Médecine :: Archives :: Module 3 (2005-2006) :: Biologie & Génétique Moléculaires Partagez |\nSujet: Notes de cours Sam 18 Mar à 13:26\n1. Organisation du génome\nLe génome humain compte 46 chromosomes: 23 sont d'origine paternelle, et 23 d'origine maternelle. Au sein de ce patrimoine génétique, on peut distinguer deux types de génome:\n- génome nucléaire: origine moitié paternelle et moitié maternelle; le génome haploïde contient 3x10p9 paires de bases, codant pour 25'000 à 30'000 gènes, et permettant hypothétiquement de former un million de protéines.\n- génome mitochondrial: origine maternelle; compte 16'000 paires de bases, codant pour 37 gènes.\nLe génome masculin compte plus de gènes différents que le génome féminin; ce dernier compte cependant plus de gènes. En effet, le génome masculin compte deux chromosomes partiellement différents, X et Y, et Y contient des gènes qui ne sont pas présents sur X; cependant, le chromosome X contient plus de gènes que le chromosome Y, ceci dû à sa plus grande taille.\nLa valeur C (contenu) est paradoxale; elle montre qu'il y a beaucoup plus de paires de bases que ce qui est nécessaire. Les gènes sont interrompus, et les régions intergéniques sont importantes. On peut différencier trois types de séquences sur la molécule:\n- hautement répétées\nLa taille d'un gène varie énormément; on peut cependant dire qu'elle est en moyenne de 10 à 15 kilobases [kb].\nLa distance intergénique moyenne dans le génome nucléaire est de 25 à 30 kb.\nRappel: l'exon est la partie du gène codant pour une protéine, l'intron est la séquence clivée au cours du mécanisme d'épissage.\nLe nombre d'exons et leur taille est normalement proportionnel à la taille du gène, comme le nombre d'introns. La taille moyenne des séquences codantes d'un gène est de 1.5 kb, ce qui représente 50 codons. La présence d'introns et de mécanismes d'épissage alternatif permettent de former plus de protéines qu'il y a de gènes. Actuellement, les recherches permettent d'authentifier la présence d'environ 100'000 protéines; on suppose qu'il y en a encore plus.\n1. 2. Classification des gènes\nIl existe ce que l'on appelle des "familles de gènes". Les gènes qui la composent, dérivent tous d'un exon ancestral, qui a subi diverses modifications (conversion génique; duplication, fusion etc.). Ils ont tous des fonctions identiques ou proches. On peut les rencontrer sur le même chromosome ou sur deux chromosomes différents. Les familles multigéniques peuvent être de trois types:\n- Type I: haut degré d’homologie entre les différents membres de la famille.\nEx: histones, rRNA, protéines ribosomiques\n- Type II: Haut degré d’homologie dans certaines régions seulement.\nEx: Domaine homeobox (60 acides aminés présents sur les facteurs morphogénétiques), Death domain (interagissent pour conditionner la mort cellulaire).\n- Type III: Homologie uniquement pour des motifs en acides aminés très courts.\nEx: DEAD box = Asp-Glu-Ala-Asp présent dans les RNA hélicases.\nUn "gene cluster" est un regroupement, dans la même région chromosomique, de gènes identiques (globines) ou très proches. Les globines sont issues de la duplication initiale d'un gène, qui a ensuite évolué par perte, fusion, duplication, inactivation en pseudogènes ou conversion génique, ce qui a permis l'évolution de cette famille de protéines. Par exemple, au cours de l'évolution telle qu'on se la représente, delta a été convertie par bêta; ceci fait que le gène delta comprend dès lors des séquences spécifiques à bêta.\nUne "superfamille de gènes" est un ensemble de gènes possédant une organisation générale commune (exon ancestral) mais pas la même fonction. C'est le cas de la superfamille des immunoglobulines.\n1. 3. Classification des séquences intergéniques\nIl existe différents types de séquences répétées:\n• Séquences répétées en tandem:\n- satellites: ADN principalement centromérique, mais parfois hétérochromatique, constitué de blocs de 100 kb à plusieurs Mb de longueur. L'ADN satellite a une densité différente du reste du ADN; ceci fait qu'au cours des premières recherches, qui consistaient à centrifuger de l'ADN, on l'ait qualifié de "satellite", car il avait une densité bien différente de celle du reste de l'ADN.\n- minisatellites: blocs de 0.1 à 20 kb correspondant à des répétitions de 6 nucléotides (TTAGGG) dans les régions télomériques, ou de 9 à 24 nucléotides, présents sur tous les chromosomes, aussi appelés VNTR, de constitution très polymorphique. Les minisatellites servent de sites préférentiels de recombinaisons.\n- microsatellites: blocs de moins de 150 pub correspondant à des répétitions de 1 à 4 nucléotides, présents sur tous les chromosomes. Ils occupent 0.3% du génome, et y sont plus dispersées que les minisatellites.\n• Séquences répétées dispersées:\n- SINE (Short Interspersed Nuclear Elements): classe composée de séquences comme AluI, qui compte 280 pb et un site de restriction. AluI est présente entre 700'000 et un million de fois dans notre génome; cette séquence est spécifique au génome des primates. On ne la rencontre donc pas chez la souris. On imagine qu'elle se propage par retrotransposition, en parasitant la rétrotranscriptase des LINEs.\n- LINE (Long Interspersed Nuclear Elements): de taille supérieure à mille bases, comprend une famille de séquences autonomes, capables de se dupliquer par elles-mêmes, en codant pour des transcriptases inverses. Leur mécanisme est très proche des rétrovirus, comme HIV.\n• Le satellite alpha (riche en A et T; on parle aussi de séquence alphoïde) est constitué d'une répétition de 171 pb. On le rencontre dans les centromères de tous les chromosomes. Il représente 3 à 5 % de l'ADN de chaque chromosome.\n• Certaines maladies sont causées par la répétition de triplets:\n- la chorée de Huntington est causée par l'augmentation de CAG, qui passe de 11 à 34 chez un individu sain à 40 à 200 chez un individu atteint.\n- l'ataxie de Friedreich est causée par l'augmentation de GAA, qui passe de 7 à 38 chez un individu sain à 66 à 1700 chez un individu atteint.\n- le syndrome "X fragile" est causé par l'augmentation de CGG, qui passe de 6 à 50 chez un individu sain à 200 à 1300 chez un individu atteint.\n- la dystrophie myotonique est causée par l'augmentation de CTG, qui passe de 5 à 35 chez un individu sain à 50 à 2000 chez un individu atteint.\n- l'ataxie spinocérébellaire est causée par l'augmentation de CAG, qui passe de 10 à 30 chez un individu sain à 44 à 81 chez un individu atteint.\n• LINE 1 , aussi appelée "famille Kpn", a une longueur de 6.1 kb, et une autre forme de 1.4kb. On la rencontre 60'000 à 100'000 fois dans notre génome, ce qui représente une copie tous les 50kb.\n1. 4. Analogies et différences entre le chimpanzé et l'humain\nLa similitude entre deux ADN d'individus appartenant à l'espèce Homo sapiens est de 99.9 %. La différence est donc d'environ un nucléotide toutes les 1000 paires de bases. Elle est de 99.0 % entre Homo sapiens et Pan troglodytes (chimpanzé):\n- La taille du génome est identique: elle compte environ 3 x 10p9 pb pour les deux génomes haploïdes, et l'estimation du nombre de gènes est la même.\n- La constitution des chromosomes est aussi très similaire.\n- La conservation de la synténie (organisation commune) est étendue.\n- L'organisation des familles de gènes est extrêmement similaire.\n- Les séquences codant pour de l'ADN sont similaires de 98 à 100 %.\n- Les séquences non-codantes sont similaires à 98 %; certaines séquences ne se rencontrent cependant que chez l'humain.\n- L'expression des gènes est en général très similaire.\n- Les séquences non-codantes répétées en tandem sont hautement conservées.\n- La séquence Alu se rencontre aussi bien chez les grands singes que chez l'humain.\nLes modifications du génome n'ont donc que peu d'importance quantitativement; on observe cependant que la sensibilité à certains facteurs est différente:\n- VIH est une maladie commune chez h'humain et rare chez le chimpanzé\n- l'influenza A (grippe) développe des symptomes plus sévères chez l'humain que chez les singes\n- l'hepatite B/C entraîne des complications plus sévères chez l'humain que chez les chimpanzés\n- le Plasmodium falciparum (malaria) touche l'humain, mais pas le singe\n- la ménopause est universelle chez l'humain et rare chez le singe\n- l'humain est résistant à E. Coli K99 (gastroentérite), alors que le singe est susceptible de la développer\n- les différentes expressions d'Alzheimer est complète chez l'humain et incomplète chez le singe\n- les cancers épitheliaux sont communs chez les humains et rares chez les singes.\nLes différences principales sont dues à:\n- FOXP2: facteur de transcription; deux acides aminés sont modifiés entre le génome humain et simiesque. On estime que cette différence est à l'origine du langage.\n- Lactase: l'homme possède un gène permettant une métabolisation du lactase, ceci dû au régime lacté qu'il a adopté au fil de son évolution.\n- Système immunitaire: les gènes du système immunitaire humain sont moins nombreux; par exemple, la caspase 12 est chez nous un pseudogène. tandis qu'elle est un gène conventionnel chez le chimpanzé. La caspase 12 provoque une réaction plus violente en cas d'agression, conduisant facilement à une septicémie (infection généralisée); l'inactivation de la caspase permet donc une résistance à la septicémie.\n- Mastication: des myoglobines impliquées dans le mécanisme de mastication sont inactivées chez l'humain; ceci a sans doute permis le développement du cerveau.\n- Odorat: l'odorat des chimpanzés est plus développé que celui des humains.\nCeci montre que la pseudogénisation peut parfois constituer un avantage évolutif.\n1. 5. Analogies et différences entre la souris et l'humain\nLes différences sont plus prononcées qu'entre l'humain et le chimpanzé:\n- La taille du génome et le nombre de protéines qu'il peut synthétiser est similaire.\n- L'humain compte 22 autosomes et deux chromosomes sexuels, X et Y. La plupart des chromosomes sont méta- ou submétacentriques. La souris compte 19 autosomes et deux chromosomes sexuels, X et Y. Tous sont acrocentriques.\n- Le génome humain compte environ 45'000 îlots CpG; la souris n'en a pas.\n- La conversion de la synténie est faible, si l'on excepte le chromosome X. Les régions concernées sont petites.\n- Dans le chromosome X, la synténie est très proche; les seules modifications sont dues à quelques inversions entre gènes.\n- L'organisation des familles est similaire, tant qu'il s'agit de familles individuelles. Les quelques différences sont causées par des duplications récentes évolutivement.\n- L'organisation des gènes est généralement commune; la taille des gènes et la position des introns est bien conservée.\n- Les séquences codantes sont homologues de 70 à 90 %, et le polypeptide produit est normalement homologue à un degré de 75 à 95 %.\n- Les séquences non-codantes sont généralement extrêmement dissemblables.\n- Les séquences répétées en tandem sont bien conservées au niveau des télomères; sur le reste du génome, leur séquence n'est normalement pas conservée.\n- Certaines séquences dispersées sont conservées, comme l'élément LINE-1. La séquence Alu de l'humain et B1 de la souris ont sans doute la même origine.\nSujet: Re: Notes de cours Sam 18 Mar à 13:26\n2. Maintien de l'information génétique\nLa réplication est semi-conservative et bidirectionnelle. Elle nécessite une ADN-polymérase, qui doit fonctionner sur une matrice et qui nécessite une amorce présentant une terminaison 3'-OH.\n2. 2. Variations dans le génome\nLes variations sont dues à des modifications de bases (ce qui est absolument normal), à des mutations (ce qui est moins normal) et au système de réparation.\nLes bases modifiées les plus fréquentes sont:\n- la 5-méthyl-cytosine (dans les cellules humaines)\n- la 6-méthyl-adénine (chez les bactéries)\n- la pseudo-uridine\nLes îlots CpG sont sous-représentés par rapport aux autres îlots présents dans le génome humain. Ceci est dû au fait que, la 5-méthyl-cytosine est déaminée en thymidine, qui est indifférenciable d'une base normale. En outre, les îlots CpG jouent un rôle particulier dans la régulation, ceci dû au fait qu'ils sont hypométhylés par rapport aux autres séquences, pour empêcher leur conversion.\nOn distingue les mutations selon la taille des séquences touchées (mutations ponctuelles ou segments larges), et la localisation de ces séquences (somatique ou germinale). Si la mutation touche les cellules germinales, elle se transmet à la descendance. La conséquence des mutations peut être néfaste, neutre ou bénéfique. Les mutations peuvent avoir lieu:\n- pendant la réplication: substitution (transitions ou transversions), délétion, insertion ("DNA slippage")\n- pendant la recombinaison réciproque (crossing over)\n- lors de recombinaisons non-réciproques (conversions géniques)\n- à cause d'une amplification, souvent due à des oncogènes\n- suite à des transpositions ou rétrotranspositions (LINE ou SINE)\n- suite à l'effet d'agents chimique sou physiques.\nLa transition est la conversion entre deux bases de même type (purine -> purine; pyrimidine -> pyrimidine), la transversion entre deux bases de type différent (purine -> pyrimidine; pyrimidine -> purine).\nL'origine des mutations est surtout due aux erreurs spontanées lors de la duplication; les agents mutagènes ne provoquent qu'une petite partie des mutations. Pendant la vie, qui comprend 10p16 à 10p17 mitoses, chaque gène peut être le site de 10p8 à 10p10 mutations.\nLes mutations sont principalement dues à la forme tautomérique des nucléotides.\nLa fixation des mutations se fait uniquement quand le brin muté est utilisé comme matrice du brin complémentaire. Elle n'est que provisoire tant que la phase S n'a pas eu lieu.\nL'activité de correction d'erreurs ("proof reading") limite grandement la survenue des fautes que peut commettre l'ADN polymérase. C'est l'activité exonucléase 3'-> 5' qui enlève les nucléotides inadaptés. le taux d'erreurs est de 1/10p6 à 1/10p10 pb par réplication.\nLors de la réplication de l'ADN, les brins peuvent glisser l'un sur l'autre; on parle de "slippage". Ceci peut induire une addition ou une délétion. Les régions privilégiées pour ce genre de fautes sont les séquences répétées. Ainsi, un trop grand nombre de codons répétés peut induire le syndrome "X fragile", par exemple (cf. supra). Dans les séquences répétées, le slippage est presque aussi stable que la configuration de base, puisque tout l'appariement peut se faire sur de grandes séquences.\nLa conversion génique est un échange non réciproque: un gène donne son information à un autre gène, mais est conservé dans son intégralité. Ceci peut se rencontrer intralocus (dans le même locus) ou interlocus. Un grand degré d'homologie est nécessaire: lors de la réplication, le brin d'ADN exogène doit être fixé sur une séquence complémentaire.\nLes agents chimiques et physiques peuvent aussi modifier le génome:\n- l'agent physique le plus mutagène est le rayonnement ultraviolet, produit par le soleil. Une heure d'exposition au soleil induit la formation de 80'000 dimères de thymine par cellule exposée.\n- les agents chimiques les plus fréquemment rencontrés sont des gaz: l'oxygène forme facilement des ions superoxades; le gaz moutarde ou le gaz nitreux ont un effet très fort sur la survenue de mutations.\nLes deux réactions chimiques qui entraînent le plus de mutations sont:\n- la dépurination: coupure d'une liaison bêta-N-glycosidique par un proton, ce qui détache la base de son squelette de phosphate et de ribose. Dans une cellule humaine, 500 purines sont perdues par jour. La dépurination est principalement causée par les agents chimiques.\n- la déamination: conversion d'une cytosine en uracile et d'une 5-méthyl-cytosine en thymine. Environ 100 bases sont déaminées par jour. La cause principale est la présence d'agents chimiques.\nCertains agents chimiques, comme l'EMS, l'acide nitreux ou l'hydroxylamine, modifient des bases par déamination. L'acridine provoque des délétions ou des insertions.\nDes analogues des bases peuvent aussi être intégrées, comme le 5-bromouracile ou la 2-amino-purine, qui forment des dimères céto-énol.\nLes sites dépurinées, appelés sites ap (apuriniques) fixent une base au hasard lors de la réplication.\nLes formes d'oxygène actif provoquent l'oxydation, ce qui peut transformer des bases: la thymindine peut être mutée en thymidine-glycol, qui bloque la réplication; la 8-oxo-7-deoxyguanosine cause des transitions entre G et C et entre A et T. Ceci peut causer l'apoptose, mais aussi des cycles cellulaires anormaux et des mutations.\nL'acridine orange ou la proflavine s'intercalent à l'intérieur de l'ADN. Elles sont parfois utilisées, tout comme l'actinomycine-D, pour bloquer la réplication et causer l'apoptose. Leur utilisation principale est un traitement contre le cancer.\nSujet: Re: Notes de cours Ven 24 Mar à 21:01\nIl existe différents mécanismes de réparation. Ils permettent d'éviter la survenue de cancers et de mutations. Leurs principes sont bien conservés au cours de l'évolution, de même que le degré d'homologie des protéines qui les compose. On les rencontre chez tous les organismes, à l'exception des virus. Ils peuvent être actifs pendant la réplication (mécanisme de "proof reading" de l'ADN polymérase, mais aussi à d'autres moments: la réparation des "mismatch" (mauvais appariement) faites par l'ADN polymérase sur le nouveau brin synthétisé survient après la fin de la réplication, et la réparation des bases altérées peut intervenir à tout moment: les protéines concernées sont efficaces sans ADN polymérases. Les mécanismes peuvent être spécifiques et fonctionner en une étape:\n- les photolyases réparent les dommages causés par la lumière (UV): ils coupent les dimères de thymine, et parfois les dimères de cytosine, qui sont cependant plus rares. On les rencontre chez E. coli et chez la levure. Le mécanisme impliqué est la photoréactivation: en cas d'exposition à la lumière, les protéines PHRa et PHRb sont exprimées. Elles utilisent la lumière visible pour séparer les dimères de thymine.\nou non spécifiques, et inclure plusieurs étapes:\n- BER (Base Excision Repair) fonctionne dans le cas des déaminations et des dépurinations. Dans le cas des déaminations (cytosine), le mécanisme fonctionne en quatre étapes:\n1) une glycosylase coupe la base non spécifique\n2) une endonucléase "AP" coupe le lien sucre-phosphate\n3) une ADN polymérase incorpore la base correcte. Dans certains cas, il peut s'agir de plusieurs bases, avec un maximum de six\n4) une ADN ligase fixe la liaison sucre-phosphate\nLa glycosylase est une protéine très spécifique; il en existe plusieurs types. Quand une uracile est présente dans la molécule, la glycosylase impliquée est une uracile-ADN-glycosylase; on rencontre le même type de protéines pour les xanthines, hypoxanthines, etc.\nDans le cas des dépurinations, l'étape 1 n'a pas lieu; le mécanisme BER commence à l'étape 2.\n- NER (Nucleotide Excision Repair) est utilisé dans les cas de dimères de thymidine et de mismatch. Les étapes sont:\n1) une excision-endonuclease coupe le brin lésé à dix à trente bases en amont et en aval\n2) une hélicase retire la région lésée\n3) une ADN polymérase synthétise la région manquante\nChez E. coli, un mécanisme de méthylation est impliqué: des séquences palindromiques (GATC) sont méthylées sur l'adénine par la protéine dam (DeoxyAdenineMethylase). Quand la réplication survient, seul le brin matrice est donc méthylé. En cas de mismatch, la protéine MutS (Mut est l'abréviation de mutator: quand ce facteur est muté, toute la cellule ne peut plus réparer ses erreurs et accumule les mutations) vient se fixer sur la séquence mutée. La protéine MutL stabilise le complexe; MutL, une exonucléase, dégrade l'ADN du lieu où se trouve le mismatch jusqu'à la séquence palindromique; l'ADN polymérase la synthétise ensuite à nouveau. Le mécanisme est le même chez les eucaryotes, bien que les protéines ne portent pas les mêmes noms. Il a été étudié grâce à la maladie Xeroderma pigmentosum.\n- la réparation par recombinaison peut être utilisée dans le cas de lésions T-T comme de délétions; le brin lésé n'a pas de matrice; il utilise donc la matrice d'un gène homologue, par exemple situé sur le chromosome homologue, pour synthétiser la région manquante.\nIl existe différentes maladies dues à des défauts génétiques impliquant des protéines impliquées dans le mécanisme de réparation:\n- Xeroderma pigmentosum est une maladie autosomique récessive rare caractérisée par un fonctionnement altéré du mécanisme NER, qui sépare les dimères de thymine. La maladie augmente de 1000 à 4000 fois la sensibilité des sujets aux ultraviolets, et entraîne la survenue de kératose (pigmentation anormale) et de cellules tumorales.\n- HNPCC (Hereditary NonPolyposis Colorectal Cancer) est un cancer non-polypeux; c'est-à-dire qu'il n'est pas lié à la présence de polypes, qui sont des facteurs prédisposant aux cancers, entraînés par la mutation des protéines FRAP et P53. Dans le cas de cette maladie, ce sont les protéines hMSH1 (l'équivalent de MutL) et hMSH2 (l'équivalent de MutS) qui sont mutées. Ces mutations empêchent la réparation des "mismatch".\n- le syndrome de Bloom, la maladie de Franconi et les cancers du sein héréditaires BRCA1 et BRCA2 sont dus à l'impossibilité de réparer la rupture des double-brins par recombinaison homologue.\n2. 3. Génie génétique\nBiologie moléculaire: Etude des être vivants au plan moléculaire; principalement: étude du génome et des protéines formées.\nGénie génétique : Ensemble des techniques de manipulation et de transfert de gènes permettant la modification du patrimoine génétique d'un organisme vivant. Aussi appelé technologie de recombinaison de l'ADN. Il peut s'agir aussi de modification de gènes. Permet l’identification, l’analyse et la mutagenèse des gènes et leur expression dans des cellules, ou organismes, homologues ou hétérologues.\nLe développement de la technique de l'ADN recombinant a suivi une longue histoire, dont les faits importants sont:\n1869: Miescher isole l’ADN pour la première fois.\n1944: Avery apporte la preuve que l’ADN, plutôt que les protéines, porte l’information génétique au cours de la transformation bactérienne.\n1953: Watson et Crick proposent un modèle en double hélice pour la structure de l’ADN basé sur des résultats obtenus par Franklin et Wilkins avec les rayons X.\n1962: Arber met en évidence pour la première fois l’existence des enzymes de restriction de l’ADN; cela aboutit par la suite à leur purification et à leur utilisation dans la caractérisation des séquences d’ADN par Nathans et H. Smith.\n1975: Southern développe l’hybridation après transfert du gel pour la détection de séquences d’ADN spécifiques.\n1985: Mullis et ses collaborateurs inventent la réaction de polymérisation en chaîne (PCR)\nLes enzymes de restriction, aussi appelées nucléases de restriction, constituent un outil très important qui permit les développements majeurs du génie génétique. Ils permettent d'établir des cartes de restriction, mais aussi de faire du clonage molculaire ou du RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism).\nLes enzymes de restriction constituent le système de défense bactérien contre les bactériophages, qui sont les virus des bactéries. Ils permettent la coupure (on parle de digestion) de l'ADN à une séquence précise et spécifique. Il s'agit donc d'endonucléases générant des fragments de taille définie.\nIl existe une classification des enzymes de restriction; mentionnons simplement que l'endonucléase EcoR1 porte ce nom parce qu'elle a été découverte chez E. coli et qu'il s'agit du premier enzyme de restriction découvert chez cette bactérie. Il s'agit d'une enzyme de classe 2.\nLe clivage se fait sur des séquences spécifiques, qui ont toujours la particularité d'être palindromiques. Il peut générer une terminaison franche, c'est-à-dire que les deux brins s'arrêtent côte à côte, ou des extensions appelées "sticky ends", qui font que quelques nucléotides dépassent de l'extrémité 3' ou 5'. On connaît actuellement plus d'une centaine d'enzymes de restrictions.\nLa carte de restriction permet de localiser les sites de clivage des enzymes de restriction le long de la molécule d'ADN. La longueur des fragments coupés est établie par électrophorèse: les molécules sont placées dans un gel d'agarose; elles migrent selon leur taille sous l'effet d'un champ électrique: plus les fragments sont petits et plus ils migrent loin. La détermination des sites de coupure se fait par recoupement logique entre plusieurs enzymes. La migration de fragments de taille connue servent souvent à étalonner le gel et à déterminer la taille des fragments inconnus. Le gel est coloré au bromure d'éthidium, ce qui permet d'observer les molécules d'ADN sous lumière ultraviolette. Cette méthode ne peut être utilisée que sur les petites séquences.\nLes cartes de restriction d'une séquence permettent de déterminer le degré d'homologie des séquences entre individus d'une même espèce ou d'espèces proches.\nL'hybridation de l'ADN selon Southern est appelée "Southern blot": elle permet de détecter une séquence particulière dans une collection de fragments séparés par électrophorèse. La méthode est basée sur l'appariement du brin radiomarqué connu (sonde) avec sa séquence complémentaire sur le brin étudié. Cette technique est aussi appliquée en cartographie physique sur des chromosomes intacts; on parle d'hybridation in situ. Elle se fait par dénaturation des ADN double-brins et des sondes, puis par hybridation dans un milieu favorable. Les ADN étudiés peuvent de nouveau s'apparier, mais aussi s'apparier avec des sondes. Ensuite, on effectue une électrophorèse dans de l'agarose, et on fixe l'ADN sur un film de nitrocellulose.\nLa technique est aussi applicable à l'ARN; dans ce cas, elle s'appelle Northern blot.\nLe Southern blot permet par exemple de détecter de petites mutations ponctuelles lorsqu'elles affectent la présence ou la longueur d'un fragment de restriction. On parle de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), utilisé en génétique des populations, en diagnostic génétique, par la médecine légale ou par la police scientifique.\nSujet: Re: Notes de cours Sam 25 Mar à 22:26\nUn site qui explique très bien le southern blot et que je recommande pour une bonne compréhension de ce procédé.\n1) On traite l'ADN avec des enzymes de restriction\n2) On colore l'ADN avec du bleu de bromophénol de manière à voir sa progression électrophorétique\n3) On injecte cet ADN dans du gel d'agarose. Des petits puits prévus pour injecter l'ADN se trouvent dans le gel d'agarose du côté de la catode (-)\nLe gel d'agarose baigne dans une solution tampon.\nOn injecte dans un autre "puits" de "l'ADN référence" de manière à pouvoir comparer les résultats (les migrations pouvant varier selon les gels d'agarose)\n4) Le bac ou baigne le gel d'agarose est mis sous tension électrique.\n5) L'ADN, qui est chargé négativement, migre vers l'anode (+) Sa progression est visible grâce au colorant bleu.\n6) Lorsque le colorant le plus rapide à migrer est arrivé à l'extrémité + du gel d'agarose, on coupe le courent.\n7) L'ADN est alors traité avec un agent intercalant : le bromure d'éthidium, qui permet de visualiser l'ADN sous lumière UV. On apperçoit des bandes rouges à différents niveaux de migration.\n8) On traite l'ADN (qui est encore contenue dans le gel d'agarose) dans un milileu basique de manière à casser la double hélice et avoir uniquement des fragments monobrins.\n9) On met ensuite le gel d'agarose contenant l'ADN dans une solution saline\n10) On appose une membrane de nitrocellulose sur le gel contenant l'ADN\n11) On place du papier absorbant sur cette membrane de nitrocellulose\n12) Le papier absorbe le liquide et entraine l'ADN à venir se fixer sur la membrane de nitrocellulose\n13) L'ADN s'est maintenant imprimé sur cette membrane de nitrocellulose qu'on peut retirer du gel\n14) On expose la membrane de nitrocellulose au UV de manière à ce que l'ADN simple brin forme des liaison covalente avec la membrane\nLa membrane de nitrocellulose est une véritable réplique du gel d'agarose.