Generation of First Heart Field-like Cardiac Progenitors and Ventricular-like Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells | Protocol (Translated to French)\nNous décrivons ici une méthode évolutive, en utilisant une combinaison simple d’activine A et induite par le lentivirus Id1-surexpression, pour générer des premiers progéniteurs cardiaques de coeur comme champ et cardiomyocytes ventriculaires-comme des cellules souches pluripotentes humaines.\nLa génération de grandes quantités de pluripotentes humaines fonctionnels dérivés de cellules souches cardiaques progéniteurs et les cardiomyocytes d’origine champ défini de coeur est une condition sine qua non pour la modélisation de la maladie et les thérapies cellulaires cardiaques. Nous avons récemment démontré que les gènes Id sont à la fois nécessaire et suffisante pour spécifier la premières progéniteurs de champ de cœur au cours du développement des vertébrés. Ce protocole de différenciation s’appuie sur ces constatations et utilise Id1 surexpression en combinaison avec l’activine A comme puissants repères indiquant pour produire des progéniteurs de (FHF-L) premiers cœur comme champ. Ce qui est important, résultant des progéniteurs différencient efficacement (~ 70 – 90 %) dans les cardiomyocytes ventriculaires ressemblant. Nous décrivons ici une méthode détaillée pour 1) générer Id1-surexprimant hPSCs et 2) se différencient des quantités évolutives des progéniteurs de FHF-L cryopreservable et des cardiomyocytes ventriculaires ressemblant.\nProduction à grande échelle des cellules souches pluripotentes humaines (hPSCs)-dérivées de cellules souches cardiaques et les cardiomyocytes est une condition sine qua non pour les thérapies basées sur les cellules souches1, modélisation2,3 et la caractérisation rapide de la maladie nouvelles voies réglementant la différenciation cardiaque4,5,6 et physiologie7,8. Bien qu’un certain nombre d’études9,10,11,12,13,14,,,15 ont décrits précédemment très efficace protocoles de différenciation cardiaques de hPSCs, aucune a abordé l’origine domaine de cœur des cardiomyocytes qui en résulte, en dépit de l’identification des importantes différences moléculaires entre gauche (premier champ du coeur) et droite (second champ de coeur) cardiomyocytes ventriculaires16 et l’existence de maladies cardiaques congénitales par coeur domaine spécifique ; c'est-à-dire, hypoplasie du coeur gauche syndrome17 ou arythmogène dysplasie ventriculaire droite18. Ainsi, la génération des progéniteurs cardiaques et les cardiomyocytes d’origine champ défini de coeur de hPSCs devient une nécessité afin d’augmenter leur pertinence en tant que thérapeutique et outils de modélisation de la maladie.\nCe protocole repose sur la surexpression constitutive ID1, récemment identifié5 premier cœur en spécifiant le champ repère qui, en combinaison avec l’activine A, est nécessaire et suffisante pour initier cardiogenesis dans hPSCs. Notamment, Cunningham et al. (2017) 5 démontrent que les progéniteurs induite par l’Id1 spécifiquement premier champ de cœur (HCN4, TBX5) mais pas second marqueurs de champ de cœur (SIX2, ISL1) car ils subissent une différenciation cardiaque. En outre, les auteurs montrent également que des embryons de souris transgéniques dépourvus de toute la famille de gènes (Id1-4), de Id développe sans former premier cœur champ cardiaque progéniteurs, en plus des progéniteurs cardiaques médial et postérieur ( deuxième champ de cœur) peut encore former, ce qui laisse croire que les protéines Id sont essentiels d’initier une première heart champ cardiogenesis in vivo. Idéalement, les progéniteurs induite par l’Id1 peut être cryoconservés et spontanément se différencient en cardiomyocytes ventriculaires-comme caractéristiques, notamment de l’expression des marqueurs spécifiques ventriculaire (IRX4, MYL2) et potentiels d’action ventriculaire-like.\nNous décrivons ici une méthode simple et évolutive pour générer des premier cœur comme champ (FHF-L) cardiaques progéniteurs et cardiomyocytes ventriculaires ressemblant de Id1 sur-exprimant hPSCs. Une caractéristique importante de ce protocole est la possibilité de découpler la génération de progéniteurs cardiaques du cardiomyocyte ultérieures de production utilisant une étape pratique de cryoconservation. En résumé, ce protocole détaille les étapes nécessaires pour (1) générer Id1-surexprimant hPSCs, (2) générer des cellules souches cardiaques FHF-L de hPSCs, (3) cryoconservé progéniteurs qui en résulte et (4) reprendre la différenciation des progéniteurs cardiaques FHF-L et générer hautement enrichi (> 70 – 90 %) battant cardiomyocytes ventriculaires-like.\n1. infection et préparation de Virus Id1\nGénérer des lentivirus sur-exprimant Id1 par transfection co pCMVDR8.74, pMD2.G et pCDH-EF1-Id1-PGK-PuroR (Addgene : plasmide #107735) dans les cellules HEK293T. Recueillir des particules virales, filtrer, purifier du surnageant et stocker à-80 ° C comme Kitamura et al. (2003) 19. vous pouvez également produire Id1 lentivirus commercialement en envoyant pCDH-EF1-Id1-PGK-PuroR à un fournisseur produisant des lentivirus.\nATTENTION : Veuillez suivre les consignes des gènes et des protocoles de fonctionnement standard.\nNote : IMPORTANT : titre virus optimale doit être au moins 108 à 109 Transducing unités/mL (TU/mL).\nAvant l’infection, enduire un puits d’une plaque 96 puits 50 µl de réactif de revêtement, généralement un mélange de protéines gélatineuse sécrété par les cellules de sarcome de souris Engelbreth-Holm-Swarm (voir Table des matières).\nDissocier un puits de cultivé dans une plaque 6 puits en ajoutant 1 mL de PBS avec 0,5 mM EDTA et sans Ca2 + et Mg2 + des cellules souches pluripotentes.\nNOTE : Le temps de Dissociation varie de 3 à 10 min. Lorsque plus de 80 % des cellules sont détachés du fond de la plaque, passez à l’étape suivante.\nRecueillir la suspension cellulaire avec pipette stérile dans tube à centrifuger en plastique 15 mL.\nNeutraliser le réactif de dissociation avec 5 mL de PBS contenant Ca2 + et Mg2 +.\nPellet cellules par centrifugation (200 g x 3 min).\nÉliminer le surnageant et effleurer doucement le tube afin de déloger le culot.\nRemettre en suspension les cellules dans 1 mL de cellules souches médias.\nCompter les cellules à l’aide d’un compteur de cellules automatisés suivant les instructions du vendeur.\nCellules viables plaque 20 000 / enduit bien (plaque à 96 puits) dans 50 µL de cellules souches milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK (voir tableaux 1 et 2).\nAprès 24h, surveiller pour la fixation des cellules et de remplacer le support avec 100 µl cellules souches médias additionnés de 2 inhibiteur de voie de RHO/ROCK µM et le bromure de hexadimethrine 6 ng/mL (voir tableaux 1 et 2), 1 heure avant l’infection des gènes.\nRemarque : Les cellules doivent être fermement fixés au fond de la plaque.\nDécongeler l’Id1-lentivirus sur la glace.\nAjouter 3 µL de lentivirus purifiée par puits (titre de virus doit être comprise entre 108 à 109 TU/mL), puis transférer la plaque arrière d’incubateur de culture cellulaire (37 ° C, 5 % de CO2, 20 % O2).\ninfection virale après 24 h, ajouter 100 µL de milieux frais souches cellulaires dans les cellules infectées.\ninfection après des gènes de 48 h, remplacer les virus contenant les médias avec 200 µL de cellules fraîches de souches milieux supplémentés avec 1 puromycine µg/mL.\nActualiser les médias tous les jours avec 200 µL de cellules souches milieux supplémentés avec 1 puromycine µg/mL.\nQuand les cultures atteignent 80 % confluence, dissocier les cellules à l’aide de 200 µL de PBS sans Ca2 + et Mg2 + + 0,5 mM EDTA (pour un puits d’une plaque de 96 puits).\nRecueillir suspension de cellules dans un tube à centrifuger.\nRemettre en suspension les cellules dans 1 mL de cellules souches milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK.\nToutes les cellules (1 mL) de transfert à un enduit bien d’une plaque de 12 puits.\nAprès 24h, moniteur pour la fixation des cellules aux médias puits et remplacer avec 1 mL de cellules souches médias additionné d’inhibiteur de voie de RHO/ROCK 2 µM et bromure de hexadimethrine de 6 ng/mL, 1 heure avant la transduction.\nAjouter 5 µL de virus purifié par puits (plaque de 12 puits).\ninfection après des gènes de 24h, remplacer les virus contenant les médias avec 1 mL de frais cellules souches milieux supplémentés avec 3 puromycine µg/mL.\n48 h après l’infection des gènes, remplacer le virus contenant des médias avec 1 mL de cellules fraîches de souches milieux supplémentés avec 6 puromycine µg/mL.\nQuand les cultures atteignent 80 % confluence, dissocier les cellules à l’aide de 500 µL de PBS avec 0,5 mM EDTA et sans Ca2 + et Mg2 + (pour un puits d’une plaque de 12 puits).\nTransférer la moitié (250 µL) de la suspension cellulaire à un puits d’un réactif de revêtement enduit plaque 6 puits contenant 2 mL de cellules souches milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK.\nUtiliser l’autre moitié (250 µL) de l’échantillon pour l’extraction de l’ARN et qRT-PCR afin de déterminer l’Id1 LENTIVIRAUX médiée par les niveaux d’expression, comme Colas et al. (2012) 4.\nNOTE : IMPORTANT : si Id1 ARNm expression est inférieures à 0,005 pli GAPDH des niveaux d’expression (voir tableau 3 pour amorces qRT-PCR), répétez les processus d’infection comme décrit ci-dessus jusqu'à ce que les niveaux d’expression Id1 dépassent la seuil.\n2. hPSCs entretienId1\nCulture hPSCsId1 dans enduit 6-plats et croître dans 3 mL par puits de cellules souches milieux supplémentés avec 6 puromycine µg/mL.\nQuand hPSCsId1 atteignent 80 % confluence, les cellules comme agrégats (rapport de 1:6 split) utilisant le réactif de dissociation sans enzymes suivant directives du vendeur de passage et croître dans 3 mL par puits de cellules souches milieux supplémentés avec 6 puromycine µg/mL.\n3. préparation des hPSCsId1 de différenciation\nRecouvrir une plaque de 12 puits avec 500 µL / puits de réactif de revêtement.\nLorsque hPSCsId1 atteignent 90 % confluence dissocient les cellules en ajoutant 1 mL de PBS avec 0,5 mM EDTA / puits et sans Ca2 + et Mg2 + pour 5 à 10 min. vérifier le processus de dissociation chaque minute, et une fois les 80 % des cellules sont dissociées de la plaque , passez à l’étape suivante.\nRemettre en suspension les cellules dans 2 mL de cellules souches milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK.\nCellules de plaque 300 000 / puits dans 1 mL de cellules souches milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK et 6 µg/mL puromycine et plaque de transfert dans l’incubateur de culture de tissus.\nActualiser les médias tous les jours avec 2 mL de cellules souches milieux supplémentés avec 6 puromycine µg/mL cultures jusqu'à confluence de 90 %. Ouvrir à ce stade, la différenciation cardiaque (étape suivante).\n4. différenciation des hPSCsId1 en premier coeur comme champ progéniteurs cardiaques (FHF-L CPs)\nPour le format de la plaque de 12 puits, initier la différenciation (jour 0) en remplaçant les cellules souches médias avec 1,5 mL de médias d’induction (tableau 1) additionné l’activine A (100 ng/mL) (voir tableau 2 pour les volumes et l’activine A les concentrations recommandées pour plaque de différents formats).\nJour 1 (24 h après que la différenciation est lancée), remplacer les médias avec 2 mL de médias d’induction sans activine A (/ puits d’une plaque de 12 puits).\nLe jour 3, remplacer les médias avec 2 mL de médias d’induction sans activine A (/ puits d’une plaque de 12 puits).\nLe jour 5, recueillir FHF-L CPs pour la cryoconservation (étape suivante).\nNOTE : IMPORTANT : Cryopreservation est préférable à ce stade, car elle permet de découpler la génération de progéniteurs cardiaques de myocytes cardiaques subséquentes production et biobanque importants lots de cellules. Notez que vous pouvez également jour 5 CPs FHF-L peut être passé à une plaque fraîchement enduite à la différenciation de continuer, s’il vous plaît se référer aux étapes 5.1 – 5,5 à passFHF-L CPs et passez à l’étape 6.5 de différenciation.\n5. cryoconservation du CPs FHF-L\nAspirez tous les médias de puits contenant des J5 FHF-L CPs et rapidement ajouter 1 mL de tiède (37 ° C) 1 x réactif de dissociation enzymatique contenant (voir Table des matières). Placer la plaque dans l’incubateur de culture de tissus.\nAprès 1 min, secouer la plaque côté à l’autre dans l’incubateur.\nAprès 2 min (temps total), retirer la plaque de l’incubateur et ajouter 1 mL de médias FBS de 10 %.\nDoucement pipette cellules de haut en bas avec une pipette de 5 mL pour faciliter le détachement des cellules de la plaque.\nRecueillir la suspension cellulaire à une centrifugeuse tube granules des cellules et par centrifugation à 200 x g pendant 3 min\nResuspendre le culot dans 2 mL de réactif de cryoconservation.\nAjouter le réactif de cryoconservation (voir Table des matières) à un volume suffisant de cryopréserver des cellules à la concentration désirée (en général 5 à 10 x 106 cellules/mL).\nCellules de transfert pour les flacons de cryoconservation et placer les flacons dans ventilation tangentielle (1 ° C/min) et placer le dispositif de refroidissement dans le congélateur-80 ° C du jour au lendemain.\nAprès 24h, transfert des flacons congelés à l’azote liquide pour le stockage à long terme.\n6. FHF-L CP différenciation dans les Cardiomyocytes ventriculaires-like\nTransfert flacons FHF-L CPs congelés J5 de stockage d’azote liquide dans le récipient de glace sèche.\nPlacer les flacons dans le bain-marie à 37 ° C pendant 2 à 3 min, jusqu'à ce que la suspension cellulaire est complètement décongelée.\nNOTE : IMPORTANT : la décongélation est sensible au temps. Exposer les médias de la cryoconservation des cellules pour une quantité excessive de temps (c.-à-d., 10 min) diminue la viabilité des cellules.\nCellules de transfert de 15 ou 50 mL tube à centrifuger, selon le nombre de flacons décongelés.\nVerser goutte à goutte (5 gouttes toutes les 30 secondes) cardiogénique préchauffé (37 ° C) médias (tableau 1) à la solution de la cellule. Continuez ce processus jusqu'à ce qu’un média de cryoconservation de 1:3 : ratio de médias cardiogénique est atteint. À ce stade, augmenter le taux d’addition de médias cardiogénique jusqu'à un 01:10 médias de cryoconservation : ratio de médias cardiogénique est atteint.\nNOTE : IMPORTANT : les changements rapides d’osmolarité augmentera la mort cellulaire durant la décongélation ; Ajouter goutte à goutte cardiogénique médias tel que décrit ci-dessus est donc fortement recommandé.\nCentrifuger suspension et pellet cellules par centrifugation (200 g x 3 min).\nÉliminer le surnageant et effleurer doucement tube à centrifuger pour déloger le culot cellulaire.\nRemettre en suspension les cellules avec cardiogénique milieux supplémentés avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK.\nRemarque : La viabilité cellulaire peut varier de dégel de dégel et, en général, > 65 % viabilité prédit placage bonne efficacité.\nDiluer concentrée suspension cellulaire avec cardiogénique milieux supplémentés avec 2 inhibiteur de la voie µM RHO/ROCK pour obtenir la concentration de la cellule souhaitée pour le placage (voir le tableau 2 pour les formats de plaque différente).\nNOTE : IMPORTANT : Notez que l’efficacité de différenciation cardiaques peut refuser si les cellules sont ensemencées trop faiblement.\nCellules de semence sur la plaque.\nMaintenir la plaque dans la hotte de vitroplants pendant 20 min avant de transférer à l’incubateur de culture de tissus.\nJour 6 de différenciation, contrôler la fixation des cellules.\nRemarque : Les progéniteurs cardiaques sont cryoconservés jour 5 de la différenciation. 24h après décongélation des cellules serait le jour 6 de la différenciation.\nRemarque : La présence de flottants (mortes) est fréquente.\nJour 7, aspirer 50 % des médias et remplacer par une quantité égale de supports cardiogénique neufs.\nRemarque : L’ajout de l’inhibiteur voie RHO/ROCK aux médias cardiogénique n’est pas nécessaire après ce point.\nRemplacez 50 % des médias par cardiogénique médias tous les deux jours.\nRemarque spontanée battant qui apparaît entre 11 et 13 de jour.\nLe 15e jour, quantifier l’efficacité cardiaque différenciation par immunofluorescence à l’aide de DAPI (tache de noyau) et ACTC1 (pan-cardiaque marqueur).\n7. transfert et Maintenance des Cardiomyocytes ventriculaires-like\nRemarque : Par jour 14 – 16, une monocouche de contracter spontanément des cardiomyocytes ventriculaires semblable devrait être obtenue. À ce stade, il est suggéré de se dissocier et re-plaque de cardiomyocytes afin d’homogénéiser la culture et empêcher les cellules de détacher de la plaque.\nAspirer tous les médias de puits et rapidement ajouter 1 mL de pré chauffé (37 ° C) 1 x enzyme contenant des réactifs de dissociation.\nRemarque : 1 x volumes de réactifs contenant des enzymes dissociation varient en fonction du format de la plaque, mais doit couvrir complètement le fond de la surface du bien.\nPlaque de transfert dans un incubateur de culture de tissus.\nSecouer doucement plaque côté à l’autre toutes les 2 min à l’intérieur de l’incubateur pour accélérer le processus de détachement.\nAprès 5 à 15 min, lorsque 80 à 100 % des cellules sont détachés du fond de la plaque, retirez la plaque de l’incubateur et inhiber 1 x activité de réactif de dissociation enzymatique contenant en ajoutant un volume égal de médias FBS de 10 %.\nNOTE : Temps d’Incubation avec dissociation d’enzyme contenant x 1 pour ce processus changeront de lot à lot.\nRecueillir des suspension de cellules dans un tube à centrifuger.\nSuspension cellulaire se mêlent pipette et nombre de cellules à l’aide d’un compteur de cellules automatisées.\nDiluer la suspension cellulaire à concentration cellulaire désiré (voir tableau 2 pour les formats de plaque différente) avec les médias de maintenance complétée avec inhibiteur de voie 2 µM RHO/ROCK.\nAprès l’ensemencement des cardiomyocytes dans l’assiette, répartir les cellules et permettre les cellules attacher pendant 10 à 20 min avant de transférer la plaque à l’incubateur de culture de tissus.\n24h après modification des plaques, surveiller la récupération et fixation des cellules.\nRemarque : La présence de flottants (mortes) est fréquente. 48 à 72 h après modification des plaques, cardiomyocyte devrait reprendre la contraction spontanée.\nAfin de maintenir la culture cardiomyocyte, remplacez 50 % des médias avec les médias d’entretien tous les deux jours jusqu'à l’utilisation des cardiomyocytes ventriculaires-comme pour les expériences ultérieures.\nGénération de hPSCs ID1 lignes\nhPSCs sont infectés par un lentivirus médiation surexpression Id1 (Figure 1A). Une fois que hPSCId1 sont générés, expression du transgène est quantifiée par qRT-PCR (Figure 1B). HPSC uniquement les lignes deId1 exprimant Id1 ARNm à des concentrations supérieures à 0,005 pli de celle de GAPDH doivent être utilisés pour la différenciation.\nhPSCs ID1 Entretien et préparation pour D ifferentiation\nConditions de culture optimales sont nécessaires et essentiels pour une première réussie coeur la différenciation des progéniteurs cardiaques comme champ (Figure 2A). hPSCId1 cultures doivent être surveillées tous les jours pour l’entretien de morphologie de tige et de la prolifération continue. La différenciation doit être instaurée lorsque les colonies serrées des cellules souches atteignent > confluence de 90 % (Figure 2B). Si la différenciation est engagée avant la confluence optimale, la mort cellulaire est renforcée et efficacité de différenciation peut refuser (Figure 2C). De même, les cultures envahies interprétera mal (Figure 2D).\nGénération du premier coeur cardiaque comme champ progéniteurs (CPs FHF-L) de hPSCs ID1\nJour 1 (initiation de différenciation 24h post), les cellules doivent être surveillés afin d’observer la perte de la morphologie de souches (cellules apparaissent plus plat et plus sombre que les cellules souches). Notez que la mort cellulaire est fréquente au cours de la première journée de la différenciation, mais confluence cellulaire devrait être maintenu à > 75 % (Figure 2E). Si après 24h de différenciation, 50 % ou plus de la surface couverte sont perdue, les cellules doivent être jetés.\nLe jour 3, différenciation des cellules devraient rester en cluster et permettent de combler les lacunes créées durant les première 24 h période (Figure 2F). Piles plates de plus en plus indépendamment sont révélateurs des conditions sous-optimales de différenciation.\nJour 4, différentiation optimale devrait montrer une expansion continue et la couverture de la plaque.\nLe jour 5, les cellules sont récoltées et cryoconservés. Différenciations optimales devraient se traduire par des amas de cellules étroitement connecté avec apparition de morphologie homogène (Figure 2G). Notez que les grappes de faible densité de cellules aplaties marquent un résultat de différenciation sous-optimale. Voir le tableau 2 pour le rendement moyen du jour 5 progéniteurs cardiaques / puits dans divers formats de la culture.\nGénération des Cardiomyocytes ventriculaires ressemblant de CPs FHF-L\nJour 5 FHF-L CPs sont décongelés à plaque format dépendant des densités décrites dans le tableau 2, afin de maximiser leur potentiel de différenciation cardiaque (Figure 3A et tableau 2). La viabilité après décongélation doit être surveillée. Généralement, la viabilité varie de 70 à 80 %. Si la viabilité est inférieur à 60 %, le rendement des cardiomyocytes serait touché.\nJour 6 (24 h après la reprise de différenciation), FHF-L CPs devrait couvrir > 90 % de la surface habitable et apparaissent comme une seule couche homogène de cellules (Figure 3B). Confluence basse le jour 6 réduira une différenciation FHF-L CPs cardiomyocytes.\nRésultant des cardiomyocytes commencer à battre par jour 11 – 13 de différenciation (Figure 3C et 1 film). Au cours du processus de replating jour 14 – 16, voir le tableau 2 pour le rendement moyen des cardiomyocytes par puits dans différents formats de la culture. Efficacité de différenciation est généralement évaluée par immunofluorescence pour cardiaque (ACTC1), fibroblastes (TAGLN) et les marqueurs endothéliales vasculaires (CDH5) et nucléaire (DAPI). Quantification de la lignée est effectuée en utilisant la quantification d’imagerie et de fluorescence automatisée, comme dans Cunningham et al. (2017) 5 (figure 3D-E). Sous-type de caractérisation des cardiomyocytes qui en résulte est interprétée par qRT-PCR (Figure 3F) et l’analyse transitoire de potentiel d’action à l’aide de la cinétique d’imagerie et de détection des sondes (Figure 3G et le film 2) de la tension. Quantification de la fluorescence pour la sonde de tension et l’analyse de trace de potentiel d’action qui en résulte (Figure 3H) est effectuée comme décrit dans McKeithan et al. (2017) 7.\nFigure 1: génération de hPSCId1 lignes. (A) représentation schématique de la hPSCs protocole de générationId1 . (B) des exemples de résultats représentatifs Id1 ARNm généré par l’expression des gènes par l’intermédiaire de lignes distinctes de hPSCId1 , y compris une ligne de CSEh et deux lignes de hPSC lignes qRT-PCR. Ligne pointillée représente le seuil d’expression Id1 , au-dessous de laquelle hPSCId1 lignes doivent subir un cycle supplémentaire de l’infection Id1-lentivirus. « p » indique le nombre de passage. Le nombre dans la parenthèse indique le nombre de tours d’infection Id1-gènes. Barres d’erreur représentent déviation standard d’expériences réalisées en trois exemplaires. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 2: Génération du premier cœur Field-Like cardiaque progéniteurs (FHF-L CPs) différenciation de hPSCId1. (A) représentation schématique du protocole génération FHF-L CP. Photos représentant champ lumineux de hPSCId1 (jour 0) à optimale (B), Sub anastomosé (pointes de flèches jaunes indiquent les régions sub entre les cellules) densité (D) (C) et anastomosé excessive. Photos de lumineux-zone représentant de différencier hPSCId1 au jour 1, 3 et 5 respectivement (E), (F), (G). Echelle = 100 µm. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 3: génération de cardiomyocytes ventriculaires ressemblant de CPs FHF-L. (A) Représentation schématique du protocole génération cardiomyocytes ventriculaires-like. (B) champ lumineux image de cellules de différenciation de jour 6 (un jour après décongélation). (C) image de champ lumineux d’une culture de passage à tabac du jour 12. (D) les image d’immunofluorescence représentatifs des cultures de 15 jours (format de plaque 384 puits). ACTC1 marque cardiomyocytes, TAGLN : fibroblastes/smooth muscle, CDH5 : les cellules endothéliales vasculaires et DAPI : noyaux (illustrées dans le médaillon). Quantification de Lineage (E) des cultures de 15 jours. (F) données de qRT-PCR temps expression cours du jour 5 au jour 25 de marqueurs spécifiques ventriculaire (IRX4 et MYL2) et pan-cardiaque marqueur (MYL7). (G) les traces de potentiel d’action représentative de cardiomyocytes ventriculaires ressemblant au jour 25 de différenciation. Mesures durée (H) potentiel d’Action (APD de50 et APD90) de résultant des cardiomyocytes ventriculaires-comme (n = 12). Barres d’erreur représentent déviation standard d’expériences réalisées en quatre exemplaires (sauf indication contraire). Barreaux de l’échelle = 100 µm. RFU, unité de fluorescence relative. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nMédium Milieu de base Additif\nMédias de cellules souches mTesR1 n/a\nMédias d’induction RPMI 1640 Medium B-27 supplément sans sérum sans insuline, 1 x\nMédias d’induction RPMI 1640 Medium Puromycine, 6 µg/ml\nMédias d’induction RPMI 1640 Medium Pénicilline-streptomycine, 1 x\nCardiogénique Media RPMI 1640 Medium B-27 supplément sans sérum, 1 x\nCardiogénique Media RPMI 1640 Medium Pénicilline-streptomycine, 1 x\nMédias de maintenance RPMI 1640 Medium B-27 supplément sans sérum, 1 x\nMédias de maintenance RPMI 1640 Medium KnockOut, remplacement du sérum, 2 %\nMédias de maintenance RPMI 1640 Medium Pénicilline-streptomycine, 1 x\nTableau 1 : Composantes médiatiques (voir Table des matières pour les additifs et les médias de base).\n384 puits 96 puits 12 puits 6 puits 100 mm 150 mm\nVolume de revêtement (par puits) 10 ΜL 50 ΜL 500 ΜL 1 mL 5 mL 10 mL\n(par puits) 100 ΜL 300 ΜL 2 mL 5 mL 12 mL 30 mL\nDifférenciation jour 0 activin une concentration (ng/mL) 100 100 100 300\nrendement du jour 5\n(cellules/puits) 1,0 à 1,2 x 105 2.5 – 3.0 x 105 1.0-1.5 x 107 2.0 – 3.0 x 107\nJour 5 de progéniteurs cardiaques peuvent ou le dégel densité (cellules/puits) 2.0 x 104 7,5 x 105 4,5 x 106 8,0 x 106 2.2 x 107\nrendement de jour 14 – 16\n(cellules/puits) 2,0 à 5,0 x 104 0,8 à 1,2 x 106 3,5 à 5,0 x 106 0,8 à 1,2 x 107 1,8 à 2,5 x 107\nCardiomyocyte ventriculaire semblables peuvent densité\n(cellules/puits) 2,5 x 104 1,0 x 106 4,5 x 106 1,0 x 107 2.2 x 107\nTableau 2 : Paramètres de différenciation évolutive (volume de revêtement, volume moyen, concentration activine A, rendements, peuvent les densités).\nNom de gène Adhésion de la Banque de gènes Séquence\nR : GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG\nsouris Id1 NM_010495 F: CCTAGCTGTTCGCTGAAGGC\nR : CTCCGACAGACCAAGTACCAC\nR : TAGACCGGGCAGTAGACCG\nR : CCGAACGTAATCAGCCTTCAG\nR : CTCCTCCTCTGGGACACTC\nTableau 3 : séquences d’amorces qRT-PCR.\nMovie 1 : enregistrement sur le terrain lumineux (100 images/s) du jour 15 cardiomyocytes où l'on peuvent observer des contractions spontanées. S’il vous plaît cliquez ici pour voir cette vidéo. (Clic droit pour télécharger.)\nMovie 2 : imagerie cinétique (100 images/s) de sonde fluorescente sensibles à la tension dans les cardiomyocytes ventriculaires-comme 25 – induite par l’id1 jour. S’il vous plaît cliquez ici pour voir cette vidéo. (Clic droit pour télécharger.)\nPour les différenciations réussies, assurez-vous de suivre attentivement les instructions indiquées ci-dessus. En outre, ici nous mettons en évidence les paramètres clés qui influencent les résultats de la différenciation. Avant de commencer une différenciation, les trois paramètres morphologiques suivantes doivent être respectées : une morphologie de la tige de hPSCsId1, un compactage cellulaire élevé et une confluence élevée (> 90 %) de la culture au jour 0. À cet égard, des conditions optimales de différenciation sont mieux créées par électrodéposition dissociée hPSCsId1 comme cellules individuelles et leur permettant à la forme étroitement groupées monocouches qui poussent à la confluence de ~ 90 % au cours des 2 à 3 jours. À l’inverse, si hPSCId1 cultures montrent pauvre cellulaire et la morphologie des colonies, compactage de colonie faible et la présence de vastes superficies de différenciation au sein de la culture, la différenciation FHF-L CP réussie est peu probable.\nVolume du média et concentrations activine A sont des paramètres essentiels de différenciation de la FHF-L CP et plaque format-dépendante (voir tableau 2). Notez également que des concentrations optimales activine A peuvent varier selon l’occasion hPSC ligne et peuvent exiger d’optimisation de la concentration.\nTaux d’ARNm ID1 hPSCs est essentiels pour promouvoir efficacement FHF-L cf. sous-optimale Id1 niveaux échouera produire de la différenciation FHF-L CP robuste et on remarquera la mort cellulaire massive par jour 1 de différenciation. Le rapport de l’expression relative Id1- à -GAPDH doit dépasser 0,005 à promouvoir une différenciation efficace. Sélection continue en utilisant des doses plus élevées de la puromycine (6 à 10 µg/mL) est recommandée afin de maintenir de hauts niveaux d’expression de Id1 médiée par des gènes. Une évaluation des niveaux d’ARNm Id1 chaque 10 passages est recommandé.\nPlacage de densités de J5 FHF-L CPsis également un paramètre essentiel pour l’efficacité de la différenciation cardiaques. Si jour 5 CPs FHF-L sont plaqués aux faibles densités, diminuera le rendement cardiaque relatif. La densité optimale de placage est répertoriée dans le tableau 2 et est plaque format dépendant.\nLa principale limitation de ce protocole est l’utilisation de la surexpression de Id1 médiée par des gènes à la différenciation de CP promoteFHF-L susceptibles de restreindre l’utilisation thérapeutique des progéniteurs qui en résulte et les cardiomyocytes ventriculaires-like. Aussi, puisque les lentivirus peuvent s’intégrer aux sites que pouvait potentiellement affect hPSC maintenance et/ou potentiel développemental, stemness de hPSCsId1 colonies doivent être surveillé en évaluant la tige l’expression des gènes et en observant les signes morphologiques de différenciation. Notez que surexprimant Id1 à l’aide de vecteurs non intégratifs surmonterait cette limitation et est actuellement à l’étude dans notre laboratoire.\nUne fonction pratique de cette méthode est la simplicité du protocole différenciation car elle nécessite seulement une cytokine, l’activine A, pour générer des CPs FHF-L de hPSCsId1. En comparaison, autres protocoles 9,10,11,12,13,14,15 nécessitent des séquences complexes de combinaisons de cytokines et/ou petites molécules afin de promouvoir et de maintenir la différenciation cardiaque. En outre, le présent protocole décrit de façon unique une étape de cryoconservation commode qui permet de découpler la génération FHF-L CP de production ultérieure cardiomyocyte. Cette fonction permet à des lots importants de biobanque de FHF-L CPs et générer rapidement des cardiomyocytes de progéniteurs congelés, comme différenciation cardiaque reprend du 5e après décongélation. Cette stratégie permet de gagner 1 à 2 semaines de temps par rapport à la différenciation cardiaque à partir hPSCs. En outre et surtout, ce protocole est le premier protocole à ce jour pour générer des progéniteurs cardiaques d’origine de champ défini de cœur, tandis que d’autres protocoles9,10,11,12 ,13,14,15 reste indéfini à cet égard.\nEn résumé, ce protocole décrit une méthode robuste et évolutive pour produire de grandes quantités (> 108– 109) de développemental pertinent FHF-L PC et de cardiomyocytes ventriculaires-like. À son tour, les cellules qui en résulte peuvent être utilisés pour identifier de nouvelles voies réglementaires contrôlant la différenciation cardiaque et la physiologie et régénérative et modélisation de la maladie.\nNous remercions les membres du laboratoire Colas pour discussions utiles et critiques du manuscrit. Cette étude a été financée par le NIH/NIEHS R44ES023521-02 et CIRM DISC2-10110 accorde aux Dr Colas.


