qu'ils étaient parfaitement en règle tout simplement car le maire avait décidé qu'il ne les voulait pas sur SA fête médiévale.\n- il semblerait que les visiteurs ne viennent plus car ils trouvent l'entrée trop cher. À ce titre, il se dit que l'accès payant serait d'ailleurs illégal, un maire ne pouvant pas interdire l'accès total à sa ville;\n- ne parlons pas de la médiocrité de certains exposants ; j'ai vu un mec vendant des bonbons façon fête foraine avec un sac à patates en guise de tabard... mais pour les organisateurs ça fait "Médiéval"\n- et ne parlons pas de leur foutu défilé organisé uniquement pour la gloriole du maire mais qui coupe la vieille ville en 2 durant 2h ce qui empêche les visiteurs de circuler et de visiter les exposants.\nAh où est-il le temps de ma jeunesse où la fête se déroulait sur toute la ville ( haute & basse) où tout les commerçants de la ville jouaient le jeu des médiévales. On avait de la place des petits groupes s'improvisaient Medfans le temps d'un WE. Je me rappelle de l'époque où TOUTE la ville était recouverte de paille au sol. C'était bon enfant, convivial et tout le monde y gagnait bien sa vie.\nAujourd'hui les Médiévales c'est quoi ???\n18 Juil 2011, 07:48\npour le reste je ne sais pas , mais pour les banques, la commune n'a rien a voir, plus la banque met du pognon dans les distributeurs, moins ils en ont dans leur caisses, et puis si le directeur de la banque a l'habitude de mettre tant dans le distributeur tout les samedis , il ne voit pas pourquoi il en mettrait plus ces jours là.\npour faire un bon directeur, il faut prendre le plus nul du troupeau, sinon on s'expose a perdre un bon ouvrier , et certainement prendre un mauvais chef.\nquand a provins , d'apres ce que j'en ai lu , c'est le meme foutoir qu'ailleurs.\nla politique se met partout, et quand on voit que c'est l'excuse qu' été prise a marsillargues pour excuser l'affluence exceptionnellement nulle de leur med, alors qu'aucune pub n'a été faite, c'est politiquement nul, un president d'assos doit etre de droite, de gauche, du centre, pour faire court il doit etre neutre et ne s'occuper que de son assos, si non il quitte l'assos, monte une liste adverse et se presente aux elections.\nça evitera le probleme relationel avec la mairie.\n18 Juil 2011, 08:40\nJF77....la section "Presentation" vous attend. Sinon, c'est très instructif ce que vous ecrivez.\n18 Juil 2011, 11:44\nBien entendu, les banques ce n'est pas la commune mais quand on organise ce genre de méga manifestation, ça se fait de rappeler à la banque du coin qu'ils pensent à recharger leur DAB dans la nuit de samedi à dimanche; juste histoire que les visiteurs puissent acheter aux exposants. Mais bien sur mon précédent post n'est que le reflet de mon impression et de ce que j'ai pu entendre et constater ici et là à propos des Médiévales et je peux me tromper.\n08 Mai 2013, 16:25\nUn bien beau site pourtant!\nDernière édition par Armée des Maures le 08 Mai 2013, 18:44, édité 1 fois au total.


L’élevage du Pech du Cayrol est un lieu de grande renommée qui a été repris en 1981 par Marc Sudret après 3 générations. En termes de positionnement à l’international, l’élevage a été le premier exportateur d’un chien reconnu aux Etats-Unis, le premier à avoir un champion du monde, le premier à avoir 2 champions de travail des USA, le premier à faire un Best In Show…\nC’est la patience et l’amour du métier qui a permis de détenir ces titres et de faire de son élevage l’un des meilleurs.\nLes lignées de base de l'élevage sont originaires du Bourbonnais et d'autres sujets sont adoptés dans les pays où sont issus les plus grands champions aussi bien en matière de travail que pour la conformité au standard.\nLes chiens ayant le plus de titres de l'élevage se trouent aux USA, dans les pays Baltes en Lituanie et dans de multiples autres pays.\nL'Australie, la Pologne, la Russie, le U.K. et bien d'autres viennent d'être conquis par les Braques du Bourbonnais du Pech du Cayrol où de nombreux juges se réfèrent à cette lignée pour débuter l'élevage ou tout simplement détenir un chien tant pour la chasse que pour les Dog Shows.\nNos chiens évoluent dans un milieu entre prairies, forêts et friches naturelles riches en gibier sauvage de manière à s’épanouir pleinement dans leur travail et de gambader comme bon leur semble.\nIls sont élevés et sociabilisés afin de favoriser leur intégration au sein d’une famille.\nLes Braques du Bourbonnais sont avant tout des chiens d'arrêt, mais aussi d’exposition, de pistage, des renifleurs à la recherche de drogues ou d'explosifs ou utilisés en cliniques pour le dépistage précoce des cancers et des accompagnateurs de malades et de personnes âgées ou des chiens pratiquant de nombreux autres sports tel l'Agility, le Fly-Ball, le Canicross, le Cani-VTT, voire le cavage dans les régions productrices de truffes. Le standard énonce bien qu'il s'agit d'un chien "polyvalent". Cela est du à son caractère souple et affectueux tout en étant très proche de son maître et bon gardien de sa maison !\nDe nature robuste, les rendez-vous chez le vétérinaire se feront rares avec eux !\nNous ne conservons les femelles qu’en fonction de leur conformité au standard, leur caractère, mais surtout à leur capacité naturelle à la maternité. C’est d’ailleurs le premier choix concernant les femelles reproductrices.