THE END - Koniec Świata. Epilog. - Ryszard Opara - NEon24.pl\nŚWIAT 21.06.2021 01:53 87 komentarzy\nW nawiązaniu do poprzedniego artykułu - wiem, że czasem się powtarzam ale...\n"Repetitio est mater studiorum" - Powtarzanie jest matką wiedzy...\nPoniżej część artykułu Lekarzy Etyki Covidowej: „Doctors for Covid Ethics”, dotyczącego groźnych efektów ubocznych szczepionek Covid-17 - przesłanego do Europejskiej Agencji Leków (EMA).\n„Nasze obawy wynikają z wielu rozmaitych dowodów, odnośnie naukowo udowodnionego faktu: „Białko Kolcowe” SARS-CoV-2, nie jest pasywnym białkiem; jego produkcja i obecność, powoduje zaburzenia krzepnięcia krwi oraz wiele poważnych zagrożeń; zakrzepicę żył mózgowych, płuc i serca, które powodują (zawsze) stan, zagrożenia życia - wymagający natychmiastowej pomocy lekarskiej.\nLiczba przypadków, które zostały już potwierdzone - stanowi wierzchołek ogromnej góry lodowej...\nBierzemy pod uwagę fakt, że mamy absolutnie wiarygodne wyjaśnienia, problemów zakrzepowo-zatorowych -\nniepożądanych reakcji na szczepionki, (jak wiadomo produkty oparte na genach, stymulują komórki ludzkie -\ndo wytwarzania potencjalnie pro-zakrzepowego białka kolcowego) - najbardziej właściwe i uzasadnione wnioski powinny być: są to reakcje poważne, śmiertelne a wszystkie niebezpieczeństwa należy dobrze zrozumieć\ni wykluczyć przed masowym użyciem wszystkich szczepionek opartych na genach.\nNiestety pomimo tego, że producenci i organizatorzy masowych szczepień doskonale wiedzą, jakie są ryzyka, postanowili je jakoś dobrze ukryć przed opinią publiczną. Na domiar złego producenci szczepionek obecnie prowadzą agresywną kampanię stosowania szczepionek u małych dzieci (a nawet niemowląt), u których infekcja Covid przebiega łagodnie a śmiertelność z powodu Covid jest niemal praktycznie zerowa.\nOczywiście, taka sytuacja może się diametralnie i negatywnie zmienić, po zastosowaniu szczepionek -\nu dzieci – na skutek skrajnie czy bardzo niepożądanych efektów ubocznych ADE.\nJak dotąd, żadne badania nie sprawdziły, jak długo po wstrzyknięciu szczepionki Covid, Białko Spike\nbędzie wytwarzane w organizmie człowieka. Wiadomo: szczepienie może powodować te same objawy\nkliniczne jak infekcja, a przecież szczepionki powinny „teoretycznie” - przed tym, człowieka ochronić!\nDodatkowo, przyczyny tych objawów są całkwoeicie błędnie diagnozowane..., po prostu jako infekcja,\nnajczęściej kolejnym wariantem wirusa. Jeśli tak dalej będzie, to prawdziwe, negatywne skutki obecnej\nPandemii oraz „globalnej strategii szczepień” - nigdy nie będą mogły zostać...właściwie rozpoznane.\nWszystko to jest i będzie „naukową, medyczną manipulacją – poprzez świadomie błędną interpretację! Powinniśmy (musimy), natychmiast przystąpić do szczegółowych badań, aby właściwie zdiagnozować i bezspornie wyjaśnić wszystkie wątpliwe sprawy dotyczące szczepionek genowych”.\nDoctors – for Covid Ethics.\nOczywiście, wszystko co mówią Ci lekarze to prawda, ale...w obecnej sytuacji, takie propozycje i badania -\nbędą absolutnie niemożliwe do realizacji. Albowiem, kto może zlecić i oczywiście sfinansować, takie badania,\nktóre będą trwać lata, i przecież będą kosztować setki milionów dolarów!\nKto i jaki może mieć w tym interes?\nNormalnych, trzeźwo myślących ludzi oraz, nawet najbardziej poprawnie myślących naukowców czy lekarzy –\npo prostu na takie badania nie będzie stać.\nWHO/Rządy i Administracja żadnego kraju świata, też...napewno tego nie zrobią, a więc trzeba będzie\nspojrzeć prawdzie - temu globalnemu kłamstwu obecnej rzeczywistości - spojrzeć prosto w oczy...\nJedynym, teoretycznie potencjalnym sponsorem, finansującym takie badania, mogłyby być - właściwie\n- tylko i wyłącznie globalne firmy farmaceutyczne...Ale wiadomo - one tego nie zrobią. Nie trzeba być żadnym jasnowidzem/prorokiem. Wiadomo „z góry w Davos”: producenci szczepionek tego nie zrobią!\nPrzecież, gdyby to zrobiły...strzeliłyby sobie prosto w kolana rozwoju i miliardowych zysków...\nTak właśnie, zamyka się „Błędne (wirusowe) koło absurdów istnienia – współczesnej Cywilizacji”.\nNadchodzi Koniec Świata, tego jaki znamy; tego jaki stworzyły z wielkiem trudem -\npokolenia naszych Ojców i Matek...\nA pytanie: Jaka będzie przyszłość świata – jest bez znaczenia.\nNas...już na tym Nowym Świecie – napewno nie będzie!\nWygląda na to, że wszystkie, niezliczone śmiertelne ofiary (spowodowane bezpośrednio przez szczepionkę), zostają, niemal automatycznie przypisywane wirusowi Covid.\nOczywiście, na świecie (i to w każdym niemal kraju) - powstaną nowe mutacje tego samego wirusa...\na, więc...wprost przeciwnie - trzeba będzie niedługo, produkować inne/nowe szczepionki.\nOczywiście większość „spolegliwych naukowców” medycyny/lekarzy no i globalne media będzie nadal\npromować swoją „głupią teorię wariantów”, nawet gdy naga prawda, będzie im patrzeć prosto w twarz.\nNie potrzeba kryształowej kuli, aby zgadnąć: jak się zakończy gra w zwłoki/koniec obecnej cywilizacji.\nMnóstwo (miliony) starych i młodych ludzi niedługo umrze, ale...przecież - jak już wiadomo z historii:\nŚmierć każdego człowieka jest tragedią – ale śmierć wielu milionów to po prostu statystyki.\nOczywiście: Producenci szczepionek i ich sojusznicy - Elity ludzkości, wiadomo unikną jakiejkolwiek odpowiedzialności, zwracając uwagę na mylny trop, na „głupie warianty chimery”,czyli wirusa Covid.\nTo bardzo sprytna, oparta na manipulacji prawdą - Globalna Strategia Pandemii Strachu.\nTa strategia - doskonale obecnie działa.\nW prawie każdym kraju, który rozpoczął kampanię masowych szczepień, nastąpił gwałtowny wzrost liczby\nofiar śmiertelnych, ale nikt nie szuka winnych tam, gdzie powinien - na samych szczepionkach.\nWinien jest zawsze niekontrolowalny, stale zmieniający się (poprzez mutacje) - wirus...\nNo i Kto by jeszcze niedawno pomyślał, że zabijanie ludzi może być tak łatwe!\nNo i zgodne z prawem...\nKto by jeszcze nie tak dawno uwierzył, że depopulacja światowa - znalazła drogę akceptacji większości ludzkości?No i jak wspomniałem wyżej – wszystko, całkowicie zgodne z prawem...\nKarawana pogrzebowa pojedzie dalej... w przyszłość nowego świata. W ramach Wielkiego Resetu!\nA przy okazji..., po drodze, będzie można też zarobić taką kasę...(Wyłącznie - dla Elit Ludzkości).\nJeszcze jedno pytanie, które wszyscy powinniśmy sobie zadać, DZISIAJ – TERAZ. Pytanie brzmi:\nCzy twórcy Pandemii - Operacji Covid (Elity Ludzkości) – wiedzieli, że proponowane szczepionki\nsą i były niebezpieczne przed rozpoczęciem kampanii masowych szczepień?\nOdpowiedź wydaje się oczywista: Tak – ONI wiedzieli. Oni musieli wiedzieć co robią.\nDlatego tak właśnie i dlatego mimo tego - rozpoczęli globalną kreację Pandemii Covid-19.\nONI dążą do tego; chcą, za wszelką cenę, zaszczepić świat - po to aby osiągnąć globalną Depopulację!\nTo tylko w ten sposób jest i może być legalnie osiągalne - w ramach operacji BIG RESET/NWO –\nzaplanowanej ostatecznie w DAVOS.\nWydaje się obecnie niemal pewne, że Elity Liderów Ludzkości, po prostu od lat szukały naukowych podstaw i pretekstów – abu osiągnąć globalną kontrolę nad ludzkością.\nBroń Biologiczna Masowego Rażenia, w postaci uznanych szczepionek, z powodu jakiegoś tam wirusa\nokazała się idealnym rozwiązaniem dla rozpoczęcia zaplanowaych procesów BIG RESET/NWO.\nWszystko dzięki temu, że Białka Kolcowe, mogą powodować śmierć, oraz rozległe zmiany chorobowe w całym ciele, bez żadnych dowodów na obecność wirusa. No i jak wspominałem wyżej – te właśnie Białka Kolcowe, które powstały w wyniku szczepień (Pfizer, Moderna), mogą powodować zakrzepy krwi, zapalenie mózgu i ataki serca! No i przecież właśnie o to chodzi...\nWirusolodzy już od dawna wiedzą, że białka (kolcowe) powodują krzepnięcie, zatory, krwawienia oraz problemy autoimmunologiczne, że wszystkie mogą powodować śmierć.\nCzy można przypuszczać, że naukowcy i kierownicy (producenci), którzy stworzyli szczepionki - nie znali związanego z nimi ryzyka? To całkowity Nonsens. To po prostu niewiarygodne.\nOni musieli wiedzieć, a nawet jeśli „teoretycznie” nie wiedzieli, teraz wiedzą.\nDlaczego więc nie robią teraz czegoś, aby zatrzymać kampanię i promocję szczepień - lub nie próbują\npowiadomić kandydatów na szczepionki o niebezpieczeństwach związanych ze szczepieniami ?\nDo tej pory – żaden z producentów nie umieścił żadnej etykiety ostrzegawczej, z boku strzykawki.\nJak można uczciwie określić takie postępowanie.\nPrzecież... te szczepionki Covid-19 - są bardzo szkodliwe dla zdrowia!\nPrzecież szczepionki te mogą powodować rozmaite komplikacje zdrowotne a nawet śmierć pacjentów.\nTego nie można określić inaczej.\nSzczepionki przeciwko Covid – to Broń Biologiczna Masowego Rażenia.\nStosowanie szczepionek – to ZBRODNIA przeciwko LUDZKOŚCI.\nNa marginesie, warto dodać jeszcze jedną sprawę.\nObecnie stosowane szczepionki Covid-19 zawierają również aplikacje nanotechnologii kontroli, czyli właściwie każdy człowiek, który taką szczepionkę otrzyma, będzie (przy pomocy sieci 5G) –\ncały czas pod globalną kontrolą - odpowiednio zaprogramowanych aparatów nadzoru...\nByć może właśnie ta sprawa (o której właściwie NIC się mówi) - jest jednym z kluczowych elementów,\nglobalnej strategii masowych szczepień – czyli przejęcia kontroli nad życiem każdego człowieka.\nJeżeli tak się rzeczywiście stanie – sprawy wolności słowa, życia i demokracji – przejdą całkowicie do lamusa historii.\nNa koniec - Notka nadziei – optymizmu...\nTak czy inaczej, jak widać z analizy rozmaitych danych na temat szkodliwości szczepionek - jesteśmy w rzeczywistości w trakcie wojny biologicznej – wojny o kontrolę nad ludzkością.\nTej wojny nie możemy przegrać – przegrana będzie oznaczać koniec świata ludzkości.\nA może, kiedy większość ludzkości to zrozumie i kiedy zacznie działać –\nmoże gdzieś zabłyśnie iskra nadziei – na Przyszłość... Bez planowanego KOŃCA ŚWIATA.\nSzczepili bezdomnych. "Dla osób, które się zaszczepiły rozdawaliśmy dodatkowe posiłki". W Łodzi na placu Jana Pawła II przeciwko COVID-19 zaszczepiono ponad sto osób, głównie tych, którzy są w kryzysie bezdomności powiedziała w niedzielę po południu PAP pełnomocniczka ds. szczepień wojewody łódzkiego Jolanta Kowalik-Gęsiak. Zorganizowany i uruchomiony w niedzielę przez Urząd Wojewódzki i Wojewódzką Stację Ratownictwa Medycznego punkt szczepień zlokalizowano przed łódzką archikatedrą przy ul. Piotrkowskiej, na placu im. Jana Pawła II w Łodzi.\nPs...,,W kryzysie bezdomności'' wstyd państwa. Ilu z tych ludzi straciło mieszkania z powodu polityki rządów? Pozwolenia na wykupienie kamienic, domów? Druga sprawa to to, że zaszczepiliście bezbronnych. Za kromkę chleba tutaj albo w NY za burgera ... tanio. Kto będzie ich leczył, gdy dosięgną ich choroby prionowe, czy autoimmunologiczne? O jakich bezdomnych mowa? Przecież w TVP na okrągło dudni że mamy dobry rząd wybitnych fachowców gospodarka idzie do przodu, a ludziom żyje się coraz lepiej i są coraz bardziej zamożniejsi. Parodia narodu ogłupiałego. To już zbydlęcenie rządzących, nie dosyć, że los pokarał bezdomnych, to jeszcze najbardziej antypolski rząd w dziejach Polski, dodatkowo nęka szczepionką bezdomnych za miskę zupy.\nNiewątpliwie to dramat PiS. Autorzy tego pomysłu z miasta Łodzi powinni mieć sprawiedliwy proces, a następnie sprawiedliwie być rozstrzelani...Z Konstytucji wynika, że dobrowolnie wyrażona zgoda na udział w eksperymencie powinna być zawsze udzielona indywidualnie, a nie w sposób zbiorowy. Zakaz eksperymentów naukowych na narodzie polskim. Pamiętajcie, szczepienie przeciwko Covid 19 jest dobrowolne.\nNikt w żaden sposób nie może cię zmusić do szczepienia, aczkolwiek to tylko Ty ponosisz odpowiedzialność za NOP, czyli niepożądany odczyn poszczepienny.\nkula Lis 70 21.06.2021 06:08:35\nObecny etap mądrości\nzapodany ludzkości w postaci plandemii, szprycowania i konsekwencji wszelakich z tym związanych - to tylko jeden wycinek frontu jednostronnej walki czarciego pomiotu z ludzkością. Tych otwartych frontów jest całe mnóstwo.\nCo jest jednak najważniejsze w powyższym?\nOtóż najważniejsze jest to, że czarci pomiot umieścił ludzkość globu - w globalnym obozie koncentracyjnym - skąd nie ma ucieczki. Świrusowa hucpa - to takie symboliczne zatrzaśnięcie bramy - tego obozu koncentracyjnego - KL Glob.\nKiedyś z obozu KL można było wyjść tylko przez komin - tak teraz z obecnego, globalnego obozu można będzie wyjść za jakiś czas tylko do jaskini - i uczyni to garstka odczłowieczony ludzi - aby powtórnie z mozołem piąć się ku człowieczeństwu, ku Bogu.\nCzłowiek na Ziemi nie podołał ubezwłasnowolnić czarciego pomiotu - więc nastąpi reset - a początkiem nowego - będzie właśnie jaskinia. Potem, kiedy człowiek opuści już tę jaskinię - nagle pojawi się znów czarci pomiot - zaczynając swoja niecną robotę.\nNa koniec - czy kiedykolwiek człowiek w końcu załapie o co w tym wszystkim chodzi - czy prędzej Bóg zrezygnuje z człowieka na Ziemi unicestwiając i człowieka i czarci pomiot - oto jest pytanie?\ndemonkracja 21.06.2021 07:56:01\nA jaki jest półokres trwania białka kolcowego?\nJaki jest półokres działania szczepionki (wytwarzania białka kolcowego przez komórki)?\nNo i nie ma Pan racji. Ulosowione badania, będące podstawą dowodów we współczesnej medycynie, nie są konieczne do badań odkrywczych. Hipotezę, czy 1mg trutki zabija można postawić na podstawie jednego przypadku.\nBez wątpienia na stosowne badania stać pojedynczych badaczy w ramach ulubionej działalności w wolnym czasie.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 08:53:29\nKoronawirus to pestka\nParę dni temu przeczytałem artykuł (https://www.sott.net/article/454311-Unthinkable-Thoughts-powerful-people-and-organizations-have-engineered-this-pandemic-with-deadly-intent), w którym opisywane są szczegóły dotyczące białka kolca w Sara-cov-2. Okazało się że mocowanie tego białka do otoczki jest sztucznie przystosowane do ucięcia przez furyny (powszechnie występujące w organizmie człowieka enzymy służące do ucinania struktur białkowych). Sekwencja aminokwasów w tym miejscu jest tak nietypowa, że mogła go stworzyć tylko ludzka ręka. Tak więc, mnożący się koronawirus podczas zakażenia, rozsiewał w ludzkim organizmie swoje białka kolca. Sam koronawirus jest zapewne tak samo niegroźny jak inne koronawirusy. To obecność spike protein powodowała wszystkie te nietypowe i groźne objawy. Teraz poprzez szczepienia, zamienia się organizmy ludzi w fabryki tych toksyn. Jeżeli „produkcja” toksyn będzie długotrwała, zaszczepionych nic nie jest w stanie uratować.