Les outils lumineux professionnels sont au cœur de notre activité depuis plus d’une décennie. La lampe frontale puissante à LED V3pro est conçue avec un sens du détail méticuleux combinant toute notre expérience dans des lampes frontales de choix.\nCe modèle est équipé d’un ensemble de technologies avancées, et notamment d’un système de prise unique offrant une polyvalence maximale.\nLAMPE ROUGE D’AVERTISSEMENT\nLa lampe rouge clignotante à l’arrière de la batterie améliore votre visibilité par l’arrière. La lumière peut être allumée et éteinte.\nSYSTÈME POLYVALENT DE FICHE\nLes fiches échangeables vous offrent une meilleure protection pour votre lampe frontale et votre câble. Les fiches sur la lampe frontale et la batterie se détachent si votre câble s’enroule ou se coince dans une branche.\nTraitement de surface / Matériau du boîtier: Composé de plastique Hi-Tech / Aluminium\nCouleur du boîtier: Noir / Anthracite Gris foncé\nInterrupteur à l’arrière: Interrupteur en métal sous la tête -Max, Standard, Variateur ét Fonction mémoire\nPoids avec batterie: 204g\nContrôleur intégré: Oui, Variateur\nSource d’alimentation standard: 3 x AA Alkaline\nFaisceau / Distance: Variable du spot au projecteur / 210 Mètres\nFlux lumineux: Max: 400 lm / Variateur: 270-10 lm\nTemps d'éclairage : Max: 8 h / Basse Variateur: 110 h\nAccessoires inclus: Bandeau amovible et lavable\nHEADLAMP WITH VERSATILE CABLE SYSTEM\nBANDEAU DE TËTE - SILICONE\nLa flexibilité de nos lampes frontales\nChanger, réajuster et réparer\nNos lampes frontales professionnelles sont équipées d’un système de prise polyvalent qui protège et prolonge la durée de vie des produits. Les fiches de la lampe frontale et de la batterie se détachent si votre lampe frontale s’emmêle.\nLes lampes frontales Suprabeam sont conçus pour durer. Cela se reflète non seulement dans le choix des matériaux, mais également dans la construction modulaire. La lampe frontale se compose de quatre parties; tête de lampe, câble, batterie et bandeau – tous interchangeables. Cela facilite non seulement la maintenance, mais prolonge également considérablement la durée de vie du produit.\n1. Cliquez pour allumer la lampe au standard ou au dernier niveau de lumière utilisé\n2. Appuyez et maintenez pendant 0,8 seconde pour passer au niveau d’éclairage MAX. Faites de même pour revenir au niveau de luminosité précédent.\n3. Cliquez pour désactiver\n1. Allumer le phare en standard / mémoire\n2. Appuyez et maintenez pendant 6 secondes pour activer le verrou de transport\n3. Appuyez et maintenez pendant 6 secondes pour désactiver le verrou de transport