\n15) On trempe la membrane de nitrocellulose dans le milieu d'hybridation : une solution contenant des sondes d'ADN radiactives simples brins. L'hybridation permet la reconnaissance spécifique des sondes marquées radiactivement avec leur brins d'ADN correspondant.\n16) On ressort la membrane de nitrocellulose et on applique un film photographique dessus.\n17) Les radiations s'impriment sur la pellicule et on peut donc de vérifier la présence du mutation!\nSujet: Re: Notes de cours Ven 31 Mar à 19:54\nIII.4 Eléments mobiles\nLa majorité des gènes eucaryotes sont constitués de gènes répétés qui se déplacent dans le génome :\n1)\tles transposons\n2)\tles rétrotransposons\nCes deux groupes se différencient par leur mode de mobilisation.\nLes transposons, appelés aussi ‘selfish genes’, utilisent un intermédiaire ADN.\nLes transposons présentent des gènes de résistance aux antibiotiques\nLes rétrotransposons utilisent un intermédiaire ARN pour leur mobilisation. Ils utilisent donc une transcriptase inverse pour retransformer l’ARN en ADN, comme les rétrovirus.\nLes SINEs, les LINEs sont des exemple de rétrotransposons.\nCes éléments mobiles peuvent avoir un rôle mutagénique.\nIII.5 La détéction RFLP\nLa méthode RFLP permet la détection de mutation.\n1)\tL'échantillon d'ADN est coupé par une enzyme de restriction\n2)\tOn procède ensuite à un Southern blot avec une sonde spécifique marquée radioactivement qui se fixe sur l’ADN dénaturé (donc monobrin)\n3)\tLe Southern blot permet de connaître la taille de ces fragments et donc de les comparer d'un individu à un autre.\nGrâce à des lavages contrôlés, l’appariement entre la sonde et la base n’est possible que si l’appariement est parfait.\nOn peut avoir soit une sonde correspondant au gène sain qui reconnaîtra uniquement la séquence saine ou on peut aussi employé la méthode RFLP avec une sonde reconnaissant une mutation.\nIII.6 Le clonage moléculaire\nSi on désire des copies d’un gène, on utilise des cellules hôtes, qui sont des bactéries (en général E.coli).\nLe clonage nécessite un vecteur de clonage capable de se répliquer dans la cellule hôte.\nEn général, les vecteurs sont dérivés des plasmides (<20kb inséré) ou des phages (<50kb inséré), ou des BAC (bacterial artificial chromosome <300kb)\nLes plasmides sont des sortes de petits chromosomes circulaires supplémentaires présents chez les bactéries. On peut introduire la séquence désirée dans ce plasmide ou dans des phages qui vont ensuite le dupliquer de nombreuses fois.\nOn emploie en fait la machinerie de duplication de ces phages ou des bactéries.\nLes plasmides R présentent des résistances aux antibiotiques. Cette résistance est normalement problématique pour la lutte contre les maladies. Cependant, elle est bénéfique pour le clonage moléculaire.\nPrincipe du clonage moléculaire :\n1)\tOn extrait de l’ADN à cloner et on le coupe en fragment (avec une enzyme de restriction)\n2)\tOn extrait des plasmides (vecteur) d’une bactérie et on les ouvre\n3)\tOn met les fragments d’ADN ainsi que des gènes de selection (résistance antibiotique) avec ces plasmides ouverts et une ligase qui les recombine.\nLe vecteur comprend donc le plasmide d’origine avec un fragment d’ADN et un gène de sélection insérés.\n4)\tUn introduit ces vecteurs dans des cellules hôtes\n5)\tOn mets mets les bactéries en contact avec un antibiotique. Seules les bactéries contenant le plasmide survivent.\n6)\tOn multiplie ces bactéries en colonies avec le DNA qu’elles contiennent.\n7)\tOn sélectionne la colonie et on purifie l’ADN.\nLe clonage moléculaire peut être effectué de la même manière avec des phages à la place de bactéries.\nSynthèse et clonage de cDNA\nLe système de l’épissage étant uniquement présent chez les eucaryotes, il faut éliminer les séquences introniques si on désire que les gènes soient exprimés dans les bactéries.\nPour cela, on emploie un RNA épissé qu’on converti en cDNA (DNA complémentaire) grâce à une transcriptase inverse (qui est caractéristique de certains virus comme le sida)\nUne fois que le cDNA est synthétisé, il peut être cloné dans des plasmides.\nIII.7 Le PCR (amplification) et séquençage du DNA\nSi on connaît une séquence d’ADN, on peut facilement l’amplifier par PCR.\nPrincipe du PCR :\nLe PCR est une méthode de duplication in-vitro.\nOn met la séquence d’ADN visée (l’ADN est donc sous forme monobrins) avec des polymérases thermostables. Le milieu est très riche en nucléotides et en amorces, ce qui permettra des duplications rapides. En suite on réalise plusieurs cycles composés de ces trois étapes :\n1)\tOn chauffe le milieu à 95 degrés pour dénaturer l’ADN.\n2)\tOn abaisse un peu la température pour permettre l’appariement des amorces\n3)\tSynthèse d’ADN à 72 degrés grâce au polymérase thermostable\nCette méthode permet de multiplier rapidement et en très grande quantité une séquence d’ADN. Après 30 cycles, on obtient 268'435'456 molécules d’ADN double brin.\nLe problème du PCR est que les erreurs sont également reproduite en très grande quantité.\nIII.8 Séquençage du DNA\nLe séquençage = détermination de la séquence de DNA\nLe DNA dont la séquence doit être déterminée doit d’abord être amplifiée par clonage ou PCR.\nPuis on sépare l’ADN en 4 portions de manière à faire 4 réactions (1 pour chaque base : ACTG)\nOn met une portion d’ADN avec des nucléotides et un analogue ‘didéoxy’ : ddNTP.\nCes analogues sont modifiés de manière à interrompre la réplication (comme l’AZT)\nLe ‘didéoxy’ est en compétition avec son nucléotide. Des fragments de plusieurs tailles seront donc produits.\nEn mettant ensuite les fragments de DNA fille de différentes tailles dans un gel électrophorétique, on peut connaître la longueur de chaque fragment. (les gels d’électrophorèse ont une précision permettant de différencier les fragments au nucléotide près. Le gel d’électrophorèse est composé de 4 pistes, correspondant chacune à la lecture d’un nucléotide.\nEn analysant ces résultats, on peut déterminer la séquence d’un fragment.\nAujourd’hui, le séquençage est automatisé. Les fragments sont marqués par fluorescence et on emploie la chromatographie pour déterminer la longueur de chacun d’entre eux. Une couleur correspond à chaque nucléotide. Les résultats sont directement traités par ordinateur.\nLa méthode de séquençage automatique permet un gain de temps considérable par rapport au traditionnel séquençage sur gel d’agarose.\nL’ordinateur calcule lui-même les incertitudes. Les deux brins sont séquencés.\nSi les incertitudes sont trop importantes, on doit séquencer à nouveau.\nIII.9 Applications du génie génétique\nLes techniques du DNA recombinant (génie génétique) sont utiles pour la recherche biologique et médicale.\nElles ont également des applications pour l’environnement, la biotechnologie et la médecine.\nDes protéines à usage thérapeutiques sont produites par les outils du génie génétique et de la biotechnologie.\nCela permet la production :\n-d’hormone de croissance (traite le retard de croissance)\n-d’EPA (qui permet la dissolution des caillots sanguins pendant le traitement consécutif à une crise cardiaque.\nDes plantes peuvent être rendu résistant à certains insectes nuisibles.\nDes bactéries peuvent être rendues capable de nettoyer certains déchets toxiques\nProduction de protéines à usage thérapeutique :\nLes bactéries ne font pas de folding ni de glycosylation des protéines. On utilise des cellules de mammifères pour obtenir des protéines correctement pliées et glycosylées\nLes chaînes alpha et bêta sont synthétisées par deux bactéries différentes.\nOn purifie les chaînes alpha et bêta, les cystéines sont oxydées, la protéine est pliée et on arrive à la production d’une insuline active qu’on peut produire en grande quantité.\nDe nombreuses maladies peuvent être traitées d’une manière similaire.\nProduction d’animaux transgénique :\nOn peut produire des animaux transgéniques pour pouvoir mieux comprendre certaines maladies ou élaborer des traitements.\n1)\tL’injection d’un transgène dans un œuf : conduit à un animal complètement transgénique.\n2)\tLa thérapie germinale : l’injection d’une cellule transgénique dans un blastocyste qui aura pour conséquence un mosaïsme.\n3)\tLa thérapie somatique : consiste à injecter un transgène qui modifiera des cellules somatique\nOn utilise un rétrovirus dans lequel on introduit un gène. Le rétrovirus est spécifique à un certain type de cellule.\nLa thérapie génique est encore à l’état de recherche.\nCependant, elle a été testée en France (pays civilisé ?) pour traiter un déficit immunitaire important (enfant bulle).\nDe la moelle osseuse a été prélevée. Ces cellules ont été infecté par un rétrovirus pour corriger le problème puis ensuite réinjectées dans la moelle.\nSur 5 enfants, 4 ont pu développer un système immunitaire normal.\nAprès deux ans, 2 ont développé des problèmes de leucémies. Le gène introduit par le rétrovirus s’est sans doute insérer près d’un oncogène.\n(je ne fais pas de commentaire sur l'éthique.... )\nSujet: Re: Notes de cours Mer 5 Avr à 1:00\nIII.10 Introduction à la génomique\nLes études globales de la structure des génomes et leurs séquences ont permis de montrer comment ceux-ci ont évolués.\nLa génomique regroupe donc en quelque sorte la génétique classique et la génétique moléculaire car on peut maintenant connaître l’organisation globale des gènes et des séquences non codantes d’une espèce donnée et les remplacer dans le génome entier.\nLes séquences, couplées aux techniques d’amplification raides et d’analyse à grande échelle de polymorphisme et d’expressions des milliers de gènes en parallèle, ainsi que les progrès de la bioinformatique conduisent à une accumulation très rapide de nouvelles connaissances et à l’établissement de cartes génétiques de plus en plus précises.\nUn siècle de recherche sur l’alcaptonurie (la maladie de l’urine noire)\nL’acide homogentistique est excrété de manière anormalement abondante dans l’urine des malades.\n1)\t1889\tLa maladie est identifiée sous le nom de ‘black urine disease’\n2)\t1902\tAutosomique récessive\n3)\t1908\tProposée en temps que déficience de l’enzyme HGO qui transforme l’ac.gentistique en ac.maleylacetoacetic.\n aucun autre progrès jusque dans les années 1990…\n4)\t1992\tLe gène AKU est cartographié sur le chromosome 3\n5)\t1995\tLe gène HGO est isolé depuis un champigon (Aspergillus)\n6)\t1996\tGrâce au HGO d’Aspergillus, on trouve le cDNA humain\n7)\t1996\tPar Northern blot, on identifie la présence de mRNA du HGO dans le foie\n8)\t1997\tLe gène HGO est séquencé\n9)\t1997\tTest d’hybridation de HGO sur le chromosome (in situ)\n10)\t1998\tLe PCR des exons 10 et 12 montre des sites mutants\n11)\t1998\tDétermination de la transmission des 2 allèles mutantes (P230S et V300G)\n12)\t1998\tDiagnostique par RFLP\nCarte de liaison génétique du chromosome humain\nLa carte de liaison génétique détermine :\n-La position des gènes sur le chromosome\n-La position de chaque sonde correspondante\nIl y a de nombreuses sondes pour chaque partie du chromosomes1\nSur le chromosome 1, il y a 2000 gènes dont 600 déjà identifiés ou homologues à des gènes connus chez d’autres espèces. L’emplacement des autres est prédit par l’analyse bioinformatique, mais leurs fonctions restent encore inconnues.\nAnalyse de l’expression des gènes d’un génome entier\nLes puces à DNA peuvent porter jusqu’à plusieurs milliers de séquences de DNA différentes et permettent d’analyser l’expression des gènes ou des polymorphisme génétiques à l’échelle du génome entier.\n« Les puces à ADN consistent en un support solide (petite lame de verre comme celles utilisées en microscopie traditionnelle ou membrane de nylon) sur lequel des milliers de fragment d'ADN sont déposés de façon géométrique à l'aide d'une micropipette robotisée. Grâce à cette technique, chacun des fragments d'ADN est représenté par un point sur le support (ou puce). Ils servent de sondes pour fixer de façon très spécifique les fragments de gènes complémentaires (cibles), présents dans les échantillons biologiques à tester : leur mise en contact permet de reconstituer la double hélice d'ADN. Ce phénomène (hybridation) peut être mis en évidence par des techniques optiques sous éclairage fluorescent ou par détection de radioactivité ; un système de « marquage » de l'échantillon au moyen de traceurs fluorescents ou radioactifs ayant été réalisé préalablement. La quantification des signaux obtenus et l'identification des fragments de gènes reconnus sont ensuite rendues possibles au moyen d'un système d'acquisition d'image puis d'analyse des données faisant appel à des logiciels informatiques spécialement conçus à cet effet. Les résultats obtenus sont ensuite validés sur le plan statistique et interprétés dans un contexte biologique. »\nTiré de http://www.genopole.org/html/fr/connaitre/cite/outils/puces.htm\nDonc l’analyse de l’expression des gènes d’un génome entier peut être fait grâce à cette méthode de puces à DNA.\nA)\tOn isole de l’ARN (de 2 souches différentes)\nB)\tOn génère de la cDNA à partir de ces ARN grâce à une rétro-transcriptase\nC)\tOn marque les cDNA par fluorescence (de couleur différente selon la souche)\n(Par exemple rouge pour la souche A et vert pour la souche B)\nD)\tOn procède à l’hybridation dans les puces à DNA\nE)\tChaque point correspond à un fragment de gène connu auquel s’est hybridé soit le cDNA d’une souche, soir celui de l’autre souche, soit les deux.\nOn reconnaît donc quel gène est exprimé selon la souche !\nOn peut comparer ainsi l’expression de milliers de gènes connus en parallèle dans 2 conditions données (par exemple : au cours du développement, lors de l’inactivation expérimentale d’un gène, en réponse à un stimuli hormonal ou à un traitement médical, dans des tissus sains et pathologiques…)\nSi on utilise directement des fragments chromosomiques au lieu de cDNA, on peut analyser des polymorphismes génétiques à grande échelle\n Par exemple en biologie des population, pour des études pharmaceutiques de variabilité de réponse à des médicaments…\nIII.11 Pathologie moléculaire et analyse génotypique\nAnalyse génotypique : analyse du génome et non du produit du gène (phène)\nAnalyse phénotypique :  RNA, protéine, couleur, …\nLes avantages de l’analyse génotypique :\n1)\tAucune considération de l’expression temporelle ou tissulaire\n2)\tAucune considération quant à l’expressivité du gène\n3)\tAucune influence due à l’inactivation du chromosome X\n4)\tLa fonction du gène analysé n’a pas besoin d’être connue\n5)\tDétection de l’état de latence d’une mutation ou d’un génome étranger (un virus par ex)\nAnalyse génotypique peut être utilisée pour la détection de nombreuses maladies comme la dépranocytose ou l’hémophilie.\nDomaine d’utilisation de l’analyse génotypique\n1)\tLes maladies héréditaires\n2)\tLes mutations somatiques\n3)\tLes infections (virus, bactéries ou parasites)\n4)\tDes identifications (greffe, médecine légale)\nConsidérations quantitatives :\nLa taille d’un gène humain est d’en moyenne 30'000bp\nLa taille du génome humain est de 3 x 109 bp\n Problème : détection d’un fragment spécifique dans environ 100'000 fragments différents\nApproches techniques :On utilise des cellules nucléées accessibles facilement comme des cellules buccales.\nOn emploie 2 techniques :\n1)\tLes enzymes de restriction et le Southern blot avec des sondes spécifiques\n2)\tLe PCR\nDétection de l’anémie falciforme (dépranocytose) :\nOn utilise une enzyme de restriction : la MST II qui coupe le palindrome CCTNAGG\nCe palindrome se trouve sur l’exon 1 du gène de l’hémoglobine β.\nLe gène normal est indiqué : βA\nIl y a trois types de mutations sur ce gène :\n1) βA*: mutation silencieuse (substitution)\n2) βS : mutation faux-sens (substitution)\n3) βthall : mutation non-sens (délétion dans le codon 6)\nL’enzyme de restriction MST 2 coupe normalement le palindrome CCTNAGG qui se trouve sur l’exon 1 du gène. Cette séquence étant modifiée dans les 3 mutations, les fragments obtenus après digestion par l’enzyme de restriction seront de taille différentes.\nEtant donné qu’on sait que normalement une coupure doit se faire à un endroit précis sur l’exon 1, on pourra vérifier s’il y a coupure ou pas en vérifiant la taille des fragments par électrophorèse.\nDiagnostique prénatal de l’anémie falciforme :\nSi les 2 parents sont hétérozygotes, la maladie peut être transmise à la postérité. Il est possible de faire un dépistage prénatal en faisant un Southern blot avec l’enzyme de restriction MST2.\nOn compare les ADN du père, de la mère et du fils pour savoir si ce dernier est homozygote, porteur, ou sain.\nLe diagnostic peut être soit direct soit indirect : \tDirect si le gène est cloné (sonde) et si la lésion est connue et univoque. On détecte donc précisément le défaut.\n\tIndirect si on connaît le gène mais pas la mutation. Cela peut être le cas dans pour l’apparition de nouvelle mutation dans la population (néomutation)\nLe diagnostic génotypique indirect :\nDiagnostic génotypique par analyse de liaisons avec des marqueurs polymorphes.\nLe principe de cette méthode consiste à distinguer le chromosome porteur du gène pathologique de son homologue normal.\nOn ne détecte pas directement la lésion génomique elle-même, mais des polymorphismes voisins de celle-ci servant de marqueurs.\nOn a donc 2 changements :\n1)\tUn qui affecte la fonction\n2)\tL’autre qui est une modification que l’on peut détecter par un changement dans la carte de restriction\nCeci permet un diagnostic chez les sujets dont le statut génotypique est inconnu (fœtus ou individu à risque)\nOn utilise cette approche par liaison seulement si la lésion génétique n’est pas directement accessible.\nOn procède pour à une analyse de liaison génétique à l’aide d’un marqueur RFLP.\nAnalyse de liaisons génétiques à l’aide d’un marqueur RFLP\nLorsqu’on ne connaît pas le gène responsable d’un phénotype ou d’une maladie propagée de manière mendélienne monogénique, on va tenter d’identifier un marqueur génotypique de type RFLP dont la propagation suit celle du phénotype.\nToutefois, on ne dispose que rarement de sites de restriction localisés à la position exacte d’une mutation provoquant un phénotype particulier !\nOn va donc chercher des marqueurs génétiques très polymorphiques d’un individu à l’autre, et permettant l’analyse de beaucoup de fragments de chromosomes différents à la fois.\nOn utilisera alors des sondes contenant des éléments répétés satellites du génome.\n on a pas la séquence de la mutation, mais un marqueur juste à côté !\nDans le cas de l’hémophilie, on distingue plus de 150 formes de mutation.\n Le diagnostic est en général semi-direct par polymorphisme de restriction.\nLes mutations non-sens se caractérisent par une hémophilie grave.\nLes mutations faux-sens se caractérisent par une hémophilie modérée\nLa plupart des maladies sur des grands gènes présentes de nombreuses mutations différentes. On utilise donc la méthode semi-directe de dépistage.\nLa génétique inverse\nGénétique classique :\tidentifier la protéine défectueuse puis identifier le gène\nGénétique inverse :\tidentifier le gène impliqué, puis ‘remonter’ à la protéine et en définir la fonction\nLe gène a été identifié, c’est la dystrophine.\nCe gène est très grand (2300kb) et prend 10 à 30 heures pour être répliqué !\nLa plupart des mutations sont dues à des délétions.\nPour un diagnostic direct, on utilise un PCR mutliplex (amplification simultanée de segments) car les produits PCR sont distinguables par leur taille.\nEn utilisant 2 séries de 9 couples d’amorces, on explore 17 exons et la région promotrice, ce qui permet de couvrir 90% des délétions.\n60% des cas sont dus à des délétions et 30% à des microdélétions ou mutations ponctuelle)\nEn analysant les exons seulement, on peut observer une absence d’un d’entre eux. Cela permet de cibler rapidement l’exon responsable de la mutation.\nOn peut également faire des analyse pour cette maladie par Southern blot (uniquement par rapport aux sites de restriction) ou par Nothern blot (expression du gène : avec RNA)\nEn plus des séquences qui correspondent à des gènes, le génome contient des séquences répétées un grand nombre de fois.\n\tles séquences uniques ou répétées un petit nombre de fois\n\tles séquences répétées : ces séquences sont transmises comme n’importe quel gène et permettent d’identifier des individus : empreinte génétique\nDes vrais jumeaux ont exactement la même empreinte génétique\nUn enfant est exclusivement constitué d’ADN provenant des parents. Les caractéristiques de son empreinte génomique sont présentes soit chez le père, soit chez la mère. La comparaison de l’empreinte génétique permet d’authentifier une filiation directe.\nDe cette manière on a pu déterminer 2 siècles plus tard que le président des Etats-Unis Thomas Jefferson avait eu un fils avec son esclave noire.\nLes polymorphismes de nucléotides uniques SNP (single nucleotide polymorphism)\nDans la population humaine, la comparaison de la séquence du même gène chez différents individus a montré qu’il pouvait exister naturellement une différence de 1/1000 nucléotides.\nCela représente une différence d’environ 1 million de différences entre deux individus.\nCette observation permet de suivre les différentes formes d’un gène ou d’un polymorphisme dans la population.\nDéfinir la fonction de chaque gène\nOn connaît actuellement la fonction de seulement 60% des gènes.\n1)\tPar homologie de séquences avec des gènes dont la fonction est connue dans d’autres organismes (la narcolepsie : présente chez le chien)\n2)\tPar réintroduction/inactivation des gènes (knock-in/knock-out)\n3)\tTranscriptome : variation de l’expression des gènes\n4)\tAnalyse de l’effet au niveau protéique : le protéome\nLe décodage du génome a un intérêt au niveau de\n1)\tL’évolution : comparaison des génomes et fonctions des protéines / arbre de vie\n2)\tMédecine :\n pharmacologie :\tréponse aux médicaments différentes selon les individus et donc selon le génome\n les maladies héréditaires, infectieuses, cancer, etc…\nSujet: Re: Notes de cours Mer 5 Avr à 21:05\nDétermination d’un arbre de vie\nLa détermination d’un arbre de vie se fait par comparaison de séquences des génomes de différents organismes.\nIl permet de détecter des homologies ou des différences.\nIl permet également de déterminer la filiation par des tests statistiques (parcimonie maximale)\nOn a pu établir que les mammifères marins et terrestres ont une origine commune.\nOrigine de l’homo sapiens\nEn comparant les séquences de l’ADN mitochondrial (maternel) et du chromosome Y (paternel) chez plusieurs individus, on a pu déterminer que l’homme actuel est descendant de l’homo erectus d’Afrique, toutes les espèces d’hominidées des autres continants ayant apparemment disparu.\nTous les hommes sont donc descendants d’ancêtres vivants en Afrique.\nDe la même manière on a pu comparer les séquences de plusieurs individus originaires de différents endroits de la planète. Ces études ont montrer 3 groupes avec plusieurs ramifications :\n1)\tLa Sardaigne est dans le même groupe que le Soudan et l’Ethiopie\n2)\tL’Europe est proche des Basques, du Maroc, du Moyen-Orient et de manière un peu plus éloignée des ethnies de Sibérie, d’Asie centrale, Hunza, Pakistan et Inde\n3)\tOn trouve dans ce troisième groupe les ethnies américaine et puis les ethnies africaines d’un côté et asiatique de l’autre.\nApplication de la pharmacogénétique\nLa pharmacologie permet de mieux cibler des traitements médicamenteux.\nIl existe des variations génétiques (polymorphismes) qui affectent l’âge de début, la vitesse de progression d’une maladie et la réponse thérapeutique.\nLa réponse aux traitements étant différente selon les individus, le traitement idéal pourrait directement être trouvé grâce à une approche pharmacogénomique et éviter ainsi de devoir réévaluer plusieurs fois le traitement pour trouver le meilleur. Ceci est d’autant plus important que les effets secondaires peuvent important selon les médicaments et causer des dommages inutiles. Cela permet donc des thérapies plus ciblées selon les individus.\nLa pharmacogénomique serait notamment utile dans le cas de maladies cardiovasculaires, schizophrénie (neuroleptiques), Alzheimer (anti-démence) ou Parkinson.\nExemple : la maladie d’Alzheimer et le gène de l’apolipoprotéine E\nLa maladie d’Alzheimer peut être due à différents problèmes et peut avoir des liens génétiques différents.\nOn a déjà pu identifier 3 allèles qui réagissent différemment au traitement.\n\tL’allèle E4 du gène de l’apolipoprotéine E (forme commune de l’Alzheimer) présente un défaut dans la synthèse de l’acéthylcholine.\nLa présence de cet allèle compromet la réponse thérapeutique à des traitements cholinergiques.\nLe déprényl fonctionne bien chez la plupart des individus E4\n\tLes individus E3 et E2 répondent à un traitement au taxol.\nCependant, le taxol peut créer des lésions hépathiques.\nCet exemple nous montre l’intérêt du détermination d’un profil génétique pour l’ApoE, mais aussi la nécessité d’identifier des liens génétiques supplémentaires.\n1)\tLa pharmacogénomique permet un traitement plus personnalisé\n2)\tElle permet l’analyse de traits complexes : maladies multigéniques\n3)\tElle permet de déterminer un profil génétique des personnes permettant de connaître le gène défectueux et donc le traitement approprié (locus susceptible)\n4)\tPermet une médecine prédictive et (espérons-le) préventive\n5)\tPROBLEME ETHIQUE : utilisation du profil génétique de l’individu !!!\nApplication aux maladies héréditaires, maladies infectieuses, cancer, etc…L’analyse génotypique permet d’envisager :\n1)\tDes thérapies géniques\n2)\tDes greffes d’organes et de tissus génétiquement modifiés\n3)\tDes vaccins\n4)\tThérapies médicamenteuse ciblée, etc…\nUtilisation des polymorphismes\n1)\tSélection de famille avec pathologie diagnostiquée (jumeaux monozygotique)\n2)\tAnalyse d’un grand nombre de régions du génome avec des marqueurs ploymorphes\n3)\tDétermination d’une corrélation entre un forme ‘particulière’ et pathologie\n4)\tCalcul statistique pour estimer le degré de confiance\nLa dermatite atopique AD :\nMaladie inflammatoire chronique cutanée marquée par un taux élevé des IgE (80% des cas), avec une susceptibilité accrue à l'asthme.\n10-20% des enfants dans le monde occidental\nOn connaît 2 loci de susceptibilité\n on emploie des marqueurs microsatellites\nLe psoriasis atteint lui 1-2% de la population\nLa dermatite atopique est distincte du psoriasis, mais dans les 2 cas on observe une inflammation avec de lymphocytes T activés.\nRarement on voit AD et psoriasis ensemble.\nIl y a plusieurs loci de susceptibilité. Les 2 gènes de susceptibilité de l’AD le sont également pour le psoriasis.\nAD est influencé par des gènes qui modulent les réponses du derme indépendamment des mécanismes atopiques.\nIl est donc important d’identifier les gènes impliqués !\n1)\tDéfinir l’organisation et l’alignement de toutes les séquences (uniques ou répétées) sur les chromosomes et chaque chromosomes (encore 5%)\n2)\tDéfinir la fonction de chaque gène (modèles)\n3)\tEtablir la carte des SNP (variabilité génétique dans la population humaine)\n1)\tClonage cellulaire (à ne pas confondre avec le clonage moléculaire\n2)\tTransgenèse (OGM)\n3)\tCellules souches pluripotentes : embryonnaire/fœtale/adulte\n1)\tSécurité des personnes\n2)\tSécurité de l’environnement\n3)\tImpérativité de soigner\n4)\tNon-discrimination sur la base du génome\n5)\tTraitement éthique des animaux\nMédecine :: Archives :: Module 3 (2005-2006) :: Biologie & Génétique Moléculaires