\nDans notre élevage, nous effectuons un travail de qualité, car nous élevons avec passion, soin et amour afin de vous présenter des chiens d’exceptions.\nMon arrière-grand mère qui s'éprit de la passion canine dès 1915 me disait toujours "il vaut mieux viser la perfection et ne pas tout à fait l'atteindre que pointer la médiocrité et y parvenir". Ce sont sur ces paroles et sur ses pas que l'élevage du Pech du Cayrol est arrivé jusqu'à moi.\nA très vite, rejoignez-nous sur notre site internet et nos pages Facebook pour plus d’informations !\nDate de naissance: 25 déc. 2020\nDate disponibilité: 25 févr. 2020\nNuméro d'identification du père Braque du Bourbonnais: 250268731604425\nNuméro d'identification de la mère Braque du Bourbonnais: 956000004175169\nPrix de base du chiot Braque du Bourbonnais à Belfort-du-Quercy: 800,00 €\nMamour du Pech du Cayrol\nDU PECH DU CAYROL, Belfort-du-Quercy


Chaussures Nike Pas Cher Fille saveursdelapelterie.fr\nau sérieux son devoir de réduire le crime et le désordre et fera tout ce qu'il peut en partenariat avec la police de Kent. Lorsque les eaux de marée ont déferlé sur l'ouragan Sandy englouti les maisons, les hôpitaux et les tunnels de transit de New York City, il a été réveillé upcall pour d'autres villes côtières. Avec la promenade Harbour Walk de 47 milles à travers 6 quartiers riverains proches de l'achèvement, l'accent a été mis sur l'élévation du niveau de la mer. 'Se préparer à la marée montante' Boston Harbor Association374 Congress StreetBoston, MA 02210 Nike Baskets\nL'American Meteorological Society a son siège social dans un élégant manoir de Beacon Hill, autrefois résidence du 3ème maire de Boston. Vivre avec de l'eau n'est pas nouveau pour le développeur Joe Fallon. Après de multiples propriétaires et des décennies de rêves brisés, Fallon est l'homme qui donne vie à Fan Pier du Seaport District. Ça a l'air surréaliste, comme un film de science-fiction qui fait bouger les digesteurs géants de la station d'épuration de Deer Island.\nÀ Charlestown, le premier nouveau bâtiment de Boston conçu pour résister aux changements climatiques devrait ouvrir ses portes, Spaulding Rehabilitation, un hôpital partenaire, devrait être un modèle de résilience. Le Tournoi de hockey KFC de Noël à Truro et Debert et le Tournoi d'amitié Phil Sears Memorial à Brookfield offrent une tonne Chaussures Nike Pas Cher Fille d'excitation pour les joueurs et les familles dans cette bande de temps entre les célébrations de Noël et du Nouvel An. 'Il n'y a aucun doute que les joueurs s.\na déclaré: «Le conseil prend très Basket Nike Bleu Homme\naidé à présenter la toute première zone de dispersion de Thanet en 2004 pour arrêter les gangs autour de Surrey Road, et Cllr Hart dit que c'est quelque chose qui pourrait devoir être rétabli si les mesures policières n'améliorent pas la situation. Chris Wells, membre du cabinet du conseil municipal de Thanet, Chaussure Nike Femme Orange\n(617) 482 1722Selon Alison Nolan, directrice générale de Boston Harbour Cruises, le changement de la marée moyenne est déjà évident sur Long Wharf.\nAccueil / Chaussures Nike Pas Cher Fille


Conflit au Yémen: Kerry va discuter avec l'Arabie saoudite d'une pause humanitaire - Challenges\nPar le 06.05.2015 à 20h52, mis à jour le 07.05.2015 à 08h47\nLe secrétaire d'Etat américain John Kerry à Djibouti le 6 mai 2015 (c) Afp\nRyad (AFP) - Le secrétaire d'Etat américain John Kerry est arrivé à Ryad mercredi pour discuter avec l'Arabie saoudite d'une éventuelle "pause" dans les opérations militaires au Yémen, où des dizaines de civils ont été tués mercredi en tentant de fuir le conflit.\nLe chef de la diplomatie américaine est arrivé de Djibouti, où il bouclait une tournée en Afrique de l'Est. Il a rencontré dans la soirée à Ryad le nouveau prince héritier, Mohammed ben Nayef, et doit s'entretenir jeudi avec le roi Salmane, et le président yéménite en exil, Abd Rabbo Mansour Hadi.\n"Nous allons discuter de la nature de la pause et comment elle pourrait être mise en œuvre", a déclaré le ministre américain devant la presse à Djibouti, exprimant "l'extrême préoccupation" des Etats-Unis devant "la situation humanitaire au Yémen".\n"Je suis convaincu de leur volonté de mettre en oeuvre une pause", a ajouté John Kerry à propos des Saoudiens, proches alliés des Etats-Unis et fers de lance d'une coalition arabe combattant depuis le 26 mars au Yémen les rebelles chiites Houthis soutenus par l'Iran.\nLe secrétaire d'Etat a précisé avoir déjà évoqué cette semaine cette "pause humanitaire" avec son nouvel homologue, saoudien Adel al-Jubeir, qu'il rencontrera jeudi, selon une source diplomatique américaine. Il en a aussi parlé avec le chef de la diplomatie iranienne Mohammad Javad Zarif, a confié un diplomate américain.\nLe ministre yéménite des Affaires étrangères, Riyadh Yassin, a indiqué à la presse à Ryad, où il est réfugié, qu'il espérait s'entretenir jeudi avec M. Kerry "surtout au sujet de l'aide humanitaire au Yémen" et de "la façon dont on peut avancer" dans ce domaine.\n"Pour l'instant, la crise immédiate est humanitaire", a martelé M. Kerry, annonçant une enveloppe de 68 millions de dollars d'assistance destinée aux organisations humanitaires au Yémen.\nVingt-deux d'entre elles ont d'ailleurs averti qu'elles risquaient de cesser leur aide d’urgence si les voies terrestres, maritimes et aériennes n'étaient pas immédiatement rouvertes pour permettre un approvisionnement en fuel.