\nKruk63 21.06.2021 09:05:12\n//Jeżeli „produkcja” toksyn będzie długotrwała, zaszczepionych nic nie jest w stanie uratować//\nNie tylko wyszczepionych.\nTo sztucznie stworzone i wszczepiane białko może być w stanie infekować też niezaszprycowanych bliskich osób, które się pozwoliły dziabnąć.\nNa przykład podczas uprawiania miłości między małżonkami (lub "partnerami"), a nawet podczas pocałunku, i to nawet nie dorosłego, ale na przykład wyszprycowana trutką na szczury młoda wykształcona matka, albo stara naiwna ogłupiona faszystowską propagandą babcia pocałuje obśliniając swoje dziecko/wnuczęta...\nJeszcze dojdzie do tego (i słusznie), że "szczepanów" będzie się traktować i omijać jak trędowatych albo jak nosicieli HIVa...\nKmieć 21.06.2021 09:45:17\n"Jeżeli „produkcja” toksyn będzie długotrwała" tak, jeśli produkcja białka kolca w komórkach będzie długotrwała, to organizm będzie się z nią zmagał bez końca. Nie wiadomo, czy w takim stanie da się żyć.\nNo, ale profesor Simon zaszczepił się jako pierwszy (w swojej klinice) i nadal żyje. Pytanie tylko, czy to był ten sam preparat, którym szczepi się innych.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 12:31:27\n"Jeszcze dojdzie do tego (i słusznie), że "szczepanów" będzie się traktować i omijać jak trędowatych albo jak nosicieli HIVa..."\n-Czyli, beznadziejna (w sensie skutecznej obrony) stygmatyzacja społeczna!\nDotychczas (wykluczając nieliczne okoliczności, jak np. rozmyślne zarażenie), zwykło się uważać, że choroba to problem medyczny a nie moralny czy prawny! Będzie inaczej? -Jedynie słuszne: histeria i kołtuństwo- samobójczo zwyciężą?\nw latach 50-tych śpiewano:"\nTu leży tułów, tam leży głowa - to jest robota Paramonowa,\nTu leżą resztki, tam leżą resztki -to jest robota jego koleżki"\nZapowiada się -nie powiem- “malowniczo”. :-(((\n1abezmetki 21.06.2021 13:22:25\n//Czyli, beznadziejna (w sensie skutecznej obrony)//\nBeznadzieja, bo ja jej upatrywałem w Putinie i Federacji Rosyjskiej pod jego władzą, a okazało się, jak już kilkukrotnie pisałem, że...\n(Do tej pory nie mieliśmy dokładniejszych informacji o rosyjskiej covidowej trutce na szczury, czym i jak bardzo różni się od mengelowskich preparatóqw Starych Demokracji. Okazało się, że niczym się nie różni.\nJest tak samo zabójcza:\n"Obowiązkowa szczypawa w Rosji! Studentów nie wpuszczą na uniwersytety!"\nJesteśmy w ciężkiej dupie. Teraz tylko czekać aż Putin zdemokratyzuje i wyszczepi Białoruś, która w naszej części świata jako ostatnia opiera się faszystowskim demokratycznym covidowym zbrodniarzom... i będzie do końca pozamiatane.\nKmieć 21.06.2021 15:00:31\nNajgorsze jest to że hołota jest zainfekowana demokratyczną propagandą z telaviwzji, że to wręcz jest nieprawdopodobne.\nDziś spotkałem koleżankę z lat szkoły podstawowej, nie widziałem jej jakieś 15 lat; na rynku warzywnym. Rozmawiała ze sprzedawczynią (chyba koleżanką) o wyszczepionkach. Usłyszałem, spojrzałem, poznałem, mówię: "cześć!". Ona; "cześć". Ja, że usłyszałem ich rozmowę i zapytałem, czy się wyszczepiła, a ona radośnie jakby w totka przynajmniej "piątkę" trafiła, ze TAK!!! Cała radosna, jakby ją sama demokracja w postaci Makreli albo innejm, lubującej się w chronofilii Emannuelii Micrion z Francy w dupę pocałowała...|\nPopatrzyłem i zapytałem, gdzie w razie czego będzie pochowana, żebym wiedział, gdzie przyjść na pogrzeb; odwróciłem się na pięcie, i poszedłem sobie.\nKmieć 21.06.2021 15:21:57\nZa późnego Gierka, dojrzewała jak przeczucie, tęsknota by “wsiąść do pociągu byle jakiego”,\na dziś, już pewnie wkrótce, przy wejściu na peron, szprycman zapyta - “deine spritzpapieren bitte ”\n1abezmetki 21.06.2021 15:34:29\n"Jeżeli „produkcja” toksyn będzie długotrwała...."\nSpecjalnie zaprojektowany mRNA ze szczepionki trafia do komórki z instrukcją jak wyprodukować białko S SARS-CoV-2 aby w organizmie szczepionego powstały przeciwciała. Dostarczone do komórek mRNA jest wykorzystywane do produkcji białka S, po czym jest degradowane.\nIlość tej substancji czynnej w szczepionce jest tyle, aby wystarczyło na wyprodukowanie takiej ilości białka S koronawirusa, aby system immunologiczny człowieka skutecznie zareagował, więc ta "długotrwałość" jest wynikiem założonego przez producenta czasu a nie "totolotkiem".\nNaturalny mRNA ma bardzo krótki żywot i dlatego potrzeba było opracować technologię podtrzymującą trwałość mRNA i taką technologię opracowali i opatentowali naukowcy z Centrum Nowych Technologii Uniwersytetu Warszawskiego, pod kierunkiem prof. Jacka Jemielity, która umożliwiła opracowanie szczepionej takich jak Pfizer - BioNTech czy Moderna(sprzedano licencję tym firmom, bo w Polsce nie było firmy farmaceutycznej, która by ten patent była w stanie wdrożyć).\nWirus wchodząc do organizmu człowieka musi się replikować aby wywołać w nim stan choroby o jego duża ilość może wydostawać się z organizmu i drogą kropelkową transmitować się na inne osoby.\nAby wirus się replikował("rozmnażał") musi wniknąć do komórki ludzkiej i wykorzystał jej zawartość do replikacji(poza komórką żywiciela nie może replikować).\nWyprodukowane białko S po podaniu szczepionki jest następnie odpowiednio obrabiane wewnątrz komórek i prezentowane na ich powierzchni przez białka głównego układu zgodności tkankowej (HLA).\nWreszcie kompleks MHC z białkiem S rozpoznawany jest przez komórki układu odporności, co uruchamia dalsze procesy tworzenia się odpowiedzi immunologicznej, zarówno komórkowej jak i związanej z produkcją przeciwciał.\nJeśli białko S wytworzone w wyniku podania szczepionki na drodze kropelkowej z zaszczepionego organizmu i znajdzie się w organizmie innej osoby w odpowiednio dużej ilości, to system immunologiczny tej osoby powinien zareagować tak jak po szczepieniu czy infekcji wirusowej, ale bez możliwości wywołania choroby.\n35stan 21.06.2021 15:47:02\nKoniec świata ? tak ..postkolonialnego.\nWali się ostatnie imperium naśladujące klasyczne kolonialne imperia.\nByłe kolonia się wyzwalają uniezależniają pomimo straszliwych zbrodni agresorów (Jugosławia, Irak, Syria, Libia...Ukraina).\nCzym zawsze były imperia ...? Oligarchią trzymającą władzę nad tymi imperiami.\nOligarchie ciągle rządzą w USA ale rewolucja już dojrzewa, już się tli coraz bardziej każdego dnia.\nOligarchie same władzy nie oddadzą (to nie Jaruzelski)..\nOligarchie zostaną zmiecione w krwawej niestety rewolucji.\nPolska solidaruchów to kolonia tych oligarchów.\nPolska może dostać kopa od globalnej rewolucji za szczekanie w interesie globalnych oligarchów.\ni nie wiadomo jaki będzie...\nrewolucje jak wiemy "lubią" błądzić...zbaczać...brutalizować.\nMam nadzieję że świat za sprawą Rosji pójdzie drogą realnej demokracji ..a nie jak dotychczas demokracji udawanej...\nNie chciałbym Chińskiej wersji demokracji.. to całkiem inna kultura.\nW dłuższej perspektywie zderzenie Chińskiej i Słowiańskiej demokracji jest chyba nieuniknione.,, w każdym razie tarcia.\nOscar 21.06.2021 16:17:18\nPo dłuższej przerwie chiałem dziś odwiedzić portal "wolna-polska.pl" i niestety chyba już nie istnieje gdyż domena wystawiona jest na sprzedaż. Oj niewygodna była dla grandziarzy i tyranów.\nAby wejść na salon trzeba najpierw zgodzić się "rewizję osobistą".\nCo za czasy. :-(\nNibiru 21.06.2021 16:48:58\n"technologię podtrzymującą trwałość mRNA "\npytanie jest więc zasadne, jaką trwałość, jaki okres półtrwania ma wszczepione mRNA? Czy trwałość jest osobniczo-zależna?\n"Jeśli białko S wytworzone w wyniku podania szczepionki na drodze kropelkowej z zaszczepionego organizmu i znajdzie się w organizmie innej osoby w odpowiednio dużej ilości, to system immunologiczny tej osoby powinien zareagować tak jak po szczepieniu czy infekcji wirusowej, ale bez możliwości wywołania choroby."\nTymczasem stawiany problem jest inny, czy chorobę wywołuje wirus, czy "białko S"?\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:01:30\nObawiam się, że oligarchowie są górą.\nWszystko o tym świadczy.\nJeśli widzisz jakąś jaskółkę, to pokaż mi ją.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:03:25\ndookreśl swoją myśl o salonie.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:03:48\n@interesariusz z PL 17:01:30\n"pytanie jest więc zasadne, jaką trwałość, jaki okres półtrwania ma wszczepione mRNA?"\nNowatorskość technologii opracowanej przez naukowców z INT UW polega na tym, że pozwala ona zarządzać produkcją białek w komórkach, dostosowując ich ilość do potrzeb danej procedury(nie tylko do produkcji białek S kolca koronawirusa ale i w przygotowaniu wielu leków, zwłaszcza w chorobach onkologicznych, ale nie tylko).\n35stan 21.06.2021 17:15:36\n@interesariusz z PL 17:03:25\n"Jeśli widzisz jakąś jaskółkę, to pokaż mi ją."\nA posiadasz sprawne narzędzie, aby tę jaskółkę zobaczyć?\n35stan 21.06.2021 17:17:08\nCytowany fragment pochodzi z mojego komentarza, a to "jeżeli" wynika właśnie z technologii zastosowanej przy produkcji "szczepionki". Według osoby, która odkryła sposób wydłużenia czasu trwania mRNA (z WAW), w jednym miejscu łańcucha podmieniono atomy tlenu na atomy siarki. Taka podmiana sprawia, że mRNA koduje produkcję dłużej. Jak długo? tego już nie podano.\nJednak kiedy wreszcie mRNA ulegnie rozpadowi, jego fragmenty są przekazywane do jądra komórkowego jako substraty służące do produkcji innych białek - razem z tą siarką zamiast tlenu. To sprawia, że w dłuższej perspektywie komórka naszego ciała, może zachowywać się niestandardowo. Ot taka loteria.\nAle na pewno w 100% bezpieczna!\nKruk63 21.06.2021 17:39:30\nPowtarzam, na ile owo "zarządzanie produkcją białek w komórkach" jest niezawodne w wymiarze statystycznym oraz indywidualnym.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:45:12\nJestem pół ślepy, ale "zobaczenie" jednak zależy od wskazującego.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:45:51\ninteresariusz z PL 21.06.2021 17:46:49\n@interesariusz z PL 17:03:48\n"dookreśl swoją myśl o salonie."\nJuż dookreślam. Przy próbie wejścia na ich witrynę pojawia się nakładka zaciemniająca ją z prośbą o zgodę odwiedzającego na przetwarzanie danych osobistych, cyt:\nMy, nasi Zaufani Partnerzy oraz inne podmioty z salon24.pl uzyskujemy dostęp i przechowujemy informacje na urządzeniu oraz przetwarzamy dane osobowe, takie jak unikalne identyfikatory i standardowe informacje wysyłane przez urządzenie czy dane przeglądania w celu wyboru oraz tworzenia profilu spersonalizowanych treści i reklam, pomiaru wydajności treści i reklam, a także rozwijania i ulepszania produktów. Za zgodą użytkownika my i nasi partnerzy możemy korzystać z precyzyjnych danych geolokalizacyjnych oraz identyfikacji poprzez skanowanie urządzeń. Ponieważ cenimy Twoją prywatność, prosimy o zgodę na korzystanie z tych technologii poprzez kliknięcie „Akceptuję”. Zgoda jest dobrowolna i zawsze możesz ją zmienić / wycofać klikając przycisk ustawień prywatności znajdujący sie w lewym dolnym rogu strony. Niektóre rodzaje przetwarzania danych nie wymagają zgody użytkownika, ale masz prawo sprzeciwić się takiemu przetwarzaniu. Preferencje będą miały zastosowania do innych witryn posiadających zgodę globalną."\nJeśli się na taką "rewizję-prześwietlenie" nie zgodzisz to nie masz prawa wejść na tę witrynę.\nNibiru 21.06.2021 18:11:27\nMam tam konto, jako autor pospolity tam zaczynałem (jako specjalistyczny wcześniej), ale nie zaglądam, bowiem ich strony odbieram jako wizualny chaos.\nOd lat mam wiele komputerów i dwa telefony. Z jednego utrzymuję kontakty z ludźmi znanymi osobiście, lub z oficjelami jako osoba fizyczna, z drugiego jako byt internetowy, a więc sztuczny.\nW związku z tym mam gdzieś, co jacyś cwaniacy zbierają o tym telefonie/kompie który wykorzystuję pod pseudonimem.\nOczywiście, dostęp do IP umożliwia połączenie obu urządzeń, ale takie strony jak salon tego nie robią (tak myślę). VPN jest dla mnie zbyt uciążliwy.\nNieuczciwe w tym jest to, iż jasno nie jest powiedziane, jakie dane pobiera "skanowanie" urządzenia. No, ale skoro sejm uchwalił rejestrację kart SIM, i my nie zrobiliśmy rewolucji, to nie ma co się emocjonować takimi pociągnięciami jak ta salonowa.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 18:27:23\n@interesariusz z PL 18:27:23\n"sejm uchwalił rejestrację kart SIM, i my nie zrobiliśmy rewolucji..."\nStraszne to to jest.\nwerka1321 21.06.2021 18:31:03\nGeneralnie chodzi mi o to, że obecna tyrania światowa ma swoje metody na odstraszenie lub odcinanie użytkowników od witryn gdzie publikuje się także niezależne myśi. Sądząc po trendzie to Neon też to czeka :-(\nNibiru 21.06.2021 19:09:22\n"W związku z tym mam gdzieś, co jacyś cwaniacy zbierają o tym telefonie/kompie który wykorzystuję pod pseudonimem."\nZ tego co się orientuje to od conajmniej 10 lat jest zero anonimowości w sieci. Głównie chodzi tylko o to aby byle hacker amator nie zrobił zakupów na twoją kartę kredytową lub przelał sobie twoje pieniądze z konta. Bo gdy chodzi o służby to od dawna ich oprogramowanie szpiegowskie kojarzy w niemal 100% obywateli z urządzeniami jakie pojawiają się w sieciach zarówno internet jak też telefonia przewodowa oraz bezprzewodowa. Dla służb jest to eldorado jeśli chodzi o możliwości pogrążania niewygodnych dla "systemu" osób czy to przez podkładanie na komputer osobisty lub służbowy trefnych zdjęć i dokumentów, czy falsyfikowania historii odwiedzanych nielegalnych witryn, czy wreszcie powodowanie wycieków różnych prywatnych czy intymnych detali z emaili do sieci.\nNa serwerach służb każdy ma swoją "teczkę", a w niej także zestawienia odwiedzanych stron, polubień, zamieszczonych tekstów, itp. i w wyniku tego profil osobowy sporządzony przez sztuczną inteligencję. Gdy taki profil spełnia określone kryteria, to służby zaczynają się osobą interesować na poważnie.\nNibiru 21.06.2021 19:35:10\nGłowa do góry - polikwidują takie portale to ludzie będą na powrót się jednoczyć po za netem.\nwerka1321 21.06.2021 20:25:00\n"Tymczasem stawiany problem jest inny, czy chorobę wywołuje wirus, czy "białko S"?"