Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan | Protocol (Translated to Danish)\nIdentifikation af celleoverflade markører for primær neurale stamme og stamceller ved metabolisk mærkning af Sialoglycan\nPræsenteret her er en protokol, der kombinerer en in vitro neurale-Endothelial Co-kultur system og metabolisk inkorporering af sialoglycan med bioorthogonal funktionelle grupper til at udvide primære neurale stamme og stamcelle celler og mærke deres overflade sialoglycoproteiner til billeddannelse eller massespektrometri analyse af celleoverflade markører.\nNeurale stamme-og stamceller (Nspc'er) er det cellulære grundlag for de komplekse strukturer og funktioner i hjernen. De er placeret i specialiserede nicher in vivo og kan isoleres og udvides in vitro, tjener som en vigtig ressource for celletransplantation til at reparere hjerneskade. Nspc'erne er imidlertid heterogene og ikke klart defineret på molekyleniveau eller renset på grund af manglende specifikke celleoverflade markører. Den forelagte protokol, som tidligere er blevet rapporteret, kombinerer et Neural-Endothelial Co-Culture system med en metabolisk Les mærkningsmetode til at identificere overfladen sialoglycoproteome af primære nspc'er. Det NSPC-endotheliale Co-kultur system giver mulighed for selvfornyelse og udvidelse af primære Nspc'er in vitro, genererer et tilstrækkeligt antal nspc'er. Sialoglycans i dyrkede nspc'er er mærket ved hjælp af en unaturlig sialisyre metabolisk reporter med bioorthogonal funktionelle grupper. Ved at sammenligne sialoglycoproteomet fra selvfornyende Nspc'er ekspanderet i en endotelco-kultur med differentierende neurale kultur, identificerer vi en liste over membran proteiner, der er beriget i Nspc'er. I detaljer omfatter protokollen: 1) oprettelse af en NSPC-Endothelial Co-kultur og NSPC differentierende kultur; 2) mærkning med azidosugar per-O-acetyleret N-azidoacetylmannosamin (AC4Mannaz); og 3) biotin konjugering til modificeret sialoglycan til billeddannelse efter fiksering af neurale kultur eller protein udvinding fra neurale kultur for massespektrometri analyse. Derefter udvælges de NSPC-berigede overflade markør kandidater ved komparativ analyse af massespektrometri data fra både det udvidede NSPC og differentierede neurale kulturer. Denne protokol er meget følsom for at identificere membran proteiner af lav overflod i udgangsmaterialerne, og det kan anvendes til markør opdagelse i andre systemer med passende ændringer\nNeurale stamceller er defineret som en multi potent cellepopulation, der kan selv forny for at opretholde en stamcelle pulje og differentiere sig til neuroner og glia. De er de vigtigste celletyper i nervesystemet og kan tilbyde stort terapeutisk potentiale i regenerativ medicin gennem celletransplantation til syge og sårede hjerner1,2. Efterhånden som udviklingen skrider frem, bliver den neurale stamcelle population heterogene3,4, og andelen af neurale stamceller i hjernen aftager gradvist5. Generelt er embryonale neurale stamceller og andre neurale stamceller, kollektivt kaldet neurale stamme-og progenitorceller (Nspc'er), placeret i avlsmateriale zonerne, ventrikel zonen og den subventrikulære zone i mus6. I den embryonale hjerne genererer neurale stamceller neuroner direkte eller indirekte gennem mellemliggende progenitorceller (IPCS) og i nogle arter gennem den ydre subventrikulære zone forfædre (orgs)7,8. Den specifikke molekylære signatur, morfologi, placering i stamcelle niche, og differentiering potentiale alle bestemme rollen for hver under type i hjernen organogenesen og kliniske anvendelser9. De aktuelt tilgængelige celleoverflade markører kan dog ikke utvetydigt diskriminere og rense forskellige undertyper af Nspc'er, hvilket begrænser forståelsen og udnyttelsen af disse undertyper.\nIdentifikationen af primære Nspc'er overflade markører er begrænset af tre store forhindringer. Den første er det begrænsede celleantal af Nspc'er i vævet, hvilket gør det vanskeligt at forberede celleoverflade protein prøver til almindelig massespektrometri analyse. Den anden begrænsning er vanskeligheden ved at producere rene celle undertyper til generering af subtype-specifikke membran protein data. Endelig er den tredje udfordring det lave forhold mellem celleoverflade proteiner i hele celle proteiner, som hæmmer deres detekteringsfølsomhed ved massespektrometri analyse.\nFor at overvinde disse problemer, vi udviklet en chemoproteomic tilgang til selektivt berige og identificere celleoverflade proteiner i primære Nspc'er ved metabolisk mærkning af sialoglycoproteiner10. For at generere et tilstrækkeligt antal Nspc'er benyttede vi en etableret protokol til at udvide og vedligeholde primære embryonale Nspc'er i udifferentierede stater in vitro, ved at co-culturing Nspc'er med musehjerne endotheliale cellelinjer ved hjælp af en permeabel støtte matrix indsats (f. eks. transwell) system11. I modsætning hertil genererer npscs, som dyrkes alene uden endotelceller, differentieret afkom11,12. Således kan protein prøver fra disse to kultur systemer relativt analyseres for at identificere proteiner, der differentielt udtrykkes i Nspc'er og differentierede neuroner. Da de fleste celleoverflade proteiner modificeres af sialsyre13, blev unaturlig sialsyre forløber analogt N-azidoacetylmannosamin-tetraacyleret (AC4Mannaz) anvendt til at kapre den iboende metaboliske pathway, således at endogene, nyligt syntetiseret sialoglycans er mærket med azido grupper, genererer en kemisk håndtag14. Gennem azido-alkyne-medierede bioortogonale reaktioner, som konjugat biotin til sialoglycans, kan celleoverflade proteiner visualiseres og beriges til proteomisk identifikation gennem en streptavidin-koblet fluoroforet eller matrix14.\nHer udfører vi farvning af SDS-side gel analyse af overfladen sialoglycoproteome fra nspc'er ekspanderet i en endotel Co-kultur og differentiere celler i et ikke-Co-kultur system. Vi renser også selektivt overflade sialoglycoproteome i de to kultur systemer til proteomisk sammenligning. Vores protokol, sammenlignet med de traditionelle Centrifugerings baserede celleoverflade rensning protokoller15, øger ekstraktions effekten ved at reducere overfladen protein udvinding procedurer gennem specifik tag konjugation og affinitet Rensning. I mellemtiden, det øger udvinding renhed af celleoverflade proteiner baseret på den forudsætning, at sialylering sker mest på celleoverfladen proteiner. Selv om endotelfaktorer ikke helt kan blokere differentieringen af ekspanderede Nspc'er, giver den komparative undersøgelse mellem en co-kultur og differentieret kultur en bekvem metode til at lokalisere stamcelle berigede overflade proteiner, uden at det er nødvendigt at Analysér proteiner fra NPC'er renset af FACS16. Vi mener, at denne fremgangsmåde kan anvendes til undersøgelser af overflade proteiner i andre systemer med passende modifikationer.\nAlle de dyre protokoller, der blev anvendt i denne undersøgelse, blev godkendt af IACUC (Udvalget for institutionel dyreomsorg og-anvendelse) på Tsinghua Universitet og udført i overensstemmelse med IACUC'S retningslinjer. Laboratoriet dyre facilitet på Tsinghua Universitet er blevet akkrediteret af AAALAC (Association for vurdering og akkreditering af laboratorium Animal Care International). Til iscenesættelse af embryoner blev midt dagen for det identificerede vaginal stik beregnet som embryon dag 0,5 (E 0,5).\nBemærk: Alle celler dyrkes i celle inkubator under forhold på 37 °C og 5% CO2.\n1. forberedelse af muse Endotelkulturen i permeable støtte skær\nBemærk: BEND3 celler vedligeholdes i henhold til producentens anvisninger.\nForbered BEND3 celle medium (BM) ved at tilsætte 50 mL FBS og 5 mL penicillin-streptomycin i 500 mL DMEM og bland godt.\nAspirer mediet fra skålen og vask BEND3-cellernes kultur med 1 mL PBS én gang. 1 mL 0,25% trypsin-EDTA tilsættes til cellerne, og cellerne inkubates i 4 minutter ved 37 °C.\nTilsæt 1 mL BM i cellerne for at neutralisere trypsin-EDTA og pipetten forsigtigt op og ned for at adskille cellerne fuldstændigt. Cellesuspensionen overføres til en ny 15 mL konisk slange og pellet ved centrifugering ved stuetemperatur (RT) i 5 minutter ved 400 x g.\nOpsug supernatanten fra røret og resuspension cellerne med 9 mL frisk BM, og tilsæt derefter 1 mL cellesuspension til en gennemtrængelig støtteindsats. Tilsæt yderligere 2 mL frisk BM pr. brønd i det nederste kammer i matrixen. Fortsæt med at kultur cellerne for en dag.\n2. forberedelse af mus primære kortikale NSPCs kultur\nFremstilling af kultur plade, papain fordøjelses medium, og kortikale vedet kulturmedium (AM)\nCoat 6-brønd plader med poly-L-lysin (PLL) ved at tilføje 1 mL PLL opløsning pr brønd i 6-brønd plader. Derefter inkubatér pladerne ved RT i 30 min.\nPLL-opløsningen overføres til et 15 mL konisk rør. Vask pladerne 3 gange med dobbeltdestilleret vand. Airdry pladerne og læg dem til side indtil brug.\nForbered papain fordøjelses mediet ved at tilføje 50 U papain, 50 μL L-glutamin og 50 μL af 100 mg/mL Acetyl-L-Cystein i 5 mL DMEM. Bland mediet kortvarigt og opvarmer det til 37 °C i 30 minutter for Enzymaktivering.\nForbered den kortikale celle vedet kulturmedium (AM): Tilsæt 500 μL L-glutamin, 500 μL natriumpyruvat, 500 μL af 100 mg/mL N-acetyl-L-Cystein, 500 μL N2, 1 mL B27 og 5 μL 100 μg/mL bFGF til 50 mL DMEM. Bland mediet godt og varm det til 37 °C før brug.\nForberedelse af primære cerebral kortikale celler og efterfølgende plating\nOffer en E 10.5 timet gravid mus ved livmoderhals dislokation.\nBemærk: Ved E 10.5 er størstedelen af cellerne prolifererende Nspc'er i hjernebarken, hvilket giver anledning til store kloner af afkom in vitro.\nSteriliser maven med 75% ethanol. Brug fine sakse og mikro-serrated tang til at åbne maven ved at skære huden og underliggende muskler langs højre side af den midterste linje. Fjern livmoderen fra bughulen forsigtigt med savtakket æg tang og skær den ud fra bughulen med fin saks.\nLivmoderen vaskes med 40 mL forkølet HBSS i 10 cm Petri skål. Derefter overføres livmoderen til en ny 10 cm Petri skål og vaskes igen med 40 mL forkølet HBSS.\nLivmoderen overføres til en ny 10 cm Petri skål med 40 mL forkølet HBSS. Fjern embryonerne fra livmoderen og Foster membranen, og skær derefter hovedet af embryonerne ud fra stamperne med Jewelers micropincet.\nHovederne vaskes med 40 mL forkølet HBSS, og hovederne overføres til en ny 10 cm Petri skål med 40 mL forkølet HBSS. Brug Jewelers mikropincet til at skrælle hud og brusk, der dækker hjernen, og skær derefter de cerebrale corticer af og saml dem i et 15 ml konisk rør med forkølet hbss.\nPellet corticer ved centrifugering i 3 min ved 4 °c og 300 x g. Aspirer supernatanten fra røret, og tilsæt derefter aktiveret papain-fordøjelses medium og 15 μL 4 mg/mL DNase i i vævs pellet.\nResuspendere vævs pellet kortvarigt ved blid vortexing. Inkuber vævet ved 37 °C i 30 minutter. I løbet af denne tid, løsne vævet ved kort vortexning hver 10 min.