\nL'ONG Oxfam a exigé "une cessation immédiate et permanente du conflit".\nLundi, Ryad avait dit envisager des trêves ponctuelles dans certaines zones du Yémen pour permettre l'acheminement de l'aide.\nMais les Houthis, qui ont conquis de vastes territoires depuis leur entrée dans la capitale Sanaa en septembre 2014 et poussé le président yéménite à l'exil, n'y semblent pas disposés.\nIls sont parvenus mercredi à frapper directement l'Arabie saoudite, tuant cinq personnes dans un bombardement sur la ville frontalière de Najrane. Ryad affirme pourtant que la menace contre son territoire n'a plus cours, après six semaines de raids aériens au Yémen.\nLa frontière entre les deux pays est le théâtre d'échanges de tirs sporadiques depuis le début de la campagne aérienne de la coalition, fin mars. Douze soldats et gardes-frontières saoudiens sont morts dans ces échanges de tirs et il y a eu au moins une tentative d'incursion de Houthis à la frontière au cours de laquelle des "dizaines de rebelles" ont été tués, selon Ryad.\nConfrontés à une situation humanitaire de plus en plus difficile, nombre de civils fuient, en dépit des risques. A Aden, 32 personnes ont été tuées et 67 blessées mercredi par des obus alors qu'elle tentaient de fuir les combats par la mer. Un responsable des services de santé a accusé les Houthis d'avoir tiré ces obus sur un port de pêche et une barge utilisée par les habitants d'un quartier pris sous le feu.\nJohn Kerry a "remercié" ce petit pays ultra-stratégique de la Corne de l'Afrique, au bord du détroit de Bab al-Mandeb, notamment pour l'accueil et le transit d'un demi-millier d'Américano-Yéménites ayant fui le Yémen avec leurs familles.\n"Djibouti est en première ligne dans les efforts contre le terrorisme", s'est félicité le secrétaire d'Etat, promettant que les Etats-Unis "continueraient à collaborer étroitement avec le gouvernement de Djibouti sur les stratégies de contre-terrorisme pour toute l'Afrique de l'Est et la péninsule arabique".\nEx-colonie française, Djibouti abrite plusieurs bases militaires étrangères, dont la seule base américaine en Afrique, d'où partent notamment des drones utilisés en Somalie contre les islamistes shebab.\nAprès l'Arabie saoudite, John Kerry sera à Paris jeudi soir, où il s'entretiendra avec ses homologues des pays du Golfe et participera aux célébrations du 70e anniversaire de la victoire des Alliés du 8 mai 1945.\nGouvernement Paris Iran Etats-Unis ONG Yémen Somalie Sanaa Djibouti Corne de l'Afrique 8 mai 1945


Les «Jours Parisiens» à la rescousse du commerce - Le Parisien\nLes «Jours Parisiens» à la rescousse du commerce\nPlus de 2 200 boutiques parisiennes organisent un grand jeu d’énigmes à partir de vendredi et pendant trois jours. Objectif : inviter les Parisiens à retrouver le plaisir du shopping après six mois de morosité.\nL’opération est lancée par (de gauche à droite) : Stéphane Roche, directeur général du groupe Vivarte ; Régis Schultz, président de Monoprix représenté par Marion Denonfoux, directrice de communication ; Dominique Restino, président de la chambre de commerce de Paris ; Olivier Bron, directeur des opérations Galeries Lafayette et BHV Marais et Yohann Petiot, directeur de l’Alliance du commerce. LP/Eric Le Mitouard\nLe 10 juin 2019 à 18h26, modifié le 10 juin 2019 à 18h36\nC'est la mobilisation générale des grandes enseignes et des petits commerces parisiens. « Il est temps d'oublier la morosité générale des derniers mois et de passer à autre chose », lance avec enthousiasme Stéphane Roche, directeur général du groupe Vivarte (La Halle, Caroll, Minelli…).\n« Il faut redonner à nos clients le côté ludique du shopping qui est le premier loisir des Français », ajoute Régis Schultz, président de Monoprix. C'est lui qui a réussi à lancer l'idée d'un grand jeu d'énigmes dans tout Paris – Les jours Parisiens – et qui, en trois semaines, a ainsi fédéré les énergies.\n100% des joueurs sont gagnants\nAu total, 25 groupes, 38 enseignes et pas moins de 2 200 commerces (dont 1 000 commerces indépendants amenés par la chambre de commerce et d'industrie de Paris) vont tenter d'attirer Parisiens et banlieusards dans la capitale vendredi, samedi et dimanche. « C'est la première fois qu'un tel jeu est organisé à cette échelle, sur tout Paris, et qui assure que 100 % des joueurs seront gagnants », se réjouit Régis Schultz.\nParmi les responsables des grands lieux du commerce de la capitale, personne ne parle des Gilets jaunes. Mais tout le monde a en tête la baisse d'activité moyenne de 20 à 25 % et le vandalisme des vitrines. « Nous avons ouvert les Galeries Lafayette sur les Champs-Elysées et le samedi est finalement le plus mauvais jour de la semaine », reconnaît Olivier Bron, directeur des opérations Galeries Lafayette et BHV Marais.\n« Le samedi était la fête du commerce. Avec la désaffection de ces derniers mois, tous nos employés viennent la boule au ventre ce jour-là », ajoute-t-il. Tous ont conscience de ce « changement de comportement des clients » qui désertent les rues le samedi et des conséquences sur le commerce. « Ce sont les employés qui subissent une perte de pouvoir d'achat et voient les risques de réduction des embauches à venir », pointe Dominique Restino, président de la chambre de commerce et d'industrie de Paris.