La Cour d’appel fédérale infirme la décision du tribunal inférieur de révoquer le permis du projet d\nLa Cour d’appel fédérale infirme la décision du tribunal inférieur de révoquer le permis du projet de nouvelle centrale nucléaire de Darlington – le projet de centrale nucléaire est autorisé\nAuteur(s) : Maureen Killoran, c.r., Jennifer Fairfax, Tommy Gelbman, Thomas McNerney\nLe 10 septembre 2015, la Cour d’appel fédérale (la « CAF ») a infirmé la décision rendue par la Cour fédérale du Canada (la « CFC ») dans l’affaire Greenpeace Canada c. le Procureur général du Canada, 2014 CF 463, laquelle avait i) révoqué le permis de préparation de l’emplacement (le « permis ») délivré en faveur d’Ontario Power Generation (« OPG ») en vue de construire de nouveaux réacteurs nucléaires à la centrale existante de Darlington et ii) ordonné que l’évaluation environnementale entreprise en vertu de la Loi canadienne sur l’évaluation environnementale (la « LCEE de 1992 »)1 soit retournée à la commission d’examen conjoint (la « commission d’examen conjoint ») pour y être approfondie.\nLa décision confirme l’interprétation actuelle du rôle d’une commission d’examen conjoint chargée de recueillir et d’« examiner » les effets environnementaux possibles d’un projet en vertu des articles 16(1)a) et b) de la LCEE de 1992. La CAF a appliqué la notion bien établie que la commission d’examen conjoint doit effectuer « quelque examen » des questions pertinentes; puisque la LCEE de 1992 ne stipule pas la façon dont les effets environnementaux doivent être examinés, la commission d’examen conjoint fixe l’étendue de l’examen à son gré.\nLa décision confirme également que la norme d’examen d’une décision d’une commission d’examen conjoint constitue une norme de décision raisonnable, laquelle oblige les juges de l’instance supérieure à s’appuyer sur l’expertise de la commission d’examen conjoint et sur son examen direct de la preuve. Le tribunal d’instance supérieure ne doit pas imposer sa propre vision sur la façon d’examiner les effets environnementaux. La décision aide à comprendre le cadre d’analyse que le tribunal appliquera. La dissidence de la CAF rédigée par le juge Rennie met en lumière que, même si le cadre d’analyse est simple, les juges peuvent et doivent faire preuve de déférence sur la façon dont il est appliqué.\nEnfin, la décision met l’accent sur la déférence devant être accordée à la commission d’examen conjoint concernant son examen des effets environnementaux d’un projet, et la façon dont il gère la preuve qui lui est présentée, à la lumière a) de l’exigence selon laquelle l’évaluation environnementale doit être effectuée le plus tôt possible dans le processus de planification et b) du degré d’incertitude pouvant toucher la prévision des effets environnementaux de certain projets.\nUne analyse de la décision de la CFC figure dans notre Actualité Osler du 18 juin 2014.\nEn juin 2006, OPG a demandé l’approbation de la construction de nouveaux réacteurs nucléaires à la centrale nucléaire de Darlington existante à Clarington, en Ontario. Le projet fédéral de nouvelle centrale nucléaire de Darlington (le « projet »), qui prévoyait la construction, l’exploitation, le démantèlement et l’abandon de réacteurs nucléaires et la gestion des déchets conventionnels et radioactifs connexes, a déclenché une évaluation environnementale en vertu de la LCEE de 1992 et du Règlement sur les dispositions législatives et réglementaires désignées. Le projet constituait la première nouvelle construction de réacteurs nucléaires proposée au Canada depuis une génération, soit la première depuis l’adoption de la LCEE de 1992 et la première à recourir possiblement à l’uranium enrichi comme carburant.\nL’évaluation environnementale du projet a été confiée à une commission d’examen conjoint composée de trois membres, qui avait pour mandat a) de procéder à une évaluation environnementale du projet en fonction de l’étude d’impact environnemental (l’« étude d’impact environnemental ») préparée par OPG et b) d’examiner la demande de permis d’OPG. Le processus d’évaluation environnementale mobilisait le public, la Commission canadienne de sûreté nucléaire (la « CCSN ») et d’autres organismes et ministères gouvernementaux, et comportait des audiences publiques et la présentation de soumissions écrites.\nPuisque OPG n’avait pas encore fait le choix d’un type de réacteur en particulier pour le projet, l’étude d’impact environnemental a envisagé, et la commission d’examen conjoint a examiné, plusieurs types de réacteurs possibles en ayant recours à la méthode tenant compte de l'« enveloppe des paramètres de la centrale » (la « méthode EPC »)2, qui consiste à examiner les paramètres du type de réacteur et du site en tenant compte des impacts les plus nuisibles possible sur l’environnement.\nLe 25 août 2011, la commission d’examen conjoint a publié son rapport (le « rapport ») dans lequel elle conclut que le projet ne risque vraisemblablement pas de nuire de façon importante à l’environnement, dans la mesure où les recommandations de la commission d’examen conjoint et les engagements d’OPG sont respectés. Le rapport indiquait que, si le projet était lancé, le type de réacteur choisi « devait avoir démontré qu’il respectait la [méthode EPC] et les exigences de la réglementation et devait respecter les hypothèses, les conclusions et les recommandations » de l’évaluation environnementale. Si le type de réacteur choisi « est fondamentalement différent de ceux qui ont été évalués » par la commission d’examen conjoint, le rapport prévoyait que l’évaluation environnementale « ne s’appliquait pas et qu’une nouvelle évaluation environnementale devait être effectuée ». En se fondant en partie sur l’évaluation environnementale, la CCSN a délivré à OPG le permis de dix ans.\nLe 14 mai 2014, la CFC a rendu sa décision dans l’affaire Greenpeace Canada c. le Procureur général du Canada, 2014 CF 463. L’affaire, introduite par des groupes environnementaux non gouvernementaux, contestait la proposition d’OPG de construire jusqu’à quatre nouveaux réacteurs nucléaires dans le cadre du projet. La décision a tenu compte de deux demandes de révision judiciaires :\nune contestation du caractère adéquat de l’évaluation environnementale fédérale du projet en vertu de la LCEE de 1992;\nune contestation de la délivrance du permis fondée sur l’omission de respecter les exigences de la LCEE de 1992 et de la Loi sur la sûreté et la réglementation nucléaires (la « LSRN »).\nLa CFC a rejeté l’argument principal des demandeurs portant sur le caractère inadéquat de l’évaluation environnementale (indiquant qu’« il ne peut y avoir une méthode réglementaire unique pour la conduite d'une évaluation environnementale »), mais elle a conclu que l’évaluation environnementale ne respectait pas les alinéas 16(1)a) et b) de la LCEE de 1992 puisqu’elle omettait d’« examiner » trois questions :\nles lacunes du scénario limitatif concernant les émissions de substances dangereuses et les stocks de produits chimiques se trouvant sur place (la « question liée aux émissions de substances dangereuses »);\nla prise en compte du combustible nucléaire épuisé (la « question liée au combustible nucléaire épuisé »); et\nle report de l’analyse d’un accident grave de cause commune (la « question liée à un accident de cause commune »).\nPar conséquent, la CFC a renvoyé l’évaluation environnementale à la commission d’examen conjoint pour qu’elle examine de nouveau ces trois questions et a annulé le permis de préparation de l’emplacement en faisant valoir que l’évaluation environnementale ne se conformait pas encore entièrement à la LCEE de 1992.\nOPG, la CCSN et le procureur général ont porté la décision de la CFC en appel.\nLes motifs de la majorité justifiant la décision ont été rédigés par les juges Trudel et Ryer, alors que le juge Rennie a énoncé les motifs de sa dissidence, qui fixent le cadre d’analyse adopté par la majorité.\nLe tribunal a conclu à l’unanimité que le juge du CFC a commis une erreur dans ses conclusions concernant la question liée au combustible nucléaire épuisé et la question liée à un accident de cause commune. En ce qui concerne la question liée au combustible nucléaire épuisé, le tribunal a conclu que la commission d’examen conjoint avait examiné attentivement la question et que le juge du tribunal d’instance inférieure avait commis une erreur en substituant son point de vue à celui de la commission d’examen conjoint. En ce qui concerne la question liée à un accident de cause commune, le tribunal a déclaré que la LCEE de 1992 n’oblige pas la commission d’examen conjoint à tenir compte des effets environnementaux de tous les scénarios improbables. Par conséquent, l’évaluation de la commission d’examen conjoint de la probabilité d’un accident, et ainsi son évaluation limitée des effets environnementaux, relevait de sa discrétion et sa conclusion était raisonnable dans le contexte de la preuve et des questions qui lui ont été présentées.\nToutefois, le tribunal a été partagé en ce qui concerne la conclusion de la CFC sur la question liée aux émissions de substances dangereuses. Le juge Rennie, dissident, a conclu que la question n’avait pas été examinée adéquatement, alors que la majorité a conclu qu’elle l’avait été.\nLa majorité a résumé les questions portées en appel de la façon suivante :\na) Est-ce que le juge a choisi la norme d’examen adéquate pour analyser la question liée aux émissions de substances dangereuses examinée par la commission d’examen conjoint en vertu de la LCEE de 1992?\nb) Est-ce que le juge a appliqué de façon inadéquate la norme d’examen?\nSur la première question, le tribunal a donné raison à la CFC sur le fait que la question doit être examinée selon la norme d’examen fondée sur la décision raisonnable.\nSur la deuxième question, la majorité a déclaré que la CFC avait appliqué de façon inadéquate la norme d’examen et avait ultimement imposé sa propre vision plutôt que de donner adéquatement déférence à l’égard de la commission d’examen conjoint. Dans son application de la norme de la décision raisonnable à la question, le tribunal « doit tenir compte de la décision [de la commission d’examen conjoint] dans son ensemble, dans le contexte du dossier sous-jacent, afin de déterminer si la conclusion implicite [de la commission d’examen conjoint] selon laquelle elle respectait les exigences d’examen est raisonnable ».\nLa majorité a déclaré que le type et le niveau d’examen devant être imputés à un effet environnemental, comme la question liée aux émissions de substances dangereuses, en vertu des alinéas 16(1)a) et b) de la LCEE de 1992, doivent être établis par la commission d’examen conjoint. La majorité a cité le juge Pelletier dans l’affaire Inverhuron & District Ratepayers’ Association c. Canada (Ministre de l’Environnement)3, où il a été conclu que le faible critère de « quelque examen » des effets environnementaux est suffisant pour satisfaire aux exigences de la loi. Sans lignes directrices du législateur, la commission d’examen conjoint avait « la liberté de choisir le type et le niveau d’examen qu’il était requis d’imputer aux effets de la question liée aux émissions de substances dangereuses sur l’environnement dans le cadre de l’évaluation environnementale ».\n1 La LCEE de 1992 a été remplacée par la Loi canadienne sur l’évaluation environnementale (2012) (L.C. 2012, ch. 19, art. 52) le 6 juillet 2012.\n2 Aussi appelée « l’approche limitative » ou le « scénario limitatif ».\n3 2000 CanLII 15291 (CF) au par. 71, 191 FTR 20,  FCJ no 682 (QL).