YouShould : 16 bars à moins de 1km de Métro La Chapelle à Paris\nBAR MÉTRO LA CHAPELLE PARIS : 16 bars à réserver ou privatiser\nVoici les 16 bars autour de Métro La Chapelle à Paris que l'équipe YouShould a sélectionné pour vous. Nous vous accompagnons pour organiser en toute sérénité votre événement : dénicher le bar idéal, le réserver ou le privatiser et profiter d'offres exclusives. Tout cela gratuitement !\nSi vous cherchez un bar à proximité du Métro La Chapelle, c'est comme si c'était fait ! Nous vous proposons une sélection de bars juste à côté. Plus besoin de GPS pour s'orienter et pas d'excuse pour les retardataires qui se seraient perdus en cours de route. On vous trouve un bar autour du Métro La Chapelle mais pas que ! Cochez les filtres qui vous intéressent pour organiser une soirée à votre image. La réservation est simple et gratuite et vous fait bénéficier de tarifs de groupe négociés par nos soins avec les gérants de nos 16 bars. Une fois le bar arrêté, la réservation se fait instantanément ou dans les 3 heures qui suivent. On vous accompagne tout au long de vos démarches alors n'hésitez pas si la moindre question vous effleure l'esprit !


Nous liberins morges / Une mature\nPosté sur 08.04.2018par Dupont Fabien\n2 photos Charmant couple Doudou39, un couple de 18 et 18 ans, Région lémanique, Vaud, Chavornay Hello, Couple libertin depuis plus de 10 ans Nous cherchons des couples sympas, discrets aiment passer des bons moments sans prise de tête. Recherche rapide Par critères Toutes les annoncesJe recherche un hommeJe recherche une femmeJe recherche un coupleJe recherche un trans./trav. Coucou les coquine et coquins. Coquin x0, bons plans x5, filtrer les résultats, organiser son voyage. Trouvez des libertins et libertines de votre région parmi notre base de plus de 500 000 membres et contactez-les par la messagerie interne ou via le chat libertin avec vidéo grâce à votre webcam. Loisir x2, voyage x2, gourmand x5, beauté. Retrouvez toutes les soirées libertines du jour dans les clubs échangistes, les clubs libertins etles saunas libertins de votre région. Tchat Webcam, moteur de recherche, liste de favoris, des visites, des membres bloqués et bien plus encore! Une partie «bon plan» est à votre disposition pour profiter des remises exclusives proposées aux membres. Nous mettons à votre disposition tous les outils pour faire des rencontres coquines, voir organiser vos propres soirées privées libertines.\nPlume75, un couple dont. 1 photo, recherche couple sérieux, coupleLibertins31, un couple dont. Kalmah, un couple dont. Nous voulons partager des soirées pleines de rire de danse et bien plus si nous nous apprécions. 3 photos, couples sympa angelucifer, un couple les. En utilisant ce site, vous acceptez lutilisation des cookies à des fins danalyses, de publicités et de contenus personnalisés. De préférence, une débutante qui.\nNousLibertins.com: Site libertin, rencontres libertines pour échangistes Trouvez des libertins et libertines dans votre région : de 500 000 membres avec photos et chat vidéo. Vous résidez en Suisse et vous souhaitez faire des rencontres libertines gratuitement? Alors inscrivez vous vite sur Gare aux libertins, suisse et accédez. Club libertin et échangistes à, morges 1110 : retrouvez les coordonnées de toutes les meilleures adresses du Petit Futé (trafick, trafick). Site mobile de rencontres libertines et échangistes Rencontres libertines en Suisse - Gare aux, libertins Les meilleurs clubs libertin et échangistes à, morges - Petit Futé Club libertin et échangistes à, morges 1110 : retrouvez les coordonnées de toutes les meilleures adresses du Petit Futé. Nous vous mettons en relation. Morges - Erotique - sur, trouvez chaque jour des annonces récentes.\nRetrouvez les fonctionnalités principales de contact avec vos amis libertins. Vous résidez en Suisse et vous souhaitez faire des rencontres libertines gratuitement? Gare aux Libertins c'est LE site n1 pour les rencontres échangistes en Suisse entre couples et adultes consentants! Le libertin amateur trouvera plus dinformations sur ces pratiques libertines dans notre blog. Paolo, un couple de 48 et 43 ans, Région lémanique, Vaud, Lausanne Nous cherchons une relation amicale et pleine de libertinage. Ne plus me demander, avis. Alors comme le marque la " Rubrique"! De 33 et 34 ans, Espace Mittelland, Berne, Corgémont.\nM est le premier site de rencontres libertines totalement conçu sur un modèle de réseau social. Nous sommes à la recherche de «piments» dans notre couple, c'est pour cela que nous venons » tenter de mettre une annonce sérieuse pour partager nos envies. 1 photo Un couple de 2 sexfriends très sympa et bon vivant. Nous recherchons avant toute chose, le feeling, le respect de chaque personnes! Nous aimons tout ( sex anal pour l'un et l'autre, jeux avec dildos et plugs. Vous pourrez chatter en direct, voir toutes les photos et vidéos des membres.\nExtra conjugales belgique notre dame des prairies 356\nSite de rencontres gratuit pour les filles placeslibertines 333\nAnnuaire de rencontre seraing Rencontre sportive celibataire tirlemont