\nRégis Schultz et les GO (grands organisateurs) de ce jeu de société veulent aujourd'hui sonner la fin des lamentations et donner le signal de la relance. Yohann Petiot, directeur de l'Alliance du commerce, l'assure : « Le commerce est le poumon des villes, au cœur de la vie avec 62 000 commerces et 330 000 emplois dans tous les secteurs d'activité ». Il est temps de se connecter au site des Jours Parisiens. D'aiguiser ses connaissances pour répondre aux énigmes. Et de jouer le jeu !\nTROIS JOURS D'ÉNIGMES\nTout commencera ce vendredi à l'ouverture des commerces. Une fois connecté sur le site lesjoursparisiens.fr, après avoir donné ses coordonnées (qui ne seront réutilisées par aucune enseigne, promettent les organisateurs), le jeu sera lancé pour les participants.\nUne fois géolocalisé, dans tout Paris, une première énigme vous lancera vers un premier magasin dans un rayon de 1,5 km. Après avoir scanné un QR code sur la vitrine de l'enseigne, une seconde énigme vous permettra de rejoindre un second commerce… et ainsi de suite.\nDès que le joueur aura validé cinq énigmes et flashé 5 QR codes, il découvrira son gain, une réduction dans une enseigne partenaire, une offre sans minimum d'achat, un massage bien-être à domicile ou une partie d'escape-game… Une question bonus permettra en outre à quatre joueurs de gagner 3 000 € de shopping à Paris.\n« Au total, cela représente 300 000 € de gains mis en jeu », indiquent les animateurs du jeu. Et chacun peut jouer, en famille ou avec des amis, jusqu'à dimanche en fin d'après-midi.\nDisneyland Paris : débrayage le 22 septembre pour défendre le rythme du travail\nLes Restos du cœur de Noisy-le-Grand se mettent au vert\nFusion Hauts-de-Seine - Yvelines : «Aucune décision n’a été prise»\nCompiègne : le quartier de Bellicart mieux desservi par les bus


Simple avec une vinaigrette qui tue - Recette de myTaste\nUne fois cuit, salez-le puis gardez-le au chaud. Juste des champignons des épinards et du quinoa. Faites revenir dans une grande poêle ou une sauteuse, les jeunes oignons et l'ail quelques secondes dans de l'huile d'olive avant d'y ajouter les champignons\nJ'avais donc posté une première idée que voici. C'est non seulement une soupe détox, mais également une des soupes préférées de ma fille Ambre alors, faites-la goûter sans crainte aux enfants\nPréparez unevinaigretteavec le vinaigre de cidre, l'huile d'olive, du sel et du poivre. Elle demande donc une préparation un peu plus longue que les recettes habituelles du blog mais elle est tellement exceptionnelle que je devais la partager avec vous\nVous n'imaginez pas tout ce que l'on peut faire de très très simpleavecune bonne sauce tomate. ) dans votre sauce, avec quelques câpres, des olives noires et de belles feuilles de basilic déchirées\nIl ne reste plus qu'à préparer la vinaigrette. Et pour la transformer en plat principal rien de plus simple\nAvec les fêtes et les repas gargantuesquesqui approchent, j'ai envie de manger plutôt léger mais copieusement quand même car il fait froid dehors\nDans une poêle, faites revenir l'oignon émincé avec le cumin et le paprika fumé sur feu moyen. Merci Delhaize, mais ce serait formidable si vous en faisiez de même avec les autres hachés\nd'abord un biscuit que l'on cuit et qu'il faut laisser refroidir avant de le mixer avec le beurre puis la crème au sucre que l'on cuit avec la croûte\nPour la vinaigrette, épluchez l'ail et écrasez-le avec l'huile d'olive et les anchois. Sortez les oeufs avec précaution et trempez-les dans de l'eau froide


Frein ar tout mou\n------ Dim 20 Mai 2018, 3:24 pm ------ BIENVENUE Invité ------\npar Invité le Sam 12 Déc 2009, 7:24 pm\nAlors je viens d'avoir ma nouvelle 650 GS et je trouve que la pedale de frein AR est un peu trop molle et qu'il faut beaucoup appuyer pour enfin freiner (course de la pedale beaucoup trop longue à mon gout). L'impression qui ressort c'est qu'on rescend rien sur les premiers mm/cm et ensuite seulement ca freine. Javais regardé et testé en concession des F800 et F650 et j'ai toujours trouvé le freinage arriere (en terme de course de la pedale) identique à mon ancienne.\nJe n'ai jamais purgé ni meme touché mes freins sur mon ancienne moto (peut etre parce que j'ai jamais eu de soucis de ce coté la). Ma moto ayant 3400 bornes et 1an et demi ca me parait bizare.\nCe pourrait il que par quelconque moyens il y ait quelques bulles d'air dans le circuit? Si vous pensez que ca pourrait etre ca, connaissez vous un moyen ou un truc pour virer les bulles d'air et donc permettre à la pedale de se durcir (enfin redevenir normale) sans passer par la case concession (+ d'une semaine de delai) ou purge liquide de frein (qui serait faite par BM car c'est encore sous garantie)?\nRe: Frein ar tout mou\npar Invité le Ven 18 Déc 2009, 10:21 am\nle pb vient aussi de la pédale en acier mou... c'est vrai qu'il n'y a pas trop de frein sur ces brèles. Déjà normalement, il est conseillé de changer le liquide ts les ans (en plus si tu vois que la couleur de celui-ci ds le bocal d'expansion est noire, ils est bon pour la benne !)\nEnsuite, attention en réglant ta garde à la pédale car c'est très fin . Il y a un moment ou tu crois avoir bien réglé la garde (mais en en laissant assez par sécurité) mais il n'y en a pas assez ; les plaquettes chauffent et restent bloquées.....