\nBemærk: Ved afslutningen af fordøjelsen, bør der ikke være synlige væv stykker i røret.\nPellet de kortikale celler ved centrifugering i 10 min ved 4 °C og 450 x g. Du aspirerer supernatanten fra røret og vasker celle pellet med præ-kølet DMEM. Gentag dette trin én gang.\nBemærk: Under fordøjelsen og vask, Vær forsigtig med ikke at pipettere væv og celle pellet groft for at undgå at beskadige cellerne med en stærk klippe kraft.\nAspirer supernatanten fra røret og tilsæt derefter 1,5 mL forkølet HBSS ind i røret. Dissociere den kortikale celle pellet i enkeltceller med blid pipettering. Tæl celle nummeret med et hemocytometer.\nTilsæt 2 mL AM og 2 x 104 kortikale celler pr brønd til 6-brønde plader. Pladen inkubates ved 37 °C og 5% CO2 i 3 timer for at lade cellerne binde sig til pladen.\n3. opsætning af Neural-Endothelial Co-kultur og AC4Mannaz mærknings system\nEn dag efter plating BEND3 celler i skær, forsigtigt aspirere mediet i nederste kammer først, så skær. Vask den enface af skær 3 gange med præ-varmet DMEM. Vask den udvendige overflade af skær ved skylning med præ-varmet DMEM.\nTilsæt 1 mL pre-varmet AM i en indsats, og overfør derefter skær i brøndene med primære kortikale celler. Medkulturen ved 37 °C og 5% CO2 i 12 timer.\nAC4Mannaz OPLØSES i DMSO for at opnå en lager koncentration på 200 mm. 12 h efter opsætning af Neural-Endothelial Co-kultur tilsættes 1 μL AC4Mannaz-bestand pr. bund kammer og 0,5 μl bestand pr. indsats i co-kulturen. Ryst pladerne straks og forsigtigt for at blande mediet godt. For kontrol cellerne tilsættes samme mængde DMSO.\nKultur cellerne i yderligere 5 dage ved 37 °C og 5% CO2. Forbered AM med 10x bFGF som refeeding medium (RM). I denne periode tilsættes 100 μL RM pr. indsats og 200 μL RM pr. bund kammer for at genfodre endotel og neurale celler hver anden dag. Under genfodring, ikke levere AC4Mannaz eller DMSO ind i kulturen.\n4. Immunofluorescent farvning af Sialoglycoproteiner i ekspanderede primære Nspc'er og differentierede neuroner\nForbered BTTAA-CuSO4 Complex 1 30x Stock, der indeholder 1,5 mm CuSO4 og 9 mm bttaa i dobbeltdestilleret vand. Forbered frisk biotin-konjugeret buffer 1 indeholdende 50 μM biotin-alkyne, 2,5 mM natriumascorbat og 1x BTTAA-CuSO4 -kompleks i PBS.\nFjern skær fra Co-kultur pladerne. Aspirer kulturmediet fra bunden brønde og vask neurale celler en gang med præ-varmet PBS.\nAspirere PBS fra brøndene. Tilsæt 1 mL forkølet 4% paraformaldehydopløsning pr. brønd ind i cellerne, og fastgør cellerne ved RT i 10 minutter. Derefter vaskes cellerne 3 gange med præ-kølet PBS.\nAspirer PBS fra brøndene og tilsæt 1 mL frisklavet biotin-konjugeret buffer 1 pr. brønd ind i cellerne. Inkuber cellerne ved RT i 10 min.\nAspirer reaktions bufferen fra brøndene. Vask cellerne 3 gange med PBS. Forbered farvnings bufferen indeholdende 1% FBS og 1 μg/mL Alexa fluor 647-streptavidin. Tilsæt 1 mL farvnings buffer pr. brønd ind i cellerne, og Inkuber cellerne ved RT i 30 minutter.\nUdsug farvnings bufferen fra brøndene og de vaskede celler 3 gange med præ-kølet PBS. Den blokerende buffer, der indeholder 5% BSA og 0,3% ikke-ionisk rengøringsmiddel-100 i PBS, forberedes. Tilsæt 1 mL blokerende buffer pr. brønd ind i cellerne og Inkuber ved RT i 10 min.\nDer fremstilles en primær antistof opløsning ved at fortynde anti-nestin-og anti-β-Tubulin III-antistoffer sammen i blokerende buffer i forhold til henholdsvis 1:20 og 1:1000. Fjern blokerings bufferen fra brøndene og tilsæt 1 mL primær antistof opløsning pr. brønd ind i cellerne. Cellerne inkubates ved 4 °C natten over.\nFjern den primære antistof opløsning fra brøndene. Vask cellerne 3 gange med præ-kølet PBS. Forbered en sekundær antistof opløsning ved at fortynde Alexa fluor 488 Goat anti-Mouse IgG1, Alexa fluor 546 Goat anti-Mouse IgG2b og DAPI sammen til blokerende buffer ved en fortynding på 1:1000. Du aspirerer PBS fra brøndene og tilfører 1 mL sekundær antistof opløsning pr. brønd til cellerne. Inkuber cellerne ved RT i 2 timer.\nAspirer antistof opløsningen fra brøndene og vask cellerne 3 gange med præ-kølet PBS. Bagefter er cellerne klar til billedoptagelse.\n5. rensning af Sialoglycoproteiner fra ekspanderede primære Nspc'er og differentierede neuroner\nForbered BTTAA-CuSO4 kompleks 2 15x lager, der indeholder 1,5 mm CuSO4 og 3 mm bttaa i dobbeltdestilleret vand. Forbered protein opblanding buffer A indeholdende 4% SDS og 10 mm EDTA i dobbeltdestilleret vand; protein opblanding buffer B indeholdende 150 mm NaCl, 50 mm triethanolamin og 1% polyoxyethylen oleyl ether (f. eks. Brij97) i dobbeltdestilleret vand med pH 7,4. Før brug blandes buffer a:buffer B = 1:8 (Vol/Vol) for at tilberede den fulde protein opblanding buffer. Forbered protein vaskebuffer 1 indeholdende 2% SDS i PBS; protein vaskebuffer 2 indeholdende 8 M urinstof i 250 mM ammoniumbicarbonat (ABC); og protein vaskebuffer 3 indeholdende 2,5 M NaCl i PBS.\nFjern skær fra Co-kultur pladerne. Aspirer kulturmediet fra bund brøndene og vask de neurale celler én gang med præ-kølet PBS.\nAspirer PBS fra brøndene og tilsæt 200 μL præ-kølet RIPA buffer per brønd ind i pladerne. Inkubér pladerne på is i 5 min. Saml protein lysis i 1,5 mL rør. Pellet celle resterne ved centrifugering i 10 min ved 4 °C og 12.000 x g.\nSupernatanten overføres til nye 1,5 mL rør. Bestem proteinkoncentrationen med BCA-kittet i henhold til producentens anvisninger. Juster proteinkoncentrationen til 1 mg/mL.\nTilsæt 100 μM alkyne-biotin, 2,5 mM natriumascorbat, og 1x BTTAA-CuSO4 kompleks 2 til 1 ml protein lyse og bland opløsningen godt. Bland blandingen ved RT i 1 time.\nReaktions opløsningen overføres til 20 mL forkølet methanol i et 50 mL konisk rør. Bland godt og Inkuber ved-30 °C natten over for at fremskynde proteinerne.\nPellet protein udfældet ved centrifugering i 15 min ved 4 °C og 4.500 x g. Protein pellet vaskes to gange med 20 mL forkølet methanol. Aspirer supernatanten fra røret. Opblanding af protein pellet med 4 ml protein opblanding buffer og overføre protein opslæmning til et nyt 15 ml konisk rør.\nTag 50 μL streptavidin perler og vask dem 3 gange med PBS. Tilsæt de vaskede perler i proteinet resuspension. Opløsningen inkubates ved 4 °C i 3 timer på en lodret rotator ved en rotationshastighed på 20 rpm.\nVask perlerne sekventielt med 6 typer af buffere: protein vaskebuffer 1, protein vaskebuffer 2, protein vaskebuffer 3, 0,5 M ABC, 0,25 M ABC og 0,05 M ABC.\nEfter vask, resuspension perlerne med 20 μL PBS og overføre perlerne til en ny 1,5 mL rør. Tilsæt 20 μL 2x protein loading buffer i perlerne og Behandl ved 95 °C i 10 min. Protein prøverne skal derefter underkastes SDS-side og farves med Coomassie Brilliant Blue R-250 i henhold til producentens anvisninger. Skær proteinerne i gel som indikeret af Coomassie Brilliant Blue R-250 for massespektrometri analyse.\nHele proceduren for in vitro-ekspansion og metabolisk mærkning af primære embryonale Nspc'er tager 6 dage (figur 1a). Kvaliteten af BEND3 cellelinje og nyisolerede primære Nspc'er er nøglen til et vellykket eksperiment. BEND3 celler er kilden til opløselige faktorer, der stimulerer selvfornyelse og spredning af Nspc'er. Det bør sikres, at de BEND3 celler er fri for enhver kontaminering og opdele aktivt med minimal celledød før Co-culturing med neurale celler. De primære Nspc'er skal forberedes omhyggeligt for at undgå overskydende skader under dissociationen. Beskadigede Nspc'er kan stadig vokse og differentiere; Men, de er ikke i stand til at reagere på endotelstimuli godt at opretholde stemthed og udvide. Ekstra forsigtighed bør tages for at være aseptisk under celledyrkning, da protokollen ikke foreslår tilsætning af antibiotika til det primære dyrkningsmedium.\nVellykket endotel Co-kultur vil føre nspc'er til at danne store, ark-lignende kloner. Sådanne Fremhævede klon figurer bliver tydelige på dag 4 og er meget typiske på dag 6. I klonerne bevarer cellerne tæt kontakt med hinanden. Immun farvning med antistoffer mod NSPC markør Nestin og neuronal markør β-Tubulin III bør afsløre, at i klon, de fleste af cellerne er Nestin+ nspc'er og meget få er β-Tubulin III+ neuronal celler. I modsætning hertil er procentdelen af Nestin + celler og β-Tubulin III+ neuronal celler i klon dannet i ikke-Co-kultur system næsten det samme (figur 1b, 1dog 1E).\nDen kemiske reporter, AC4Mannaz, er en metabolisk analog og kan inkorporeres i den iboende protein sialylationsvej. Høje doser af AC4Mannaz er giftige for celler. For hver specifik type celle skal mærknings koncentrationen af AC4Mannaz testes på forhånd for at opnå den højeste mærknings effektivitet uden signifikant cytotoksicitet. Her, den optimerede mærkning koncentration af AC4Mannaz for primære nspc er 100 ΜM. kombinatorisk evaluering af celledød indikeret af cellulære og kerner morfologi tyder på, at denne mærkning koncentration ikke forårsager indlysende cytotoksiske virkninger og er effektivt at kunne mærke Nspc'er (figur 1c og 1d). Den klonale morfologi, selvfornyelse og differentierings potentiale for Nspc'er i både det endoteliale samkultur-og ikke-Co-kultur-system påvirkes ikke (figur 1c, 1dog 1E).\nDen vellykkede mærkning af Nspc'er ved AC4Mannaz kan undersøges efter konjugering af biotin til en kultur, der er medieret af en bioorthogonal reaktion mellem Azid og alkyne. Hver celle i AC4Mannaz-mærket kultur er plettet og visualiseret med Alexa fluor 647-streptavidin. Ingen celle er positiv for Alexa fluor 647-streptavidin farvning i DMSO kontrolgruppen. Desuden protein prøver fremstillet af AC4Mannaz-mærket kultur ved biotin konjugering og streptavidin perler rensning viser stærk Coomassie strålende blå farvnings signal i SDS-side gels. I mellemtiden var der kun farvnings baggrund og uspecifikke bindings signaler i banerne lastet med protein prøver fra DMSO-kontrolgruppen. Dette indikerer også en effektiv mærkning af Nspc'er ved AC4Mannaz (figur 1f).\nFigur 1 : Identifikation af celleoverflade markører for primære Nspc'er bistået af endotel Co-Culture system og metabolisk sialoglycan-mærkning. (A) skematisk af arbejdsprocessen for protokollen. Dette tal er blevet modificeret fra Bai et al. 10. de BEND3 celler er seedet i matrix skær på d0. Udarbejdelsen af primære kortikale Nspc'er og etablering af co-kultur system udføres på D1. Metabolisk mærkning af kultur varer fra D2 til D6. Kultur genfodring udføres på D3 og D5. B) immunfluorescent billeder for kloner dannet af primære nspc'er efter 5-dages kultur med eller uden endotelceller. Skala bjælke angiver 20 μm. C) lyse feltbilleder for kloner dannet af primære Nspc'er efter en 5-dages kultur med AC4Mannaz eller DMSO. Kerner blev modfaret af DAPI. Skala bjælken angiver 20 μm. Fejl bjælken indikerer SEM (n.s. = ikke signifikant). D) immunfluorescent billeder for nspc dannede kloner i endotelco-kulturen med AC4Mannaz eller DMSO. Stiplede cirkel afgrænses beskyttelses en enkelt neurale klon. Skala bjælken angiver 50 μm. E) kvantificering af Nspc'er og differentierede neuroner i kloner dannet af Nspc'er i endotel-Co-kultur og ikke-Co-kultur system med AC4Mannaz-mærkning eller DMSO-kontrol. Fejl bjælken indikerer SEM (* * * p < 0,0005; n.s. = ikke signifikant). F) coomassie Brilliant blå farvning af proteiner renset af streptavidin perler fra neurale celler mærket med AC4Mannaz eller DMSO i endotel Co-kultur og nonco-kultur system. 