Philo - Comptes Rendus - 5009 Mots\nPages: 21 (5009 mots) Publié le: 13 avril 2011\n■ Conseils pour bien démarrer\nCe sujet s’inscrit dans la deuxième partie du programme « Inégalités, conflits et cohésion sociale : la dynamique sociale », et plus particulièrement dans le point 3 de celle-ci, « Intégration et inégalités » : lien social, socialisation, intégration et exclusion. Le lien social relie les individus les uns aux autres, les relie ensemble à lasociété et aux groupes sociaux auxquels ils appartiennent, produisant ainsi de la cohésion sociale. La construction de ce lien est le résultat d’un long processus de socialisation, apprentissage social par lequel l’individu apprend et intériorise les valeurs et les normes sociales de son groupe d’appartenance. La fragilisation du lien social désigne le processus d’affaiblissement des liens qui unissentl’individu à la société, à tel point que ceux-ci sont souvent proches de la rupture et que l’intégration de la personne se trouve menacée. Le sociologue R. Castel utilise le terme de désaffiliation, qui désigne le processus générant les situations d’exclusion, en retraçant le parcours qui a conduit l’individu à connaître un risque accru de mise à l’écart de la société. Selon lui, la participationconcrète des individus à la vie collective peut être analysée selon deux axes principaux : celui qui définit leur rapport à l’emploi et à la protection sociale, et celui qui traduit l’ensemble de leurs échanges hors sphère professionnelle et de leur relations sociales (famille, amis, quartier, associations…) Or, on a assisté depuis deux décennies, d’une part à la fin d’une organisation économiquequi garantissait le plein emploi et d’autre part à la désinstitutionnalisation des relations sociales et notamment familiales. Ces deux axes principaux semblent particulièrement bien adaptés pour répondre à la question du sujet, qui propose d’analyser les causes de la fragilisation du lien social depuis le début des années quatre-vingt en France, d’autant plus que les documents vont dans le mêmesens.\nL’intégration sociale est un thème fort chez E. Durkheim. Celui-ci considère qu’une société est intégrée si l’individu « au lieu d’être réduit à ses\nseules forces, participe à l’énergie collective et vient y réconforter la sienne quand elle est à bout ». Il y voit trois conditions : 1. Les individus possèdent une conscience commune et partagent les mêmessentiments, croyances et pratiques. 2. Ils sont en interaction les uns avec les autres. 3. Ils se sentent voués à des buts communs. Nous pouvons retenir comme questions-guides :\n1. Comment les difficultés économiques (précarisation de l’emploi et chômage) expliquent-elles la fragilisation du lien social ? 2. Y a-t-il d’autres causes plus sociologiques ?\nBIEN COMPRENDRE LES DOCUMENTSDocument 1\n– emploi total – statut – emplois à durée limitée – actifs occupés à temps partiel\nComment exploiter le document ?\nCet extrait des Données sociales de l’INSEE en 2003 nous montre l’évolution parallèle de l’emploi total, de la part de l’emploi à durée limitée et de la part des actifs occupés à temps partiel entre janvier 1990 et mars 2002. Alors que l’emploi total a augmentéde 6 % environ pendant cette période, l’emploi des femmes augmentait plus rapidement et l’emploi salarié progressait de 10 % environ. Dans le même temps, l’emploi à durée limitée, c’est-à-dire celui qui fait l’objet d’un contrat qui limite le temps d’embauche (quelques jours, 6 mois, un an…) augmentait de façon importante, passant de 6,9 % des actifs en 1990 à 9,9 % des actifs en 2002, soit unehausse de 3 points de pourcentage. Parmi ceux-ci, les intérimaires connaissent la progression la plus forte (+ 100 %). Par ailleurs, la proportion d’actifs occupés à temps partiel augmente fortement, notamment chez les femmes dont la proportion d’actives occupées à temps partiel passe de 23,6 % à 29,7 %, soit une hausse de 6,1 points. L’augmentation de ces deux catégories d’emploi, facilitée par...