\nje vais poster sur des plaquettes que j'utilise et qui sont géniales à mon gout car on retrouve mordant ET freinage (EBC)\npar jeff34 le Jeu 20 Jan 2011, 8:27 pm\nmon liquide frein arriere est tout noir et je n' arrive pas a régler le frein arriere correctement depuis 2 semaines que j' ai la moto\nil me faut certainement vidanger le frein arrirere\nje purge moi meme mes freins sur mes autres motos mais quid de l' ABS ?\nquelqu' un a t il déja tenté l' opération sur sa moto\nje ne trouve rien nulle part , c' est surement que ça doit etre passage obligé chez bm\npar Invité le Jeu 20 Jan 2011, 9:19 pm\nC'est vrai que moi aussi j'ai toujours trouvé que cette pédale de frein était très molle et pas très efficace. Le concessionnaire me laissant entendre que c'était « normal » sur ce modèle? J'en ai déduis que c'était un défaut de la 800. Mais jamais eu de liquide noir.\npar Invité le Ven 21 Jan 2011, 9:01 am\nLa purge du liquide de frein et l'ABS n'ont rien à voir ensemble. Tu peux purger tes freins sans intervenir sur l'ABS et la réciproque est vraie !\nPar contre, pour bien purger ses freins, il faut avoir l'habitude. Pour ma part, je n'ai jamais bien réussi et je laisse donc ça aux vrais mécanos\nSinon, moi je règle la garde de la pédale de frein grace au système d'écrou contre écrou qui se trouve à l'AR de la pédale de frein. Celui-ci commande la hauteur de la tige qui appui sur le piston du maitre cylindre (sous le petit soufflet plastique amovible).\nAttention quand même, comme dit Rico, le système est assez sensible et il y a un risque de mettre les plaquettes en contact permanent avec le disque avec pour conséquence une usure prématurée des plaquette voir un disque abimé.\nAprès, du liquide de frein noir, j'ai jamais vu ça T'es sur que le bricolo précédent n'a pas confondu lookeed et huile de vidange\npar Quasimoto le Ven 21 Jan 2011, 11:27 am\nLe bocal arr étant très exposé, sur la mienne au bout de 6/9 mois le liquide était bien noir. Changé à la révision des un an/10000 km.\npar jeff34 le Ven 21 Jan 2011, 7:46 pm\nsi tu es sur que le circuit d' ABS est independant du circuit de freinage , je vais tenter la purge a ma façon habituelle éprouvée\nparce que le réglage est vraiment tres sensible sur la tige avec le contre ecrou . j' ai aussi roulé avec les plaquettes serrées et c' est l' odeur qui m' a fait réagir !!\net si je desserre , la pedale descend trop et il faut pomper pour freiner\nen plus l' ABS arriere déclenche presque tout le temps .\nil faut que je purge pour pouvoir tenter de regler ce frein correctement\npar Quasimoto le Ven 21 Jan 2011, 8:46 pm\nLe circuit de purge passe obligatoirement par la centrale hydraulique de l'ABS. On ne touche pas à l'ABS d'un point de vue électronique , mais pour la purge c'est coton !\nSur une 12GS il y a une flopée de vis de purge et il faut absolument le faire dans le bon ordre, ça m'étonnerait fort que sur la 800 ce soit d'une simplicité enfantine. Mais n'ayant pas tenté la chose, ce n'est qu'un avis , disons, prudent.\npar jeff34 le Ven 21 Jan 2011, 8:50 pm\nc' est bien ce que j' avais vu sur les forums GS\net il y a peu etre meme un adaptateur bmw pour purger la centrale ABS\nmais quand j' ai demandé le prix de la purge des freins , bm m' a proposé de faire ça avec la revision annuelle pour 280 euros\npar Quasimoto le Ven 21 Jan 2011, 8:56 pm\nSur ma facture des 10 000 km, il y a 10 roros pour le DOT4 mais la MO n'est détaillée. La facture finale est de 140 euros; certains ont payé 110 pour les 10 000 . , 30 euros la purge ? mais seulement l'arrière en l'occurrence. ce serait plausible en tout cas. 280 pour la totale, là c'est du pur délire !!!\npar Invité le Mar 25 Jan 2011, 2:55 pm\nBon sang ! ça me fait penser que j'ai pas demandé ma facture des 30000 ! Ils l'ont peut-être fait sans me le dire !!!\nPar contre, je ne vois toujours pas pourquoi l'ABS aurait une influence sur la purge des freins ??? Quand on purge les freins, on laisse toujours le circuit en charge on ne fait que faire circuler du liquide neuf par le réservoir en chassant l'ancien par la purge.\nJe ne l'ai jamais fait pour le frein AR mais pour le frein AV je fais comme ça et ça le fait très bien.\npar LoRZo le Mar 25 Jan 2011, 5:55 pm\nLe système ABS de la 800GS est 100% mécanique donc aucune incidence pour la purge, elle se fait "normalement".\nRien à voir avec celui de la 12GS qui a une assistance électrique ou mécanique en fonction du modèle et un répartiteur de freinage AV+AR.\nCependant Jeff je ne pense pas qu'une purge de frein change quoi que ce soit au réglage de celui ci.\nLa couleur du liquide de frein AR devient noir au bout de 6 mois en général, sans incidence sur le freinage mais ça fait pas beau dans le bocal.\npar jeff34 le Mar 25 Jan 2011, 7:04 pm\ndonc cette pedale est vraiment difficile a regler correctement\nj' ai modifié le réglage ce dimanche sur la piste et ça va un peu mieux\nmais je vais affiner ça aux petits oignons avec la position de la pedale a la bonne hauteur pour la trouver facilement sous la botte\nsais tu comment fonctionne cet abs 100% mecanique ?\net ne crois tu pas que le looked noir donc dénaturé perde une partie de ses qualités d' incompressibilité\nDernière édition par jeff34 le Mar 25 Jan 2011, 8:33 pm, édité 1 fois\npar Quasimoto le Mar 25 Jan 2011, 8:11 pm\nL'ABS n'est absolument pas 100% mécanique ( si tant est que cela existe d'ailleurs !) , mais si la purge se fait facilement comme dit capsudmc, faut pas se priver de purger soi même .