55 kD-båndet i kontrol mærknings grupperne repræsenterer uspecifikke binde proteiner. (B, C, E og F), som svarer til denne protokol, er blevet tilpasset fra Bai et al. 10. Klik venligst her for at se en større version af dette tal.\nOverflade markører bruges almindeligvis til at mærke og rense specifikke celletyper in vitro og in vivo17,18. Opdagelsen af overflade markører bidrager i høj grad til regenerativ medicin og stamcelleforskning ved at give molekylære værktøjer til selektivt at berige en stamcelle population fra normale eller patologiske væv og kultur retter, der tilbyder en renset celle ressource til klinisk brug eller undersøgelse af biologiske egenskaber. Men fremskridtene med at udvikle overflade markører for neurale stamcelleforskning har været langsom på grund af vanskeligheden ved at isolere stamceller fra primære væv. Den her beskrevne protokol er baseret på en forenklet in vitro-platform. Ved at sammenligne primære Nspc'er, der er udvidet af en endotelco-kultur til en differentierende neurale kultur, fremhæves proteiner, som differentielt udtrykkes i ekspanderede Nspc'er, og giver mulighed for yderligere identifikation. Vores protokol giver også en alternativ strategi til at rense celleoverflade proteiner ved at kapring den iboende metaboliske vej til at mærke sialoglycan med bioorthogonal grupper. Sammenlignet med traditionelle protokoller for rensning af celleoverflade proteiner er fordelene ved denne protokol understøttet af to specifikke træk: 1) forekomsten af sialylering på celleoverflade proteiner sikrer maksimal dækning af cellens overflade proteome, og 2) reaktions specificiteten mellem den bioortogonale gruppe og dens ligander giver renhed af den erhvervede overflade proteome. Således resulterer vores protokol i en mere følsom proteomisk analyse i tilfælde af mindre råvarer. Vi har demonstreret gennemførligheden af denne protokol i primære NSPCs overflade markører. Med de relevante modifikationer på ekspanderende stamceller in vitro, denne chemoproteomic tilgang kan være kompatibel med at identificere overflade markører af andre stamcelle typer. Det er bemærkelsesværdigt, at som Ac4ManNAz er per-O-acetylated det kunne føre til kunstig S-glykosylering. Brugen af uacetylerede unaturlige sukker kan undgå artefakt dannelse og forbedre specificiteten og gyldigheden af metabolisk Les mærkning i levende celler19.\nForberedelse af primære kortikale neurale stamceller og endotelceller er kritiske trin i protokollen. Først, når fordøje embryonale kortikale væv, fordøjelsestid, mængden af enzym, og styrken af håndteringen skal være omhyggeligt kontrolleret. Overdreven fordøjelse og mekaniske klippe kræfter vil skade integriteten af plasma membran-og celleoverflade receptorer, der formidler signaltransduktion for cellernes overlevelse og vækst, og de vil også forstyrre Nspc'er for at stimulere endotelceller og deres evne til selvfornyelse. For at opnå korrekt fordøjelse, skal eksperimenta aktivere papain fuldt ud og stoppe fordøjelsen, så snart vævs blokkene forsvinder. For det andet, BEND3 celler skal opretholdes i en sund tilstand for at støtte sekretionen. Det anbefales at bruge BEND3 celle batches med færre passager og passage cellerne, før de når 100% sammenløbet. Dette vil forhindre celle cyklus anholdelse og senescens forårsaget af DNA-skader akkumuleret under passaging eller ved overfyldte kontakt mellem celler.\nHigh gennemløb sekventering Technology øger identifikationen af celleoverflade markører gennem analyse af RNA-udtryk, især for celletyper, herunder vævs stamceller, som ofte er til stede in vivo i mængder for små til at udføre proteom analyse ved Massespektrometri. Selv om RNA-SEQ-analysen kan identificere gener, der specifikt udtrykkes i Nspc'er, afspejler det måske ikke i virkeligheden protein ekspression, fordi RNA-udtryk ikke altid er i overensstemmelse med protein ekspression20. Desuden kan ikke-protein-biomolekyler, der fungerer som overflade markører, ikke påvises ved transkriptomic-undersøgelser. For eksempel, oligosaccharid Lewis X er en velkendt overflade Maker meget brugt til at mærke humane embryonale stamceller og nspc'er, selv om det kan være forbundet med flere proteiner21. Derfor er direkte massespektrometri analyse endnu ikke substituerbare, og udviklingen af metoder, der kan gøre massespektrometri analyse mere gennemførlig og bekvem, er af stor interesse for fremtidige undersøgelser.\nUd over sialylering spiller andre typer post-translationelle protein modifikationer en vigtig rolle i reguleringen af funktioner af modificerede proteiner. Disse modifikationer påvirker protein egenskaber såsom kropsbygning, Half-Life, og subcellulære lokalisering22,23. Flere protein modifikationer har celletype specificitet24,25,26. Med det stigende indhold af den kemiske værktøjskasse, mere modifikation typer er modtagelig for metaboliske mærkning med kemiske journalister27. Derfor kan den kemiske fremgangsmåde, der er beskrevet her, anvendes til at studere andre forskelle i protein modifikation mellem stamceller og differentierede celler, hvilket illustrerer de molekylære mekanismer bag vedligeholdelse af stamcelle egenskaber og differentiering Forordning.\nForfatterne har intet at offentliggøre.\nFigur 1b, 1C, 1E og 1f gengives fra Bai et al . 10 med tilladelse fra Royal Society of Chemistry. Vi takker Yi Hao i X. C. 's Lab for figur redigering. Dette arbejde støttes af Kinas National Natural Science Foundation (nr. 91753206 til Q. S. og X. C., nr. 31371093 til Q. S., og NOS. 21425204 og 21672013 til X. C.).


Parkering på Smørumvej, Brønshøj-Husum | ParkeringsInfo.dk\nParkering på Smørumvej\nSmørumvej har 142 parkeringspladser og er lokaliseret i bydelen Brønshøj-Husum i København. Smørumvej er placeret udenfor de gængse betalingszoner i København. Du skal dog stadig være opmærksom på eventuelle skiltninger, som kan forekomme og eventuelle private parkeringsområder som kan kræve betaling ved parkering.\nLæs mere om parkering på Smørumvej her\nData på denne side omrking Smørumvej er tilføjet i perioden 14-02-2012 til 29-01-2020. Der kan forekomme ændringer i informationer, zoner, antal parkeringspladser og skiltning. Data må kun ses som vejledende. Siden indeholder blandt andet data fra Københavns Kommune.\nRestriktioner på Smørumvej\nDer er 2 restriktioner langs Smørumvej. Du skal derfor være opmærksom på eventuel skiltning ved vejen. Klik på de enkelte ristriktioner herunder for at se mere information på kortet.\n» Parkeringsforbud: 8-9 15-16


Fire Siege Fortress Online spillemaskine - NetEnt Casino Slots\nFire Siege Fortress Spillemaskine\nFire Siege Fortress Spillemaskine unknown\nFire Siege Fortress Online Slot\nOpret en konto og lav din første indbetaling; modtag 10 daglige freespins de næste 30 dage på den nye livlige online spillemaskine Fire Siege Fortress; aktiver din 100% bonus ved at gå til “Mine bonusser” før du kommer i gang med dit spil! Her på asgardcasinodk kan du spille gratis på Fire Siege Fortress for at afprøve spille. På nuværende tidspunkt kan du spille Fire sige Fortress med rigtige penge!\nVi bliver konstant imponeret over hvad den svenske spilproducent NetEnt kan finde på, men deres nyeste online spillemaskine, Fire Siege Fortress, overgår alle vores forventninger. Fire Siege Fortress er en lækker spillemaskine der giver en spiloplevelse som minder mere og mere om et computerspil, at det næsten er skræmmende.\nNetEnt har formået at skabe en online spillemaskine med et middelalderligt tema om riddere, drager, katapulter og bueskytter. Musikken sidder lige i skabet og det hele bindes sammen med en forrygende grafik i topklasse. Det er ikke svær at se at NetEnt har fået inspiration til Fire Siege Fortress fra Game of Thrones.\n576 måder at vinde gevinster på Fire Siege Fortress\nSelve spillet går ud på at jagte forskellige symboler der hver især giver adgang til diverse bonusrunder med unikke gevinster. Spiller man Fire Siege Fortress vil man støde ind i masser af free spins bonusfeatures såsom Fire Siege Free Spins, Fire Free Spins og Tower Coin Win som alle udøser ekstra gevinster på hver deres måde. Det klassiske Wild symbol er nøglen til at udløse de tre andre unikke mini bonusfeatures som Archer Attacks, Dragon Breath og Trebuchet Assaults.\nFire Siege Fortress spilles på 5 hjul med 4 rækker og et utal af gevinstmuligheder. I Fire Siege Fortress er der ikke nogen udbetalingslinjer; gevinster udbetales så længe der er ens symboler synlige på nærliggende hjul, som tæller fra venstre til højre I Fire Siege Fortress ligger minimumsindsatsen på 2 kroner og der kan satses helt op til 2.000 kroner. Derudover ligger gevinstprocenten på hele 96,01%!\nBonusrunder og bonusfeatures på Fire Siege Fortress slot\nI Fire Siege Fortress kan man støde ind i 3 forskellige bonusfeatures som udløser forskellige gevinster:\nFire Siege Free Spins – udløses ved at ramme tre Crown Scatter symboler vilkårligt på hjul 1, 3 og 5. Hvilken som helst Crown på øverste række vil udløse seks Free Spins, hvorimod Crowns hvilken som helst på hjulene udløser tre.\nFire Free Spins – rammer man to Crowns og en af dem er på øverste række, udløser det tre Free Spins.\nTower Coin Win – lægger en multiplikator på 5x oven i gevinsten\nUdover ovennævnte bonusfeatures kan Wild symboler dukke op vilkårligt på all hjul og udløse yderligere mini bonusfeatures:\nArcher Attack – en til tre Wild symboler bliver lagt oveni hjulene\nDragon’s Breath – hjul 3 bliver fuldstændig Wild\nTrebuchet Assault – en eller to gigantiske Wild symboler bliver lagt oveni hjulene\nDog kræves det, at Wild symbolet lander på bestemte positioner på hjulene, for at udløse disse specielle bonusfeatures. Wild symbolet skal ramme i bunden af hjul 2, 3 og 4. Wild symbolet erstatter alle andre symboler på nær Scatter symbolet.\nKonklusion på Fire Siege Fortress\nFire Siege Fortress er en super online spillemaskine med en spiloplevelse ud over det sædvanlige. Med et hav af gevinstlinjer krydret med en maksimum indsats på 2.000 kroner gør, at man kan vinde en formue på Fire Siege Fortress.\nFire Siege Fortress er spækket med underholdning og overraskelser i hvert eneste hjørne. Denne spillemaskine har meget mere at byde på, men vi vil ikke spolere det for læserne. Gå over eller og find ud af det selv. Spillere får lige nu udover en stærk 100% indbetalingsbonus på 1.000 kroner desuden 300 eksklusive gratis spins! Tag udfordringen op i Fire Siege Fortress!