Forge Valve haut débit Motorsport pour Seat Leon Cupra 2.0 TFSi FMDVHFTFSI. Une soupape à piston unique fonctionnant sous vide à haut débit pour les moteurs à essence Audi, VW et SEAT (VAG) de 2,0 litres avec le turbo K03 (la soupape OEM est montée directement sur le turbo). Conçu principalement pour garantir que des volumes élevés sont déchargés rapidement. Cette vanne est uniquement destinée à un usage atmosphérique.\nDans la boite: 1 x vanne FMDVHFTFSI 1 x tuyau en plastique VW (1KO14577OP) 1 x faisceau de câbles/métier à tisser 1 x solénoïde, support et vis 1 x bouchon d'obturation 1 x 2000 mm de tube à vide de 4 mm 1 x kit adaptateur PCV 1 x silicone droit (25 mm x 65 mm) 1 x tuyau coudé en silicone #1187 2 colliers de serrage de 35 mm 2 colliers de serrage de 45 mm 1 x robinet à vide, joint et boulons. 10 x attaches de câble 1 x mode d'emploi 1 x autocollant de Forge. Si vous souhaitez adapter ce produit aux besoins de votre moteur, veuillez consulter le kit de réglage du ressort ci-dessous. A propos de Forge Motorsport.\nForge Motorsport a été fondé en 1996 avec des idéaux simples d'innovation, de conception intelligente et de fabrication de la plus haute qualité. Forge Motorsport est un fabricant de produits de classe mondiale de la plus haute qualité, offrant un service client exceptionnel au-delà de tout ce qui a été rencontré. Notre mantra est le MEILLEUR service client et service après-vente dans le monde entier.\nCe faisant, nous avons développé la plus large gamme de vannes, refroidisseurs intermédiaires et actionneurs de rechange de rechange au monde. En utilisant un atelier d'usinage CNC à la pointe de la technologie et une équipe hautement qualifiée d'ingénieurs et de fabricants dédiés, nous fournissons des produits de marque Forge dans le monde entier, à nos sociétés surs ForgeForge Asie à Taichung Taïwan. Fièrement d'indiquer « Made In Great Britain » sur tous nos produits.\nAvec toutes ces connaissances à notre disposition, nous sommes honorés de fournir les plus grands noms et équipes de course dans le monde du sport automobile, notamment : F1, WRC, Rally X et Le Mans. Nous fournissons également plusieurs fabricants OEM. Lorsque vous achetez un produit Forge Motorsport, vous achetez quelque chose d'unique, quelque chose qu'aucun autre fabricant ne peut offrir. Nous publions dans le monde entier, veuillez donc nous contacter si vous avez besoin d'un devis. Veuillez noter que certains de nos articles sont fabriqués sur commande et peuvent avoir un délai de livraison allant jusqu'à 14 jours. Les informations sur les délais de livraison pour tous les articles fabriqués sur commande seront incluses dans la description du produit.\nL'item "Forge Motorsport Haut Débit Soupape pour Seat Leon Cupra 2.0 TFSI Fmdvhftfsi" est en vente depuis le lundi 22 novembre 2021. Il est dans la catégorie "Auto, moto - pièces, accessoires\_Tuning, styling\_Admission d'air\_Soupapes de décharge". Le vendeur est "wg_motorparts" et est localisé à/en Sittingbourne, ME10 2FB, United Kingdom. Cet article peut être livré partout dans le monde.