\npar jeff34 le Mar 25 Jan 2011, 9:10 pm\nje purge a la seringue par la vis de purge vers le reservoir pour faire remonter les bulles en meme temps que le vieux looked que j' evacue du reservoir avec une 2eme seringue.\ndonc si je laisse le circuit en pression je vais au moins purger le looked qui me sert a freiner\nmais comment fonctionne donc cet abs ?\npar Quasimoto le Mar 25 Jan 2011, 10:34 pm\nY'a pas 50 000 façons de gérer un antiblocage; des couronnes avec des trous près des disques, un capteur pas loin et un calculateur (électronique) pour mesurer la vitesse de rotation . Si arrêt il y a , commande d'une électrovanne qui est entre ton maître cylindre de frein (actionné par le levier), pour faire chuter la pression dans le circuit de la roue en train de se bloquer et lui permettre de continuer à tourner. Dès que la rotation redevient normale , l'électrovanne s'ouvre à nouveau pour continuer le freinage si nécessaire. En dessous de 10km/h ( environ) , l'ABS n'est plus actif: sinon on ne s'arrêterait jamais !\nça fait quand même pas mal d'années que ça marche comme ça......\npar COURSEUR81 le Mar 08 Fév 2011, 7:57 am\nLe freinage arrière du 800 était réputé spongieux, voir un moto-revue d'automne 2008 ou hiver 2009, je ne sais plus.\npar contre,la bécane sort de la révision des 11000 Km, et l'action sur la pédale du frein arrière est plus ferme (ce qui n'est d'ailleurs pas plus mal). Il y a eu certainement une intervention du mécano. Faut que je vois ça avec eux.\nA moins que ce soit du à une intervention divine!!!\nTiens je vais retourner à l'église.


Communiqués de presse | La France Mutualiste\nContact presse : Maud de Valicourt\nTél : 01 40 53 78 00\nEmail : communication@la-france-mutualiste.fr\n[Assurance vie] La France mutualiste fait évoluer la garantie de son fonds en euros\nLors d’une assemblée générale extraordinaire, les délégués représentant les adhérents ont arbitré en faveur d’une très légère baisse de la garantie de son fonds en euros. A l’heure où une majorité d’acteurs du marché déportent le risque vers les assurés, confortant une épargne individualisée, La France Mutualiste réaffirme son engagement pour la défense du fonds en euros comme « bien commun » et levier majeur dans la dynamisation et la protection de l’épargne des adhérents.\n[Assurance vie] Taux de rendement 2021 de La France Mutualiste\nLe conseil d’administration de La France Mutualiste, réuni en décembre, a entériné les taux de rendements pour l’année 2021 de son fonds en euros.\n[Nominations] La France Mutualiste renforce son équipe de direction\nDans la perspective du prochain plan stratégique d’entreprise qui sera lancé en 2022, Dominique Burlett, président et Dominique Trébuchet, directeur général du groupe de conseil mutualiste en assurance et en épargne, annoncent 3 nominations, dont 2 arrivées.\n[Fondation d’entreprise] Un taxi de la Marne offert au Mémorial de la Clairière de l’Armistice\nEngagée en faveur de la conservation et de la transmission de la mémoire, la Fondation d’entreprise La France Mutualiste a remis, le lundi 13 septembre, un authentique taxi de la Marne à l’association du Mémorial de la Clairière de l’Armistice (Oise)\n[Engagement social] Découvrez la 1ère promotion « Générations+, l'Appel à projets » de La France Mutualiste\nLes solidarités intergénérationnelles inspirent les entrepreneurs et porteurs de projets dans toute la France.\nParmi les 144 candidatures reçues, 5 projets ont été récompensés d’une dotation financière et d’un accompagnement sur-mesure par l’association Makesense.\n[Engagement social] Génération+, un appel à projets en faveur des liens entre générations\nLieux de vie partagés, échanges de savoir et de savoir-faire entre générations, activités communes, tutorat… Générations +, l’appel à projets de La France Mutualiste vise à soutenir le développement d’initiatives favorisant les liens « qui font du bien ».\nL'appel à projets Générations+\nDécouvrir l'appel à projets\n[Retraite] La France Mutualiste dévoile son Plan d’épargne retraite individuel\nDès son origine, il y a 130 ans cette année, La France Mutualiste s’était donnée pour raison d’être la constitution d’une retraite.\nAvec la loi Pacte, elle a lancé fin décembre son PER affichant un taux de rendement du fonds euros parmi les meilleurs du marché : 1,70 %*.\n[Retraite] Regards croisés : contrairement aux idées reçues des actifs, les retraités sont connectés et optimistes !\nL’originalité de l’enquête menée par La France Mutualiste avec BVA est de croiser le regard des actifs sur la retraite avec celui des retraités eux-mêmes. Exit tricot et mots croisés, les séniors sont actifs et connectés ! Une enquête qui démystifie les idées reçues.\n[Assurance vie] Taux de rendement 2020 du fonds en Euros de La France Mutualiste\nLe conseil d’administration de La France Mutualiste, réuni en décembre dernier, a entériné les taux de rendements pour l’année 2020 de son fonds en Euros.\n[Observatoire] Comment les liens intergénérationnels font-ils grandir la société ?\nPour 37% des Français le lien intergénérationnel va se distendre dans les 30 prochaines années, alors même que pour 91% ces relations sont jugées essentielles pour la construction personnelle.\nÀ l’aide d’une étude menée par l’IFOP, La France Mutualiste dresse un état des lieux du lien entre générations et de son évolution avec la crise de la Covid-19.\n©2022 La France Mutualiste