Arrêtons-les ! 02/ – Secrétariat d'Etat chargé de l'égalité entre les femmes et les hommes et de la lutte contre les discriminations\nAccueil > Actualités/Presse > Brèves > Arrêtons-les ! 02/\nArrêtons-les ! 02/\nEn marge de la Journée mondiale de lutte contre les violences sexistes et sexuelles, Marlène Schiappa, secrétaire d’État auprès du Premier ministre, chargée de l’Égalité entre les femmes et les hommes, lance le second volet de la campagne « Arrêtons-les ». Alors que la première campagne visait à faire prendre conscience de la gravité de leurs actes aux auteurs d’agressions sexistes ou sexuelles, l’édition lancée aujourd’hui cible les violeurs.\nLes 93 000 viols ou tentatives de viols enregistrés en France chaque année couvrent des réalités diverses. Ces 5 nouvelles animations illustrent cette diversité ; Si les faits sont différents, la qualification reste bien la même : c’est un viol.\nQuelles que soient les situations et les circonstances, le viol est un crime. Il est défini par le code pénal comme « tout acte de pénétration sexuelle, de quelque nature qu’il soit, commis sur la personne d’autrui par violence, contrainte, menace ou surprise. » (Article 222-23 à 222-26 du code pénal). User de la force n’est pas l’unique mode opératoire du violeur, la contrainte physique ou psychologique, la menace verbale, la surprise sont d’autres modes opératoires reconnus par la loi.\nPour que cessent les violences sexistes et sexuelles et que la honte change de camp, le Secrétariat d’Etat en charge de l’Egalité entre les femmes et les hommes vous invite à partager massivement cette campagne.\nPartagez les vidéos :\nL’ensemble des vidéos est disponible sur http://www.dailymotion.com/playlist/x51vev\nTéléchargez le communiqué de presse du 2ème volet de la campagne “Arrêtons-les !”