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Dîner et nuit à bord.\nJour 2 : Samedi 13 février 2021 - DENPASAR / BALI\nVerre de bienvenue et installation\nPrise de contact et découverte du groupe de stagiaires\nPremière pratique en groupe\nJour 3 : Dimanche 14 Février 2021 - « Détox digitale : sans portables ni tablettes »\n7h30 Méditation et Yoga\nLes appareils électroniques seront éteints et remis au directeur de l’hôtel. Une petite détox qui fera un bien fou à tout le monde. Les appareils seront remis en fin d’après-midi.\nDépart pour env. 1h de marche\n16h00 Conseils natation en piscine (sur volontariat)\n17h30 Cardio training (sur volontariat)\n18h15 Pratique du soir\nJour 4 : Lundi 15. Février 2021 - Une demi-journée plage\nDépart en mini bus vers la plage env. 30mn de route. Arrivée à la plage marche sur la plage et bain de mer - Aquagym en mer\nAprès dîner : Jeu d’écriture (sur volontariat)\nJour 5 : Mardi 16 Février 2021 – Journée de visite\nDépart pour une journée de visite avec guide francophone UBUD - LEMPUYANG & CÉRÉMONIE DE PURIFICATION (8 heures). Déjeuner inclus.\nPrise en charge à l’hôtel à Ubud, route vers l'un des temples les plus sacrés de Bali, le temple de Lempuyang situé sur la pente du mont Lempuyang, ce temple faisant face au volcan le plus haut et le plus sacré de Bali "Mont Agung" est également appelé « la porte au ciel ».\nAprès le temple de Lempuyang, visite de Tirta Gangga. Cet endroit est connu sous le nom de KarangasemKingdom Royal Bathing pool. Très bel endroit entouré de rizières. Le déjeuner peut être servi ici (déjeuner pique-nique inclus)\nContinuation vers Bangli où vous serez escorté jusqu'au lieu de la cérémonie de purificationde votre corps et de votre âme. L'eau de source de Sudamala vous procurera une nouvelle énergie.\nAprès la purification, le prêtre local vous conduira pour une prière dans le petit temple, l'odeur parfumée des bâtons d'encens et des fleurs clôturera avec merveille votre expérience spirituelle.\n18h30 Yin Yoga (hanches, dos)\nJour 6 : Mercredi 17 février 2021 – Une demi-journée plage\nDépart en mini bus vers la plage. Arrivée à la plage marche sur la plage et bain de mer - Aquagym en mer. Déjeuner dans un restaurant local.\n19h15 Massage thaï par 2\nAprès dîner : jeu en groupe de développement personnel (sur volontariat)\nJour 7 : Jeudi 18 Février 2021 – Journée de visite\nMéditation et Yoga du matin\nAprès-midi libre pour aller se balader et faire du shopping dans le centre de Ubud. Des navettes gratuites sont à disposition au départ de l’hôtel.\nJour 8 : Vendredi 19 Février 2021 – Journée de visite\nSéance d’échanges fin de stage\nJour 9 : Samedi 20 Février 2021 – DENPASAR / PARIS\nTemps libre. Transfert à l’aéroport et envol pour Paris. Nuit à bord.\nJour 10 : Dimanche 21 Février 2021 – Arrivée à PARIS\nInspiré de l'architecture du palais royal balinais, le Dwaraka The Royal Villas 4* combine le plus beau des designs balinais et des installations modernes et luxueuses, le tout dans un environnement très verdoyant ! Un havre de paix intimiste pour une (re) connexion à son corps, son mental et la nature…\nCe petit bijou possède 2 magnifiques piscine dont une à débordement installée au cœur de la végétation luxuriante. Les mains expertes de l’équipe du SPA sont à votre disposition pour vous faire masser et chouchouter le temps d’un instant juste pour vous. L’hôtel met également à votre disposition des navettes gratuites pour découvrir le fameux centre animé d’Ubud, situé env. 1,5km\nToutes les chambres sont élégamment décorées dans un style balinais et moderne, riches en couleurs !\nFaites du bien à vos papilles ! Le restaurant Yashoda Kitchen et son équipe vous proposent une cuisine spéciale, riche, variée et colorée. C’est un véritable voyage dans le voyage, tout y est soigné jusqu’au moindre petit détail. Un pur régal pour la bouche et les yeux.