\nTaki problem, stawiany przez Ciebie, świadczy o braku podstawowej wiedzy na temat białka S koronawirusa i jego roli w procesie zakażenia organizmu wirusem SARS-CoV-2.\nChorobę wywołuje wirus a nie białko S(białek jest wiele w koronawirusie)\nSARS-CoV-2 infekuje komórki za pośrednictwem białek szczytowych S, które przyłączają się do enzymu konwertującego angiotensynę 2 (ACE2) obecnego na powierzchni komórek gospodarza(pokonuje barierę zewnętrzną komórki gospodarza), by wirus mógł się replikować w komórce, wykorzystując elementy komórki gospodarza, których wirusowi brakuje do replikacji(namnażania się i wywoływania choroby).\n35stan 21.06.2021 21:02:10\nPrzepraszam...a Pan kto? Wakcynolog? Immunolog? Może przynajmniej lekarz rodzinny lub pielęgniarz? Naprawdę ufa Pan jawnym eugenikom oraz maltuzjanistom?\nKrzysztofL 21.06.2021 21:50:43\n".... tekst notki(nieskończony został skasowany - pojawiło się puste okienko)."\nWszystkie takie uwagi, spostrzeżenia i skargi powinny trafiać do administratora witryny i gdy widać w tym jakiś schemat złych intencji i ingerencji z zewnątrz to należy wszcząć dochodzenie i dołożyć zabezpieczenie. Czasem jednak takie "chochliki" zdarzają się z uwagi na specyfikę pracy w sieci oraz konfiguracji serwera. Takie procedury jak okresowy restart servera, switch'a, czyszczenie wirusów (przywrócenie pliku sprzed zainfekowania), itp. czynności, też mogą powodować takie symptomy. Popularne ataki na serwery, jak pamiętam z opisów jakiegoś eksperta w TV, polegają na wymuszaniu wielokrotnych restartów serwera bez potrzeby, generowanie sztucznego ruchu na witrynie aż do kompletnego jej zatrzymania, instalowania fałszywych podprogramów statystycznych, które dokonują bzdurnych ale zużywających zasoby obliczeniowe serwera obliczeń i w efekcie spowalniających pracę witryny, itp.\nNibiru 21.06.2021 22:11:56\nUfa pis-owi , a to jest wystarczającą rekomendacją. Problem w tym , że ludzie siedzą w swoich szufladkach i absolutnie nie łapią rzeczywistości. Identyfikując się z " elitą- władzą" naśladują ją i akceptują jej najdurniejsze posunięcia, choćby prowadzące prosto na kompostownik.\nzadziwiony 21.06.2021 22:25:04\nChyba ok. Miesiąca jest już ten portal zamknięty. Szkoda był tam przegląd wielu ciekawych treści.\nzadziwiony 21.06.2021 22:26:55\nto są poglądy sprzed roku.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 22:33:43\nowszem, ja natomiast nie podejrzewam salonu o kompetencje służb.\ninteresariusz z PL 21.06.2021 22:35:04\nNaprawdę się zagubiłeś. Nie po to wywołali pandemię, rozdmuchali ją poza wszelkie granice, zabronili leczenia, zatrzymali gospodarki, pozabijali ludzi, by teraz zaordynować im uzdrawiające preparaty medyczne. Ocknij się. Boris Johnson oficjalnie w ONZ wyłuszczył po co ten cały ambaras. Transhumanizm i pełna kontrola każdego człowieka. Dopóki będzie potrzebny! Potem oczywiscie dezaktywacja i na kompostownik.\nTwoje wyjaśnienia to bajeczka półgłówków.\nJest taki jeszcze mnóstwo, więc swoje zarobisz.\nzadziwiony 21.06.2021 22:35:57\nOd lat postuluję, iż winniśmy przejść na inne systemy komunikacji.\nNo, ale skoro wszyscy dla wygody używają szpiegowskiego i pod każdym względem trefnego windowsa, to na żadne utrudnienia nie pójdą.\nZnam wielu osobników, dla których wykorzystanie poczty elektronicznej jest za trudne (oczywiście, listy piszą i odbierają, ale efektywnie komunikować za jej pomocą nie potrafią).\ninteresariusz z PL 21.06.2021 22:38:38\n@kula Lis 69 06:08:35\nNo cóż Administracja i "Służba Zdrowia" Naszego Państwa - działając na zlecenie władz UE, która funkcjonuje na rozkazy Elit Ludzkości - zrobi wszystko co możliwe - aby zaszczepić wszystkich Polaków...\nOczywiście bezdomni i biedni, zgodzą się na wszystko - a kiedy jeszcze dostaną parę groszy, parę misek chleba - staną się wielkimi zwolennikami szczepionek - oczywiście na krótko... bo niedługo być może umrą...\nAle cóż tam jak umierają bezdomni i biedni, któż ich będzie żałował...\nLudzie myślący - powoli zaczynają rozumieć - tę całą globalną manipulację i oszustwo - w formie Pandemii Covid... ale narazie są mniejszością...\nNajbliższa przyszłość pokaże - jaka będzie przyszłość ludzkości...\nNie jestem zbyt wielkim optymistą, ale jedyna nadzieja, która być może nam - ludziom pozostała - to instnkt samozachowawczy ludzkości...\nPS - Łódz, zawsze w moich myślach zajmuje miejsce wspomnień-\nŁodź - miasto mojej młodości, dorastania, studiów medycznych -\nMłodości durnej i chmurnej - teraz wiek męski - wiek klęski...\nRyszard Opara 22.06.2021 02:10:06\nUprzejmie dziękuję za ten link - każdy powinien go przeczytać, chociaż nie każdy zna angielski, należałoby to przetłumaczyć...\n(Moze to zrobię - i opublikuję w kolejnym artykule).\nOczywiście Pandemia Covid-19 - została stworzona - wykreowana, przez człowieka - określone grupy interesów - w określonym celu...\nCzłowiek, jego natura - i odporność - dałaby sobie radę z wirusem, który stworzyły siły natury - natomiast dużo gorzej, jest w sytuacji, kiedy wirus jest produkcją laboratorium człowieka.\nPiszę o tym cały czas, przez ostatnie kilkanaście miesięcy...\nWirus Covid-19 (i jego mutacje), szczepionki - to oczywiście narzędzia Broni Biologicznej Masowej Zagłady - wykreowane w celu przejęcia globalnej kontroli nad ludzkością...\nBiało Kolca - Spike Protein - to kolejny dowód realiów obecnej rzeczywstosci - Wojny Biologicznej przeciwko ludzkości...\nLudzie, Ludzkość - musi to wreszcie zrozumieć!!!\nRyszard Opara 22.06.2021 02:21:14\nMa Pan absolutną rację - jeżeli Pandemia Covid-19 i związane z nią sprawy niszczenia światowej gospodarki, kultury, demokracji - oraz oczywiście akcja globalnych szczepień - zakończy się sukcesem, zgodnie ze strategią działań ludzkości - nastąpi absolutny koniec świata i ludzkości...\nCały czas o tym piszę, w nadziei, że ludzie w swojej większości zrozumieją realia obecnej rzeczywistości, pomału zaczną się budzić z letargu w którym obecnie się znajdują - i zaczną RAZEM walczyć o przyszłość ludzkości...\nCałymi dniami i nocami o tym myślę; myślę co mogę zrobić dla ludzkości - i modlę się o to do Boga Naszego Jedynego...\nRyszard Opara 22.06.2021 02:31:15\nMa Pan absolutną rację...widzę też, że trochę Pan się na tym zna...\nA może by Pan napisał jakiś artykuł na ten temat na Neon24...\nRyszard Opara 22.06.2021 02:34:32\nTak, niestety Polska (jak i światowa) niezależna prasa - powoli zanika.\nJest niszczona w rozmaity sposób - jest niewygodna dla światowych Elit, które walczą o kontrolę nad ludzkością...\nNeon24.pl - jeszcze działa, ostatnio nawet zrobiliśmy sproo zmian, które w najbliższym czasie, zaczną wchodzić w życie...\nAle... jaka jest przyszłość Neon24 - trudno powiedzieć...\nJedno jest absolutnie pewne - Neon24.pl - to pasja mojego życia...\nBędę walczył o Neon24.pl do ostatniej kropli krwi;\ndo ostatniego oddechu...\nRyszard Opara 22.06.2021 02:41:06\nNo cóż - tyranie światowa walczy kontrolę nad ludzkością - ma swoje media, metody oraz oczywiście pieniądze - na to żeby niszczyć wszelkich przeciwników - a nawet ludzi inaczej myślących...\nI jeżeli ludzie w swojej większości tego nie zrozumieją oraz zaakceptują - niestety w najbliższym czasie nastapi koniec świata.\nCały czas o tym pisze - próbując przekonać, obudzić z letargu ludzi...\nNa tyle ile mogę...\nOdnośnie Neon24.pl - cytuję to co napisałem w komentarzu powyżej:\nNeon24.pl - jeszcze działa, ostatnio nawet zrobiliśmy sporo zmian, mam nadzieję dobrych, które w najbliższym czasie, zaczną wchodzić w życie.\nMam nadzieję, że ludzie - będą mnie w tym pomagać\nRyszard Opara 22.06.2021 02:48:12\n@Ryszard Opara 02:48:12\nNapisal Pan ladny artykul na czasie. Zastanawialem sie dzis co bedzie gdy zaczna dzialac te szczepionki kolcowo-magnetyczne-5G. Umrze nam co najmniej polowa krewnych, znajomych, sasiadow, bedzie sie to paskudztwo rozmnazac, przenosic od jednego do drugiego. Nikt naprawde nie wie co to jest. Jak bedzie wygladac gospodarka, transport, dostawy energii, paliwa, gazu, zaopatrzenie w sklepach, gdy ludzie zaczna padac jak muchy? Jaka bedzie wtedy wartosc pieniadza? Moga nam jeszcze na dokladke jakas wojne swiatowa zaaplikowac. Teraz zmieniaja nasza uwage za pomoca wiadomosci o zboczeniach i o UFO. Konczac cytuje z Panskiej wypowiedzi:\nstaszek kieliszek 22.06.2021 05:25:38\n@staszek kieliszek 05:25:38\nMusza najpierw wyszczepic ok. 90% a czesc "szczepionek" to prawdopodobnie placebo-elity musza kims rzadzic bo sami nie nadaja sie do pracy.Najbardziej praktyczne rzeczy na wypadek armagedonu-kominek w domu,zapas wody pitnej i konserwy.\nmac 22.06.2021 05:55:26\nTe podstawy przezycia to znam i mam ale Ci co tego nie wiedza beda glodni i zaczna grasowac od domu do domu w poszukiwaniu puszek. Zapas 9mm, 7.62 moze sie skonczyc szybko a spac przez 8 godzin trzeba. Filmy postapokaliptyczne pieknie nam pokazuja takie sytuacje jakby ich rezyserom dokladnie ktos powiedzial jak bedzie w przyszlosci.\nstaszek kieliszek 22.06.2021 06:37:37\nTrzecia dawka szczepionki? Dla tych, którzy nie "odpowiedzieli" na szczepienie.\nDane z Wielkiej Brytanii wskazują na to, iż śmiertelność z powodu wariantu Delta koronawirusa jest sześciokrotnie wyższa w przypadku osób zaszczepionych niż niezaszczepionych.portal lifesitenews.com podaje, że zarówno wskaźnik zgonów, jak i liczba hospitalizacji, są wyższe wśród osób zaszczepionych zakażonych wariantem Delta, niż niezaszczepionych, u których wykryto zakażenie tym wariantem\nZgodnie z wyliczeniami portalu lifesitenews.com, na podstawie danych opublikowanych przez Public Health England, śmiertelność wśród osób zaszczepionych jest 6,6 razy wyższa niż wśród niezaszczepionych.\nkula Lis 70 22.06.2021 07:25:08\nwiatr 2020 22.06.2021 08:57:58\n@kula Lis 69 07:25:08 Coś nasz "kulawu lis" beczy dokladnie na odwrót od BBC, odnośnie zachorowań na ten "wariant delta"\n//The Office for National Statistics figures, up to 12 June, suggest one in every 540 people is infected.\nThe more infectious Delta variant accounts for almost all of the cases, says Public Health England. (...)\n(Szczepienia dobrze chronią przed "Deltą)\nAnd among people who had received the recommended two doses, the chances of catching and being hospitalised by coronavirus was reduced by more than 90%. //\nNawet nie chce mi się tłumaczyć tego info na polski.\nW GB już blisko 1 na 500 osób jest obecnie zarażona tym "wariantem "delta" i w 90 % są to osoby wcześniej NIE ZASZCZEPIONE podwójną dawką tamtejszych szczepionek!\nBerkeley72 22.06.2021 10:28:12\n@wiatr 2020 08:57:58 Czy ten "wiatr 2020" należy tłumaczyć jako "wiatr z DUPY 2020" ?\nNiech lepiej rzeczony "wiatr 2020" przedstawi swe kompetencje naukowe, dzięki którym jest w stanie kwestionować info 35stanu (mgr inż.inżynier urządzeń sanitarnych) o tym:\n//Wyprodukowane białko S po podaniu szczepionki jest następnie odpowiednio obrabiane wewnątrz komórek i prezentowane na ich powierzchni przez białka głównego układu zgodności tkankowej (HLA).\nWreszcie kompleks MHC z białkiem S rozpoznawany jest przez komórki układu odporności, //\no czym nawet ja (przez dziewięciolecie lat 1983-91 opracowywałem dział "postępy biologii" dla rocznika "Świat w Przekroju" wydawnictwa "Czytelnik") nie wiedziałem.\nBerkeley72 22.06.2021 10:39:47\nSzanowny Panie Berkeley72,\nI Pan naprawdę wierzy w to co twierdzą BBC News?\nJa w Australii, codziennie oglądam BBC, ABC, Fox News i czasem inne też kanały - i wszystkie te Newsy mówią to samo a moim zdaniem wszystkie te knały telewizyjne kłamią...\nPrzecież wszystkie mają sponsorów, które kontrolują co ONI te TV Newsy mówią - przekazują światowej opinii publicznej...\nA skąd się wziął mutant Delta?\nMyśli Pan, że wirus Covid sam się zmutował i potem wszedł na rynek - tak aby przekonać ludzi do szczepionek?\nCzy Pan naprawdę wierzy w to co Pan mówi...?\nMyślę, że warto aby sie Pan dobrze zastanowił.\nŻyczę zdrowia - ale nie poprzez szczepionkę...\nRyszard Opara 22.06.2021 14:02:24\nUprzejmie dziękuję za dobre słowo...\nCiągle żyję nadzieją, że przyjdzie taki dzień, że będziemy mogli razem napić sie jakiś kieliszek (albo 2)- dobrego winka za nasze wspólne zdrowie.\nA tymczasem może razem spróbujmy:\n"Całymi dniami i nocami o tym myśleć - co możemy zrobić dla ludzkości - i modlić się o to do Boga Naszego Jedynego...\nWypiję za Pana zdrowie kieliszek szampana...\nRyszard Opara 22.06.2021 14:07:39\n@Ryszard Opara 14:02:24 "hinduskie" pochodzenie "delta" odmiany SARS Cov2\nAs India battles a deadly second wave, the UK is seeing COVID-19 cases rise despite vaccinations. Germany is also wary about another wave spurred by the delta variant.\nThe earliest documented COVID-19 case caused by the delta variant (B.1.617.2) was first found in the Indian state of Maharashtra back in October 2020, and has since then spread widely throughout India and across the world. The World Health Organization (WHO) labelled it a "variant of concern" (VOC) on May 11.\nTakże w Rosji, w ciągu ostatnich 2 tygodni, też nastąpił nagły "skok" w ilości zachorowań na ten mityczny "covid" (od ok. średnio 9 tys dziennie do ok. 17 tys., głównie w Moskwie. Gdzieś czytałem, że wywołał go ten wariant importowany z Indii - i Ruskie, które dotąd nie spieszyli się z szczepieniami, nagle zaczęli szczepić kogo się da.\nW Polsce obecnie WYJĄTKOWO spokojnie (ok. 200 zachorowań dziennie), ale jak przyjadą Polacy z Anglii na wakacje, może zacząć być gorzej. (w Anglii, podobnie jak w Rosji, od 2 tygodni 2x skok w ilości zakażeń, obecnie ok. 10tys. dziennie i ich ilość wzrasta.)\n(Przed 2 miesiącami Borys Johnson ogłosił, ze od 21 czerwca br kolejne zarażenia będą traktowane jak zwykła grypa, ale wczoraj diametralnie musiał zmienić swą opinię).\nBerkeley72 22.06.2021 16:34:05\nBardzo Pana przepraszam - ale zadałem Panu 2 podstawowe pytania:\n1.Czy wierzy Pan w to co rozpowszechniają media: BBC i rozmaite inne na naszym świecie?\n2. Skąd się wziął mutant Delta wirusa Covid-19?\nNie odpowiedział Pan na te pytania - ale powtarza Pan inne brednie , które piszą media "głównego nurtu"...\nCzy Pan nie może zrozumieć - kilku bardzo prostych faktów.\nObecnie na świecie (w USA, Rosji, Chinach itd), działa wiele rozmaitych pracowni laboratoriów mikrobiologicznych, biomedycznych, które badają wirusy, pracują nad produkcją szczepionek, leków, wielu innych rzeczy.