Quelques nouvelles – A Bike Around the World\nVoilà quelques nouvelles de la suite de mon périple et quelques explications sur le manque d’article de ces derniers temps.\nJ’ai passé un mois formidable en Nouvelle-Zélande ; bien que je n’ai que visité l’île du sud j’ai pu admirer de nombreux paysages différents, pédaler plus de 2000 km et vivre de formidables expériences.\nJ’ai franchi la frontière du Laos il y a quelques jours après avoir passé deux semaines au Vietnam. Rizières, baie d’Halong, grottes, tout était très joli.\nIl me reste une grosse vingtaine de jours avant mon retour et la fin de mon aventure, je vais donc essayer de profiter à fond des derniers moments.\n« Et alors ou sont les photos et les vidéos ? » me direz-vous. Et bien mon PC portable a malheureusement rendu l’âme. Je ne sais pas à quoi c’est dû, mais vu la quantité de vibrations qu’il a subi toute cette année ça ne m’étonne que peu.\nJe suis donc dans l’incapacité de partager mes photos et de faire des montages vidéos. Mais je vous promets que, dès mon retour, je publierai mes histoires de la Nouvelle-Zélande et de l’Asie en images.\nEncore un peu de patience donc, je vous donne rendez-vous vers la fin avril ici même.\n4 réactions au sujet de « Quelques nouvelles »\n23/03/2018 à 09:12\nEt le « ~ », coquin ?\n28/03/2018 à 13:03\nlol, c’était sûr !\nhey Mac Ouille ! J’ai bien hâte de te revoir ! Encore quelques jours… Yeah ! Profites encore à fond. des besos amigos\n28/03/2018 à 17:18\nbonjour, dommage cet imprevu de materiel, qui nous prive pour le moment de ce beau periple. donc à bientôt et merci encore de ce beau voyage de france au costa rica. amities, bernard


«Trigger télécommandé par IR ou RF» - 29839853 - sur le forum «Amplis et Préamplis» - 1056 - du site Homecinema-fr.com\nTrigger télécommandé par IR ou RF\n» 06 Déc 2006 11:17\nBonjour, je cherche un moyen de réaliser un trigger télécommandé soit par RF ou IR afin de pouvoir allumer à distance un ampli de puissance rotel RMB 1077, avec une télécommande.\nJ'ai bien pensé à brancher l'ampli directement sur une prise télécommandée, mais après avoir changé le cable secteur et la multiprise faite par Christian Christian, ce serait peut être dommage d'y intercaler une prise chacon.\nUne autre solution serait de me servir d'une prise télécommandée pour la transformer en trigger ou partir de zero en sachant que je n'ai pas touché de fer à souder depuis les cours de technologie au collège, soit depuis un bail.\nUne autre question, pourquoi les constructeurs ne prévoient pas directement de télécommande, plutot que des triggers, ou même les deux ?\nJe viens de tomber sur la réponse : apparement il suffit de mettre un transfo de 12v sur une prise télécommandée et le tour est joué, par contre comme l'entrée du trigger est en jack 3,5mm, comment faire ? est ce que cela existe tout fait ou faut il un adaptateur ou se mettre à la soudure ?\nDernière question, le manuel n'indique pas d'intensité en ampère, est ce vraiment important ?\n26 Avr 2015 19:41\nIndex du forum › DO IT YOURSELF - FAITES-LE VOUS-MÊME › DIY - Audio › Amplis et Préamplis › Trigger télécommandé par IR ou RF


Noisetier bourgeons Bio - 50 ml - Herbalgem - Onatera.com\nNoisetier bourgeons Bio - 50 ml - Herbalgem\n< Retour à Tous les bourgeons\nNoisetier bourgeons Bio - 50 ml\nFortifiant. Libère les voies respiratoires. Équilibre le terrain. Qualité premium.\n" bon au goût, date limite de consommation peut-être restreint / gélules mais action différente dans sa vitesse d'absorption "\nLe macérat-mère concentré de bourgeons de noisetier intervient notamment comme draineur des voies respiratoires qu'il contribue à assainir et libérer.\nIl tonifie, active les forces naturelles de l'organisme.\nIl équilibre et fortifie le terrain et s'utilise donc en association d'outres remèdes de gemmothérapie;\nMacérat concentré de bourgeons de noisetier*, alcool* (35%), eau, glycérine végétale.\nVraiment très efficace pour les bronches\nlibére le bronche\naprès un Covid-19 faible et une difficulté à reprendre le sport une pharmacienne m'a conseillé ce produit qui après plusieurs sorties CP et VTT m a bien libéré les bronches m a facilité la reprise\nbon produit pour aider le système respiratoire ,me convient bien.\nLes bourgeons de noisetier sont recommandés pour dégager la sphère poumons et en effet le traitement est efficace. J'ai moins de difficultés à respirer lorsque je suis allongé. Je recommande toute la gamme de bourgeons ; au plus près de la nature. Efficacité réelle.\nMon mari a eu l’envJe de faire une nouvelle cure\nAvis : 412\nJ'ai essayé ce produit car j'avais une toux très persistante mais il n'a pas suffit. Je pense qu'il doit être efficace mais il ne faut pas être trop atteint.