Le diagnostic home staging - Avis d'experts | BFM Immo\nAvis d'expertsAvis d'expertslundi 31 décembre 2012 à 10h59\nVous avez besoin d’être conseillé pour mieux vendre votre bien ? Le diagnostic home staging est une étape essentielle dans le processus de valorisation. Grâce à un état des lieux détaillé de chaque pièce ciblant les points sur lesquels il est nécessaire d’intervenir, le diagnostic permet d’analyser votre logement afin de comprendre comment le mettre en valeur.\nComment se déroule un diagnostic home staging ? Tout d’abord, le home stager va visiter une première fois l’ensemble de votre domicile avec l’œil critique d’un acheteur potentiel mais saura l’évaluer avec le regard d’un professionnel ! Ensuite, il va réaliser l’état des lieux, pièce par pièce, recoin par recoin, élément par élément. Rien ne lui échappera ! C’est ainsi qu’il pourra répertorier les réparations à effectuer, juger de l’état d’encombrement du bien, estimer l’utilité du mobilier et de la décoration, évaluer les flux de circulation puis suggérer des idées pour valoriser l’ensemble de votre bien.\nQue va-t-il regarder dans les pièces ? Sur quoi son œil va-t-il s’attarder ? A quoi va-t-il faire attention ? Que va-t-il vous conseiller ?\nLes frais d'un home stager\nLa sonnette fonctionne-t-elle ? Si elle ne fonctionne pas, cela donne une mauvaise impression avant même d’avoir commencé la visite ! Le sol est-il en bon état ? Si il y a un tapis, est-il propre ? Y a t ‘il assez de lumière ? Les murs et le plafond sont-ils en bon état ? Si il y a des meubles (console, meuble à chaussures, étagères, porte manteau…), ne sont-ils pas trop encombrés ? Une entrée surchargée ne donne pas envie d’aller plus loin !\nLes murs et le plafond sont-ils en bon état ? Y a-t-il assez de lumière ? Si ce n’est pas le cas, pensez à ajouter des luminaires, à nettoyer les vitres et à ouvrir en grand les rideaux ! Où le canapé est-il installé ? Si il est face à un mur, cela ne donne pas envie de s’asseoir dedans ! Mieux vaut l’installer face à une fenêtre, une cheminée ou une perspective intéressante. Peut-on circuler facilement dans la pièce sans buter sur un meuble ? Pensez à garder au minimum 75 cm entre chaque meuble pour que le futur acquéreur ne se sente pas « coincé » lors de sa visite. Et si il y a des meubles imposants (armoire normande, buffet…), on essaye de les stocker en dehors de chez soi le temps des visites ! La déco ? N’oubliez pas que trop de déco tue la déco. On enlève tout ce qui est trop personnel (photos de famille, souvenirs ramenés de vacances, signes religieux et éléments de déco trop typés). On se crée une déco chaleureuse mais neutre.\nMêmes consignes que pour le salon. Concernant la table à manger, évitez les tables de plus de 6 couverts sauf si votre salle à manger n’est pas intégrée à votre salon et qu’elle fait plus de 10 m2. Et si elle est dans un bois ou un coloris sombre, recouvrez la d’une nappe blanche.\nLes murs et le plafond sont-ils en bon état ? Y a t’il assez de lumière ? Si ce n’est pas le cas, pensez à ajouter des luminaires et à nettoyer les vitres ! Les placards et le carrelage sont-ils au goût du jour ? Si ce n’est pas le cas, pensez aux peintures tous supports qui vous permettront de leur redonner une seconde jeunesse. Pareil pour les poignées de porte. Un petit détail qui peut tout changer. Le plan de travail est-il encombré ? Si oui, rangez tout ce qui n’est pas utile au quotidien. L’électroménager est-il propre ? Des traces de graisse et des miettes qui trainent donnent une impression de négligé. Lors des visites, la cuisine doit être rutilante !\nLes murs et le plafond sont-ils en bon état ? Si la peinture est défraichie, un petit coup de peinture enlèvera l’impression de grisaille. Et si on ne doit repeindre qu’un seul mur, c’est celui de la tête de lit ! Les portes de placard ferment-elles bien ? Si non, on les enlève et on les remplace par un rideau !\nLe linge quand à lui devra toujours correctement rangé lors des visites et pas en boule dans les placards car les visiteurs ouvrent les placards ! Et dans les chambres d’enfants, on fait pareil avec les jouets. Combien y a t’il de chevet ? Même si on vit seul, on doit toujours avoir un chevet de chaque côté pour un lit 2 places. Et pour le linge de lit, on le choisi dans une couleur sobre et unie.\nLes murs et le plafond sont-ils en bon état ? Repeindre un mur de salle de bains est rapide. Et pour le carrelage, si il n’est plus au goût du jour, comme pour la cuisine, pensez aux peintures tous supports. Les luminaires ? Sont-ils suffisants ? Les tâches de calcaire doivent disparaitre. Tout doit briller ! Et le linge de toilette doit être uni et bien plié.\nLe plus important ? La propreté ! Les WC doivent être nickel, la cuvette baissée et si il y a un chat la litière changée ! On évite les mauvaises odeurs avec un coup de pschitt ou une bougie parfumée.\nDans toutes les pièces, on vérifie que les interrupteurs fonctionnent, qu’il n’y a pas d’ampoules à changer, que toutes les prises sont bien fixées, que les robinets ne fuient pas, qu’il n’y a pas de traces de moisissures ni de toiles d’araignées qui trainent, que les poignées de portes sont bien fixées et que les portes de placards s’ouvrent facilement.\nCar ce sont tous ces petits détails cumulés qui seront sujets à négociation !