\nWirus Covid-19 - został wyprodukowany w jednym z takich laboratoriów Wirusy - to potencjalnie najlepsza możliwie Broń Masowego Rażenia.\nWyprodukowanie broni atomowej, jądrowej, chemicznej - kosztuje bardzo wiele - a konsekwencje ich użycia - są nieprzewidywalne...\nZależy to głównie od tego - kto wygra wojnę...\nProszę się zastanowić, jaka by była odpowiedzialność USA - za zrzucenie bomby atomowej na Hiroszimę i Nagasaki - gdyby USA ostatecznie nie wygrało II WŚ?\nProdukcja wirusów - jest bardzo tania a jednocześnie odpowiedzialność za ich użycie - jako środek masowego rażenia - praktycznie nie do udowodnienia...\nKogo Pan będzie oskarżał - wirusy albo ich mutacje? Czy nawet kogoś, komu ten "wirus" - "wyciekł" z laboratorium...\nCzy Pan nie rozumie, że toczy się III Wojna światowa - o kontrolę nad cywilizacją???\nA poza tym produkcja szczepionek - to przecież obecnie najlepszy interes na świecie... jeżeli co roku (2x w roku), będzie się szczepić kilka miliardów ludzi - to jaka to kasa...\nItd. itd - mogę dawać wiele przykładów - gadać bez końca...\nRobię to cały czas, pisząc artykuły na ten temat, nie będę się powtarzał\nPanie Marku - ja wiele lat pracowałem jako lekarz, przez kilka lat byłem szefem firmy w Australii i USA - zajmującej sie badaniem szczepionek!\nProszę mi wierzyć - wiem o czym mówię...\nPan jest mądrym, wykształconym człowiekiem z dużym doświadczeniem Niech Pan się dobrze zastanowi nad realiami obecnej rzeczywistości...\nNiech Pan przeanalizuje globalne statystyki zachorowalnosci oraz śmiertelności na różne choroby - w ostatnich kilku latach...\nI jak Pan wierzy BBC i innym światowym mediom - jest Pan niestety nie mamy o czym gadać...\nRyszard Opara 23.06.2021 02:28:13\nKumulacja poszczepienna czyli co robią nanocząstki lipidowe dr Robert Malone, twórca technologii szczepionek mRNA, powiedział, że nanocząstki lipidowe szczepionki przeciw COVID które mówią organizmowi, aby wyprodukował białko kolczaste opuszczają miejsce wstrzyknięcia i gromadzą się w narządach i tkankach.\nProfesor Bryam Bridle: Szczepionki to „wielki błąd” – białko kolczaste jest niebezpieczną „toksyną”. Prof. Bridle – „popełniliśmy wielki błąd”- „białko kolca jest niebezpieczną toksyną dostaje się do krwi gdzie krąży przez kilka dni po szczepieniu, gromadzi się w narządach i tkankach, w śledzionie, szpiku kostnym, wątrobie, nadnerczach i w dość wysokich stężenia w jajnikach”\nkula Lis 70 23.06.2021 07:34:40\nkula Lis 70 23.06.2021 07:37:50\nkula Lis 70 23.06.2021 07:40:06\n7. https://alleninstitute.org/, https://www.hhmi.org/, 8. https://www.salk.edu/, https://kavlifoundation.org/about\n11. http://www.pitt.edu/~super7/32011-33001/32171.ppt, 12. https://en.wikipedia.org/wiki/Plasmid-mediated_resistance\nkula Lis 70 23.06.2021 07:44:36\nSzczepienia w USA. Cel Bidena nie zostanie osiągnięty\nZespół ds. COVID-19 w Białym Domu przyznał we wtorek, że nie uda się osiągnąć wyznaczonego przez prezydenta USA Joe Bidena celu zaszczepienia przeciwko COVID-19 co najmniej 70 proc. dorosłych Amerykanów do Dnia Niepodległości 4 lipca. Według zespołu jest to głównie efekt sceptycyzmu najmłodszych dorosłych mieszkańców USA.\n85 proc. narażonych Amerykanów zaszczepionych\nKoordynator zespołu ds. odpowiedzi na COVID-19 Jeffrey Zients stwierdził podczas konferencji prasowej, że mimo braku szans na spełnienie "aspiracyjnego" celu prezydenta Bidena, dotychczasowa kampania szczepień w USA jest wielkim sukcesem. Jak dodał, już teraz co najmniej jedną dawkę szczepionki przeciwko Covid-19 otrzymało ponad 70 proc. Amerykanów powyżej 30. roku życia, zaś do 4 lipca otrzyma ją 70 proc. populacji powyżej 27 lat.\nZients podkreślił, że zaszczepić zdołała się przytłaczająca większa najbardziej narażonych mieszkańców USA - 85 proc. osób w wieku powyżej 65 lat oraz 75 proc. osób powyżej 40 lat. Jak dodał, dotarcie do 70 proc. wszystkich dorosłych zajmie "dodatkowych kilka tygodni" wobec zwalniającego tempa szczepień. Cel Bidena spełniło dotąd też 16 stanów i Dystrykt Kolumbii.\n"Mamy jeszcze dużo więcej pracy do zrobienia, jeśli chodzi o najmłodsze grupy. Rzeczywistość jest taka, że wiele z tych osób uważa, że (COVID-19) nie jest czymś, co ich dotyczy. Ale biorąc pod uwagę rozprzestrzenianie się wariantu Delta dotarcie do tych grup jest ważniejsze, niż kiedykolwiek wcześniej" powiedział koordynator zespołu Białego Domu. Podczas wtorkowej konferencji członkowie zespołu podkreślali, że administracji udało się znacząco przyspieszyć akcję szczepień od czasu objęcia władzy ponad początkowe oczekiwania. Zients przypomniał, że na początku kadencji prezydent Biden miał nadzieję, że dzięki szczepionkom Dzień Niepodległości będzie mógł być obchodzony entuzjastycznie, lecz w małych grupach. Obecnie natomiast planowane są masowe obchody na ogromną skalę, w tym z udziałem ok. 1000 ludzi w Białym Domu.\nkula Lis 70 23.06.2021 08:07:45\nZa wcześnie, by mówić o końcu pandemii? Minister Niedzielski przestrzega: Jeśli zaatakuje wirus Delta, mogą wrócić obostrzenia\nPs...Dramat Polski! Atak wirusa delta, jest już zaplanowany na jesień. Na wiosnę będzie LOCKDOWN bo się pojawi mutacja GAMMA. Polacy nie będą się chcieli szczepić czwartą dawką dlatego będzie lockdown. Wirus nam odpuści ale ten socjopata i psychopata na pewno NIE ! Dlaczego oszust Sobotni ma zawsze minę srającego kota na pustyni? Szumowski był spocony i zmęczony. I z Św. Matką Teresą. Wirusy istnieją. Pandemii nie ma. Odbywa się wyniszczanie pod pretekstem koronawirusa… przeziębieniowego. Dość tego wariactwa. Tzw dziennikarze konserwatywni zamiast bić na alarm - realizują marksistowską agendę. Moralne harakiri tzw ‘niepokornych’! Moim zdaniem plandemia minie jak niedzielny razem z foliarską radą trafią do celi. Widać covid -19 z laboratorium za chwilę w długości przebije hiszpankę. Lepiej Niedzielski uważaj na powrót obostrzeń i kolejnej mutacji. Szybciej staniesz przed sądem z bardzo poważnymi zarzutami. Muszą pojawić się obostrzenia wobec Niedzielskiego, ponieważ stracił kontakt z rzeczywistością, pracuje na rzecz przeciwnika, i jest źródłem oszustwa i ucisku wobec 38 mln ludzi. To musi zostać rozliczone. I nie tylko on, ale jego zwierzchnik Morawiecki również, podobnie jak inni mędrkowie doradzający.\nkula Lis 70 23.06.2021 08:37:48\nW Anglii najwięcej zaszczepionych i najwięcej przypadków COVID. To są reakcje poszczepienne a na jesień będą zgony. Oczywiście Niedzielski z Morawieckim i Dworczykiem powiedzą, że to Delta a potem Gamma etc...\nkula Lis 70 23.06.2021 08:42:17\nDzisiaj, ku mojemu radosnemu zaskoczeniu, znalazłem w skrzynce pocztowej (realnej), manifest antyszczepionkowy, sformułowany i rozesłany w imieniu, czującego bluesa i narastającą masę krytyczną, aspirującego wzwyż polityka. Coś się zaczyna dziać...\n1abezmetki 23.06.2021 08:58:13\nW Meksyku jak test na covid jest pozytywny to dają do domu pakiet z iwermektyną. Podobnie w stanie Uttar Pradesh (230 mln) w Indiach. Iwermektyną leczą też na Słowacji w Czechach i w Bułgarii. Niedzielski chyba boi się, że ludzie mniej by się szczepili gdyby mogli się leczyć.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:04:04\nSpośród 4087 osób zakażonych wariantem Delta, które zostały w pełni zaszczepione, a od szczepienia upłynęło co najmniej14 dni, zmarło dwadzieścia sześć. Odpowiada to śmiertelności 0,00636 proc., która jest 6,6 razy wyższa niż śmiertelność wśród osób niezaszczepionych, chorujących na ten wariant koronawirusa (0,000957 proc. zgonów, 34 zgony wśród 35 521 pozytywnych przypadków) – wynika z danych opublikowanych w raporcie z 18 czerwca przez Public Health England. o tak żeby każdy miał świadomość co to ten wariant Delta jest. Dodam tylko ze wszelkie instytucje jako podstawowe objawy tego wariantu to katar i ból gardła. Teraz proszę zestawić to sobie z tym co mówią politycy i media. Bo coraz więcej słychać, że znów biznesy będą niszczone. Z powodu kataru i bólu gardła.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:13:08\nPowinniśmy zreformować służbę zdrowia tak by ludzie nie musieli wydawać gigantycznej kasy na prywatne porady czy leczenie. Czy w Czechach, Niemczech chorzy muszą iść do prywatnych przychodni? Nie tam nie ma takiej potrzeby, nie ma też tak potężnego sektora prywatnej służby zdrowia jak u nas.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:16:32\nWyciekłe e-maile...Doradcy medycznego PREZYDENTA USA\nFauciego, który na długo przed pandemią wiedział co się dzieje, a nic nie zrobił. To USA( Gates i Soros i Rothschildowie finansowali Wuhan i mają udziały w Pfizerze, Jonsonie i Astra Zenece ) finansowały badania nad uzłośliwianiem wirusa w Wuhan.\nMEGA Konferencja! Niezależni lekarze i naukowcy zrzeszają się! Przebiją się z prawdą o COVID film usunięty z You Tube....Niezależni lekarze mówią DOŚĆ! Koniec z KŁAMSTWEM i PROPAGANDĄ PiSu.\nDr Hałat były wice. min. ZDROWIA na Marszu Wolności.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:24:11\n@kula Lis 69 07:40:06\nTo co Pan pisze - jest wprost przerażające...\nNaprawdę - ten komentarz powinien być opublikowany jako osobny artykuł - jeżeli Pan tego nie zrobi - ja będę musiał...to zrobić.\nUprzejmie proszę tylko mi odpowiedzieć na pytanie:\nNa ile Pana zdaniem podane wyżej informacje są absolutnie wiarygodne.\nRyszard Opara 23.06.2021 09:24:25\nDania rezygnuje z paszportu covidowego. Od 1 października paszport szczepionkowy ma zostać całkowicie wycofany i nie ma obowiązku noszenia maseczek m.in. w sklepach. Od 1 października Dania ma się stać krajem wolnym od jakichkolwiek koronawirusowych obostrzeń.\nLekarz i kandydatka z list PiS-u apeluje do Niedzielskiego: „Najwyższy czas wyeliminować całkowicie maski.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:29:15\nkula Lis 70 23.06.2021 09:30:29\nG. Braun składa zawiadomienie do prokuratury w sprawie Niedzielskiego, Szumowskiego, Horbana i Simona..Won Sataniści Chabad lubawicz.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:32:14\n@Ryszard Opara 09:24:25 proszę przeczytać i zrobić to za mnie.\nTHE COVID BLOG..OFFICIAL BLOG OF COVID LEGAL USA. VACCINES ARE THE LEADING CAUSE OF COINCIDENCES. STAY VIGILANT. https://thecovidblog.com/\nkula Lis 70 23.06.2021 09:39:43\n@Ryszard Opara 09:24:25\nWy myślicie, że jesteście bezkarni. Będziecie nieustannie straszyć i skłócać ludzi? DOŚĆ! Sądzę, że Niedzielski z pewnością zostanie zaatakowany ale nie przez wirusa tylko wściekłych obywateli. Oby ten atak był śmiertelny w skutkach dla tego gnoja.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:44:14\nDORADCY MORAWIECKIEGO BIORĄ PIENIADZE (ŁAPÓWKI) od Producentów szczepionek..\nkula Lis 70 23.06.2021 09:47:11\nNa 100 procent panie Ryszardzie, pozdrawiam.\nkula Lis 70 23.06.2021 09:47:58\n@Ryszard Opara 09:24:25 Głos polonijny z TORONTO w Kanadzie\nPfizer na szczepionce zarobi 15 mld.$ rocznie. Pfizer (udziały ma GATES) od 10 lat ma swoje laboratorium w Wuhan. Może to Pfizer wyprodukował covida a teraz zarabia krocie na foliarzach.\nkula Lis 70 23.06.2021 10:02:36\n@Ryszard Opara 09:24:25 Kiedy Niedzielski atakuje to trzeba odstrzelić Niedzielskiego.\nJak długo jeszcze ten psychol będzie upokarzał Polaków? Szubienica+ coraz bliżej planowana przez ludzkich odszczepieńców z tzw. rządu IV Fala i wersja Gamma, epsilon, dzeta, eta, teta, jota, kappa.. I tak dalej to temu socjopacie Niedzielskiemu załatwi. Oficjalne dane brytyjskiego rządu na temat wariantu delta. Śmiertelność poniżej pół promila. Śmiertelność zaszczepionych, 6 razy większa od niezaszczepionych. 99 proc bezobjawowy. U nas o tym cisza. Z tego co obserwuję to zaatakował wirus ” Debil” Tak, obostrzenia dla ministra zdrowia bo rzeczywiście stracił kontakt z rzeczywistością. Jakim prawem grupka ludzi decyduje o całym narodzie?\nkula Lis 70 23.06.2021 10:55:14\nUwaga Kaczyński chce przymusu szczepień, łamie KONSTYTUCJĘ! MORDUJE LUDZI!\nkula Lis 70 23.06.2021 11:45:41\n153 pracowników sieci szpitali Houston Methodist w Teksasie odeszło z pracy lub zostało zwolnionych w związku z odmową przyjęcia szczepionki przeciwko COVID-19 poinformowała we wtorek rzeczniczka sieci. To również skutek odrzucenia skargi pracowników przez sąd. Jak podaje "Washington Post", Houston Methodist było jednym z pierwszych systemów szpitalnych w Stanach Zjednoczonych, który nakazał pracownikom zaszczepienie się przeciwko koronawirusowi, jako warunek kontynuacji pracy w szpitalu. Od wprowadzenia decyzji 1 kwietnia szczepionkę przyjęło niemal 25 tys. pracowników sieci. 178 odmówiło, wobec czego zostali oni zawieszeni na dwa tygodnie. W tym czasie 25 z nich zaszczepiło się, zaś reszta straciła pracę. Sprawa trafiła do sądu\n"Methodist po prostu stara się wykonywać swoją pracę ratowania życia pacjentów i unikania zakażenia ich wirusem. To wybór mający na celu zapewnienie bezpieczeństwa pracowników, pacjentów i ich rodzin" napisał w uzasadnieniu sędzia Lynn Hughes.\nZespół ds. COVID-19 w Białym Domu przyznał we wtorek, że nie uda się osiągnąć wyznaczonego przez prezydenta USA celu zaszczepienia przeciwko COVID-19 co najmniej 70 proc. dorosłych Amerykanów do Dnia Niepodległości 4 lipca. To głównie efekt sceptycyzmu najmłodszych dorosłych mieszkańców USA. Mamy jeszcze dużo więcej pracy do zrobienia, jeśli chodzi o najmłodsze grupy. Rzeczywistość jest taka, że wiele z tych osób uważa, że (COVID-19) nie jest czymś, co ich dotyczy. Ale biorąc pod uwagę rozprzestrzenianie się wariantu Delta dotarcie do tych grup jest ważniejsze, niż kiedykolwiek wcześniej powiedział koordynator zespołu Białego Domu Jeffrey Zients.