» Billige Plantegødning på nettet – Se hele listen her\nTemmelig mange online firmaer udlover nu til dags diverse billige leveringsudgaver til plantegødning. Den mest populære er nu til dags at få afleveret pakken hos en pakkeshop, hvor det er meget fleksibelt at kunne hente din nyindkøbte vare når det passer ind i din hverdag. Løsningen er jo temmelig simpel, og i mange tilfælde tilmed den mest prisbevidste form for levering.\nDu bør ydermere foretrække at få pakken leveret til hvor du bor eller til adressen på dit arbejde. Leveringsformen er til tider et hak mere bekostelig, men tillige super gnidningsløs ved køb af plantegødning online. Den mest betalelige fragtløsning er uden tvivl at du selv henter ordren, men den mulighed beroer på at du fysisk befinder dig tæt på e-handlens byggecenter, eksempelvis Jem og Fix, Harald Nyborg, Bauhaus eller Silvan.\nLeveringstidspunktet på plantegødning kan være ekstremt relevant når vi har brug for produktet straks, så i det øjemed er det relativt relevant at vi ser det anslåede leveringstidspunkt ved plantegødning. De fleste internet webshops – eksempelvis Harald Nyborg, Bauhaus, Jem og Fix og Silvan – præsterer billig dag-til-dag fragt på deres bedst sælgende varenumre online, men som trods alt afhænger af at handlen gemmenføres inden et fastsat klokkeslæt, så de højst sandsynligt kan nå at få produkterne afsted før lagerpersonalet holder fyraften.\nEnkelte byggecentre lover gratis levering på plantegødning online, men tit kun såfremt der bestilles for et fastsat beløb. I øvrigt kunne man vælge den mest billige fragtløsning, der i mange tilfælde vil være at få fragtfirmaet til at bringe din ordre til en pakkeshop.\nDe største byggemarkedskæder foreslår click-and-collect hvor du køber billig plantegødning derhjemme og selv henter i byggemarkedet. For eksempel Harald Nyborg, Bygma, 10-4, Stark, Bauhaus, Davidsen, Jem og Fix, Silvan og XL-Byg. Byggemarkederne tildeler blandt andet klik-og-hent på plantegødning i disse byer:\nViborg, Tilst, Odder, Ikast, Vallensbæk, Hedehusene, Virum, Hobro, København, Herning, Fredericia, Lystrup, Åbyhøj, Helsingør, Nyborg, Birkerød, Brønderslev, Brønshøj, Thisted, Solrød Strand, Lillerød, Middelfart, Hedensted, Frederiksværk, Risskov, Kalundborg, Ringsted, Frederiksberg, Albertslund, Brabrand, Køge, Rødovre, Vordingborg, Værløse, Frederikshavn, Søborg, Haderslev, Hvidovre, Skive, Hillerød, Stenløse, Randers, Ølstykke, Greve, Horsens, Grenaa, Nykøbing Falster, Brøndby, Skanderborg, Slagelse, Charlottenlund, Nørresundby, Farum, Svendborg, Rudersdal, Nærum, Roskilde, Højbjerg, Vejle, Tårnby, Rønne, Ishøj, Kokkedal, Vanløse, Gladsaxe, Sønderborg, Jyllinge, Gentofte, Lyngby, Varde, Taastrup, Herlev, Hjørring, Ballerup, Frederikssund, Holstebro, Silkeborg, Glostrup, Odense, Dragør, Aalborg, Næstved, Esbjerg, Aabenraa, Allerød, Kolding, Aarhus, Haslev, Hørsholm, Nakskov, Holbæk, Valby, Struer, og Korsør, .\nClick-and-collect af plantegødning er en mulighed i de fleste regioner af landet: Jylland (Sydjylland, Sønderjylland, Syddanmark, Nordjylland, Vestjylland, Midtjylland, Østjylland), Fyn (Midtfyn, Nordfyn, Vestfyn, Østfyn, Sydfyn) og Sjælland (Midtsjælland, Lolland, Hovedstaden, Bornholm, Amager, Vestsjælland, Sydsjælland, Nordsjælland, Østsjælland, Falster).\nVed indkig i tallene fremstår det tydeligt, at folk mange gange søger efter blandt andet billig plantegødning og plantegødning priser. Vi ser desuden som regel internet shoppere kigge efter blandt andet plantegødning tilbud, køb plantegødning samt plantegødning online, foruden de store byggemarkeder som Davidsen, 10-4, Bygma, Harald Nyborg, Jem og Fix, Silvan, Stark, Bauhaus og XL-Byg.\nGode tilbud på plantegødning\nDet er jo efterhånden rigtig ukompliceret for almindelige dødelige at tjekke tilbud på billige plantegødning online på flere firmaer på nettet, og for det har flertallet af internet shops ikke kunne lade være med at nedsætte udsalgspriserne på plantegødning enormt, og derudover garantere levering uden gebyr.\nDog kan det stadigvæk vise sig udbytterigt at efterse nogle forskellige internet butikker efter tilbud og udsalg på plantegødning online forinden du bestiller, således at man ikke er i tvivl om at få fat i den mest billige pris. Kig ikke kun på de velkendte byggecentre som Davidsen, Harald Nyborg, Jem og Fix, Bygma, Stark, XL-Byg, Bauhaus og Silvan.\nDu må lige meget hvad ikke glemme, at hvis en shop på nettet afsætter billige plantegødning online for en tilbudspris der anses for himmelråbende beskeden, så burde det mange gange være et bevis på en snydagtig internet webshop. Shopping med kort er på den anden side inkluderet i en anordning, der støtter os overfor svindlende online firmaer.\nGenerelt foreslår vi køb med betalingskort eller mobilbetaling. Som en anden løsning bør du drage nytte af en afdragsordning som for eksempel ViaBill, for så vidt du har i sinde at afbetale prisen på plantegødning over en længere periode. Det foreslåes ofte i specialiserede netshops, men ikke de store byggemarkeder som for eksempel Silvan, Harald Nyborg, Stark, 10-4, Davidsen, Jem og Fix, Bauhaus og Bygma.\nVed indkig i tallene fremstår det klart, at netshoppere som regel søger fx plantegødning online og billig plantegødning. Derudover oplever vi mange gange folk lede efter eksempelvis køb plantegødning, plantegødning priser samt plantegødning tilbud.\nTrustpilot yder fuldt ud relevante chancer for at bese ret mange aktuelle køberes betragtninger og derved går vi ind for, at du tjekker online forhandlerens omtaler forud for at du shopper billige plantegødning online.\nFacebook fremskaffer på samme måde altid pæne genveje til at få indsigt i webshoppens kundetilfredshed. Tilmed møder vi nogle e-shops hvor du kan levere en anmeldelse af købsoplevelsen, hvilket lige så vel bør tages i brug til vurdering af tilfredsheden hos kunderne.\nFør nogen handler billige plantegødning online hos en e-forretning bør man de facto gennemse webbutikkens handelsvilkår, men det er tit en omfattende opgave, særligt på de gængse byggecentre som Jem og Fix, XL-Byg, Bygma, Stark, Bauhaus, Harald Nyborg, Silvan, Davidsen og 10-4.\nEn anden løsning kan derfor være at efterse hvorvidt netbutikken er godkendt af e-mærket, hvilket skulle være et bevis på at e-forretningen føjer de danske love, foruden at netshoppen rutinemæssigt besøges af jurister der kender vilkårene på området.\nDette er desuden en god genvej til opbakning, såfremt du bliver udsat for vanskeligheder i forbindelse med din bestilling af plantegødning. For øvrigt anbefales det at du er obs på de mest centrale retningslinjer der gælder for bestillingen af plantegødning online, f.eks. hvilken returrettighed internet selskabet benytter.\nI den forbindelse er det tillige vigtigt, at man når som helst beholder ens faktura e-mail, således man altid vil kunne vidne om sin bestilling af plantegødning, uagtet om man har handlet hos XL-Byg, Davidsen, Bygma, Silvan, Harald Nyborg, 10-4, Bauhaus, Stark eller Jem og Fix.


Få renset dit udstyr i klinisk forstand – Artindex\nHjem/Ukategoriseret/Få renset dit udstyr i klinisk forstand\n299 1 minuts læsning\nI dag er der mange brancher, som skal bruge klinisk rent udstyr. Det betyder også, at man må tage andre midler i brug Det er blandt andet her at ultralydrensning kommer ind i billedet, som også er brugt i mange tilfælde i dag. Det er her hvor man kan opleve komplet rensning af sine redskaber, udstyr og så videre. Her kan man vide sig sikker på, at der ikke bliver efterladt nogen former for spor af førhenværende projekter eller indgreb.\nDet er eksempelvis på hospitaler og lignende steder, at man oftest ser sådan nogle maskiner komme i brug. Her kan man forstille sig sådan noget som operationsbordet får en tur, samt alle ens redskaber og værktøjer man bruger, når man opererer på folk. Det efterlader en spotløs overflade, og alt andet lige gør det klar til brug hos den næste. Det kunne også være at mekanikershoppen har brug for en, for at kunne blive ved med at bruge deres brugte værktøj.\nFind din næste forhandler af ultralydrensere her\nSkal man ud og indkøbe sådan en maskine eller flere af dem, kan man også finde nogle gode produkter hos anmasi. Her kan man i hvert fald forsikrer sig en god kvalitet, og samtidig få en god pris for produktet. Så det er et udmærket sted, at få udleveret sin næste ultralydrenser. Det er ofte et krav på nogle arbejdspladser, og det er af ren og skær sikkerhedsmæssige årsager og for hygiejnens skyld.\nFind en rigtig god model her, og få den bestil hjem med det samme. Du får et produkt som enten stammer fra en række standardløsninger, men også med muligheden for specialiserede løsninger. Så der er helt sikkert noget, som nok skal kunne dække alt hvad man har behov for. Det er sågar noget, som man også kan bruge privat, hvis det er man har nogle smykker eller lignende, som har brug for en oprensning. Så her er der også noget værdi at hente.\nSpis lækker aftensmad hver dag!