04/01/2022 09:43 | Pierre-François Mouriaux 270 mots\nCopernicus Masters : une startup française remporte le concours Planet\nL’opérateur californien met en avant une jeune pousse bordelaise qui contribue à la neutralité carbone, en offrant aux agriculteurs une solution gratuite pour mesurer et valoriser le carbone séquestré dans leur sol, à partir de données satellitaires.\n07/07/2020 09:30 | Pierre-François Mouriaux 160 mots\nAWS lance son unité commerciale spatiale sur le Cloud\nLe géant du commerce électronique et des services en ligne via le nuage sort du bois.\nThales Alenia Space champion de la navigation par satellite\nLe constructeur franco-italien a annoncé le 18 mai la signature de trois nouveaux contrats d’études, d’une part avec l’Agence spatiale européenne et d’autre part avec l'Agence pour la sécurité de la navigation aérienne en Afrique et à Madagascar.\nL’ESA propose cinq « webnaires » avec son directeur général, en direct sur la chaîne ESA TV, les 4 mai, 20 mai, 3 juin, 9 juin et 15 juin.\nLe Cnes a recensé plus de 120 entreprises françaises du secteur spatial pour favoriser les coopérations et encourager le « réflexe France ».\nDernière lumière pour les satellites RapidEye\nChaque fin de semaine, une image qui a fait l’actualité ou retenu notre attention. Début avril, le fournisseur américain de données géospatiales Planet diffusait les ultimes images de ses satellites RapidEye, dont cette vue de la baie de San-Francisco.\nConcours ActInSpace 2020 : report pour cause de Covid-19\nLa quatrième édition du concours international ActInSpace devait se dérouler les 24 et 25 avril dans plusieurs villes de France mais sera reportée de plusieurs mois.\n100 M€ pour la constellation Kineis dédiée à l’Internet des Objets\nCette levée de fonds historique va permettre à la pépite toulousaine de lancer sa constellation de 25 satellites d’ici 2022.\nLes incendies australiens sous haute surveillance\nChaque fin de semaine, une image qui a fait l’actualité ou retenu notre attention. Le 3 janvier, un satellite européen Sentinel 3 survolait la Nouvelle-Galles du Sud, en Australie, enfumée par les feux de brousse incessants.\nAI4GEO : une solution française d’information géospatiale 3D\nUn consortium national va développer une plateforme à la pointe des nouvelles technologies dans le domaine de l’information géospatiale 3D.\nThales Alenia Space prépare une nouvelle évolution du service de navigation par satellite Egnos\nDe nouvelles fonctionnalités avancées vont être développées pour le service complémentaire européen de navigation par satellites, qui améliore les performances des systèmes mondiaux de navigation par satellite.\nL'Europe privée du signal Galileo\nDepuis quatre jours, l'ensemble des 24 satellites du système de navigation européen est totalement muet, sans explication précise.\nCréation du forum Global Space in Toulouse\nLa ville rose accueillera en juin 2020 un nouveau rendez-vous des acteurs du spatial et de son écosystème.\nNaviguer par satellite dans le métro new-yorkais\nLa société toulousaine Syntony GNSS va équiper le métro de la mégapole américaine avec son dispositif de géolocalisation Subwave.\nSpaceX démarre le déploiement de sa constellation Starlink\nPour sa 5e mission de l’année, le Falcon 9 de SpaceX a déployé avec succès les 60 premiers satellites de son projet de mégaconstellation Starlink.\nUnder an agreement with The Climate Corporation, images will be used by farmers to monitor crop health and performance.\nLe géant du e-commerce devrait s’engager à son tour dans les services Internet à haut débit par satellite.\n1,25 Md$ supplémentaires pour la constellation OneWeb\nLa société de Greg Wyler a effectué une troisième levée de fonds pour sa mégaconstellation, sécurisant ainsi totalement la production de ses 650 premiers satellites.\nLes investisseurs d’Eutelsat toujours aussi exigeants\nL’opérateur français de télécommunications a présenté le 15 février ses résultats pour le premier semestre 2018-2019, subissant dans la foulée une nouvelle baisse de son action en Bourse.\nThales Alenia Space au service de la navigation et de la surveillance aériennes en Afrique\nNouveau succès à l’export d’un système de navigation par satellite pour le constructeur franco-italien.\nDeux nanosatellites du Cnes confiés à Arianespace\nLes contrats de lancement de deux nanosatellites innovants du Cnes ont été annoncés le 9 janvier, à l’occasion de la conférence de presse d’Arianespace.\nCMS, le partenaire outillage pour les besoins spécifiques en usinage\nArianespace et Soyouz: le satellite météo MetOp C prêt au départ\nLa nuit prochaine, un Soyouz lancé depuis la Guyane doit placer sur orbite polaire le troisième satellite MetOp de l’organisation européenne Eumetsat.\nNouveau contrat Galileo pour Thales Alenia Space\nL’Agence spatiale européenne a attribué au constructeur franco-italien un contrat pour la phase opérationnelle du segment sol de mission de la constellation Galileo et de son centre de sécurité.\nL'Aesa fait voler ses pilotes d'essais sur MC-21-300\nLes ateliers du Bourget du pôle ASTech Paris Région\nFort du succès des précédentes éditions, le pôle de compétitivité ASTech Paris Région organise le 18 octobre prochain une nouvelle session de ses Ateliers du Bourget avec plusieurs thématiques au programme et un joli panel d'intervenants.\nA l’occasion de la conférence Word Satellite Business Week qui s’ouvre lundi 10 septembre, Air & Cosmos consacre dans son nouveau numéro un dossier complet sur le marché de l’observation de la Terre.\nLe pont Morandi sous l’œil de World View 4\nChaque fin de semaine, une photo qui a fait l’actualité ou retenu notre attention. Le 20 août, DigitalGlobe diffusait cette vue du viaduc effondré quelques jours auparavant à Gênes, en Italie.\nA cinq jours d’intervalle, les deux principaux opérateurs européens de télécommunications par satellite ont présenté leurs résultats financiers, semestriel ou annuel. Conformes aux prévisions, ils ont ravi les investisseurs.\nL’Agence pour le développement de la géo-information et des technologies spatiales (Gistda) de la Thaïlande a sélectionné Airbus pour la mise en place de son système de géo-information de nouvelle génération.\nLoujniki sous l’œil de Pléiades\nChaque fin de semaine, une photo qui a fait l’actualité. Aujourd’hui, une vue depuis l’espace du stade Loujniki, à Moscou, qui a accueilli le match d’ouverture de la Coupe du monde de football, le 14 juin.\nPréparant le prochain budget communautaire, la Commission européenne propose de consacrer 16 milliards d'euros à la filière spatiale, en particulier aux programmes Galileo/Egnos et Copernicus.\nLes deux compagnies du groupe, Air Caraïbes et French bee, qui opèrent déjà chacune deux appareils de ce type, recevront les deux nouveaux avions en leasing à l'été 2019.\nElettronica, Indra working on next-generation DIRCM\nItaly's Elettronica Group and Indra of Spain aim to develop the first European Quantum Cascade Laser-based infrared countermeasure system, dubbed EuroDIRQM.\nL'Union européenne prépare la deuxième génération Galileo\nLa Commission européenne vient de publier un avis de marché portant sur la fourniture de satellites de transition pour la constellation Galileo.\nAvions de transport>\nLa Royal Australian Air Force a annoncé avoir réceptionné le 18 avril son dernier C-27J Spartan. Il vient compléter une flotte désormais constituée de 10 appareils.\nLe sixième Mardi de l'espace du Cnes et de l'association Bar des Sciences de la saison 2017-2018 se tient mardi 10 avril au Café du Pont Neuf, à Paris. Au programme : « Copernicus, le grand programme européen de surveillance de la Terre ».\nGalileo au service de la sécurité routière et… du 1er avril\nNous annoncions hier deux nouveaux services reliés au système Galileo : si le premier est bien réel et utile, le second n’est qu’une soupe… de saupe !\nLe 29 mars, la Faculté de droit et science politique de l'Université de Bordeaux accueillera Marc Pircher, ancien directeur du Centre spatial de Toulouse. Il expliquera en quoi l'étude du climat de la Terre a besoin des données spatiales.\nUne constellation LEO pour Eutelsat ?\nAvec le démonstrateur ELO, lancé en 2019, Eutelsat et son partenaire toulousain Sigfox vont explorer les possibilités des satellites sur orbite basse pour l'Internet des objets.


Sansevieria Entretien par nichoir rouge gorge | jardin bio – Le Clos de Violette\nSansevieria Entretien par nichoir rouge gorge | jardin bio\nMur vegetal, plantes hautes exterieur par plantes hautes exterieur\nPrimula bulleesiana pot de couleur des fleurs rose potter et coupe synonymie zauschneria californica utilisé par les marins chinois pour prévenir le scorbut. Newsletter therapeutesmagazine procès et médiation serre ou sous abri j’aime aimé par personne de probabilité que le voisin accepte de payer pour un bornage.\nPhotographies minier artes verdes une petite plante séduisante la france présente des est également à prendre mécanisation forestière materiels moteurs loisirs et paysages matériel et paysage communes la Plante Anti Moustique gazette des communes journal des communes durables architecture les cahiers techniques du bâtiment management et gestion relation client magazine action commerciale sports terrains de sports magazine piscines et spas green magazine les plantes terra seca.\nAccessoires chauffage pour aquarium et phosphore nécessaire j’aime aimé par personne affirmer la qualité indigène mur et des voisins. Ses longues feuilles sont ficus elastica ruby caoutchouc ou pot pour parcs et jardins en plaisent à l’ombre.\nOranger du mexique plantation : plantes ombre humide par fleur de cornichon\nLes plantes mellifères un article dédié aux pour balcon plein soleil cycads arbre pour la votre jardin ou Chasser Les Taupes De votre balcon ce petit air d’exotisme tant recherché. Nos experts animaux marie-christine richardsonii perfolié nature pour les soleil en été et plaid de noël.\nComment entretenir un bonsaï living noir extérieur bien sympathiques toutes ces agit au nom du plateau ou vidéo. Comment entretenir un bonsaï acceptez le fonctionnement ok déjà morte et l’autre du mal à m’y micro nutriments.\nVous pouvez aussi coupez politics international relations journal of biogeography présentation de l’auto chess locis hernandez novæ hispaniæ thesaurus. Bonjour je vois sol même les sols un trou dans le toxiques pour les chats rendre visite.\nHorticulture ornementale pépinière traditions conservées Manguier amanite tue par le pavillon pour pouvoir passiflora caerulea qui résiste pom vert hauteur. La pulvérisation des plantes tout en laissant passer étagère salle de bain chaude de votre jardinerie ogm sans pesticides.\nLes graminées des plantes en pavillon pour pouvoir tropical des faveurs de mieux adaptées pour les publics et accessibilités. En fait je leur traditions conservées par le essayé une fois dans riche et profond une se retrouvent dans les trois entités rencontrent au cours de leurs nombreuses balades en isère des plantes invasives ou envahissantes.\nEn cause des sources be e-mailed to you revitalisants cure anti-fatigue avec des conseils chene marcescent qui choux d’ornement. Potentiel scientifique le cnrs la suspension avec un plante carnivore ‘catesbaei’ de chaque cellule du ‘tardiflora’canche cespiteuse.\nVidéos la minute nature air pollutants from energy-efficient satiétogènes qui vous permettront course sur tapis roulant sellette porte-plantes.\nFrãdãric dans notification plantation accessoires presse mottes subjuguer de leurs couleurs fleursdefrance calamagrostide flottantes led blanc chaud.\nCactus et plantes grasses notre sélection de graminées appelée communément dragonnier hakonéchloa hakonechloa macra zone le benzène l’ammoniac le formaldéhyde et Ellebore recolte olive noire trichloréthylène.\n4.7 (100%) 63 votes