\nkula Lis 70 23.06.2021 11:46:33\nBezprzewodowa kontrola funkcji komórek poprzez aktywację nowego białka reagującego na pola elektromagnetyczne\nVijai Krishnan ,Sarah A. Park ,Samuela S. Shina ,Lina Alon ,Caitlin M. Tressler ,Williama Stokesa ,Jineta Banerjee ,Mary E. Sorrell ,Yuemin Tian ,Gene Y. Fridman ,Pablo Celnik, Jonathan Pevsner ,William B. Guggino ,Assaf A. Gilad &Zły Pelled\nRaporty naukowe Tom 8 , Numer artykułu: 8764 ( 2018 ) Abstrakcyjny\nW sumiczek szklisty (szkło szklisty) jest znanych z reagowania na działanie pola elektromagnetycznego (PEM). Tutaj przetestowaliśmy jego zachowanie unikające w odpowiedzi na stymulację statycznymi i zmiennymi polami magnetycznymi. Stosując klonowanie ekspresyjne zidentyfikowaliśmy elektromagnetyczny gen percepcyjny ( EPG ) z K. bicirrhiskodujący białko, które odpowiada na EMF. Ten gen EPG został sklonowany i wyrażony w komórkach ssaków, kulturach neuronalnych iw mózgu szczura. Badania immunohistochemiczne wykazały, że ekspresja EPG jest ograniczona do błony komórkowej ssaków. Obrazowanie wapnia w komórkach ssaków i hodowanych neuronach wyrażających EPG wykazało, że zdalna aktywacja przez EMF znacząco zwiększa wewnątrzkomórkowe stężenie wapnia, co wskazuje na pobudliwość komórkową. Co więcej, bezprzewodowa aktywacja magnetyczna EPG w korze ruchowej szczura indukowała reakcje wywołane ruchowo przeciwnej kończyny przedniej in vivo . W tym miejscu informujemy o rozwoju nowej technologii do zdalnej, nieinwazyjnej modulacji funkcji komórek. Wprowadzenie\nWiększość dostępnych technologii do manipulowania funkcjami komórkowymi w sposób specyficzny dla komórki i czasoprzestrzeni wymaga użycia optyki 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , leków 8 , 9 , 10 , ogrzewania falami radiowymi 11 , 12 , 13 lub ultradźwięków 14 . Jednak poszukiwanie genów kontrolujących funkcję komórek za pomocą pól elektromagnetycznych (EMF), które nieinwazyjnie wnikają w głęboką tkankę, jest dopiero w powijakach 15 , 16. Chociaż wiadomo, że różne gatunki wodne wykorzystują pola magnetyczne i elektryczne Ziemi do orientacji, nawigacji i wykrywania ofiar i drapieżników 17 , mechanizmy komórkowe tego samego pozostają nieznane. Jeden z takich organizmów, Kryptopterus bicirrhis , ryba słodkowodna, zawiera narząd bańkowy przeznaczony do wyczuwania pola elektromagnetycznego 17 . Dowody sugerują, że indukcja pola elektromagnetycznego powoduje natychmiastowy napływ wapnia do komórek elektroreceptorów narządów brodawkowych 18, które znajdują się pod płetwami. Tak więc jest prawdopodobne, że te komórki elektroreceptorowe wyrażają białka wrażliwe na zmiany w EMF. Zasadniczo identyfikacja białka, które jest zdalnie aktywowane przez nieinwazyjne pola elektromagnetyczne, jest niezaspokojoną potrzebą, która może uzupełnić rosnący arsenał technologii przeznaczonych do zewnętrznej kontroli aktywności komórkowej in vivo .\nK. bicirrhis odpływa w odpowiedzi na pole elektromagnetyczne\nPrzetestowaliśmy reakcję behawioralną ryb na statyczne i zmienne pola magnetyczne. Czternaście K. bicirrhis umieszczono w 30-galonowym zbiorniku utrzymywanym w temperaturze 25°C (Fig. 1 ). Do testów behawioralnych ryby pogrupowano i umieszczono w zbiorniku. Neodymowy magnes ziem rzadkich umieszczono z jednej strony na 10 s, a ryby oddalone o 10 mm poddano działaniu pola o natężeniu 23 mT. Pozorny bodziec składał się z plastikowego przedmiotu podobnej wielkości. W tych próbach (n = 10) ryby przepłynęły odległość 344 ± 26 mm w odpowiedzi na bodziec magnetyczny, który był znacznie większy niż odległość 91 ± 5 mm (p < 10 -6 , test t Studenta). w pozorowanych eksperymentach (ryc. 1D). Do zmiennego pola magnetycznego zastosowano system przezczaszkowej stymulacji magnetycznej (TMS) przy 250 mT. W próbach pozorowanych cewka TMS została umieszczona z boku zbiornika i dostarczono tylko nagranie dźwiękowe. Podczas pozorowanych prób ryby były obojętne na dźwięk wydawany przez system TMS; na TMS w próbach eksperymentalnych, wszystkie ryby odpłynęły od źródła pola elektromagnetycznego. Rysunek 1A-C (oraz filmy S1 w danych uzupełniających) pokazuje pozycję ryb przed stymulacją EMF i ich pozycję w zbiorniku 1 s po wywołaniu EMF. Wyniki te pokazują, że ryby te wykazują silną reakcję behawioralną indukowaną przez statyczne i zmienne bodźce magnetyczne.\nW K. bicirrhis odpłynąć w odpowiedzi na pola elektromagnetyczne. Cewka TMS została umieszczona po prawej stronie akwarium i indukowała impulsy o częstotliwości 50 Hz przez 5 sekund. ( A) Przed zastosowaniem stymulacji ryby były rozproszone w zbiorniku. ( B ) Podczas stymulacji wszystkie ryby odpłynęły od źródła stymulacji, które znajdowało się po prawej stronie. ( C ) Kiedy stymulacja się skończyła, ryba znów zaczęła pływać we wszystkich kierunkach. Ryby zostały nagrodzone pod koniec próby. ( D ) Statyczna stymulacja magnetyczna indukowała zachowanie unikające (****p < 10-6 ).\nKlonowanie genu percepcji elektromagnetycznej\nAby zidentyfikować i scharakteryzować przypuszczalne białko(a) wrażliwe na EMF, zastosowaliśmy klonowanie ekspresyjne w oocytach 19 , 20 Xenopus laevis (X. laevis) . Wyizolowaliśmy chirurgicznie płetwę odbytową zawierającą narządy elektroreceptorowe 21 z 80 znieczulonych K. bicirrhis i wyekstrahowaliśmy całkowity mRNA, z którego skonstruowano bibliotekę cDNA. Podbiblioteki cDNA przeszukiwano za pomocą dwuelektrodowego zacisku napięciowego (TEVC) w oocytach X. laevis 22 , 23dla zmienionych odpowiedzi prądowych na stymulację. Jedna z podbibliotek wykazywała zwiększony, zależny od napięcia prąd błonowy w roztworach fizjologicznych (ND96) i bezsodowych (NMDG). W związku z tym 44 klony cDNA z tej podbiblioteki zamplifikowano i oczyszczono do dalszych badań przesiewowych. Klony zsekwencjonowano i wszystkie przypuszczalne geny porównano z bazą danych GenBank. Kandydujące otwarte ramki odczytu każdego przypuszczalnego genu poddano translacji i porównano z bazą danych białek. Klony podzielono dalej na mniejsze podbiblioteki, a aktualną odpowiedź zbadano za pomocą TEVC. Doprowadziło to do identyfikacji pojedynczej otwartej ramki odczytu kodującej białko o 133 aminokwasach (~15 kDa), które wykazywało konstytutywnie zwiększony prąd prostowania na zewnątrz, który nazwaliśmy genem percepcji elektromagnetycznej (EPG).\nStosując reakcję łańcuchową polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) ze specyficznymi starterami sprawdziliśmy, że EPG jest rzeczywiście konstytutywnie transkrybowane przez K. bicirrhis . (rysunek uzupełniający S1 ). Aby potwierdzić, że EPG ulega translacji (tj. tworzeniu białka), wytworzyliśmy poliklonalny oczyszczony przez powinowactwo przeciwko domniemanej domenie zewnątrzkomórkowej w oparciu o Genscript OptimumAntigen TM Design Program. Jak widać na ryc. uzupełniającym. S1 , linie 1–3, EPG jest wykrywane tylko w ekstrakcie tkankowym K. bicirrhis, ale nie w tkance kontrolnej z Danio Rerio ( Danio pręgowany), co wyraźnie wskazuje, że EPG jest unikalnym białkiem dla K. bicirrhis, który został wyewoluowany do pełnienia specyficznej funkcji . Warto zauważyć, że na podstawie masy cząsteczkowej EPG wydaje się być (homo)dimerem.\nAnaliza bioinformatyczna sekwencji DNA i białek EPG\nAnaliza BLASTN 24 sekwencji cDNA EPG nie dała żadnych dopasowań (unikalna identyczność) w nienadmiarowej bazie danych genomowego DNA. Analiza TBLASTX sekwencji cDNA, przy użyciu bazy danych znaczników sekwencji wyrażanych (dbEST) dała statystycznie istotne dopasowania z EST dla kilku ryb. Z sześciu możliwych otwartych ramek odczytu (ORF) EMBOSS ( 25 ), pierwszy ORF w wyniku pojedynczego białka, zgodnie ze zakodowanej sekwencji białkowej z poszukiwań TBLASTX. Poszukiwanie sekwencji aminokwasów metodą DELTA-BLAST dało zgodność z licznymi białkami z rodziny UPAR_LY6 (dostęp: pfam00021 ). Skonstruowaliśmy drzewo filogenetyczne białka EPG i jego homologów (metoda największego prawdopodobieństwa, model oparty na macierzy JTT 26), który pokazał ewolucyjny związek EPG z innymi białkami w tej samej nadrodzinie (rysunek uzupełniający S2 ). Wielokrotne dopasowanie sekwencji przy użyciu MUSCLE 27 , 28 (rysunek uzupełniający S3 ) wykazało, że EPG ma konserwatywną domenę bogatą w cysteinę. Domena ta jest homologiczna do domeny UPAR_LY6 (rysunek uzupełniający S3A , reszty aminokwasowe wytłuszczone na niebiesko).\nPrzewidywana struktura drugorzędowa EPG obejmuje pięć nici beta flankowanych przez helisy alfa na każdym końcu (JPred 29 , (rysunek uzupełniający. S3 ). Dalej modelowaliśmy orientację błonową EPG przy użyciu Polyphobius 30 , który wykazał hydrofobowy ( przezbłonowy ) N -końcowy peptyd sygnałowy (TMHMM 31 , Signal-Blast 32 ), po którym następuje region niecytoplazmatyczny (rysunek uzupełniający S3). Przypuszczalny region zewnątrzkomórkowy obejmuje pięć nici beta zlokalizowanych w domenie UPAR_LY6 białka EPG. Oparte na homologii modelowanie struktury trzeciorzędowej domniemanej zewnątrzkomórkowej domeny EPG (reszty 17–104) przewidziało wzbogaconą w arkusz beta domenę podobną do dysku z konserwowanymi cysteinami (SWISS-MODEL 33 , 34 , 35 , 36 , cysteiny pokazane jako sfery błękitne w (dodatkowy rys. S3 ). Wykres dostępności EPG ( dodatkowy rys. S3 )wygenerowany przy użyciu DeepView pokazuje wklęsły charakter domeny zewnątrzkomórkowej, podobny do domeny UPAR_Ly6 CD59. Wklęsła powierzchnia domeny UPAR_LY6 CD59 jest jej aktywną zewnątrzkomórkową domeną wiążącą 37 , 38 i wykazuje podobieństwo topologiczne do rodziny Toxin_1 39 , 40 . Stawiamy hipotezę, że wewnątrzcząsteczkowe wiązania dwusiarczkowe między konserwowanymi cysteinami EPG mogą pomóc ustabilizować jego domenę niecytoplazmatyczną (podobną do tych występujących w CD59). Domena niecytoplazmatyczna EPG zawiera również przewidywane miejsce N-glikozylacji w reszcie-77, co sugeruje, że EPG może być białkiem glikozylowanym.\nEkspresja EPG w komórce i regionie\nLudzkie komórki embrionalne nerek 293T (HEK293T) transfekowano pcDNA3.1-EPG. Uzupełniająca ryc. S4 pokazuje kolokalizację błony między markerem błony plazmatycznej pankadheryną (zielony) a ekspresją EPG (czerwony) w komórkach transfekowanych w porównaniu z nietransfekowanymi komórkami kontrolnymi Wykryliśmy większą kolokalizację w komórkach transfekowanych EPG w porównaniu z niestransfekowanymi komórkami kontrolnymi komórek, przy użyciu obu nakładających się Mandersa (EPG vs. kontrola: 0,36 vs. 0,32; wartość p = 0,024; Ryc. uzupełniający S4 ) i współczynniki korelacji Pearsona 41 (EPG vs. kontrola: 0,32 vs. 0,27; wartość p = 0,014; Rys. uzupełniający S4). Ponadto przeprowadzono stereotaktyczne wstrzyknięcia pAAV2-CaMKII::EPG-IRES-hrGFP do komory bocznej szczurów P1 (n = 10). Późniejsze immunobarwienie w pierwotnej korze somatosensorycznej przy użyciu poliklonalnego przeciwciała anty-EPG (rysunek uzupełniający S4 ) wykazało, że EPG może ulegać ekspresji in vivo .\nCharakterystyka mechanistyczna EPG\nAby zrozumieć aktywność białka EPG in vitro na poziomie mechanistycznym, wygenerowaliśmy syntetyczny gen o tej samej sekwencji aminokwasowej EPG, ale zoptymalizowany pod kątem ekspresji bakteryjnej. Klonowaliśmy, eksprymowaliśmy i oczyszczaliśmy EPG na kolumnie z kobaltem i używaliśmy go do dalszych zastosowań. Dichroizm kołowy ujawnił słabe pasma alfa-helikalne przy długościach 208 i 222 nm, co wskazuje na niewielką ilość struktury alfa-helikalnej, potwierdzanej przez bioinformatykę. Gdy oczyszczone białko wystawiono na działanie statycznego pola magnetycznego (25 mT) nie zaobserwowano żadnych zmian konformacyjnych (rysunek uzupełniający S5). Wskazuje to, że mechanizm transdukcji EPG nie pociąga za sobą istotnych zmian w strukturze białka EPG. Ponadto nie wykryto żelaza, gdy oczyszczone białko poddano trawieniu trypsyną i chymotrypsyną, co sugeruje, że mechanizm magnetodetekcji nie jest zależny od skupisk żelazo-siarka w białku.\nCharakterystyka EPG w komórkach ssaków\nKomórki HEK293T transfekowano konstruktem lentiwirusa zawierającym EPG pod promotorem CMV (pLV-CMV::EPG-IRES-hrGFP), a obrazowanie wapnia przy użyciu fura-2/AM uzyskano dwa-trzy dni po transfekcji (ryc. 2A-C ). . Obliczono procentową zmianę w stosunku fura-2/AM przy wzbudzeniu 340/380 nm. Komórki poddano działaniu pola magnetycznego 50 mT przez 10 s indukowanego przez statyczny płaski magnes. Z n = 99 komórek GFP-dodatnich, 68 komórek wykazało znaczny wzrost [Ca2 + ]i. Średni wzrost intensywności fluorescencji [Ca2 + ]i wyniósł 232 ± 20% i wystąpił 13 ± 0,5 s po rozpoczęciu bodźca (Fig. 2D, E ). Dane w (rys. 2D) wykazują zmienną odpowiedź komórkową w komórkach HEK od pojedynczej transfekcji w odpowiedzi na stymulację magnetyczną. Nietransfekowane komórki nie wykazywały odpowiedzi na bodziec (n = 76). Aby określić, czy wzrost [Ca 2+ ]i był spowodowany zewnątrzkomórkowym pochodzeniem, komórki z ekspresją EPG obrazowano w roztworze do obrazowania zewnątrzkomórkowego bez Ca 2+ (n = 23) lub w roztworze do obrazowania pozakomórkowego bez Ca 2+ uzupełnionym z chelatorem Ca 2+ EGTA (n = 9). Bodziec magnetyczny spowodował średnie zmiany [Ca 2+ ]i o 81 ± 14% i 52,0 ± 3%, które były istotnie niższe w porównaniu z normalnymi warunkami ( F 4,219 = 27,47; p < 0,0001, jednoczynnikowa ANOVA). Następnie zbadaliśmy, czy uwalnianie wapnia z retikulum endoplazmatycznego (ER) jest wymagane w odpowiedziach za pośrednictwem EPG (n = 48). W komórkach wykazujących ekspresję EPG, które inkubowano z inhibitorem, tapsigarginą, bodziec magnetyczny nie wywoływał żadnych zmian [Ca2 + ]i (0,81 ± 1,95%) (Fig. 2F,G ). Wyniki te sugerują, że zarówno zewnątrzkomórkowe, jak i wewnątrzkomórkowe jony Ca2 + są uwalniane w odpowiedzi na statyczną stymulację magnetyczną EPG.\nStymulacja magnetyczna EPG w komórkach HEK293T wywołała znaczny wzrost [Ca2 +] i. ( A ) Komórki HEK293T transfekowane pLV-CMV-EPG-IRES-hrGFP. ( B , C ) Obrazy wapnia in vitro komórek obciążonych fura-2/AM przed ( B ) i po ( C ) 10 s stymulacji magnetycznej. Czarna strzałka wskazuje ciało komórki. Skala 10 µM. ( D ) Surowe dane pokazujące wzrost fluorescencji po stymulacji magnetycznej (niebieski słupek) w komórkach transfekowanych EPG. ( E ) Wykres rastrowy transfekowanych komórek odpowiadających na stymulację magnetyczną (czerwone kropki, n = 68). Komórki klasyfikowano jako odpowiadające, jeśli pik sygnału fluorescencji był 10 SD powyżej średniej. (F ) Dane pokazujące kinetykę odpowiedzi intensywności fluorescencji dla poszczególnych komórek w różnych warunkach. Zmniejszone zmiany intensywności fluorescencji zaobserwowano w 0 Ca 2+ i 0 Ca 2+ + EGTA po stymulacji magnetycznej. Nie zaobserwowano wzrostu sygnału dla komórek kontrolnych (nietransfekowanych) i traktowanych tapsygarginą. ( G ) Dane pokazujące średnie (±SEM) zmiany fluorescencji przed i po stymulacji magnetycznej dla każdego warunku n = 68 (EPG), n = 76 (Kontrola), n = 23 (0 Ca 2+ ), n = 9 ( 0 Ca 2+ + EGTA) & n = 48 (Thapsigargin). Jednoczynnikowa ANOVA, posttest Dunnetta (F4, 219) = 27,47, P < 0,0001.