Så hænger det der.. – Catarina.dk Så hænger det der.. – Catarina.dk\nSå hænger det der..\n..og om lidt er det sikkert også helt tørt og klar til at komme oveni bunken med allerede meget strygetøj.\nJeg nusser rundt, mens Søren er kørt til København\nReply\tPia 22. april 2007 at 15:35\nStrygetøj, må erkende at jeg ikke stryger andet end end skjorte i ny og næ, resten blir lagt pænt sammen og så må det være sådan. Altså hvis noget er helt vildt krøllet får det selvfølgelig en tur:)\nReply\tDeborah 22. april 2007 at 16:39\nDet første der ville ske, hvis jeg vandt en stor sum penge i lotto el. på anden måde, ville være at ansætte en til at stryge og gøre rent for mig 😉 Uha, det er en af mine “blive bedre til ting” – altså noget jeg skal stramme op på. Lige nu går jeg heller ikke så meget op i tøjet p.g.a vægten, men når det hele engang bliver som det skal så skal der også styges – for så har jeg også fået fint nyt tøj – hm, lad os nu se *griner* Håbet er lysegrønt 😉\nReply\tHege 22. april 2007 at 16:44\nJeg kan kjenne lukten av soltørket tøy. Mmmmm!!!! Og her regner det fortsatt.\nReply\tPia 22. april 2007 at 19:03\nJa, solen nåede heller aldrig her til, såk manne, mon ik den så tager ekstra tilløb imorgen?\nMit tøj blev dog alligevel tørt, så det gik alligevel helt godt:)\nReply\tCatarina 23. april 2007 at 06:21\nPia, så er det prøvet, sengetøjet blev glattet lidt og derefetr lagt på plads. 😉\nJeg har også tit spekuleret over det med at få hjælp, men tanken om en fremmed i huset afholder mig. Held og lykke med vægten 😉\nJa, Hege der er næsten ikke noget bedre 🙂\nJeg håber du får sol i dag Pia.


Nye læsekoncepter og idéer søges | Læsesporet\nForside » Til biblioteker »\nSådan kan I få jeres læsekoncept på læsesporet.dk\nKriterier for læsekoncepter på læsesporet.dk\nHvad betyder det at være konceptejer på læsesporet.dk?\nSådan deler I jeres inspiration til læselyst og ny viden om læsning\nHvad mangler I på læsesporet.dk?\nBibliotekerne er sammen om læsesporet.dk. Det er her, vi deler. Deler vores bedste læselystindsatser med hinanden. Her finder du oplysninger om, hvordan du deler - hvad enten det drejer sig om et læsekoncept eller en hamrende god idé til at skabe masser af læseglæde i biblioteket, i skolen eller hjemme hos familierne.\nHar I et godt læsekoncept på jeres bibliotek, som I vil dele med landets øvrige biblioteker? Så se med her! Orienter jer først og fremmest i de læsekoncepter, der er på læsesporet.dk. Hvis det koncept, I har, skiller sig ud og i øvrigt lever op til de kriterier, I finder herunder, så læs videre. Fælles for alle læsekoncepterne er - og skal være - at de omhandler læsning og giver gode muligheder for at styrke børn og unges læselyst.\nFor at sikre en fortsat kvalitet i de læsekoncepter, der formidles på læsesporet.dk, er der en række kriterier, som koncepterne skal leve op til. Kriterierne er udarbejdet af indsatsgruppen bag Bibliotekernes Læsespor i samarbejde med forsker Stine Reinholdt Hansen.\ner afprøvet af rigtige børn, fagprofessionelle og/eller forældre\nfagprofessionelle har gjort sig erfaringer og oplevet succes med konceptet\nkan formidles digitalt\nkan skaleres op og ned, så det kan bruges af både små og store biblioteker\nkan strække sig over en længere periode eller involvere større grupper af deltagere\nhar fokus på læsning og læselyst hos børn i skolealderen\ninddrager aktuelle samarbejdspartnere som fx skolen, fritidsordninger eller andre biblioteker\nHar I et læsekoncept, som I vil dele, og kan I sætte kryds ved de fleste af kriterierne så klik på boksen herunder, udfyld skabelonen og send den fluks til laesesporet@aalborg.dk. Herefter vil indsatsgruppen vurdere de indsendte koncepter og tage stilling til, hvilke der skal på læsesporet.dk i løbet af 2022.\nSkabelon til læsekoncept 2022\nBliver jeres læsekoncept udvalgt til læsesporet.dk sættes en samarbejdsproces i gang mellem jeres bibliotek og Bibliotekernes Læsespor. Det er konceptet, der afgør, om processen bliver en tilpasnings- og tilretningsproces, eller om der i processen også er brug for videreudvikling af konceptet. Konceptet klargøres i et tæt samarbejde mellem jeres bibliotek og arbejdsgruppen bag Bibliotekernes Læsespor. Der vil være en grafiker tilknyttet konceptet, som kommer med udkast til grafikken til jeres koncept ud fra de ønsker, I måtte have. Som konceptejer er det jeres opgave at vedligeholde konceptet og de materialer, der hører til indenfor en årrække.\nHar I spørgsmål til det at være konceptejer? Send en mail til laesesporet@aalborg.dk\nSend også inspiration og viden til laesesporet@aalborg.dk. På Læsesporet skal der nemlig være et hav af idéer og inspiration til forskellige læseaktiviteter og -tiltag, som kan bruges af og på bibliotekerne rundt om i landet. Det kan være inspiration og gode idéer til booktalks, læsequizzer, læselege eller noget helt fjerde.\nPå sigt vil læsesporet.dk indeholde en bred og varieret vifte af viden om børn og unges læselyst, læsevaner og læsekultur. Del. Din. Viden.\nEfterspørger jeres samarbejdspartnere i skole eller fritidstilbud et særligt tilbud med fokus på læsning og læselyst? Har forældrene hos jer et ønske om eller en idé til noget specielt, der kan styrke læselysten hjemme hos dem? Eller har jeres bibliotek måske et særligt behov for noget, der kan være til glæde for brugerne af læsesporet.dk - og som endnu ikke er her? Så skriv til os. Bibliotekerne er sammen om læsesporet.dk. Det er her, vi deler.


Blitzwolf® BW-BR5 3 I 1 Bypass Bluetooth V5.0 Audio Transmitter Modtager 3,5 mm Aux Trådløs Audio Adapter Lav latens 80 m / 262ft Lang rækkevidde til TV PC Hovedtelefon Bilstereoanlæg Hjemmelydsystem COD\nBypass, sender og modtager 3 i 1\nBypass-tilstand: Uden en Bluetooth-forbindelse passerer lyden fra indgangene til udgangene.\nSendertilstand: Gør dit tv / computer / bærbar computer til en Bluetooth-aktiveret enhed. Du kan lytte til lyden fra dit bluetooth-headset og se en film eller spille et spil uden at forstyrre nogen.\nModtagertilstand: Tilslut BR4 til dit hjemhøjttalersystem / bilstereo / hovedtelefoner, og gør det til en Bluetooth-lydenhed. Du kan derefter forbinde din smartphone eller anden Bluetooth-enhed og afspille musik trådløst.\nBC8675-chippen giver dig Bluetooth V5.0 og optisk lydoutput til en virkelig universal trådløs løsning.\n≤264ft Trådløs forbindelsesområde\nIndbygget antenne, op til 80 meter (264ft) lang rækkevidde og stabil transmission, der deler din lyd fra indendørs til udendørs.\nTransmission af optisk fiber\nFrekvens 2.4GHz - 2,48GHz\nInterface Micro USB, 3,5 mm AUX, optisk input / output\nDriftsområde RX: 20-40 meter\nOutput lydformat Stereo analog lyd, optisk fiber digital lyd\nIndgang lydformat Stereo analog lyd, optisk fiber digital lyd\n1 x Blitzwolf® BW-BR5 Bluetooth V5.0 musiklydmodtager


En hel del e-forhandlere tildeler efterhånden en lang række forskellige leveringsformer. Førstevalget hos mange er for nærværende pakkeshops, hvor du så selv henter bestillingen præcis når det passer dig. Fragtformen er nemlig vældig let, og desuden derudover den prisbilligste leveringstype ved køb af .\nDu bør alternativt prøve at bestille ordren til levering til din lejlighed eller hus eller til når du er på job. Fragttypen bliver som regel en tak mere omkostningsfuld, men desuden ret ukompliceret. Den prisbilligste fragtløsning vil dog i de fleste tilfælde være selv at hente varerne, som desværre betinges af at du fysisk befinder dig nær internet shoppens adresse.\nLeveringstiden på er selvfølgelig ekstremt udslagsgivende om man skal bruge produkterne nu og her, så i det øjemed er det naturligvis centralt at vi ser nærmere på det forventede leveringstidspunkt på den vedkommende vare.\nEn stor portion e-firmaer i Danmark garanterer muligheden for dag-til-dag levering på en lang række af deres varer, eksempelvis , men som ikke desto mindre forudsætter at bestillingen laves tidligere end et fastsat klokkeslæt, således at de kan nå at få bestillingen klar forinden logistikmedarbejderne har fri.\nFlere webbutikker yder gebyrfri levering, men oftest afkræver det at der bestilles for en bestemt pris. Alternativt skulle man snuppe den mest letkøbte fragtmetode, som i mange tilfælde – uden hensyn til om du opholder sig ved Aalborg, Vordingborg eller Hammel – vil blive at få fragtmanden til at bringe ordren til en pakkeshop.\nDet er jo efterhånden usædvanlig fremkommeligt for internetbrugere at finde frem til de bedste priser hos forskellige outlets på nettet, og for det har en hel del internet forhandlere set sig tvunget til at reducere prisniveauet på en række af deres varer – til drenge og piger, lige så vel som til voksne – helt i bund, og endda nogle gange byde på portofri levering.\nTil gengæld kan det til hver en tid blive smart at sammenholde nogle forskellige internet butikker efter rabat på før du gennemfører dit køb, sådan at man er garanteret at opnå den bedste pris.\nMan bør blot være omhyggelig med, at i tilfælde af at en e-forhandler reklamerer bedst i test varer til en pris der virker hamrende beskeden, burde det for det meste være et bevis på en uægte internet virksomhed. Kortbetalinger er trods alt dækket ind under en anordning, som passer på køberen imod svindlende internet shops.\nVi slår generelt et slag for betalinger med kort eller mobilbetaling. Som en anden løsning kunne du udnytte en løsning på afbetaling som f.eks. ViaBill, såfremt du gerne vil betale prisen over et længere tidsrum.\nForinden nogen bestiller hos en e-shop bør man uden tvivl tage stilling til webshoppens forretningsbetingelser, dog er det for det meste et omfattende arbejde.\nEn anden løsning kunne måske være at granske hvorvidt internet selskabet er tilsluttet e-mærket, siden det bør være et kendetegn for at e-shoppen respekterer de opstillede regler, udover at webshoppen undertiden monitoreres af eksperter som har indsigt i lovene på området. Det er en rigtig god genvej til at få hjælp, for så vidt du får udfordringer i processen med dit køb.\nDesuden stiller vi forslag om at køberen er sat ind i de mest basale regler der har indvirkning på bestillingen, fx hvilken returpolitik netbutikken tilsikrer. I den sammenhæng er det desuden afgørende, at man stadig sikrer ens ordrekvittering, så man altid kan bekræfte sin bestilling af , uden hensyn til om man efterspørger produkter til en pige eller dreng.\nTrustpilot indebærer fuldkommen pålidelige muligheder for at efterse mange andre køberes oplevelser og herved er det en hjælp, at du efterforsker internet forhandlerens bedømmelser af inden du køber.\nFacebook resulterer i lige så vel fuldt ud stabile chancer for at få en idé om e-forretningens popularitet. Desuden ses faktisk online outlets som giver kunderne mulighed for at udfærdige en omtale af deres køb, hvilket på samme måde burde drages fordel af til at bedømme tidligere kunders oplevelser.\nDenne hjemmeside finansieres af annoncer. Vi arbejder sammen med en del online forretninger når vi fremviser butikkernes tilbud, og indkasserer provision om en bruger fra vores hjemmeside fuldfører et køb.\nInformationer angående tilbud og butikker på nettet opdateres nu og da, men man kan ikke stille os ansvarlig for forandringer der eventuelt er iværksat siden seneste opdatering af websitets oplysninger.