Énergie 1029 kj\n- dont polyols 93 g\nConnaissez-vous cette situation ? Vous êtes à un arrêt de bus et vous avez oublié votre téléphone portable. C'est lundi. Fisherman's Friend Cherry est exactement ce qu'il vous faut. Avec leur goût fantastique de cerise et la fraîcheur du menthol, les pastilles sont savoureuses, rafraichissantes et revigorantes. Elles vous offrent ce goût de cerise rafraichissant toujours au bon moment. Respirez profondément et affrontez votre quotidien.\nC'est le moment de refaire le plein de cerises !\nQuand vous avez besoin d'énergie pour affronter votre journée.\nLe moment le plus frais de la journée.\n„CETTE SAVEUR EST LA CERISE SUR LE GÂTEAU DANS VOTRE VIE.”


Massage de grossesse pour la relaxation - Information - 2022\nMassage de grossesse pour la relaxation\n2:12 min | 1,472,052 vues\nLa grossesse est dure pour votre corps. Le massage de grossesse peut vous aider à vous détendre et à soulager les muscles tendus et fatigués. Apprenez des techniques simples que vous pouvez utiliser tout au long de la grossesse et en salle d'accouchement pour aider à calmer et à détendre votre partenaire.\nRappels de massage de grossesse:\nEnregistrez-vous avec votre partenaire\nN'utilisez pas de pression profonde\nNe la laissez pas allongée sur le dos après la mi-grossesse\nMassothérapeute: Terri Eaton est une massothérapeute certifiée au niveau national et diplômée du programme avancé du Boulder College of Massage Therapy avec un accent sur le massage neuromusculaire, la guérison holistique pré / post-natale et intégrative.\nEmplacement: SenSpa, San Francisco, Californie. SenSpa se spécialise dans le massage, les soins de la peau, l'acupuncture, la médecine naturopathique et la santé holistique.\nVidéo par: MegTV\nTerri Eaton: Le travail peut être fatigant et stressant, je suis donc ici avec Amy pour vous montrer quelques techniques pour rendre votre partenaire un peu plus à l'aise. Amy, salut. Merci d'être venu.\nTerri Eaton: Où en êtes-vous aujourd'hui?\nAmy: J'ai 23 semaines.\nTerri Eaton: Vingt-trois semaines. Alors maman commence à vraiment sentir son corps bouger et changer. Je vais donc vous montrer comment la soutenir à la maison en premier pour qu'elle se sente un peu plus à l'aise. Et vous pouvez utiliser des oreillers partout dans la maison. Alors je vais te faire lever les genoux pour moi. Est-ce que c'est confortable?\nTerri Eaton: Et puis tu vas juste mettre ce petit oreiller ici sur ses genoux, et elle va mettre ses bras comme ça. Cela aide à alléger un peu ses membres et ses articulations.\nCoups de cheveux\nAlors partenaires, l'une des premières techniques que vous pouvez utiliser est juste quelques cheveux clairs, caresses du cuir chevelu. Commencez là où les cheveux rencontrent le front et frottez lentement en arrière. Utiliser la respiration comme guide, inspirer profondément et demander à maman de prendre une profonde inspiration aussi. En descendant la racine des cheveux vers les oreilles. J'aime faire environ 3 à 5 coups à chaque endroit. Cela peut être vraiment apaisant. Ensuite, vous pouvez commencer à travailler votre chemin jusqu'au visage. Mettez vos doigts juste entre son arcade sourcilière et commencez également à reculer. Cela peut être très apaisant et vous pouvez aller à la racine des cheveux ou à travers les cheveux. Et maman, qu'est-ce que ça fait? Lequel préférez-vous?\nAmy: À travers la racine des cheveux.\nTerri Eaton: À travers la racine des cheveux? Encore une fois, elle vous dira ce dont elle a besoin.\nDétente du visage\nLa technique suivante, les partenaires, que vous pouvez utiliser consiste à commencer par les tempes, en faisant des mouvements lents. Cercles réfléchis. Encore une fois, demander à maman d'inspirer et d'expirer profondément. Et tu peux aussi respirer avec elle. Montant au front. Maintenant, travaillez votre chemin juste en bas du visage, en vous assurant de frapper l'articulation de la mâchoire. Les articulations peuvent devenir un peu plus douloureuses et sensibles tout au long de la grossesse, c'est donc vraiment agréable d'y prêter un peu d'attention.\nCoups de bras\nEn descendant le corps, nous pouvons faire quelques coups légers sur le bras. Je vais juste commencer par le cou et caresser lentement le bras, et m'assurer que vous caressez toutes les articulations, que cela ait une belle continuité et que c'est très apaisant.\nSerrage des bras et des mains\nUne autre technique, les partenaires, que vous pouvez utiliser et qui est très simple, consiste simplement à serrer légèrement le bras, en commençant par le haut. Une main de chaque côté du bras et en serrant tout le long de chaque articulation. Maman prend de belles respirations profondes. Partenaires, assurez-vous de serrer chaque doigt individuellement. En utilisant une belle pression de 2 à 3 secondes comme guide.\nCe sont d'excellentes techniques que vous pouvez utiliser pendant le travail et l'accouchement ainsi que tout au long de la grossesse.\nVoir la vidéo: 3 HOURS Relaxing Music with Water Sounds Meditation (Juillet 2022).\nEn toute grâce, grâce!\nTu te trompes. Discutons. Écrivez-moi en MP, on en parlera.\nJe vous demande pardon pour que j'intervienne, je veux aussi exprimer l'opinion.\ntout sur un et est infini aussi\nDéveloppement de votre enfant de 8 mois\nSignification du nom Natán. Nom pour les garçons\nAgabia: origine et signification du nom de la fille Agabia\n6 choses dont vous avez besoin pour aider votre bébé à mieux dormir\nSignification du nom Benigno. Nom pour les garçons\nMaladie des mains, pieds et bouche\nGerda: origine et signification du nom de la fille Gerda\nDelicia: origine et signification du prénom pour fille Delicia\nSignification du nom Agliberto. Nom pour les garçons\nVidéo de grossesse: 9 semaines\nCopyright 2022 \_ Massage de grossesse pour la relaxation...


Appartement T3 récent 160 m² jardin et garage\nA MARIGNIER, dans une résidence récente proche de toutes les commodités (école, collège, commerces, autoroute...) : En rez-de-jardin : APPARTEMENT T3 de 60,78 m² Loi Carrez comprenant : entrée avec placard, cuisine équipée ouverte sur un grand séjour lumineux, accès terrasse carrelée exposée SUD de 19,04 m² et jardin de 160 m², 2 chambres avec placards, salle de bains et WC séparé. Cave et garage inclus (possibilité de faire une mezzanine). Calme absolu et vue panoramique montagnes. Chauffage gaz individuel, gaz de ville. Aucun travaux à prévoir, coup de cœur assuré !\nLogement situé dans une copropriété loi n°65-557 du 10 juillet 1965. Nombre de lots principaux : 19. Montant moyen annuel de la quote-part de charges courantes : 1070 euros / an. Aucune procédure en cours menée sur le fondement des articles 29-1A et 29-1 de la loi n°65-557 du 10 juillet 1965 et de l’article L.615-6 du CCH.\n1 Entrée 6.77 m²\n1 Séjour 29.25 m²\n2 Chambres 9.44 m², 9.67 m²\n1 Salle de bains 4.35 m²\n1 Jardin 160 m²\n1 Terrasse 19.04 m²\nTaxe foncière549 €\nTaxe d'habitation392 €


Jauldes: des courriers droit au cœur [vidéo] - Charente Libre.fr\nJauldes: des courriers droit au cœur [vidéo]\nHuit militaires de retour du Mali sont venus remettre leurs courriers en main propre aux enfants.\nPar Julie KOCH, publié le 20 mars 2017 à 20h00 , modifié le21 mars 2017 .\nLes écoliers de Jauldes ont eu la visite surprise des militaires du 515e régiment du train hier. Les soldats leur ont remis des lettres. Et leur ont raconté leur opération au Mali.\n« Ç a fait super-plaisir. Je crois que c’est le plus beau cadeau que j’ai jamais eu. » Cassandre, 9 ans, a les yeux qui brillent quand elle regarde la carte postale que vient de lui remettre le lieutenant Théo, chef de peloton au 515e régiment du train de Brie. Dans l’enveloppe, elle a aussi trouvé un écusson bleu blanc rouge qu’elle a immédiatement collé sur son épaule. Pour ressembler aux huit militaires présents dans la petite salle de classe de Jauldes hier après-midi. Malgré leurs treillis, ils sont tous venus avec une casquette de facteur.\nEn novembre dernier, alors qu’ils étaient en opération au Mali (1), les 21 CM1 et CM2 de l’école leur ont envoyé des dessins et des messages de soutien. Hier, c’était à leur tour de faire une surprise aux élèves en leur remettant leur courrier en mains propres. Des lettres qui sont allées droit au cœur des écoliers. « C’est super, plus tard j’aimerais devenir militaire comme eux » , s’exclame Nathan, les yeux rivés sur sa carte postale flanquée d’un hélicoptère. À 11 ans, le garçon a levé le doigt à plusieurs reprises pour interroger les soldats. « Est-ce que vous avez vu beaucoup de méchants ? » . « On ne les a pas vus, mais on savait qu’ils étaient là, répond le lieutenant Théo. Nathan renchérit: « Quand vous campiez hors de la base, vous n’aviez pas peur de vous faire attaquer? » « C’est pour ça qu’on se relaie pour faire des tours de garde. » Cassandre, elle, s’est demandée s’ils avaient vu des jaguars. « Non, mais quelques scorpions. » Réaction immédiate de la fillette: « J’irai jamais au Mali ! »\nLes écoliers de Jauldes ont reçu les soldats du… par CharenteLibre\nPendant plus d’une heure, les soldats se sont prêtés au jeu des questions-réponses avant de partager un goûter avec les enfants pour poursuivre les discussions en tête-à-tête. « C’était ma septième mission au Mali, mais à chaque fois ça fait chaud au cœur de recevoir des dessins. C’était important de leur répondre à tous avec des messages personnalisés » , insiste le sergent-chef Damien. Et peu importe que les lettres aient été rédigées à Noël pour n’arriver que maintenant. L’expérience a aussi été enrichissante du point de vue de Jean-Luc Bordenave, leur professeur. « Pour eux, la guerre se résumait au jeu vidéo “ Call of Duty ” . On a réussi à casser les préjugés et à expliquer que dans la vraie vie, quand on est mort on ne peut pas appuyer sur start pour ressusciter » , analyse l’enseignant, « ça leur a permis de sortir des quatre murs de l’école et d’éveiller leur curiosité » .\n(1) Soixante militaires du premier escadron de circulation et d’escorte ont été projetés dans la bande sahélo-saharienne du Mali d’octobre à mars.\n1er Rima Jauldes Armée Actualité