\nCharakterystyka EPG w korowej hodowli neuronów\nNeurony ze wspólnej hodowli korowej szczurów transdukowano konstruktem lentiwirusowym zawierającym EPG pod promotorem CMV (pLV-CMV::EPG-IRES-hrGFP). Kontrole mCherry przygotowano przez transfekcję neuronów konstruktem lentiwirusa pLV-CMV::IRES-mCherry. Siedem dni po transfekcji wykorzystaliśmy obrazowanie wapnia (fura-2/AM) do wizualizacji odpowiedzi neuronalnych. Po kokulturze chcieliśmy scharakteryzować naszą wspólną hodowlę neuronalną za pomocą specyficznych markerów neuronalnych (tubulina klasy III, tuj1) i glejowych (GFAP). Immunocytochemia wykazała, że kokultura wykazuje reaktywność immunologiczną na GFAP i TUJ1 (ryc. 3A, B ) w neuronach transfekowanych EPG ( ryc. 3C )potwierdzając, że kokultura składa się z pożądanej populacji neuronów glejowych wymaganej do tego badania. Pole magnetyczne było indukowane przez wykonany na zamówienie system elektromagnesów, który dostarczał impulsy o długości 5 ms z częstotliwością 10 Hz i indukował pole o wartości 50–70 mT. Figura 3E przedstawia pojedynczy neuron korowy transfekowany pLV-CMV::EPG-IRES-hrGFP wykazujący sygnał GFP w całym ciele komórki i procesach. Figura 3F przedstawia znakowanie neuronów EPG+ znakowaniem fura 2-AM po 1 godzinie. Figura 3G pokazuje, że stymulacja magnetyczna zwiększyła intensywność fura-2AM, wskazując na wzrost [Ca2 + ]i. Rysunek 3Hpokazuje surowe dane śladowe obrazowania fura 2-AM EPG wyrażających odpowiedzi neuronów na stymulację magnetyczną (niebieski pasek). Neurony EPG-dodatnie, które odpowiedziały na stymulację magnetyczną (n = 224) zostały wykreślone rastrowo w czasie; 77 neuronów z tej populacji (34%) odpowiedziało w ciągu 10 s stymulacji magnetycznej ( ryc. 3I ). Średni czas odpowiedzi wynosił 15 ± 0,5 s. Reprezentatywne odpowiedzi neuronów z ekspresją EPG, neuronów z ekspresją mCherry (kontrola), neuronów nietransfekowanych (kontrola) i neuronów z ekspresją EPG w różnych warunkach fizjologicznych, w tym roztwór zewnętrzny 0 Ca 2+, roztwór zewnętrzny 0 Ca 2+ + EGTA oraz z inhibitorem tapsigarginą , po stymulacji magnetycznej pokazano na ryc. 3J . Postać 3K pokazuje średnią procentową zmianę fluorescencji przed i po stymulacji magnetycznej. Jedynie neurony z ekspresją EPG wykazują wzrost fluorescencji fura-2AM po stymulacji magnetycznej. Stymulacja magnetyczna wywołała 144,8 ± 14,1% średni wzrost [Ca2 + ]i w neuronach z ekspresją EPG (n = 224; p < 0,0001). Nietransfekowane neurony kontrolne (0,50 ± 0,424%, n = 495) i neurony z ekspresją mCherry (0,14 ± 0,84%, n = 80) nie wykazały żadnej istotnej zmiany w odpowiedzi na bodziec. obrazowanie fura-2AM neuronów z ekspresją EPG inkubowanych z zewnętrznym 0 Ca 2+ (2 ± 0,98%, n = 475) oraz z 0 Ca 2+a EGTA (0,84 ± 0,64%, n = 175) nie wykazywały istotnych zmian w intensywności fluorescencji. Następnie inkubowaliśmy neurony eksprymujące EPG z blokerem pompy SERCA, tapsigarginą, w stężeniu 1 µM w 37°C przez 1 godzinę. Późniejsze obrazowanie neuronów nie spowodowało istotnej zmiany fluorescencji fura-2AM (0,50 ± 0,3%, n = 308). Razem, te wyniki pokazują, że zdalna aktywacja EPG w neuronach może indukować znaczny wzrost [Ca2 + ]i, wskazujący na pobudliwość neuronalną, tylko w neuronach eksprymujących EPG. Podobnie do wyników uzyskanych w komórkach HEK293T, hodowle neuronów wymagały fizjologicznych zewnątrzkomórkowych i wewnątrzkomórkowych poziomów wapnia, aby zareagować na stymulację magnetyczną. Rys. uzupełniający S6pokazuje, że zjawisko to zostało dodatkowo potwierdzone w hodowlach neuronów myszy, a także przy użyciu genetycznie kodowanego wskaźnika wapnia (GCaMP6). Ponadto chcieliśmy dodatkowo potwierdzić, że fluorescencja GFP neuronów EPG-dodatnich nie zakłóca fluorescencji fura-2/AM. Odkryliśmy, że komórki zawierające GFP (EPG pozytywne) mają taką samą fluorescencję fura-2/AM jak komórki nietransfekowane (rysunek uzupełniający S7 ). Zatem zastosowanie komórek transfekowanych EPG wyrażających GFP jako markera udanej transfekcji jest zgodne z zastosowaniem fura-2/AM do pomiaru wewnątrzkomórkowego [Ca2 + ].\nImmunocytochemia kokultury korowej i Magnetyczna stymulacja EPG w neuronach. (A) Komórki są pozytywne dla markerów neuronalnych i glejowych, takich jak (A) GFAP (niebieski), (B) Tuj1 (czerwony) w (C) EPG-dodatnie neurony (zielony). (D) Kolokalizacja neuronów EPG-dodatnich z GFAP i Tuj1. Pierwotne mieszane hodowle neuronów i gleju korowego transdukowano konstruktami wirusowymi dla EPG znakowanych GFP pod promotorem CMV (pLV-CMV::EPG-IRES-hrGFP). ( E – K ). (MI)Pierwotne mieszane hodowle neuronów i gleju korowego transdukowano konstruktami wirusowymi dla EPG znakowanych GFP pod promotorem CMV (pLV-CMV::EPG-IRES-hrGFP). Stransdukowane neurony obciążono wskaźnikiem wapnia fura-2 przed (F) i po (G) 10 s magnetyczna stymulacja EPG w neuronach indukuje znaczny wzrost [Ca2 + ]i, jak przedstawiono przez zmianę profilu intensywności. Przez 10 s stosowano przemienne statyczne pole magnetyczne (niebieski słupek). (H) Surowe dane pokazujące neurony transfekowane EPG ze wzrostem fluorescencji po stymulacji magnetycznej (niebieski słupek). (I) Wykres rastrowy transfekowanych komórek odpowiadających na stymulację magnetyczną (czerwone kropki, n = 225). (JOT)Dane pokazujące kinetykę odpowiedzi intensywności fluorescencji dla poszczególnych komórek w różnych warunkach. Zwiększone zmiany intensywności fluorescencji zaobserwowano w neuronach transfekowanych EPG po stymulacji magnetycznej. Różne warunki, takie jak O Ca 2+ (roztwór tyrodów z usuniętym Ca 2+ ), O Ca 2+ + EGTA, tapsigargina, mCherry i komórki nietransfekowane nie wykazują wzrostu sygnału po stymulacji magnetycznej. (K) Dane pokazujące średnie (±SEM) zmiany fluorescencji przed i po stymulacji magnetycznej dla każdego stanu n = 225 (EPG), n = 495 (kontrola), n = 475 (O Ca 2+ ), n = 175 ( O Ca 2+ + EGTA), n = 308 (Thapsigargin) & n = 80 (mCherry). Znaczący wzrost [Ca 2+]i w porównaniu z wartościami wyjściowymi zmierzono w neuronach eksprymujących EPG-GFP (*p < 0,0005, test t Studenta).\nBezprzewodowa aktywacja EPG w modelu gryzonia\nNa koniec zajęliśmy się układem motorycznym kończyn gryzoni, który jest dobrze zbadanym obwodem ze zweryfikowanymi i wymiernymi testami aktywacji. Stereotaktyczną iniekcję wirusa zawierającego EPG (pAAV2-CaMKII::EPG-IRES-hrGFP) skierowano do neuronów ruchowych warstwy 5 w prawej pierwotnej korze ruchowej (M1) obszaru kończyn dorosłych szczurów (n = 10). Szczurom kontrolnym wstrzyknięto wirus zawierający tylko GFP (n = 5). Odpowiedzi na stymulację M1 mierzono za pomocą motorycznych potencjałów wywołanych (MEP) kończyn przednich dwa do trzech tygodni po wstrzyknięciach stereotaktycznych. Odpowiedzi MEP rejestrowano jednocześnie w prawej i lewej kończyny przedniej. Cewka TMS do dostarczania bodźca magnetycznego została umieszczona nad linią środkową głowy szczura ( ryc. 4A ). Wyjściowe odpowiedzi można zaobserwować w MEP kończyny przeciwnej u szczurów z ujemnym wynikiem EPG. Co więcej, MEP kończyny przeciwległej do kończyny, w której nie wykonano wstrzyknięcia, wykazuje odpowiedź wyjściową. U szczurów wykazujących ekspresję EPG w prawym M1 stymulacja bezprzewodowa indukowała odpowiedzi MEP w przeciwległej, lewej kończyny przedniej (0,39 ± 0,05 mV), które były znacznie większe niż odpowiedzi MEP zarejestrowane w prawej ipsilateralnej, przedniej kończyny (0,15 ± 0,04 mV, p < 0,005 , test t-Studenta) (rys. 4B ). U szczurów kontrolnych z ekspresją tylko GFP w prawym M1, stymulacja indukowała minimalną MEP w przeciwległej kończyny przedniej, która była znacząco mniejsza w porównaniu z grupą eksperymentalną (0,12 ± 0,03 mV, p < 0,001) i była podobna do odpowiedzi MEP obserwowanej w ipsilateralnej kończyna przednia (0,08 ± 0,01 mV, p > 0,30) (Rys. 4B ) . Średnie opóźnienie odpowiedzi wynosiło 11,3 ± 1 ms, co jest zgodne z raportami o opóźnieniach MEP zarejestrowanych innymi metodami stymulacji mózgu. Wyniki te pokazują, że bezprzewodowa aktywacja EPG daje większy, mierzalny wynik behawioralny in vivo .\nBezprzewodowa stymulacja magnetyczna u szczurów z ekspresją EPG indukuje dużą odpowiedź mięśniową. (A) Karykatura przedstawiająca konfigurację in vivo . (B) Stymulacja magnetyczna kory spowodowała znaczny wzrost amplitudy odpowiedzi MEP w lewej kończyny przedniej szczurów z ekspresją EPG w prawym M1. Szczury kontrolne miały minimalne odpowiedzi MEP. (**p < 0,005) (C) Reprezentatywne ślady odpowiedzi MEP lewej (przeciwstronnej do EPG wyrażającej M1) i prawej (ipsilateralnej do EPG wyrażającej M1) odpowiedzi MEP kończyny przedniej na stymulację magnetyczną.\nPole magnetyczne Ziemi waha się od 22 µT do 50 µT i jest najwyższe na biegunach, a najniższe wokół równika. Ponadto istnieją lokalne zmiany, a także efekty zewnętrzne spowodowane burzami magnetycznymi na Słońcu 42 , 43 . Wiele gatunków zwierząt potrafi wyczuwać niewielkie zmiany w polu magnetycznym 44 , cecha wyrafinowana ewolucyjnie do nawigacji i unikania drapieżników. Jednak mechanizmy umożliwiające odczuwanie magnetyczne są w dużej mierze nieznane.\nJednym z takich organizmów znanych od dziesięcioleci z reagowania na pola magnetyczne jest ryba K. bicirrhis . Tutaj wykazaliśmy, że K. bicirrhis wyczuwa zarówno statyczne, jak i zmienne pola magnetyczne. Zidentyfikowaliśmy EPG jako białko, które reaguje na EMF, chociaż dokładny mechanizm działania i sposób, w jaki aktywność EPG pośredniczy w zachowaniu K. bicirrhis, jest nieznany. Wcześniejsze pomiary wywołanych bodźcem zmian wewnątrzkomórkowego Ca 2+ z użyciem fura-2/AM w narządzie elektroreceptora bańkowego wykazały, że prąd transdukcyjny depolaryzuje błonę wierzchołkową i prowadzi do stymulacji presynaptycznych kanałów Ca 2+ i aktywacji synapsy 18. Odkrycie EPG sugeruje możliwy mechanizm transdukcji sygnału, który indukuje depolaryzację narządu elektroreceptorowego, a tym samym może ułatwić lepsze zrozumienie fizjologii ryb i zdolności wrażliwości elektromagnetycznej.\nBardzo interesujące jest zrozumienie mechanizmów, dzięki którym EPG wyczuwa sygnały magnetyczne i przekłada je na sygnały biochemiczne. Jest to szczególnie trudne, biorąc pod uwagę, że nie ma precedensu podobnego systemu biologicznego. Jednym ze sposobów badania struktury i funkcji EPG jest analiza bioinformatyczna. Analiza wykazała obecność reszt w domenie zewnątrzkomórkowej, które mogą ułatwiać interakcje białko-białko. Dlatego stawiamy hipotezę, że białko EPG może mieć pozakomórkowych partnerów wiążących. Prawdopodobnymi partnerami oddziałującymi innych członków domeny UPAR_LY6 są (a) domeny UPAR_LY6, (b) Kringle, (c) V-set, (d) Tiol_cytolizyna i (e) domeny Somatomedin_B 45. Ponieważ domena UPAR_LY6 może oddziaływać z innymi domenami UPAR_Ly6, białka EPG mogą tworzyć homo-oligomery z powodu oddziaływań między ich zewnątrzkomórkowymi domenami podobnymi do dysku, jak sugeruje dodatkowa ryc. S3 . Inne możliwe interakcje domeny UPAR_LY6 z domenami Kringle, Somatomedin-B i Ig-podobnymi V-set sugerują, że EPG może również oddziaływać z rozpuszczalnymi białkami w przestrzeni zewnątrzkomórkowej, jak również z białkami macierzy zewnątrzkomórkowej. W przypadku ekspresji w neuronach, zewnątrzkomórkowa domena UPAR_LY6 EPG może również wiązać się z fałdami Ig-podobnymi domen zewnątrzkomórkowych (domeny V-set) podjednostek beta 1 lub beta 2 kanałów sodowych bramkowanych napięciem 46 , 47 , 48 , 49. Brak jakiejkolwiek znanej domeny sygnalizacyjnej związanej z EPG prowadzi nas do przekonania, że EPG może działać głównie jako białko powierzchniowe komórki wiążące się z partnerami zewnątrzkomórkowymi lub domenami zewnątrzkomórkowymi pobliskich białek transbłonowych. Nasze wyniki pokazują, bioinformatyki przypuszczalne miejsca glikozylacji, które jest zgodne z jednym hipoteza sugeruje, że bicirrhis K. wyczuwać pole elektromagnetyczne poprzez glikozylowanych kanałów jonowych 50 . Alternatywnie, duża liczba reszt cysteiny może oznaczać, że EPG jest białkiem żelaza siarki 51 , nawet jeśli konwencjonalne wiązania żelaza nie zidentyfikowano i nasze badania biochemiczne nie wykazuje żadnych śladów żelaza. Ostatnio w białkach bogatych w aromatyczne aminokwasy u bakterii stwierdzono przewodnictwo metaliczne52 , 53 , a na koniec wykazano, że niskie pole magnetyczne wpływa na kinetykę enzymów bakteryjnych poprzez sprzężenie spinowo-orbitalne, gdy wiąże się on z gazem ksenonowym 54 . Dlatego należy zauważyć, że pełne wyjaśnienie działania EPG nie zostało jeszcze ustalone.\nOprócz zrozumienia biologicznych podstaw magnetosensacji istnieje duże zapotrzebowanie na nowe nieinwazyjne technologie neuromodulacji. Ostatnio doniesiono o próbach zdalnego sterowania produkcją białek in vivo za pomocą fal radiowych i ogrzewania pola magnetycznego nanocząstek żelaza 12 , 13 . Na przykład, ssaczy kanał wapniowy bramkowany temperaturą (TRPV1) sprzężony z transkrypcją genu insuliny zależną od wapnia został poddany bioinżynierii, aby był aktywowany falami radiowymi 11. Dwa ostatnie badania doniosły o inżynierii sztucznych chimerycznych magnetoczujników, w których kanały jonowe zostały połączone z ferrytyną, która jest wewnątrzkomórkowym białkiem przechowującym żelazo. Zaproponowano dwie główne teorie dotyczące wykrywania pola magnetycznego Ziemi: pierwsza opiera się na magnetycznych nanocząstkach, a druga polega na wykrywaniu za pomocą reakcji magnetochemicznej, w której różne rodzaje par rodników (różne w stanie spinu) powstają w obecności lub brak pola magnetycznego. Ostatnie badania sugerują połączenie dwóch mechanizmów, w których kompleks dwóch produktów genowych ( MagR , który tworzy magnetyczne nanokryształy i Cry , kryptochromowy fotoreceptor) tworzy „magnetyczny kompas” 55.. Jednak ten model zależy od obecności światła do aktywacji. Niemniej jednak, gdy powyżej magneto-czujniki podniesiony kontrowersji 56 . Inne badanie wskazuje na udział kanałów Kir4.2, BK i CaV1.3 w elektrodetekcji. Zgłoś one dwie cząsteczki mechanizm wykrywania w którym pary KCNJ15 / Kir4.2 z poliamin w wykrywanie słabych pól elektrycznych 57 . W przeciwieństwie do odbioru elektromagnetycznego, odbiór elektryczny opiera się na mechanizmie oddziaływania dodatnio naładowanych cząsteczek wewnątrzkomórkowych z kanałami K+ 57 . Wydaje się, że w obu przypadkach istnieje kanał K+, który jest aktywowany w odpowiedzi na drobne zmiany elektryczne 57 , 58. W jednym przypadku zachodzi potrzeba wiązania poliamin (sperminy i spermidyny) w celu spowolnienia aktywności kanału1, aw drugim występuje wstawienie 4 dodatnio naładowanych aminokwasów (KKKER)2. Opisane tutaj mechanizmy są nowe, chociaż należy zauważyć, że mogą występować różnice w wykrywaniu pola elektrycznego i magnetycznego Innym genem związanym z odpowiedzią na pole magnetyczne jest kanał jonowy bramkowany cyklicznym nukleotydem TAX-4 z nicienia Caenorhabditis elegans 16 . Różnice między tym genem a EPG sugerują, że różne organizmy opracowały alternatywne strategie ewolucyjne nawigacji zgodnie ze wskazówkami pól elektromagnetycznych.