Video: Tycho Brahes grav åbnes | Illvid.dk\nEt dansk ledet forskerhold løftede mandag stenen af Tycho Brahes grav i Týnkirken i Prag. De jordiske rester af astronomen undersøges nu for at få løst mysteriet om, hvorfor den danske astronom døde. Var det mord, fejlmedicinering, sygdom eller kviksølv, der tog livet af Tycho Brahe i en alder af kun 54 år?\nI kisten fandtes velbevarede rester af hår, kranium og hjerne, som der nu foretages dna-analyser på. På fredag, når Tycho Brahe genbegraves, har retsmedicinere og forskere forhåbentlig nok materiale til at kunne kortlægge omstændighederne omkring Tycho Brahes død.


KOM I GANG MED AT SNORKLE - blaaoplevelser.dk\nBlå oplevelser er bedst under vand! Men har du ikke snorklet før, skal du sætte dig ind i udstyr, sikkerhed og meget andet. Vi giver dig her en liste over udstyr og gode råd til din snorkeltur, så du får den bedste oplevelse under overfladen.\nSnorkling er en sjov aktivitet, der er forholdsvis lige til. Det kræver slet ikke lige så meget udstyr og træning som at dykke med flaske, og er derfor en god måde at komme tættere på det spændende liv, der gemmer sig under overfladen. Men inden du kaster dig ud i det, er der stadig nogle ting, der skal være på plads for at sikre at du får dig en god og sikker snorkeltur.\nEr du nybegynder er det en god idé at starte på lavt vand ved en strand, du kender. Du kan i første omgang nøjes med dykkermaske, snorkel og svømmefødder. Øv dig i at svømme roligt i overfladen, mens du kigger ned på bunden. Selv på en ganske almindelig dansk sandstrand er der masser at se. Stimer af tobiser og kutlinger kan ses i vandsøjlen på lavt vand, og små rejer, krabber og tangnåle gemmer sig omkring tang og sten.\nPRØV UDSTYRET I EN BUTIK\nDet er nemt og fristende at bestille en dykkermaske, snorkel og svømmefødder over nettet. Men pasform og kvalitet er alfa omega, hvis du skal have en god og tryg oplevelse, og derfor bliver du nødt til at prøve det først. Det kan du gøre i en dykkerbutik eller andre butikker, der sælger udstyr til vandsport.\nMASKEN skal være blød, behagelig og sidde tæt uden at stramme for meget. Silikone masker er blødere og mere fleksible end gummi og plastik. Sørg for at der ikke sidder hår i maskekanten, der kan gøre at vandet siver ind. Du kan IKKE bruge almindelige svømmebriller, når du skal snorkle. Maske skal dække næsen så du kan trykudligne, hvis du dykker et par meter eller mere ned. Inden du bruger masken første gang, skal du rense glassene med tandpasta, det forhindrer at de dugger. Det er dog altid en god idé lige at købe noget anti-dug med når du er i dykkerbutikken.\nSNORKLEN er den, du skal trække vejret igennem, når du ligger i overfladen. Den bliver fyldt med vand, når du dykker ned og du skal derfor have en snorkel, der er nem at tømme for vand med et enkelt, kraftigt pust. De fleste vælger en snorkel med ventil i bunden, der letter tømningen. Når du er ude ved vandet så øv dig i at dykke ned, lade snorklen fyldes med vand, og tøm den igen i overfladen inden du tager første åndedrag.\nHold øjnene åbne, for der er masser af liv under overfladen.\nSVØMMEFØDDERNE eller finnerne, er din motor under vand. Det er dem, der skaber fremdrift og giver dig mulighed for at nå ned på lidt dybere vand. Der findes to slags finner; til bare fødder og til neoprensokker/støvler. Finner til bare fødder er kun til om sommeren, når vandet er varmt. Når du vælger finner til bare fødder skal du igen prøve dem på fødderne inden du køber dem. Det kan nemlig være at du skal have en anden størrelse end dit vanlige fodtøj. Her er blødhed og kvalitet også vigtigt. Ligesom med dykkermasken skal finnerne være behagelige at have på og sidde så godt fast at de ikke falder af når du sparker med fødderne, men samtidig ikke give dig vabler.\nFinner til koldere vand har en rem i hælen, som du kan spænde ind. De skal bruges med neoprensokker eller –støvler og kan bruges i koldere vand. Så hvis du forventer at du også vil snorkle i foråret og efteråret, kan du lige så godt købe dem fra start. Dog skal du være opmærksom på at neoprenen skaber opdrift, så dine fødder flyder mere i overfladen og du skal sparke lidt hårdere for at komme ned på dybderne.\nNår du er mere øvet og tryg ved dit udstyr, kan du begynde at udforske nye steder og tilføje udstyr. Vil du gerne dykke ned på dybere vand, er det en god idé at investere i en våddragt og et blybælte. Våddragten til snorkling bør være 3 eller 5 mm tyk. Bliver den meget tykkere har den enormt meget opdrift og du skal derfor bruge mere bly for at kunne dykke. En våddragt skal også prøves først, for den skal sidde tæt, så den ikke hurtigt fyldes med vand og den skal give dig fleksibilitet, så du kan bevæge dig frit i vandet.\nHvor meget bly, du skal have på afhænger af mange ting; hvor stor du er, hvor tyk din dragt er og hvor dybt du kan dykke. De fleste snorklere med våddragt bruger mellem 2-8 kg, men prøv dig frem. Det skal være nemt at ligge under vandet uden hele tiden at stige til overfladen, men det må heller ikke være svært for dig at komme op, og du skal ikke bruge energi i overfladen på at holde dig oppe.\nSørg for at finde det rigtige udstyr, der passer lige til dig og er i høj kvalitet.\nDer er en række gode råd og sikkerhedsregler, du bør følge, når du skal snorkle. Hvis du vil være helt på den sikre side er der mange dykkercentre og svømmehaller, der tilbyder snorkelkurser. Her lærer du om udstyr, sikkerhed og teknikker.\nAFPRØV DIT UDSTYR I EN SVØMMEHAL\nSå er du sikker på at det sidder rigtigt og behageligt. Du får afprøvet følelsen af at være under vand, hvordan udsynet er, og hvordan du bruger finnerne til at komme frem i henholdsvis overfladen og under vand. Her kan du også øve dig i at holde vejret og se, hvor dybt du kan komme – men pres ALDRIG dig selv udover hvad der føles nemt og godt. Øv dig også i at trykudligne ved at holde for næsen uden på masken og pust luft ud af næsen. Du mærker et pop i ørene og så har du trykudlignet. Det skal du bruge, hvis du dykker på lidt dybere vand. Du kan mærke når det er tid til at trykudligne, for så føler du et let pres mod ansigt og ører.\nTAG ALDRIG UD ALENE\nSelvom snorkling er en let og sikker aktivitet, er det altid bedst at være minimum to, så man kan hjælpe hinanden. Man kan f.eks. få et ildebefindende eller bliver overrasket af strøm på et sted, man ikke kender. Der skal være nogen, der ved hvor I er og hvornår I forventer at være tilbage. Sørg for at have pakket masser af vand, snacks, solcreme og at telefonerne er opladet hjemmefra.\nVær nysgerrig og nyd dyrene og planterne, men stress dem ikke ved at tage fat i dem, holde dem fanget osv. Selvom vi kun har en giftig fisk i Danmark, kan man skære sig på rurer og muslinger. Man kan også skrabe sig på sten hvis man kommer for tæt på. Så hold afstand for både din egen og dyrenes skyld. Læg i stedet og kig i huler og sprækker og under tang, så ser du masser af liv. Selv på sandbunden gemmer der sig masser af fladfisk.\nHAV ALTID EN BØJE OG EKSTRA UDSTYR MED\nBrug en oppustelig markeringsbøje, når du snorkler. Placer den et fast sted ved at binde den på f.eks. en sten, hvis du vil opholde dig i samme område. Bevæger du dig fra A til B, kan du binde en lille bøje fast til dit blybælte, rundt om livet etc. så bøjen følger dig. Bøjen er for din sikkerhed, så du ikke risikerer at blive sejlet ned.\nEkstra udstyr er også en god idé at tage med. Der findes ikke noget værre end at være helt klar til at hoppe i vandet for at opdage at maskeremmen er knækket. Hav derfor ekstra af remmer, stropper, mundstykker, bly med. Tag evt. også en UV lygte med, hvis du vil opleve de sande farver under vand, eller det er overskyet eller halvmørkt. En sjov og lærerig ting at have med er også bøger, kort eller lignende, så I efter dykket kan identificere alle de dyr og planter, I har set!\nSkyl ALTID dit udstyr i ferskvand efter det har været udsat for saltvand og sand. Så holder det kvaliteten og sikkerheden længere.\nStart i det små på lavt vand et sted, du kender godt.


Le maree Lorena i Porto Azzurro til Bedste Pris-garanti | Agoda.com\nVal di Capanne 13, Porto Azzurro, Porto Azzurro, Italien, 57036 - Se på kort\nMere om Le maree Lorena\nLe maree Lorena er indrettet til både ferie- og forretningsrejsende og ligger idéelt i Porto Azzurro; én af byens mest populære beliggenheder. Herfra har gæster glæde af nem adgang til alt, hvad denne livlige by kan tilbyde. Med sin praktiske beliggenhed tilbyder dette hotel nem adgang til byens vigtigste seværdigheder.\nLe maree Lorena tilbyder fremragende service samt alle de basale bekvemmeligheder der skal til for at nyde et skønt ophold. Gæster der opholder sig på dette vidunderlige hotel kan blandt andet benytte sig af familieværelse.\nAtmosfæren på Le maree Lorena afspejles på hvert eneste værelse. altan/terrasse, fjernsyn, tekøkken, køleskab, bruser er blot nogle af de faciliteter der kan findes på ejendommen. Hotellets rekreative faciliteter, som have, er indrettede med ro og afslapning i mente. Le maree Lorena er et idéelt sted for rejsende der efterspørger charme, komfort og bekvemmelighed i Porto Azzurro.\nDu bedes give Le maree Lorena besked om, hvornår du regner med at ankomme. Du kan gøre dette ved at skrive til hotellet i boksen "Særlige anmodninger" når du booker, eller du kan kontakte overnatningsstedet. Du finder kontaktoplysningerne på din reservationbekræftelse. Ved ankomst opkræves et skadesdepositum på 100 EUR. Depositummet er fuldt refunderbart ved udtjekning, såfremt der ikke findes skader ved inspektion af værelset.