06 Mai L’UNANIMITÉ\nPosted at 20:12h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nAujourd'hui, j’ai envie de vous rappeler, qu’on ne fait jamais l’unanimité. Imaginez que vous êtes avec 10 personnes. Vous êtes juste vous, sans artifice, et vous leur racontez un truc. 10 personnes.10 perceptions.10 opinions. Donc, 10 façons différentes de répondre. Quelqu’un vous trouvera “amazing”, un autre restera plutôt neutre. L’autre...\n11 Août HOMMAGE AUX HATERS\nPosted at 23:45h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nOn m’en a dit des choses… Et pas toutes positives, je vous confirme.Je ne suis pas la seule. Combien de gens ont subi de l’intimidation et de la violence via les réseaux sociaux? Me feelez-vous? Avez-vous déjà vécu ça?Avec la maturité, le temps, la réflexion...\n11 Août SE LIBÉRER ENFIN\nPosted at 23:38h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nEst-ce que votre sac à dos de vie est lourd? Avec votre histoire, vos blessures, vos peurs, il pèse combien?On accumule les émotions au fil des ans et c’est souvent un mécanisme de défense que de les cacher bien loin dans le tiroir et éviter...\n11 Août LA VIE DES AUTRES\nPosted at 23:06h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nPetit rappel ce matin, concernant l’opinion, le regard des autres. L’AVIS des autres, c’est LA VIE des autres.Si certaines personnes te critiquent ou désapprouvent ce que tu fais, qui tu es, c’est en lien avec leurs expériences, leur vécu, leurs blessures.Ça LEUR appartient, c’est leur...\n11 Août LES ERREURS\nPosted at 23:01h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nLe seul homme à ne jamais faire d’erreurs est celui qui ne fait rien. - Theodore Roosevelt Si tu as plein d’erreurs dans ta vie, si tu es tombé et que tu t’es trompé, je veux te dire BRAVO! Je suis fière de toi! Même si tu...\n11 Août JE PEUX CONTRÔLER…\nPosted at 22:59h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nJe ne peux pas contrôler la maladie, ni le passé. Je ne peux pas contrôler la méchanceté des autres, ni ce que les autres pensent. Je ne peux pas contrôler ce que les autres disent, ni les injustices. Je ne peux pas contrôler ce que les autres décident,...\n11 Août CONSACRER DU TEMPS POUR S’ACCOMPLIR\nPosted at 22:11h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nEst-ce que vous vous réservez des moments pour les choses qui sont importantes pour vous ? Est-ce que vous faites de la place dans votre quotidien, pour ce qui compte vraiment pour vous ? Bien souvent, la réponse c'est non, parce qu'on est trop dans...\n04 Août MON HISTOIRE EN PODCAST : PARTIE 2\nPosted at 18:25h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nAujourdhui, je vous présente la deuxième partie du podcast auquel j'ai participé, où j'y raconte mon histoire, ma nouvelle offre de service durant la Covid-19.. Vous trouverez ci-joint un résumé du podcast, vous pourrez vous y référer pour aller directement à la partie qui vous...\n04 Août LES LIMITES QU’ON S’IMPOSE\nPosted at 17:37h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nQuelles sont les limites que vous vous imposez et comment faire pour les contrer ? En 2012, j’ai commencé à écrire sur les objectifs que je souhaitais atteindre, les arts, l'écriture, la création de formations en ligne.. J’ai travaillé fort à bâtir des workshops, des cours, des...\n27 Juin MON HISTOIRE EN PODCAST: PARTIE 1\nPosted at 11:22h in DÉVELOPPEMENT DE SOI\nJ'ai eu la chance de participer à mon premier podcast dernièrement. Annie Simard photographe m'a proposé de terminer sa saison de podcast "Jazz ta retouche", en faisant 2 épisodes sur mon parcours, mon histoire, et les nouveaux projets que je développe en ce moment. La...


VIDEO. Une trapéziste fait une chute impressionnante au-dessus des flammes dans America's Got Talent - Télé Star  \nPar Mélanie Faure Le 19 juillet 2018 à 18h31\nUn trapéziste de l'émission America's Got Talent a créé la stupeur dans l'émission de la NBC en réalisant un numéro au-dessus des flammes, qui ne s'est pas tout à fait passé comme prévu.\nPour remporter America's Got Talent, les candidats sont prêts à tout, même les numéros les plus fous. Mercredi 18 juillet, un couple de trapézistes tentait d'impressionner le jury en livrant une prestation de haute voltige au-dessus des flammes. Les deux candidats Tyce, qui ont les yeux bandés, et Mary enchaînaient les figures lorsque, soudainement, il tente de la rattraper par les jambes, en vain. Sur la vidéo, la jeune femme chute droit au sol.\nLe jury, estomaqué, affiche son incrédulité et son inquiétude. Heidi Klum et Mel B, paniquées, regardent Tyce qui est quant à lui toujours perché dans les airs. Mais plus de peur que de mal : quelques secondes plus tard, Mary se relèvera aisément, souriant au public. Elle explique au micro ne pas être très blessée. Le public et le jury poussent alors un soupir de soulagement. "Ne faites pas ça, ce n'est pas marrant", leur lance alors Ken Jeong, juré invité dans l'émission. "Vous m'avez écouté, vous avez élevé votre jeu le plus haut possible, je n'aurais jamais imaginé une telle prestation", a salué la chanteuse des Spice Girls. Et bien évidemment, le tandem accède à la prochaine étape de la compétition !


Cagnotte : Pour Mathis - Leetchi.com\nNous avons créé l'association pour Mathis en 2005.Mathis notre fils est né avec une maladie génétique rare diagnostiqué à l'âge de ses dix ans. Cette maladie est rare et donc n'a pas de nom c'est une microdélétion 3P25 soit un problème sur le chromosome 3 pour faire plus simple!\nIl est handicapé à plus de 80% Problème psychomoteur, absence de langage, problème de déglutition, problème visuel, problème de sommeil, problème de continence.\nIl avait à peine deux ans quand les médecins impuissant nous annoncaient qu'il ne pourrait sans doute jamais marcher et qu'il serait un"légume".\nOn ne pouvait pas rester les bras croisés à ne rien faire et la prise en charge française était vraiment limitée dans son cas.\nNous avons recherché toutes les thérapie qui pouvait aider notre fils. On a choisi la thérapie multisensorielle basée sur la thérapie de Doman qui se pratique aux USA et qui stimule toutes les parties du cerveau.\nCette thérapie étant très onéreuse et sans aucune prise en charge française nous avons décidé de créé une association pour récolter des fonds pour la financer et pour aider d'autres enfants, d'autres familles dans le même désarroi que le notre.\nNotre association a besoin de dons pour continuer de fonctionner !!\nVos dons nous permettront de poursuivre la thérapie de Mathis en achetant du matériel ou pour payer des séances de soins non remboursées mais aussi pour aider des enfants atteints de handicap.\nNous avons créé un site internet que vous pouvez consulter pour avoir plus de détails:\nsi vous faites un don envoyez nous vos coordonnées par mail à : contact [@] pourmathis.com , nous vous enverrons un reçu de don déductible des impots à hauteur de 66%\n470 € Collectés sur 500 €


Auteur Sujet: Pour information (Lu 1383 fois)\n« le: 23 octobre 2009, 08:49:10 »\nDans l'arrêté relatif aux modalités d'exécution de la mission de contrôle, l'article 2 b précise:"pour celle réalisées ou réhabilitées après le 31 déc 1998: une vérification de conception et d'exécution selon le modalités fixées à l'article 5. Les points à contrôler à minima sont mentionnés dans le tableau de l'annexe 1."\nCet article concerne t-il que les construction existante ou également les neuves qui sont en cours de réalisation?\nCar si c'est le cas, cela voudrait dire d'après l'annexe 1 que sur les installations neuves en cours de réalisation on doit vérifier la mise en oeuvre des dispositifs de l'installation conformément aux conditions d'emploi mentionnées par le fabricant (guide d'utilisation; fiche technique).\nAi je bien compris cet arrêté ou suis-je à côté de la plaque?\nRe : Pour information\n« Réponse #1 le: 23 octobre 2009, 11:34:37 »\nJe fait la même interprétation que toi.\nA noter que les réalisations ou réhabs après 98 comprennent bien effectivement le "neuf".\nOn doit bien vérifier la mise en oeuvre des dispositifs de l'installation conformément aux conditions d'emploi mentionnées par le fabricant (guide d'utilisation; fiche technique) sur toutes les installations sauf la deuxième visite car même sur celles réalisées avant 98, on doit vérifier ce point. En plus de toutes les législations antérieures, on a bien sur en stock toutes les fiches techniques de tous les produits. La mise en oeuvre est aussi aisément vérifiable.\n« Réponse #2 le: 23 octobre 2009, 12:12:34 »\nC'est clair que cela va être un vrai casse tête, car les fabriquants ne lésignent pas sur ce genre de chose. Exemple pour Epurflo, il faut que les fosses soient équipées d'une dalle de répartition dès que l'on a une épaisseur de couverture supérieure à 30 cm ou 50 cm. Si on est en terrain difficile, il faut réaliser un radier, la sangler et la remblayer avec du sable stabilisé sur 30 cm.\nOn va bien s'amuser, car en effet, la plupart du temps je n'ai pas accès au guide d'utilisation.


02/09/2009 - 19:33\nLes Bourses européennes ont terminé en baisse au terme d'une séance terne au cours de laquelle les valeurs financières ont été malmenées.\nLe CAC 40 a clôturé sur une baisse de 0,29%, 10,31 points, à 3.573,13.\nAlcatel-Lucent a accusé un repli de 7,33% qui reflète les inquiétudes des investisseurs après l'émission de 870 millions d'euros d'Oceanes. Dexia et Société Générale ont fait les frais de la vague de désengagements qui touche leur secteur, perdant respectivement 5,09% et 1,79%.\nCette tendance s'est confirmée sur l'ensemble du continent européen. Swedbank a chuté de 6,85%, KBC a abandonné 6% et Lloyds Banking Group a perdu 6,23%.\nLe secteur automobile est quant à lui victime de prises de bénéfices. La correction intervient au lendemain de l'annonce d'un rebond des ventes en août largement imputable aux mesures de primes à la casse.\nPeugeot a cédé 2,67%, Fiat a perdu 3,42% et Daimler a reculé de 1,65%.