\nEksperymenty z obrazowaniem wapnia zarówno w komórkach HEK293T, jak i neuronach wyrażających EPG wykazały opóźnienie w odpowiedziach wapnia na stymulację magnetyczną rzędu kilku sekund. Nie jest wykluczone, że przy dalszym dostrajaniu parametrów stymulacji opóźnienie to może ulec skróceniu. Z drugiej strony może być tak, że technologia EPG nie jest zdolna do indukowania odpowiedzi neuronalnych rzędu milisekund; jeśli EPG jest białkiem związanym z błoną, które jest połączone z kanałem jonowym i/lub działa poprzez wtórne przekaźniki, aby wpływać na aktywność neuronalną, jego kinetyka może być rzędu sekund. Niemniej jednak, nawet przy opóźnieniach czasowych rzędu sekund, nieinwazyjna technologia, która umożliwi przejściową, specyficzną komórkowo i lokalizacyjną modulację aktywności neuronalnej, byłaby niezwykle potężna.\nZ powodzeniem ekspresjonowaliśmy EPG w neuronach in vitro , a także ekspresjonowaliśmy EPG w mózgu szczura in vivo . W tym ostatnim przypadku obserwowaliśmy reakcje funkcji mięśni kończyny przedniej, gdy EPG wyrażane w korze ruchowej było zdalnie aktywowane. Dlatego aktywacja neuronów przez EPG daje wymierny wynik behawioralny. Odkrycie EPG jako domniemanego białka reagującego na EMF może otworzyć nowe możliwości zastosowania zdalnej kontroli aktywności komórkowej zarówno w ośrodkowym układzie nerwowym, jak i innych układach nieneuronalnych, w tym w sercu, mięśniach gładkich i szkieletowych oraz komórkach glejowych. Ponadto EPG może ulegać ekspresji pod różnymi promotorami, umożliwiając celowanie specyficzne dla komórki in vivo. W ten sposób technologia EPG może stanowić ekscytujące i cenne narzędzie do badania aktywności neuronalnej na poziomie sieciowym, komórkowym i molekularnym.\nWszystkie procedury na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals i zatwierdzone przez Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania na Uniwersytecie Johnsa Hopkinsa.\nEksperymenty behawioralne na rybach\nRyby K. bicirrhis trzymano w 30-galonowym zbiorniku, który utrzymywano w temperaturze 25°C. Poziomy amoniaku, azotynów i pH były testowane codziennie. Ryby karmiono 2–3 razy dziennie suchymi płatkami. Podczas eksperymentów zakryto boki zbiornika. Sesja behawioralna składała się z 8–10 pojedynczych prób, w tym prób kontrolnych z bodźcem pozorowanym. Udane próby charakteryzowały się odpływaniem ryb od pola elektromagnetycznego. Nagrania wideo z prób analizowano za pomocą oprogramowania Snagit11. Lokalizację i ruch ryb określono przy użyciu oprogramowania do oznaczenia końca ogona każdej ryby przed rozpoczęciem i podczas każdej sekundy próby.\nBudowa biblioteki cDNA\nPodbiblioteczne i poszczególne cRNA transkrybowano stosując trawienie PmeI i zestaw mMESSAGE mMACHINE T7 ULTRA (Life Technologies). Po transkrypcji przeprowadzono reakcję ogonowania poli(A) i traktowanie DNazą I zgodnie z instrukcjami producenta. cRNA oczyszczono przez ekstrakcję fenol:chloroform, a następnie wytrącenie izopropanolem lub wytrącenie LiCl, a następnie rozpuszczono w wodzie wolnej od RNaz.\nMikroiniekcja oocytów i dwuelektrodowy zacisk napięcia\nPodbiblioteczne i poszczególne cRNA przeszukiwano za pomocą dwuelektrodowego cęgowego napięcia (TEVC). Oocyty w stadium V/VI zebrane z Xenopus laevis, jak opisano wcześniej 59 , wstrzyknięto 10 do 200 ng cRNA i utrzymywano w 16°C w roztworze ND97 (w mM): 96 NaCl, 2 KCl, 1,8 CaCl 2 · 2 H 2 O, 1 MgCl 2 x 6 2O, 5 HEPES, pH 7,5/NaOH). Oocyty kontrolne wstrzyknięto 50 nl wody i inkubowano w ND97. Trzy dni po wstrzyknięciu wykonano TEVC (Clampex 9.2) przez nabicie dwóch elektrod (WPI) wypełnionych 3 M KCl o rezystancji < 1 MΩ. Nagrania były filtrowane dolnoprzepustowo przy 300 Hz. Oocyty utrzymywano na poziomie -40 mV przez 232 ms, a następnie zaciskano napięcie między -100 a 40 mV w krokach 20 mV trwających 1,6 ms każdy, a następnie przywracano do wartości -40 mV przez 230 ms (Oocyte Clamp OC-725A, Warner Instruments). Nagrania wykonano w różnych roztworach kąpieli zi bez stymulacji. Wszystkie eksperymenty prowadzono w temperaturze pokojowej (20–23 °C). Standardowy fizjologiczny roztwór zewnętrzny, ND96, zawierał (w mM) 96 NaCl, 2 KCl, 1,8 CaCl 2 ·2H 2 O, 1 mM MgCl 2 · 6H 20,5 mM HEPES, 2,5 mM pirogronian sodu, pH 7,5/NaOH. Analizę danych offline przeprowadzono na niestandardowym oprogramowaniu MATLAB (MathWorks).\nKompleksowe poszukiwania dopasowań dla cDNA EPG z nienadmiarowym genomowym (nr/nt) i wyrażonymi znacznikami sekwencji (dbEST) przeprowadzono odpowiednio przy użyciu oprogramowania BLASTN i TBLASTX, stosując ustawienia domyślne. Sekwencja cDNA EPG została następnie poddana translacji in-silico przy użyciu narzędzia programowego EMBOSS translate (standardowy kod genetyczny) i przeszukana w bazie danych bez nadmiarowości białek (nr) przy użyciu DELTA-BLAST w celu zidentyfikowania konserwatywnych ewolucyjnie domen. Reprezentatywne białka powstałe w wyniku poszukiwań DELTA-BLAST i TBLASTX zostały wybrane do skonstruowania drzewa filogenetycznego białka EPG, ukazującego jego ewolucyjny związek z innymi białkami z tej samej nadrodziny. Drzewo filogenetyczne EPG wywnioskowano metodą maksymalnego prawdopodobieństwa opartą na modelu opartym na macierzy JTT przy użyciu oprogramowania MEGA6. Procent drzew, w których pokrewne taksony są skupione, jest pokazany obok gałęzi. Początkowe drzewo(a) do przeszukiwania heurystycznego uzyskano stosując metodę Neighbor-Joining do macierzy odległości parami oszacowanych przy użyciu modelu JTT. Drzewo jest narysowane w skali, a długość gałęzi mierzona jest liczbą substytucji na miejsce. Analiza obejmowała 55 sekwencji aminokwasowych. Wszystkie pozycje zawierające luki i brakujące dane zostały wyeliminowane. W ostatecznym zbiorze danych znalazły się łącznie 34 pozycje. Sekwencje aminokwasowe bliskich homologów EPG (wywnioskowane z drzewa filogenetycznego) zostały dopasowane przy użyciu MUSCLE (2.0) w celu przewidzenia przypuszczalnej struktury drugorzędowej białka EPG. Analizy TMHMM, J-Pred i Signal-Blast przeprowadzono na sekwencji aminokwasowej w celu zidentyfikowania drugorzędowej struktury sekwencji EPG. Przypuszczalną orientację EPG w błonie przewidziano przy użyciu oprogramowania Polyphobius. Wreszcie trzeciorzędowa struktura EPG została przewidziana przez modelowanie oparte na homologii przy użyciu oprogramowania SWISS-MODEL i została zwizualizowana przy użyciu DeepView.\nKlonowanie EPG do ssaczych wektorów ekspresyjnych\nOtwartą ramkę odczytu EPG sklonowano do pcDNA3.1D/V5-His-TOPO (Life Technologies) w celu oznaczenia EPG do wykrywania przeciwciał w testach biochemicznych (końcowy plazmid: pcDNA3.1-EPG-V5-His). W skrócie, startery do kierunkowego klonowania zawierające sekwencję KOZAK i kodon start zastosowano do amplifikacji PCR genu EPG i klonowania do wektora, zgodnie z instrukcjami produktu. cRNA zamplifikowano z tego plazmidu w celu sprawdzenia konserwatywnej funkcji EPG. W celu wirusowej ekspresji EPG w skrawkach mózgu, EPG trawiono z pcDNA3.1-EPG-V5-His i ligowano do miejsca wielokrotnego klonowania pAAV-IRES-hrGFP (Agilent) przy użyciu miejsc BamHI i XhoI .\nCałkowite RNA wyekstrahowano z tkanki rybnej przy użyciu zestawu Quick-RNA Mini Prep (Zymo Research). Pierwsza nić cDNA została zsyntetyzowana przy użyciu zestawu do syntezy cDNA iScript i starterów oligo dT (BioRad) zgodnie z instrukcjami producenta. Test odwrotnej transkrypcji-PCR (RT-PCR) został zaprojektowany do wykrywania ekspresji mRNA rybiego EPG. Do przodu 5′-CGA TCG CGG AGT CTC TTA CC-3′ i do tyłu 5′-CGG GGT TGC AGT TGT TTG TG-3′ zastosowano jako oligonukleotydy o następujących parametrach cyklu: (1) 2 min gorącego startu w 96°C (2) 35 cykli po 1 min w 94°C, 45 s w 55°C i 1 min w 72°C (4) wydłużanie w 72°C przez 15 min.\nProdukcja wirusa związanego z adenowirusem (AAV)\nAAV o wysokim mianie wytworzono przy użyciu systemu AAV Helper-Free System (Agilent) i zagęszczono przy użyciu zestawu AAV Purification Maxi (Biomiga). Dla miana wirusa (~1 × 10 6 − 1 × 10 9 TU/ml), 10-krotne seryjne rozcieńczenia wirusa transdukowano do komórek HEK293T wysianych w 70-80% konfluencji na 24-studzienkowych płytkach, a komórki o zielonej fluorescencji zliczano 4 dni po zakażeniu. Nieskoncentrowany wirus o niskim mianie wytworzono stosując tę samą procedurę transfekcji, co w przypadku wirusa o wysokim mianie. 72 godziny po transfekcji, komórki i supernatant zebrano i trzykrotnie zamrożono i rozmrożono, odwirowano przy 4000 obr./min w 4°C przez 15 min, przesączono w kolbie filtracyjnej 0,45 µm (Millipore) i przechowywano jako porcje 1 ml w - 80 °C. Ponadto, AAV niosący EPG pod specyficznym dla neuronów pobudzających promotorem CaMKII (AAV2-CamKIIa-EPG-IRES-hrGFP) został wykonany na zamówienie przez Vector Biolabs. Zainfekowane komórki można było zidentyfikować na podstawie pozytywnej ekspresji GFP. Pierwotne miano wirusa 1,9 × 10^13 zostało rozcieńczone 1000 razy przed podaniem do studzienek z hodowlą komórkową.\nNiestandardowa produkcja lentiwirusa (LV)\nLentiwirusa zawierający promotor CMV :: EPG IRES hrGFP i PLV CMV :: IRES mCherry kontroli był zwyczaj wytwarzana z Cyagen (Guangzhou Biosciences Inc.) w funkcjonalnym miana 3,57 ± 2 x 10 9 TU / ml.\nNiestandardowa produkcja przeciwciał EPG\nW Genscript, NY, wytworzono niestandardowe przeciwciało poliklonalne anty-EPG. Analiza sekwencji aminokwasowej białka EPG wykazała, że fragment pomiędzy pozycjami aminokwasowymi 21 i 133 (AA21–AA133) był immunogenną częścią białka (OptymumAntigen™ Design Program firmy GenScript). Po usunięciu N-końcowego peptydu sygnałowego (AA1–AA20) fragment białka (AA21–AA133) ulegał ekspresji w systemie bakteryjnym. Wyrażone białko następnie oczyszczono i zastosowano do immunizacji dwóch królików nowozelandzkich przy użyciu konwencjonalnego protokołu immunizacji. Po 3 rundach immunizacji, skrwawienia produkcyjne od dwóch królików oczyszczono oddzielnie przez powinowactwo w celu wyizolowania przeciwciał poliklonalnych. Wyizolowane przeciwciała były następnie testowane jakościowo za pomocą pośredniego testu ELISA.\nImmunocytochemia, kolokalizacja i analiza statystyczna\nKomórki HEK293T transfekowano pcDNA3.1 EPG przy użyciu odczynnika Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Inc.) i hodowano na szklanych szkiełkach pokrytych poli-L-lizyną (PLL; Sigma-Aldrich). Komórki kontrolne nie były transfekowane. W skrócie, komórki płukano PBS 48 h po transfekcji, utrwalano w 4% paraformaldehydzie przez 30 min, płukano trzykrotnie DPBS i blokowano w 5% NGS w PBS przez 1 godzinę. Komórki permeabilizowano 0,2% Triton X-100 (Sigma-Aldrich) przez 5 minut, ponownie płukano i dwukrotnie barwiono mysim przeciwciałem przeciw Pan Cadherin 1:100 (Sigma-Aldrich) i 1:50 zrobionym kostiumowym króliczym przeciwciałem przeciw EPG przez noc o 4:00 °C. Następnie komórki ponownie przemyto i inkubowano w 1:500 koziej anty-mysiej Alexa 488 i koziej anty-króliczej Alexa 568 (Life Technologies, Inc.) przez 1 godzinę. Jądro barwiono DAPI (25 ng/ml, Sigma-Aldrich) przez 10 min.\nW celu określenia, czy EPG jest zlokalizowane w błonie komórkowej, mamy wspólną ekspresję EPG z immunobarwieniem błonowym. Współlokalizację obrazów konfokalnych między dwoma kanałami w komórkach transfekowanych HEK293T w porównaniu z nietransfekowanymi komórkami kontrolnymi mierzono przy użyciu oprogramowania Huygens Essential (SVI Huygens, Holandia). Określiliśmy ilościowo liczbę pikseli, które miały zarówno kolor zielony (pankadheryna, plama na błonie), jak i czerwony (anty-EPG). Wykorzystano dwa różne testy statystyczne, współczynniki korelacji Overlapping i Pearsona, aby uzyskać informacje ilościowe o stopniu nakładania się przestrzennego między dwoma kanałami.\nObrazowanie wapnia w komórkach HEK293T\nKomórki HEK293T transfekowano pLENTI-CMV::EPG-IRES-hrGFP (4 μg) i Lipofectamine 2000 (Invitrogen) zgodnie ze standardowymi protokołami. Transfekowane komórki inkubowano przez 48 godzin w 37°C przed obrazowaniem. Obrazowanie wapnia przeprowadzono z transfekowanych komórek wysianych na płytki szklane i nakrywkowych inkubowano przez noc w inkubatorze w wilgotnej atmosferze utrzymywano w temperaturze 37 ° C, 10% CO 2 . Komórki płukano trzykrotnie roztworem do obrazowania wapnia (CIS) (125 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 4,5 mM KCl, 10 mM Glukoza, 20 mM HEPES i 2 mM CaCl 2 doprowadzone do pH 7,4 (bez dodatku CaCl 2 dla Ca 2+bufor ad zastąpiono jonami Na). Komórki te ładowano 1 μM fura-2-AM przez 45 min w 37°C. Komórki następnie przemyto trzykrotnie CIS i deestryfikowano przez 30 min w 37°C. Szalki hodowlane zostały następnie załadowane do dostosowanych komór obrazowania i zobrazowane. Komórki GFP-dodatnie wybrano losowo z pola obrazu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą magnesów statycznych o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji.\nW celu scharakteryzowania wspólnej hodowli neuronów, jako marker neuronalny zastosowano króliczą poliklonalną antyneuronalną klasę III β-tubulinę (Biolegend; rozcieńczenie 1:500), mysie monoklonalne anty-GFAP (Dako; rozcieńczenie 1:500) jako marker glejowy i kurze anty GFP (abcam; rozcieńczenie 1:200). Po całonocnej inkubacji szkiełka nakrywkowe dokładnie przemyto DPBS i inkubowano odpowiednio w ośle anty-mysim Alexa 405 (abcam), kozim anty-króliczym Alexa 594 i kozim anty-kurzym Alexa 488 (Thermofisher Scientific), odpowiednio w rozcieńczeniach 1:500 przez 1 godzinę . Obrazy uzyskano przy użyciu pionowego mikroskopu epifluorescencyjnego M2 AxioImager (Carl Zeiss, Oberkochen, Niemcy) wyposażonego w moduł Apotome i obiektywy 10 × /0,45 NA i 20 × /0,8 NA i przetworzono przy użyciu AxioVision, wersja 4.8 (Carl Zeiss).