Læhegn? Se Husejerens anbefalinger\n✓Du skal kende de betingelser webshoppen udsteder i forbindelse med dit køb online, så du undgår problemer med fx reklamationer. Man bør derfor læse byggeshoppens handelsbetingelser.\n✓Nogle byggekæder præsterer et bredt udvalg af produkter, imens andre er specialiserede i en specifik type af vare. Du skal gennemtænke hvorvidt det er essentielt for dig at du har mange forskellige produkter at vælge i blandt, udover blot læhegn.\n✓Hvis du vil have varerne hurtigst muligt eller blot ønsker at slippe for leveringsgebyret, så kan du tænke over at hente produkterne personligt. Det er navnligt muligt ved de gængse byggekæder.\n✓For nogle er byggeri lig med en stor portion spørgsmål. Hermed bør du vælge et online byggecenter, hvor du bliver tilbudt tips og tricks til valg af læhegn.\n✓Det er absolut utrolig vigtigt at se, om det produkt du vil købe online overhovedet er tilgængelig i det pågældende byggecenter. Som alternativ må du finde et andet.\n✓Du vil finde variationer i prisen på billige læhegn fra byggemarked til byggemarked. En del fokuserer på billige priser, imens nogle fokuserer på faglig rådgivning. Du skal reflektere over hvad du foretrækker.\n✓De store byggemarkeder forhandler varer fra adskillige specialbutikker, og derigennem kan du handle fra et bredt sortiment af læhegn online.\n✓De store byggekæder finder du nær dig, og derigennem har man adgang til at købe online og transportere produkterne på eget initiativ. Derved kan du overveje at slippe for fragtgebyret, samt ovenikøbet få fat i varerne lige nu.\n✓De store byggemarkeder er populære og velkendte forretninger, hvilket kan give en tryghedsfornemmelse når man skal handle online. Det vil nogle se fordele ved.\n✓Forskellige webshops med fokus på et smalt varesortiment er opstartsfirmaer, der typisk er danske, givetvis endda lokalt i dit område. Disse kan du hjælpe ved at købe læhegn online på deres side.\n✓Majoriteten af webshops i små nicher har ekstra meget forstand på deres varer, idet de kun sælger disse varer. Altså formår de at yde en høj grad af god rådgivning fra mennesker med ekspertviden i netop læhegn.\n✓Hovedparten af webshops som fokuserer skarpt på nogle få produkter står selv for produktion af de produkterne der sælges i de store byggekæder. Når du køber direkte hos nicheforretningerne online bør du få en billig pris.\nStark blev stiftet i 1896, og udgøres i dag af mere end 2.000 kollegaer i deres 72 varehuse. Stark tilstræber salg til professionelle, og omsætter årligt for ca. 7 milliarder kroner.\nBygma kom frem i 1952, og lønner i dag ca. 2.300 medarbejdere i de 56 varehuse. Bygma satser på at sælge til professionelle, og omsætter årligt for omkring 5 milliarder kroner.\nJem og Fix blev stiftet i 1988, og udgøres nu af omkring 2.100 mennesker i deres 122 varehuse. Jem og Fix satser på gode tilbud til private, og omsætter årligt for over 2 milliarder kroner.\nDavidsen blev stiftet i 1944, og beskæftiger i dag cirka 1.000 personer i forretningens 9 byggecentre. Davidsen fokuserer primært på billige priser til private og professionelle, og afsætter årligt for i nærheden af 2 milliarder kroner.\n10-4 startede i 1947, og beskæftiger nu ca. 100 kollegaer i virksomhedens 6 varehuse. 10-4 specialiserer sig i at sælge til private og professionelle, og omsætter årligt for omtrent 500 millioner kroner.\nHarald Nyborg blev stiftet i 1904, og omfatter i dag omkring 2.000 personer i firmaets 33 butikker. Harald Nyborg satser på salg til private, og omsætter årligt for mere end 5 milliarder kroner.\nXL-Byg åbnede i 2002, og udgøres i dag af omkring 2.000 kollegaer i forretningens 104 butikker. XL-Byg satser på billige priser til private og professionelle, og afsætter årligt for over 5 milliarder kroner.\nBauhaus begyndte i 1988, og udgøres i dag af over 1.000 medarbejdere i selskabets 17 varehuse. Bauhaus er specialiseret i at sælge til private, og omsætter hvert år for omtrent 2 milliarder kroner.\nJohannes Fog startede i 1920, og omfatter i dag omkring 500 kollegaer i virksomhedens 9 butikker. Johannes Fog fokuserer primært på salg til private, og afsætter årligt for cirka 1 milliard kroner.\nSilvan kom frem i 1968, og omfatter i dag ca. 1.000 medarbejdere i virksomhedens 41 varehuse. Silvan fokuserer primært på salg til private, og afsætter hvert år for over 1 milliard kroner.\n1Du bør tænke over om du selv bør stå for hele projektet, eller du skal investere i eksperthjælp til færdiggørelsen af det. Hvis du skal have hjælp fra en fagmand kan du spare penge ved at at indhente en pris fra en håndfuld virksomheder.\n2Det er meningsfuldt at du har de nødvendige bygningsmaterialer parat forud for at du indleder håndværket. Du kunne med fordel nedskrive en simpel indkøbsliste hvor der bør fremgå alt hvad der er nødvendige, og dernæst tjekke listen, så du føler dig tryg ved at alt er som det skal være.\n3Godt forarbejde viser sig som metoden til at komme i mål med dit byggeprojekt. Du må lave en velovervejet arbejdsplan, der beskriver hvilke opgaver der laves på hvilke dage, og en tilhørende numerisk orden. Det anbefales at være skarp idet du sammensætter oversigten.\n4Du bør på ingen måde nedprioritere din sikkerhed, så glem ej sikkerhedsbeklædning herunder arbejdshjelm som beskyttelse imod eventuelle skader. Det er afgørende at du husker sikkerheden i dit byggeprojekt, specielt såfremt du ikke har eksperthjælp.\n5Der præsenterer sig utvivlsomt uforudsete problematikker når det gælder omfattende opgaver, og på grund af det viser det sig værdifuldt at man afsætter rigeligt med tid i agendaen, således at man føler sig selvsikker på at nå det inden ens deadline.\n6For byggeprojekter udendørs har eventuelt regnvejr en betydningsfuld rolle. Af den grund skal du løbende tage et kig på vejrforudsigelserne i perioden for arbejdets start, så det ikke med et brag går i gang med at regne nøjagtig som du er midt i dit ellers velplanlagte byggeprojekt.\n7Det kan være nyttigt at få en hjælpende hånd til dele af projektet, hovedsageligt ved store byggeopgaver. Store byggeprojekter behøver flere personer. Desuden vil det vise sig bedre og mere interessant at lave arbejdet med andre.\n8Inden du påbegynder byggeprocessen kan det være ekstremt centralt med et tilsagn om, at byggeriet ikke er i strid med loven. Alt efter din boligtype vil der være en række retningslinjer for, hvad du gerne må, samt hvad der ikke kan lade sig gøre.\n9Det er muligt at hente offentlig støtte til byggeprojekter. Det gives i tilfælde af at projektet gør en forskel for miljøet. Den økonomiske støtte er altså betinget af at byggeprojektet har betydning for klimaet.\n10Du må aldrig fattes arbejdsredskaber. Ofte kan det være fordelagtigt at du har grejet disponibelt akkurat som du igangsætter byggeprojektet. Desuden er det afgørende at indkalkulere de her udgiftsposter i det økonomiske overblik.\n11Der er vældig mange artikler og videoer via internettet hvor du kan få gratis hjælp. Navnligt YouTube tilbyder dig vældig meget gavnlig information, navnligt ifald man benytter engelske søgeord.\n12Ofte vil det vise sig af stor betydning at lave et regnskab for projektet, så du har styr på penge-delen af det. Det kan vise sig at være fordelagtigt at kortlægge alle omkostninger, og bagefter undersøge ens omkostning ved dem én efter én.\nBauhaus.dks score på Trustpilot er 4,3 ud af 5, som i særdeleshed er absolut godt arbejde. Evalueringen er regnet ud fra 23.161 ratings, hvor ikke mindre end 69 % har givet maksimum point, og kun 8 % har givet den laveste karakter. På nuværende tidspunkt har Bauhaus.dk 56.023 Facebook-fans.\nPå Trustpilot har 10-4.dk en score på 4,7 ud af 5, som i særdeleshed er fantastisk beundringsværdigt. Bedømmelsen tager udgangspunkt i 19.208 anbefalinger, hvoraf intet mindre end 84 % har givet den højeste karakter, og alene 2 % har givet den laveste karakter. Indtil videre har 10-4.dk 43.202 Facebook-fans.\nHarald-Nyborg.dks bedømmelse på Trustpilot er 4,6 ud af 5, som altså er hamrende overlegent. Karakteren er et gennemsnit af 28.109 bedømmelser, hvoraf imponerende 76 % giver den bedste karakter, og alene 4 % giver 1 stjerne. Til dato har Harald-Nyborg.dk 8.857 Facebook-fans.\nDavidsenShop.dks Trustpilot-bedømmelse er 4,7 ud af 5, hvilket selvfølgelig er ret så imponerende. Scoren er baseret på 11.467 bedømmelser, hvoraf ikke mindre end 86 % har givet den bedste karakter, og kun 2 % giver 1 stjerne. I dette øjeblik har DavidsenShop.dk 53.774 følgere af deres Facebook-side.\nXL-Byg.dk er bedømt til 4,3 ud af 5 på Trustpilot, som klart er rigtig flot. Scoren er et gennemsnit af 2.856 meninger, hvoraf ikke mindre end 59 % kvitterer med maksimum point, og blot 9 % giver den laveste karakter. Indtil videre har XL-Byg.dk 67.935 Facebook-følgere.\nEn lang række internet foretagender giver heldigvis et stort udvalg af billige fragttyper til læhegn. En der er meget populær er lige nu at få leveret til et afhentningssted, hvor du selv henter de bestilte produkter når du har tid. Denne er nemlig yderst fremkommelig, samt i mange tilfælde desuden den mest billige leveringsmetode.\nDu kan endvidere beslutte dig for at få produkterne bragt hjem til dig privat eller til hvor du arbejder. Denne viser sig gerne en smule mere omkostningsfuld, men desuden i høj grad nem for læhegn online. Den mest betalelige fragtmulighed vil dog altid vise sig at være at du selv henter pakken, men den løsning forudsætter at du bor nær e-forretningens byggemarked, fx Harald Nyborg, Bauhaus, Silvan eller Jem og Fix.\nAntal dages levering på læhegn er selvfølgelig særdeles central forudsat man har brug for ordren øjeblikkeligt, så herved er det forholdsvis klogt at man finder den anslåede leveringstid ved læhegn. En stor portion internet selskaber – for eksempel Harald Nyborg, Silvan, Jem og Fix og Bauhaus – stiller garanti om billig dag-til-dag levering på flere varenumre online, men glem ikke at det står og falder med at bestillingen køres igennem forinden et besluttet tidspunkt, således at de har udsigt til at kunne nå at få pakken sendt afsted forinden pakkepersonalet har fri.\nEn hel del forhandlere på nettet tilbyder portofri fragt på læhegn online, men ofte kun ifald der erhverves for en fastsat sum. Desuden må man foretrække den mest billige fragtløsning, der gerne vil blive at få dem til at levere bestillingen til et afhentningssted.