Sujet: Bonjour à tous 01.03.10 17:15\nJe m'appelle Julien, 26 ans, et j'habite en Ardèche, plus exactement sur le plateau ardéchois.\nJe roule enduro depuis 4 ans maintenant, et c'est toujours un régal!\nJ'ai roulé 2temps, 4temps, et je suis finalement revenu au 2temps avec l'achat d'un 250 KX ichiban de 2000.\nUne moto peut-être un peu puissante pour le technique, mais je vais la dompter!!!\nEn espérant croiser quelques uns d'entre vous dans les chemins, bonne randos à tous.\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 18:13\nbienvenue l'ami Ardechois!!!!\ntu verra l'ambiance est top ici\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 18:20\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 19:33\nbienvenue a toi tu roule ou exactement car je connais bien le plateau justement et quelques de non ou de roulage\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 20:09\nJe roule sur St cirgues en montagne et ses alentours, mais je rattaque de rouler après un arrêt d'un an cause au boulot.\nEn tout cas, St cirgues, beaucoup doivent connaitre, car il y a eu une manche du championnat de france l'année dernière.Et pour info, les 4 et 5 juillet 2010, se déroulera à Langogne(48), une manche du championnat français d'Enduro.\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 20:12\nSa doit en effet marcher pas mal le 2 et demi kx ( le 125 était dja pas mal.. )\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 20:30\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 20:47\na st cirgue tu connais le circuit du cdf de mémoire surement\ndes amis étaient marsharl jérome saussac et florent gerland, thiérry ceyte roule sur le térrain de cross mais jamais eu l occasion de le renconter en vrai\net les frères gandon je connais laurent et 1 fois alexandre queyrer a issarles\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 20:58\n[quote="vialle]a st cirgue tu connais le circuit du cdf de mémoire surement\net les frères gandon je connais laurent et 1 fois alexandre queyrer a issarles[/quote]\nOui, le parcours du cdf je le connais un peu, à 2-3 détails près!\nJe connais bien certains membres du moto-club local, qui ont fait beaucoup pour avoir le cdf à St cirgues, et qui organise chaque année le motocross.\nJe connais bien Laurent aussi.\nJe vois que tu connais bien aussi, donc je pense qu'on se croisera dans une grimpette ou au passage d'un petit gué!!!!\nSujet: Re: Bonjour à tous 01.03.10 21:09\nSujet: Re: Bonjour à tous 02.03.10 10:30\nSujet: Re: Bonjour à tous 02.03.10 19:54\nj'ai un pote qui roule en ardeche....forcement il est ardechois.\nil roule du cotè du mont gerbier des joncs....\nSujet: Re: Bonjour à tous 02.03.10 19:59\nBienvenue ami ardéchois, quel magnifique département qu'est l'Ardèche\nSujet: Re: Bonjour à tous 03.03.10 12:45\nSujet: Re: Bonjour à tous 03.03.10 15:54\nà tous pour vos messages, et à très vite dans les chemins!!!\nEnfin quand y aura plus de neige\nSujet: Re: Bonjour à tous 03.03.10 17:28\nj'ai eu une 250 KX ichiban de 99..... une moto de caractère!!!!\nma première enduro.... un peu présomptueux!, j'aimerai ressayer aujourd'hui...\nen tous cas profites bien du fofo!\nSujet: Re: Bonjour à tous 03.03.10 17:59\nMoto : 450 béta RR\nSujet: Re: Bonjour à tous 03.03.10 19:46\nbienvenue 07 du sud\nSi tu viens dans le nord de l'Ardèche "Saint Félicien" on se croisera peut être


Comment installer et entretenir mon poulailler ? Conseils et astuces.\nOù placer idéalement mon poulailler?\nChoisissez un endroit plat, hors des courants d’air.\nEvitez de placer votre poulailler dans un creux du jardin, ceci pour éviter que le ruissèlement des eaux de pluie ne vienne à stagner près de celui-ci ou dans la volière. L'eau doit ruisseler loin du poulailler, du parcours / enclos et des volières.\nSur les sols argileux, boueux, ajoutez une plateforme de sable, ce qui drainera l'eau et permettra aux animaux de rester les pattes au sec et ne pas patauger dans la boue lors des périodes humides. Cela rendra aussi le nettoyage plus facile au balai à gazon/ râteau à feuilles.\nExposez votre poulailler dos aux vents dominants: Pour éviter que le vent ne s'engouffre dans le dortoir et les pondoirs. Vos poules pourront alors rester à l'abri des courants d'air. Généralement on l'orientera vers l'Est.\nPrévoyez d'installer une assise sous le poulailler : une ceinture de bois (sablière), ou un contour de bordurettes de jardin, ceci afin de le stabiliser et l'isoler du sol. Spécialement pour les poulaillers de grand format, ou avec une volière. Pour cela, attention à prendre en compte les dimensions au sol et non les dimensions hors tout de votre article. Voir les fiches techniques de chaque poulailler.\nSi vos poules sont destinées à ne jamais sortir dans votre jardin, (ce qui est dommage) ne pas placer la volière sur un sol bétonné : La poule est très sensible aux chocs du bec sur une surface trop dure et ne pourrait donc pas picorer. Elle ne pourrait pas non plus gratter le sol ou s'abîmerait les pattes, ce qui est très dommage car le grattage est une activité innée et importante chez la poule.\nPréparer mon poulailler et l'arrivée des poules :\nAjoutez de la paille broyée ou des copeaux de bois tassés (plus pratiques) dans le dortoir et dans les pondoirs. Vous pouvez ajouter une feuille plastique au fond du tiroir à déjections, sous la litière pour protéger le tiroir et en faciliter l'entretien. Attention la fiente de poule est corrosive.\nIl est important que les poules n'aient pas froid aux pattes, car, dit-on, « Une poule qui a froid aux pattes ne pond pas! » ... car la poule prend la température par ses pattes.\nA titre préventif, faites un traitement antiparasitaire, notamment contre les poux rouge, à saupoudrer à l'intérieur du poulailler.\nVous trouverez dans notre catégorie "Prévention des parasites" des produits efficaces et adaptés aux volailles, utilisez la terre de diatomées, ou les poudres à base de pyrèthre végétal.\nNotez que les premiers jours de l’arrivée de vos poules, il est conseillé de les maintenir dans leur nouveau poulailler (volière) afin qu’elles prennent confiance, se repèrent et s’habituent à leur nouveau logement. Elles peuvent ne pas pondre pendant plusieurs jours suite au stress du changement d’habitat. L’autre intérêt est qu’elles prennent l’habitude de pondre dans leur pondoir et non pas n’importe où dans votre jardin.\nCombien de perchoirs et de nid par poule ?\nLe poulailler, qu'il soit fixe ou mobile doit présenter minimum 18 cm à 20 cm de perchoir/ poule et une densité de 6 à 9 poules /m2 à l'intérieur*. (*normes de l'agriculture bio, selon que ce soit de la poule pondeuse ou de chair).\nSi vous placez des perchoirs à des hauteurs différentes, vous risquez de créer une compétition entre les poules qui voudront toutes celui le plus haut. Sachez aussi que certaines poules se perchent peu (et ne volent pratiquement pas). Elle resteront dormir au sol, dans les copeaux / paille.\nLes poules ne pondent pas toutes en même temps, ainsi 2 nids sont suffisants pour 3/6 poules, elles y pondront à tour de rôle.\nUn bac à poussières est-il nécessaire pour les poules?\nLa poule ne se baignant pas, elle se fait des bains de poussières. Ceci lui entretien la plume et la débarrasse des parasites externes éventuels. Ainsi, laissez-lui à disposition un 'bac à poussières" (type bac à litière) rempli de sable mélangé à de la cendre de bois. Vous verrez vos poulettes s'y coucher et s'y ébrouer. Mettez le bac à l'abri de la pluie afin qu'il reste au sec.\nIl est à noter que les poules en liberté trouvent d'elles-même un endroit où s'ébrouer dans votre jardin, c'est le fameux 'nid de poule".\nComment créer un parcours herbeux idéal pour les poules?\nL'idéal est que vos poules puissent gambader en dehors de la volière du poulailler. Les volières ne sont pas des lieux permanent de vie !. Organisez-leur un "parcours herbeux" (pour ceux qui souhaitent clôturer l'espace accessible aux poules) dans votre jardin, prévoir alors 4 m2 minimum par poule (norme de l'agriculture bio) ou 2.5 m2 si c'est une installation mobile.\nLa poule n'est pas un animal de pâture! (son ancêtre vivait dans la jungle). Vous observerez que vos poules, même libres restent généralement proche de leur poulailler et jusqu’à 40/50m mètres autour, ainsi que sur les zones ombragées/protégées.\nLa poule aime les zones couvertes et courir le long des haies, c'est une grande marcheuse.\nIl faut adapter son environnement pour que la poule se sente en sécurité lorsqu’elle est en liberté : plantation d'arbustes, de buissons, de haies, création d'abris... Lui laisser son poulailler ouvert pour qu’elle puisse s’y réfugier en journée si besoin.\nLes plantations, arbustes, haies et clôtures sont intéressantes car fournissent de l’ombre, protègent du vent, servent de repères et de guide dans ses déplacements, et surtout protègent vos poules de la vue des rapaces.\nEn savoir plus sur les parcours herbeux? Comment les organiser, découvrez notre article dédié.\nAvantages du poulailler ou d'un parc mobile:\n- Utilisation flexible du terrain, on déplace l'installation sur les espaces herbeux nouveaux régulièrement, ainsi les poules broutent et mangent les vers à loisir.\n- Pression des parasites et des pathogènes éventuels réduite en raison des changements de parcelle.\nQuelques conseils pratiques pour nourrir vos poules.\nLa prévention des maladies communes de la poule.\nCopyright© PoulaillerDesign® 2011- MAJ 2021. Tous droits réservés.


Face à la “menace” iranienne, Washington rappelle des diplomates en Irak\nLe président américain Donald Trump s’entretient avec des journalistes, en présence de son conseiller national à la sécurité John Bolton, à la Maison-Blanche, le 3 mai 2019. Crédits : REUTERS/Jonathan Ernst.\nLe département d’Etat américain a donné l’ordre de partir au personnel gouvernemental non essentiel de l’ambassade à Bagdad ainsi que du consulat à Erbil, au Kurdistan irakien, en raison d’une “menace imminente” venant de l’Iran. Selon le New York Times, Washington aurait été alarmé par des images aériennes montrant des missiles assemblés sur des bateaux dans le Golfe Persique.\nEn pleine escalade des tensions avec Téhéran, la Maison-Blanche a pris mercredi une mesure de précaution rare : elle a décidé de rappeler son personnel diplomatique non essentiel en Irak, en invoquant notamment une “menace imminente” en “lien direct” avec l’Iran voisin, rapporte USA Today.\nS’appuyant sur trois sources anonymes à la Maison-Blanche, le New York Times affirme quant à lui mercredi soir que Washington aurait obtenu des “images aériennes montrant des missiles assemblés sur de petits bateaux dans le Golfe Persique qui auraient été installés par des forces paramilitaires iraniennes”.\nInquiétudes en Europe et parmi les élus du Congrès américain\nLe rappel du personnel diplomatique non-essentiel américain a poussé mercredi Berlin à prendre à son tour des mesures de précaution. Peu après la décision de la Maison-Blanche, l’Allemagne a notamment annoncé avoir suspendu jusqu’à nouvel ordre ses opérations de formation militaire en Irak, rapporte Die Welt, tout comme les Pays-Bas.\nCe flou concernant “la possibilité d’un affrontement militaire avec l’Iran” a aussi provoqué mercredi l’agacement de plusieurs élus du Congrès républicains qui ont exigé des explications, rapporte The Hill. “Je ne trouve pas juste de nous laisser dans l’expectative” a notamment expliqué au média américain le sénateur républicain de Caroline du Sud, Lindsey Graham qui s’est dit notamment préoccupé par l’évacuation du personnel de l’ambassade à Bagdad, “compte tenu des attaques régulières subies par cette institution au plus fort de la guerre en Irak”, qui n’avaient pas nécessité à l’époque que l’on déplace des employés. “J’étais plusieurs fois présent sur place quand nous étions frappés par des roquettes. Si nous pouvions rester sur place à l’époque, c’est que la menace aujourd’hui doit être réelle” souligne le sénateur.\n“La posture militaire de l’administration Trump masque une nouvelle série de sanctions économiques” à venir\nErin Banco et Asawin Suebsaeng, journalistes du Daily Beast, semblent douter de la volonté de Donald Trump d’entrer en conflit avec l’Iran. “A plusieurs reprises au cours des deux dernières années, lorsque de hauts responsables de l’administration ont informé Trump de la situation en Iran, le président s’est inquiété de l’impact potentiel de la montée des tensions sur les marchés pétroliers, selon deux sources proches. En abordant cette question avec de hauts responsables, Trump a laissé entendre qu’un conflit majeur entre l’Iran et les États-Unis pourrait effacer les gains économiques nationaux dont le public américain a bénéficié ces dernières années - gains sur lesquels Trump compte s’appuyer pour sa campagne de 2020”.\nLes journalistes du Daily Beast estiment que “la position militaire de plus en plus agressive de l’administration Trump à l’égard de l’Iran masque” des projets présidentiels “plus concrets visant à paralyser le régime de Téhéran”. Des hauts responsables à la Maison-Blanche, qui travaillent sur la politique iranienne depuis l’investiture de Trump, “envisageraient actuellement une nouvelle série de sanctions économiques” encore plus agressives, “notamment dans le secteur pétrochimique”, destinées à “déstabiliser l’Iran, à saper le leadership iranien et à remplacer d’éventuelles actions militaires” affirment-ils.