Qu'est-ce qu'un site vitrine ? | Domaine-Pack.fr\nBLOG | T. 09 50 60 05 85|info@domaine-pack.fr\nAccueil/Blog/Qu’est-ce qu’un site vitrine ?\nUn site vitrine est un outil de communication Web visant à présenter les activités d’une entreprise. Le site vitrine est, tout simplement, un site web destiné à décrire (en quelques pages) votre société, mettre en valeur votre image ou encore vos activités. Il s’agit, en fait, d’une sorte de version en ligne d’un prospectus qui présente vos produits, vos prestations ou votre savoir-faire.\nPour que votre site vitrine soit efficace, nous vous conseillons de soigner le design et le message à véhiculer, afin d’améliorer votre image et d’attirer l’attention des clients, prospects, partenaires ou fournisseurs. En tant que concepteur de sites Internet à Nice, nous vous proposons des services de qualité adaptés à votre besoin et nous vous donnerons ici quelques conseils pour vous aider, grâce à un Site Vitrine, à augmenter votre chiffre d’affaires.\nInternet est aujourd’hui synonyme de dynamisme. L’image de votre société doit évoluer.\nLimiter vos coûts de communication\nUne communication traditionnelle à l’aide de flyers, d’affiches, de plaquettes et d’enseignes coûte cher. Un site Internet vous permet :\n– De multiplier vos prospects\n– D’optimiser votre temps\n– De satisfaire une demande plus importante\nInternet permet de proposer des services supplémentaires à votre clientèle:\n– Consulter votre catalogue directement sur le site\n– Consulter un service d’aide à l’utilisation de vos produits.\nUne visibilité disponible 24h/24 et 7J/7\n– Votre entreprise et votre commerce sont-ils ouverts 24h sur 24 ?\n– N’avez-vous jamais ragé de ne pouvoir obtenir un renseignement avant d’aller physiquement en magasin ?\nUn commercial toujours disponible\n– Entre midi et deux, le soir après le travail, les internautes font leurs courses, planifient leurs dépenses, leurs travaux avec l’aide d’Internet.\n– En créant votre site Internet, vous recrutez un commercial toujours présent et vous mettrez en valeur vos atouts professionnels.\n– De nombreuses personnes apprécient de ne pas être dans une relation commerciale orale, souvent pressante et d’avoir le temps de juger les produits.\nEntre deux entreprises que vous souhaitez consulter l’une a un site Internet, l’autre non :\nLaquelle allez-vous contacter en premier ?\nLaquelle vous semble la plus sérieuse ?\nQue comporte un site vitrine ?\nDe manière générale, un site vitrine professionnel contient :\n3 ou 4 pages pour présenter votre activité, vos produits ou services\nUne page « Qui sommes-nous ? » pour présenter votre équipe et/ou votre entreprise\nUne page de contact avec un formulaire et/ou un plan d’accès\nUne page « Plan de site »\nUne page « Mentions Légales »\nVos prospects ou clients vous recherchent via Internet ?\nLa solution idéale serait de créer un site vitrine pour votre entreprise. En choisissant les services de Domaine-Pack, bénéficiez d’un site vitrine à la hauteur de vos attentes, qui saura parler de vous. Pour que celui-ci reflète parfaitement ce que vous recherchez, nous serons à l’écoute de toutes vos requêtes.\nDomainePack vous propose donc, sur votre site vitrine professionnel, une page d’accueil originale, à même de retenir l’attention du visiteur et de l’inciter à vouloir continuer sa visite sur votre site. Une autre page sera consacrée à présenter vos produits ou vos services.\nDomaine Pack possède les compétences requises pour concevoir un site vitre en technologie Responsive, pouvant vous aider à amener de nouveaux clients. De plus, notre agence Internet basée à Nice peut prendre en charge le référencement SEO de votre site afin d’améliorer votre présence sur Internet et votre visibilité sur Google.\nSi vous désirez avoir votre site web adapté pour les mobiles ou tablettes, Domaine-Pack.fr peut également s’en charger. Spécialisé dans la création de site web en tout genre, nous serons votre partenaire idéal pour vous faire connaître sur le web.\nQue vous soyez sur Nice Côte d’Azur ou partout dans les Alpes Maritimes, vous pouvez dès maintenant nous demander un devis gratuit.\nDomaine-Pack.fr 2017-06-15T14:23:39+00:00 juin 2nd, 2015|Tags: Création Site Internet Professionnel, Création Site Web Nice, Domaine-Pack.fr, Projet De Création De Site Web, Site Internet, Site Vitrine, Site Web|\n229 Bis, Promenade des Anglais\nTÉL. : +33 (0) 9 50 60 05 85\n© 2017 Création et hébergement web Domaine-Pack.fr