\nEn del netbutikker tilbyder afhentning hvor man handler billig læhegn på nettet og afhenter i butikken. Eksempelvis 10-4, Jem og Fix, Bygma, Stark, Davidsen, XL-Byg, Bauhaus, Silvan og Harald Nyborg. De udlover for eksempel klik-og-hent på læhegn i disse områder:\nRønne, Helsingør, Hobro, Brønderslev, Herning, Ballerup, Brøndby, Roskilde, Birkerød, Sønderborg, Svendborg, Rødovre, Jyllinge, Kolding, Nykøbing Falster, Kokkedal, Nærum, Gladsaxe, Silkeborg, Randers, Ølstykke, Greve, Værløse, Slagelse, Højbjerg, Ishøj, Vordingborg, Farum, Hørsholm, Lyngby, Haderslev, Virum, Dragør, Thisted, Struer, Gentofte, Albertslund, Rudersdal, Vallensbæk, Taastrup, Ringsted, Herlev, Fredericia, Holbæk, Tilst, Hvidovre, Charlottenlund, Vejle, Lillerød, Aalborg, Nakskov, Skanderborg, Risskov, Ikast, Nyborg, Allerød, Lystrup, Haslev, Vanløse, Næstved, Hillerød, Køge, Solrød Strand, Grenaa, Odense, Brønshøj, Hedehusene, Tårnby, Brabrand, Holstebro, Valby, Viborg, Aabenraa, Frederikssund, Stenløse, Odder, Nørresundby, Hjørring, Aarhus, Glostrup, Hedensted, Varde, Frederiksværk, Kalundborg, Frederikshavn, Middelfart, Søborg, Åbyhøj, Frederiksberg, Esbjerg, Horsens, Korsør, Skive, og København, .\nKlik-og-hent af læhegn er muligt i alle områder af Danmark: Sjælland (Østsjælland, Sydsjælland, Bornholm, Lolland, Nordsjælland, Falster, Midtsjælland, Hovedstaden, Amager, Vestsjælland), Fyn (Vestfyn, Midtfyn, Østfyn, Nordfyn, Sydfyn) og Jylland (Sydjylland, Syddanmark, Midtjylland, Sønderjylland, Nordjylland, Østjylland, Vestjylland).\nNår vi kigger i statistikkerne står det tydeligt, at online shoppere som regel leder efter fx billig læhegn og læhegn priser. Foruden dette ser man som regel online shoppere lede efter fx læhegn tilbud, læhegn online samt køb læhegn, foruden de kendte byggecentre som 10-4, Davidsen, Silvan, Bauhaus, Jem og Fix, Harald Nyborg, XL-Byg, Bygma og Stark.\nFå rabat på læhegn\nDet er jo særdeles hensigtsmæssigt for enhver at analysere tilbud på billige læhegn online fra flere firmaer på nettet, og til tak har utallige shops på nettet ikke kunne slippe for at nedsætte priserne på læhegn en hel del, og ydermere garantere billig fragt.\nMen det kan stadigvæk blive rentabelt at efterse forskellige webbutikker efter udsalg og tilbud på læhegn online før du gennemfører din handel, således at man er på den sikre side med at få den skarpeste pris. Se ikke kun hos de store byggemarkeder som Silvan, XL-Byg, Stark, Bauhaus, Harald Nyborg, Davidsen, Jem og Fix og 10-4.\nDu bør ikke desto mindre være obs på, at i tilfælde af at en e-butik reklamerer billige læhegn online til salg for en udsalgspris som er ufattelig billig, kan det ofte være en indikator for en uægte shop. Betalinger med kort er i hvert fald omfavnet af en bestemmelse, der passer på køberen overfor uægte online selskaber.\nVi anbefaler generelt kortkøb eller betalinger med mobilen. Som en alternativ mulighed kunne du overveje en løsning på afbetaling fra fx ViaBill, hvis du hellere vil afdrage beløbet til læhegn af flere omgange. Dette tilbydes typisk i niche netbutikker, men sjældent de kendte byggekæder som fx 10-4, Jem og Fix, Stark, Bauhaus, XL-Byg, Bygma, Davidsen og Harald Nyborg.\nNår der ses på tendenserne fremstår det klart, at mennesker jævnligt leder efter eksempelvis læhegn online og køb læhegn. Foruden dette ser vi som regel folk kigge efter eksempelvis læhegn tilbud, billig læhegn og læhegn priser.\nTrustpilot yder adskillige gode chancer for at verificere en hel del forhenværende forbrugeres anmeldelser og herved foreslåes det, at du sonderer internet shoppens ratings forinden du handler billige læhegn online.\nFacebook leverer ligeledes ultra solide løsninger til at få et kig ind i webbutikkens kundetilfredshed. Tilmed ser vi en del webbutikker som tilbyder folk at formulere en evaluering af deres køb, hvilket ydermere kan bruges til afvejning af hvor glade kunderne er.\nInden folk køber billige læhegn online hos en e-handler burde de helt sikkert løbe igennem netbutikkens regler, det er dog tit et tidskrævende projekt, især ved de velkendte byggekæder som 10-4, Stark, Davidsen, Silvan, Harald Nyborg, XL-Byg, Jem og Fix, Bauhaus og Bygma.\nEn nemmere løsning kunne være at se hvorvidt internet firmaet er e-mærke godkendt, hvilket er en angivelse af at internet forretningen respekterer dansk lovgivning, samt at online forhandleren tit overværes af specialister der har indsigt i reglerne på området.\nDerudover tilbydes du chance for hjælpende service, når du udsættes for problemer med din bestilling af læhegn. Ligeledes er det klogt at man er på vagt for de primære betingelser der har betydning for købet af læhegn online, til eksempel hvilken ombytningsret e-butikken anvender.\nDerfor er det samtidig relevant, at man permanent bibeholder ens købsbekræftelse, således man når som helst kan bevise sin bestilling af læhegn, uagtet om man køber ved Stark, Davidsen, Jem og Fix, 10-4, Bygma, Bauhaus, XL-Byg, Harald Nyborg eller Silvan.\n1Det er yderst problemfrit for os alle at finde tilbud online på billige læhegn fra flere internet shops, og af den grund lover flertallet af e-butikker levering uden beregning. Det kan dog til hver en tid vise sig tiden værd at kigge forbi diverse internet shops i Danmark efter tilbud og rabat inden du placerer ordren, således at man er tryg ved at få den skarpeste pris.\n2Vi anbefaler bestillinger med betalingskort eller betalinger med mobilen. Handler med kort er omfattet af et reglement, som redder en overfor falske e-firmaer. Som et alternativ burde du overveje en løsning fra for eksempel ViaBill, for så vidt du higer efter at dække pengene over en periode.\n3Den mest betalelige form for levering vil altid vise sig at være selv at hente ordren, men dette kræver at du har bopæl nær online shoppens tilholdssted. Den leveringsversion er ultra vigtig om du mangler læhegn inden for kort tid. Alternativt så tilbyder enkelte firmaer på nettet billig fragt, men oftest er det betinget af at der erhverves for en konkret sum.\n4Trustpilot byder på sådan set fantastiske løsninger til at inspicere ret mange eksisterende forbrugeres anmeldelser og herved er det prisværdigt, at du kigger på online webshoppens ratings forinden du bestiller billige læhegn online. Facebook frembringer desuden absolut stabile løsninger til at få indsigt i netbutikkens troværdighed.\n5Fragtperioden er naturligvis rigtig vigtig om du har behov for ordren inden for få dage, og med det formål er det rigtig klogt at du kigger nærmere på den anslåede leveringstid for læhegn. Temmelig mange internet firmaer yder billig 1 dags fragt på adskillige produkter, men vær påpasselig da det tager udgangspunkt i at bestillingen indsendes før et angivent klokkeslæt.\n6Nogle enkelte netbutikker frembyder fragt uden beregning på læhegn, men undertiden under forudsætning af at der købes for et fastsat beløb. I øvrigt må man tage den mest billige type af levering, der oftest vil blive at få fragtfirmaet til at levere din ordre til et udleveringssted. Fragtmuligheden er uheldigvis tillige ualmindeligt let. Den mest prisbevidste løsning til levering vil dog altid være at hente ordren selv.\n7Forinden folk handler billige læhegn hos en e-forhandler bør man helt sikkert sætte sig ind i e-shoppens vilkår, det er dog normalt et tidskrævende arbejde. Herudover er det at foretrække at man er klar over de mest aktuelle retningslinjer der indvirker på bestillingen af billige læhegn online, eksempelvis den returneringsret internet forhandleren bruger.\n8Generelt anbefaler vi at granske om online shoppen er tilsluttet e-mærket, som længe har været en angivelse af at internet forhandleren imødekommer de opstillede regler, og at den tit undersøges af sagkyndige som kender lovgivningen. Før folk shopper billige læhegn i en online shop kunne man for at være på den sikre side betragte webshoppens regler.\n9Temmelig mange netbutikker i Danmark tildeler efterhånden en række forskellige billige leveringsmåder til læhegn. En der er meget almindelig er i øjeblikket at afsende til en pakkeshop, fordi du på den måde nemt kan hente bestillingen på et valgfrit tidspunkt. Fragtløsningen er nemlig temmelig overkommelig, og i mange tilfælde ligeledes den mest prisbevidste metode til levering.


Rejse med e-bike\nKombinationen af motion og afslapning - sådan ser den perfekte ferie ud for mange mennesker. Det bliver stadig mere populært at rejse med en e-bike. Derfor har vi samlet vigtige tips til at rejse med en e-bike.\nPendling med e-bike\nNår du pendler til arbejde på e-bike, holder du dig i form, skåner din pengepung og miljøet. Så hvorfor ikke lade bilen stå i garagen og i stedet sætte dig op på cyklen og træde i pedalerne med blid støtte?\nKør sikkert på din eBike\nLidt større vægt, lidt højere hastighed og lidt anderledes køreegenskaber - der er små men afgørende forskelle på at køre på eBike og på en almindelig cykel. Derfor har vi samlet en stribe vigtige begynder-råd om den rigtige teknik til at køre på eBike.\nSikker gennem vinteren med eBike\nDagene bliver kortere, luften køligere og cykelstierne mere tomme. Når vinteren er lige om hjørnet, sætter mange mennesker deres cykler i kælderen eller i garagen og cykler først igen til foråret. Men sådan behøver det ikke at være! Hvis du er opmærksom på nogle få, vigtige regler, kan du også nyde at få vind i håret i den kolde årstid og komme gennem vintermånederne på din eBike uden problemer.\n10 grunde til at vælge en eBike.\nAt køre på eBike bliver mere og mere populært. Uanset om du er ung eller ældre og skal cykle til hverdag eller for sportens skyld, gør eBikens hjælpemotor cykling mere afslappende over længere distancer, så du kan nå mere udhvilet frem til din distation. Det, der begyndte som en niche-bevægelse, er ved at udvikle sig til en trend.


Varenr. 925-231-494-300 Producent: AU Maison\nVil du skabe ekstra hygge og varme i din indretning, så er et tæppe den helt rigtige løsning; og særligt dette Josephine tæppe fra AU Maison. Tæppet har et smukt romantisk udtryk, og et er udviklet me...\nProdukter som vi anbefaler til AU Maison Josephine - Tæppe - Natur/Sort - 70x140 cm.\nAU Maison Marble-Box - Opbevaringsboks rund - Marmor - Grøn\nAU Maison Hamam-Hella - Håndklæde - Sort og hvid - 100x185 cm.\nVil du skabe ekstra hygge og varme i din indretning, så er et tæppe den helt rigtige løsning; og særligt dette Josephine tæppe fra AU Maison. Tæppet har et smukt romantisk udtryk, og et er udviklet med de fineste detaljer. Ydermere er tæppet perfekt som guldløber, idet tæppet måler 70x140 cm.\nFarve: Naturfarvet med sorte detaljer