Résultats élection au Mali : la Cour Constitutionnelle confirme la victoire d’IBK - Cotedivoire.News\npar Kohan Kioshiko 20/08/2018\nLa Cour Constitutionnelle malienne vient d’enteriner la victoire d’Ibrahim Boubacar Keïta, le président sortant du Mali candidat à sa propre succession. Dans une déclaration lue en cours de matinée ce lundi, Manassa Danioko, présidente de la plus haute institution du pays, a déclaré élu le candidat IBK avec 67,16% des voix à l’issue du second tour de la présidentielle malienne qui l’avait opposé au chef de file de l’opposition, le malheureux candidat de l’URD Soumaïla Cissé. Ce dernier avait introduit un recours auprès de la Haute institution du pays pour dénoncer les résultats du scrutin, un recours qui sera malheureusement rejetée ce lundi comme l’a annoncé la présidente de l’institution juridique.\nLa présidentielle au Mali se classe parmi les thématiques qui dominaient l’actualité africaine ces derniers jours. Ce lundi 20 août, les résultats de l’élection malienne ont été validés par la Cour Constitutionnelle à la grande déception de l’opposant Soumaïla Cissé qui rejetait les chiffres communiqués par le ministre de l’administration territoriale il y’a quelques jours. Au cours d’une récente conférence de presse, le chef de file de l’opposition malienne avait même déclaré avoir ‘‘gagné cette élection avec 51,75%, le président sortant a eu 48,25%.’’Mais l’administration territoire a déclaré vainqueur jeudi dernier le président sortant avec 67,16% des suffrages, créditant son rival Soumaïla Cissé de 32,84% des suffrages exprimés. Sur les antennes nationales, la présidente de la Cour Constitutionnelle a mis fin au suspense en entérinant la victoire du président sortant IBK qui se présentait pour un second mandat à la tête du Mali. Mais au cours de sa lecture du verdict final du scrutin, la présidente de la Cour Constitutionnelle a retranché un peu plus de 500 voix au président sortant réélu il y’a quelques jours, ce qui ne changera hélas rien au résultat de la présidentielle au Mali dont le premier tour s’est tenu dimanche le 29 juillet dernier. Dans son communiqué ce lundi sur la chaîne nationale, Manassa Danioko, présidente de la Cour Constitutionnelle malienne, a aussi annoncé le retrait de 216 voix dans le score réalisé par Soumaïla Cissé. Les résultats de l’élection étant désormais validé par la plus Haute Juridiction du pays, la prochaine étape sera donc la cérémonie d’investiture du président sortant pour son deuxième mandat à la tête du pays. La cérémonie aura officiellement lieu dans un peu plus de deux semaines, le mardi 4 septembre prochain pour être plus précis. Concernant la régularité du scrutin présidentiel au Mali, les observateurs de l’Union Européenne déployés sur le terrain « n’ont pas observé de fraudes mais des problèmes d’irrégularités procédurales », a l’évidence aucun incident de nature à altérer véritablement les résultats du second tour de l’élection malienne.\nQuel recours pour Soumaïla Cissé ?\nL’opposant historique malien va-t-il se plier au verdict de la Cour Constitutionnelle comme en 2013 ? Pour ce deuxième rendez-vous du destin face au président sortant, le chef de file de l’opposition avait non seulement dénoncé les résultats, mais affirmer haut et fort qu’il était le vainqueur du deuxième tour de la présidentielle qui s’est tenue le 12 aout dernier sur l’ensemble du territoire malien. Mais comme en 2013, le chef de file de l’opposition se voit débouter par la Cour Constitutionnelle, en dépit des situations de fraudes qu’il avait dénoncé dans certaines régions qui lui étaient favorables. Pour l’heure, l’opposant malien n’a laissé aucune consigne à ses partisans après la validation des résultats de l’élection ce lundi par la plus Haute Juridiction du pays. Rappelons que l’opposant avait annoncé des marches pacifiques pour décrier les fraudes constatées par son camp dans ce scrutin.\nL’élection présidentielle au Mali fait toujours la une de l’actualité dans les…


Les honoraires sont librement fixés en accord avec le client.\nMaître ZANA fixe ses honoraires en fonction de la nature et de la complexité du dossier.\nUne convention d’honoraires est établie afin de connaître le montant prévisible des honoraires et des frais à envisager.\nIl s’agit des honoraires de consultation, d'assistance, de conseil, de rédaction d'actes juridiques et de plaidoirie.\nCes honoraires sont convenus à l’ouverture du dossier, après un premier rendez-vous.\nSi aucun dossier n’est ouvert à l’issue de ce rendez-vous, celui-ci vous sera facturé 75 € H.T. soit 90 € T.T.C.\nEn cas d’ouverture d’un dossier, tous les rendez-vous seront compris dans le forfait établi par la convention d’honoraires.\nEn cas de succès, et en fonction de la nature du litige, un honoraire de résultat pourra être convenu, entre 10 % H.T. et 15% H.T. sur les sommes obtenues en Justice.\nSi vous avez souscrit une assurance de protection juridique, vous avez le libre choix de votre avocat et aucun assureur ne peut vous imposer un autre avocat que celui dont vous souhaitez l’assistance.\nAprès communication du barème de prise en charge par votre assureur, la convention d’honoraires précisera si des honoraires ou frais excèdent ou non cette prise en charge.\nVous pouvez vous renseigner auprès de votre assurance multirisque habitation ou automobile.\nEn fonction de vos ressources et si votre assurance de protection juridique refuse d’intervenir, vous pouvez bénéficier de l’aide juridictionnelle, totale ou partielle. Le cabinet vous accompagnera dans la constitution de votre dossier d’aide juridictionnelle.\nCe dossier sera déposé auprès du Bureau d’aide juridictionnelle du Tribunal judiciaire concerné par votre litige, qui statuera sur votre accessibilité ou non à cette aide.\nSi vous êtes éligible à l’aide juridictionnelle totale : le cabinet percevra, à la fin de la procédure, une indemnité de l'Etat dont le montant est fixé par décret, en fonction de la nature du litige. Aucun honoraire ne sera alors à votre charge, à l’exception, le cas échéant, d’un droit de plaidoirie d’un montant de 13 €.\nSi vous êtes éligible à l’aide juridictionnelle partielle : le cabinet percevra une indemnité forfaitaire partielle versée par l’Etat, et des honoraires complémentaires seront fixés par Maître ZANA dans une convention d'honoraires soumise au contrôle du Bâtonnier de l'Ordre des Avocats.


Mercedes GLC Coupé | À Découvrir\nLe GLC Coupé complète l'arsenal de crossovers de Mercedes.\nAvec le GLC Coupé, Mercedes complémente son offre de crossovers de taille moyenne avec un produit de niche convoyant une image dynamique et sportive. Plus long de 8cm que le GLC, le GLC Coupé atteint une longueur de 4.73m sur un empattement inchangé de 2.87m. Il est plus bas de 4cm (1.60m), ce qui affine son profil, et monté en roues de 18 à 20 pouces. Le Cx pointe à 0.31 et la capacité du coffre varie de 491 à 1205 litres.\nMercedes a toutefois cherché la cohérence en travaillant également les aspects dynamiques du GLC Coupé. La suspension sport d'origine peut être remplacée par un système à amortissement réglable Dynamic Body Control (avec des ressorts en acier), ou par la suspension pneumatique Air Body Control, elle aussi réglable. Celle-ci abaisse la hauteur de caisse de 15mm lorsque le mode Dynamic Select Sport+ est sélectionné. La suspension pneumatique intègre naturellement un correcteur d'assiette selon la charge, mais peu également abaisser le seuil du coffre 4cm pour faciliter son chargement. Le rapport de direction a également été réduit à 15.1:1 au lieu de 16.1:1 sur le GLC. Le poids est annoncé à 1710kg pour le GLC 250 Coupé.\nLes motorisations incluent les inévitables 4 cylindres turbodiesel et turbo-essence, celles-ci seront commercialisées en priorité. Peu après, Mercedes lancera également une 350e version hybride plug-in à 4 roues motrices, avec une autonomie de 30 km en mode électrique. Et en pleine cohérence avec l'offensive '43', un Mercedes-AMG GLC 43 4MATIC Coupé viendra chapeauter la gamme avec son V6 biturbo de 3 litres développant 367 chevaux (et probablement 520 Nm comme le GLC 43). Huit motorisations seront disponibles au total, 4 diesel et 4 essence. En voici cinq:\nToutes les motorisations à l'exception du GLC350e sont offertes de série avec la boîte 9G Tronic et une transmission intégrale 4Matic. Le GLC 350e reçoit la boîte 7G Tronic, optimisée pour un fonctionnement hybride. Comme de coutume chez Mercedes, une version de lancement Edition1 sera proposée avec jantes AMG de 20 pouces, peinture Designo et sellerie en cuir à deux tons.


Release : Oliver Smith – Anjunabeats Worldwide EP 08 pt.1 [Anjunabeats]\n5 septembre 2018 BulbiProgressive TrancePas de commentaires\nEt si on reparlait un peu de la maison Anjunabeats tiens ? Maison du trio Above & Beyond, elle abrite certains des talents les plus sous-estimés de la Progressive et de la Trance, on pense notamment à des artistes comme Grum ou ilan Bluestone. Mais l’un des derniers à avoir bien percé chez eux est évidemment Oliver Smith, depuis notamment le succès de son titre ‘Endorphins’, bien poussé notamment par les patrons du label dans leur set.\nLe talentueux britannique vient de sortir sur le label le premier des deux EPs à venir issu du mix annuel Anjunabeats Worldwide sorti le mois dernier. Celui-ci inclut trois excellentes tracks, montrant différentes facettes du label. ‘Atacama’ attaque forte d’entrée avec cette grosse bassline chère à d’autres artistes du label comme Jason Ross, avant ce break angélique et sa douce mélodie au piano qui vous donnera envie pianoter avec les doigts. ‘Over You’ vient dans la droite ligne, avec toujours ce style euphorique sur le drop cher à la maison. ‘Foundation’ par contre, c’est vraiment la pure Progressive, tout le morceau étant porté par la mélodie sans vraie drop explosif. Une nouvelle pépite à savourer qui vient clôturer en beauté un excellent EP. Oliver Smith, gros talent à suivre !\nLe Post Précédent News : Dyro très bientôt de retour sur le devant de la scène ? Le Post Suivant News : Une prison désaffectée d’Amsterdam transformée en club pour l’ADE


Refondation de notre système de santé | Familles de France\nRefondation de notre système de santé\nFamilles de France est intervenu lors de la conférence sur le thème "refondation de notre système de santé" à Ermont dans le Val-d'Oise.\nC'est le jeudi 24 mars 2022 qu'après plusieurs interventions, notamment du docteur J-F Damour, Chantal Huet, présidente nationale, a exprimé la voix des patients et de leur famille. Présents dans de nombreuses commissions des usagers de la santé, les représentants du mouvement reçoivent dans les établissements hospitaliers, de soins ou les EHPAD : les doléances des patients et les difficultés rencontrées par les familles.\nChantal Huet, après avoir rappelé la diminution importante de la médecine scolaire depuis les années 90, a affirmé que "La santé est un enjeu quotidien des familles et un axe fort des politiques publiques".\nLes objectifs de Familles de France sont d'assurer la défense des droits des usagers : lors de l'accueil à l'hôpital, aux urgences (avec un lit et pas dans le couloir), un accès à la santé pour tous, et de faire de la prévention.\nPierre Vieuville, en charge du pôle santé, a quant à lui interpellé les présents sur le rôle de l'administration au sein des établissements puis a précisé le rôle des représentants des usagers et pour finir il évoqua le handicap, le suicide qui sont également des sujets majeurs pour lesquels Familles de France s'attache à faire des actions de prévention et de l'information.


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