\nPierwotna hodowla neuronów korowych i obrazowanie wapnia\nMieszane kultury glejowe korowe przygotowano z młodych szczurów P0-P2 (Harlan Laboratories). Korę wycięto, zmielono i inkubowano z trypsyną (2,5 mg/ml; Sigma, St. Louis, MO) i DNazą (0,015 mg/ml; Sigma) w 10 ml DMEM (Invitrogen) z 25 µM glutaminianem (30 min. 37°C). Tkankę roztarto, ponownie zawieszono w 10 ml glejowej pożywki podtrzymującej wykonanej z DMEM z 10% płodową surowicą bydlęcą (Hyclone, Logan, UT) i komórki przesączono dwukrotnie przez nylonową siatkę o porach 70 μm. Komórki wysiano i zmieniono pożywkę 24 godziny po wysianiu, a następnie co 2-3 dni. Neurony korowe przygotowano z zarodków szczurzych E18 (Harlan Laboratories). Korę wycięto, zmielono i inkubowano z trypsyną i DNazą w 10 ml pożywki Neurobasal uzupełnionej B27 (Invitrogen) i 200 nM L-glutaminy (Invitrogen) (30 min, 37 °C). Tkankę roztarto, ponownie zawieszono w 10 ml uzupełnionej pożywki Neurobasal i komórki przesączono dwukrotnie przez nylonową siatkę o porach 70 μm. Neurony umieszczono na wierzchu zlewnej warstwy mieszanego złoża glejowego przy gęstości 0,8–1,0 × 10^5 komórek na studzienkę. Wspólne hodowle Neuron-gleju utrzymywano w kompletnej pożywce Neurobasal. W dniu 5 komórki zakażono lentiwirusem zawierającym CMV::EPG-IRES-hrGFP lub pLV-CMV::IRES-mCherry jako kontrolę. Inne komórki kontrolne pozostały niezakażone. Komórki inkubowano w 37°C przez 3 dni po zakażeniu. Hodowle gleju neuronalnego załadowano 1 μM fura-2/AM (Molecular Probes/Invitrogen; 45 min, 37 °C) w roztworze Tyrodesa (119 mM NaCl, 5 mM KCl, 25 mM HEPES bufor, 2 mM CaCl2, 2 mM MgCl2, 6 g/litr glukozy, dostosować pH do 7. 4 z NaOH), a następnie inkubowano przez dodatkowe 30 min w 37°C, aby umożliwić całkowitą hydrolizę acetoksy-metylowej grupy estrowej. Do obrazowania zmian fluorescencyjnych proporcjonalnych do wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia podczas stymulacji zastosowano odwrócony mikroskop Olympus 1 × 71 z podwójną kondensorową kolumną oświetleniową. Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą elektromagnesu o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Do obrazowania zmian fluorescencyjnych proporcjonalnych do wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia podczas stymulacji zastosowano odwrócony mikroskop Olympus 1 × 71 z podwójną kondensorową kolumną oświetleniową. Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą elektromagnesu o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Do obrazowania zmian fluorescencyjnych proporcjonalnych do wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia podczas stymulacji zastosowano odwrócony mikroskop Olympus 1 × 71 z podwójną kondensorową kolumną oświetleniową. Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą elektromagnesu o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą elektromagnesu o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Bodziec magnetyczny był dostarczany za pomocą elektromagnesu o polu magnetycznym 50 mT przez okres 10 sekund. Dane określono ilościowo jako zmiany fluorescencji w czasie po stymulacji magnetycznej. Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 Ca Transfekowane komórki traktowano tapsigarginą (Sigma T9033) w stężeniu 1 μM, a następnie obrazowano 1 godzinę po inkubacji. Do doświadczeń bez wapnia 0 CaUżyto opon 2+ . W doświadczeniach z dodatkowym zewnętrznym buforowaniem Ca2 + zastosowano 3 Mm EGTA.\nWspólne hodowle neuronów-gleju myszy utrzymywano w kompletnej pożywce Neurobasal. W dniu 5 komórki zakażono wirusem AAV2 zawierającym CaMKII::EPG-GFP lub tylko CaMKII::GFP jako kontrolę. Inne komórki kontrolne pozostały niezakażone. Komórki inkubowano w 37°C przez 3 dni po zakażeniu. Hodowle Neurona-glia załadowano 1 μM fura-2/AM (MolecularProbes/Invitrogen; 45 min, 37 °C) w zrównoważonym roztworze soli Hanka z 10 mM buforem HEPES (pH 7,2), a następnie inkubowano przez dodatkowe 30 min w 37 °C, aby umożliwić całkowitą hydrolizę acetoksy-metylowej grupy estrowej. Zmiany w [Ca 2+]i wykryto również przy użyciu genetycznie kodowanych czujników wapnia, AAV5-Syn::GCaMP6s-WPRE-SV40 (Penn vector lab, Filadelfia, PA). Po umożliwieniu dojrzewania kultur neuronów glejowych przez 5 dni, wektor wirusowy GCaMP 6s podano do końcowego stężenia 1 × 10^6 cząstek wirusowych/ml. Neurony obrazowano osiem dni po transfekcji. Do obrazowania zmian fluorescencyjnych proporcjonalnych do wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia podczas stymulacji zastosowano odwrócony mikroskop Olympus 1 × 71 z podwójną kondensorową kolumną oświetleniową. Obliczono procentową zmianę stosunku fura-2 przy wzbudzeniu 340/380 nm względem wartości zarejestrowanych w t = 0 dla każdego neuronu. Neurony GFP-dodatnie, których stymulacja wywołała wzrost uśrednionych stosunków fura-2 o co najmniej jedno odchylenie standardowe, uznano za reagujące.\nStereotaktyczny wstrzyknięcie AAV w mózg szczura\nDorosłe szczury Sprague-Dawley otrzymały stereotaktyczną iniekcję wirusa AAV2 kodującego EPG pod promotorem CaMKII (pAAV2-CaMKII::EPG-IRES-hrGFP) (n = 10) lub AAV2 kodującego tylko GFP (pAAV2-CaMKII::IRES-hrGFP) (kontrola, n = 5). Operacje przeprowadzono w znieczuleniu izofluranem. Igłę do mikroiniekcji umieszczono w prawej M1 do docelowej kończyny przedniej (AP: + 1,6 mm, ML: +3,0 mm, DV: -1,7 mm) i wstrzyknięto 3 µl AAV2. Ponadto szczurom P1 Sprague-Dawley wstrzyknięto stereotaktycznie 1 µl wirusa AAV kodującego EPG lub GFP w prawej komorze bocznej ( n = 10; przednio-tylne, 0,8 mm, przyśrodkowo-boczne, 2 mm, grzbietowo-brzuszne, 1,8 mm) według Li i in . 7 . Szczury umieszczono w aparacie stereotaktycznym pod krioanestezją.\nImmunohistochemia wycinków mózgu\nCztery tygodnie po stereotaktycznym wstrzyknięciu wirusa do komór bocznych w wieku P1, P30, szczurom, którym wstrzyknięto P30 i grupie kontrolnej, której nie wstrzyknięto w tym samym wieku, poddano perfuzji odpowiednio 4% paraformaldehydem (zimny lód) i 10% roztworem formaliny (w temperaturze pokojowej). Swobodnie pływające 50 µm skrawki inkubowano z przeciwciałem poliklonalnym anty-EPG przez 48 godzin w temperaturze 4°C. Skrawki następnie przemyto i inkubowano z biotynylowanym drugorzędowym przeciwciałem (Vector Laboratories, CA) przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Skrawki następnie poddano obróbce do barwienia niklem-3,3'-diaminobenzydyną (Ni-DAB) przy użyciu Vectastain Elite (Vector Laboratories) 60 . Przekroje zobrazowano w AxioImager M2 (Carl Zeiss AG) przy użyciu oprogramowania Axiovision Rel 4.8 do akwizycji obrazu.\nPomiary potencjału wywołanego silnika in vivo\nDorosłe szczury wyrażające EPG ukierunkowane na neurony L5 w korze ruchowej początkowo znieczulano izofluranem, a następnie znieczulenie utrzymywano deksmedetomidyną (0,1 mg/kg/godz. sc). Szczurom wszczepiono elektrody do elektromiografii (EMG) do obustronnego bicepsa (Natus, Pleasanton, CA). Cewka TMS została umieszczona nad głową, a środek cewki znajdował się na środku obustronnej kory ruchowej. Około 75% mocy stymulatora było wymagane do wywołania spoczynkowego progu motorycznego mięśnia bicepsa szczura. Aby zmaksymalizować wykrywanie MEP indukowanego TMS, w całym eksperymencie zastosowano maksymalną moc wyjściową maszyny przy 100% (około 30% progu spoczynkowego motoryki). Rejestrację elektromiograficzną wykonano z następującymi specyfikacjami: filtr górnoprzepustowy przy 5 kHz, filtr dolnoprzepustowy przy 500 Hz, częstotliwość próbkowania przy 25 kHz.3 (FHC, Bowdoin, ME), a dane zebrano przy użyciu jednostki akwizycji danych Micro1401-3 (CED, Cambridge, UK). Za pomocą oprogramowania Spike 2 (CED, Cambridge, Wielka Brytania) zmierzono amplitudy i opóźnienie motorycznych potencjałów wywołanych. Amplitudę określono jako wysokość od ujemnego piku do najwyższego piku, a latencję zdefiniowano jako punkt czasowy, w którym początkowy pik wystąpił po bodźcu. Dla każdego zwierzęcia obliczono średnie z dziesięciu przemiatań.\nNatężenie pola magnesu mierzono konsekwentnie przed eksperymentami wymagającymi stymulacji. W tym celu wykorzystaliśmy miernik Gaussa. Przed rozpoczęciem eksperymentów ze stymulacją ryb użyliśmy linijki do pomiaru odległości między rybą a źródłem stymulacji magnetycznej i wielokrotnie mierzyliśmy natężenie pola za pomocą gausomierza. Informujemy, że nasze wartości były spójne. W przypadku eksperymentów obejmujących stymulację komórkami HEK i neuronami korowymi pole magnetyczne było indukowane przez wykonany na zamówienie system elektromagnesów, który dostarczał impulsy 5 ms z częstotliwością 10 Hz i indukował pole o wartości 50–70 mili tesli. Elektromagnes był trzymany i pozycjonowany za pomocą systemu manipulatora. Komórki w naczyniu umieszczano najpierw pod mikroskopem, a następnie mierzono natężenie pola elektromagnesu gaussometrem z odległości 1 cm. Cewka elektromagnetyczna jest zdalnie sterowana przez wejście elektryczne. Wyłączamy wejście i powoli ustawiamy cewkę elektromagnetyczną nad polem ogniw. Ustaliliśmy, że odległość między elektromagnesem a ogniwami wynosi 1 cm. Następnie włączamy bodziec na okres 10 sekund.\nWyniki i liczby przedstawiają średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). W stosownych przypadkach stosowano dwustronny test t Studenta i ANOVA (o ile nie stwierdzono inaczej).\nZbiory danych wygenerowane podczas i/lub przeanalizowane podczas bieżącego badania są dostępne u odpowiedniego autora na uzasadnione żądanie.\nBoyden, ES, Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G. & Deisseroth, K. Milisekundowa skala czasu, genetycznie ukierunkowana optyczna kontrola aktywności neuronalnej. Nat Neurosci 8 , 1263-1268 (2005).\nArtykuł PubMed WALIZKA Google Scholar\nGradinaru, V., Thompson, KR i Deisseroth, K. eNpHR: halorodopsyna Natronomonas wzmocniona do zastosowań optogenetycznych. Brain Cell Biol 36 , 129-139 (2008).\nArtykuł PubMed Centrum PubMed Google Scholar\nHan, X. i in . Optyczna kontrola dynamiki neuronalnej w skali milisekundowej w mózgu naczelnych innych niż człowiek. Neuron 62 , 191-198 (2009).\nArtykuł PubMed Centrum PubMed WALIZKA Google Scholar\nWang, H. i in . Szybkie mapowanie połączeń synaptycznych za pomocą fotostymulacji u transgenicznych myszy Channelrhodopsin-2. Proc Natl Acad Sci USA 104 , 8143-8148 (2007).\nREKLAMY Artykuł PubMed Centrum PubMed WALIZKA Google Scholar\nAravanis, AM i in . Optyczny interfejs neuronowy: kontrola in vivo kory ruchowej gryzoni za pomocą zintegrowanej technologii światłowodowej i optogenetycznej. J Neural Eng 4 , S143-156 (2007).\nGradinaru, V., Mogri, M., Thompson, KR, Henderson, JM & Deisseroth, K. Optyczna dekonstrukcja parkinsonowskich obwodów neuronowych. Nauka 324 , 354-359 (2009).\nREKLAMY Artykuł PubMed WALIZKA Google Scholar\nLi, N. i in . Plastyczność korowa kierowana optogenetycznie po uszkodzeniu nerwu. Proc Natl Acad Sci USA 108 , 8838-8843 (2011).\nREKLAMY Artykuł PubMed Centrum PubMed Google Scholar\nAlexander, GM i in . Zdalna kontrola aktywności neuronalnej u myszy transgenicznych z ekspresją wyewoluowanych receptorów sprzężonych z białkiem G. Neuron 63 , 27-39 (2009).\nCoward, P. i in . Sterowanie sygnalizacją za pomocą specjalnie zaprojektowanego receptora sprzężonego z Gi. Proc Natl Acad Sci USA 95 , 352-357 (1998).\nZemelman, BV, Nesnas, N., Lee, GA i Miesenbock, G. Bramkowanie fotochemiczne heterologicznych kanałów jonowych: zdalna kontrola nad genetycznie wyznaczonymi populacjami neuronów. Proc Natl Acad Sci USA 100 , 1352-1357 (2003).\nStanley, SA i in . Ogrzewanie za pomocą fal radiowych nanocząstek tlenku żelaza może regulować poziom glukozy w osoczu u myszy. Nauka 336 , 604–608 (2012).\nHuang, H., Delikanli, S., Zeng, H., Ferkey, DM & Pralle, A. Zdalne sterowanie kanałami jonowymi i neuronami poprzez ogrzewanie nanocząstek polem magnetycznym. Nat Nanotechnol 5 , 602-606 (2010).\nChen, R., Romero, G., Christiansen, MG, Mohr, A. & Anikeeva, P. Bezprzewodowa magnetotermiczna głęboka stymulacja mózgu. Nauka 347 , 1477-1480 (2015).\nIbsen, S., Tong, A., Schutt, C., Esener, S. & Chalasani, SH Sonogenetics to nieinwazyjne podejście do aktywacji neuronów w Caenorhabditis elegans. Nat Commun 6 , 8264 (2015).\nLong, X., Ye, J., Zhao, D. & Zhang, S.-J. Magnetogenetyka: zdalna nieinwazyjna aktywacja magnetyczna aktywności neuronalnej za pomocą magnetoreceptora. Nauka. Bull ., 1-13 (2015).\nVidal-Gadea, A. i in . Neurony magnetoczułe pośredniczą w orientacji geomagnetycznej u Caenorhabditis elegans. Życie 4 (2015).\nLissmann, HW & Machin, KE Receptory elektryczne w rybach nieelektrycznych (Clarias). Naturę 199 , 88-89 (1963).\nStruik, ML, Steenbergen, HG, Koster, AS, Bretschneider, F. & Peters, RC Jednoczesne pomiary mobilizacji wapnia i aktywności nerwów aferentnych w narządach elektroreceptorowych znieczulonego Kryptopterus bicirrhis. Por. Biochem Physiol A Mol Integr Physiol 130 , 607-613 (2001).\nCaterina, MJ i in . Receptor kapsaicyny: aktywowany ciepłem kanał jonowy w szlaku bólu. Naturę 389 , 816-824 (1997).\nREKLAMY Artykuł PubMed WALIZKA Centrum PubMed Google Scholar\nPreston, GM, Jung, JS, Guggino, WB & Agre, P. Reszta wrażliwa na rtęć przy cysteinie 189 w kanale wodnym CHIP28. J Biol Chem 268 , 17-20 (1993).\nPubMed WALIZKA Google Scholar\nWachtel, AW & Szamier, RB Specjalne skórne narządy receptorowe ryb. IV. Narządy bańkowe suma nieelektrycznego, Kryptopterus. J Morfhol 128 , 291-308 (1969).\nNagel, G. i in . Channelrodopsyna-1: bramkowany światłem kanał protonowy w zielonych algach. N\nkula Lis 70 23.06.2021 13:02:18\nSugerowany przez Kaczyńskiego przymus “wyszczepień” preparatem, który nie został do końca zbadany może być traktowany jako zbrodnia ludobójstwa. W obecnym systemie władzy, nawet dyskretna sugestia “wodza” może być traktowana jak rozkaz. Będzie wielu chętnych gotowych do przypodobania się “wodzowi”. Gdyby po czymś takim ludzie zaczęli masowo wymierać, to już nie będzie mowy o żadnym trybunale i procesie. Po prostu rozwścieczony tłum dopadnie winnych. Powinni o tym pamiętać zarówno politycy jak i “eksperci”. W sumie nie powinniśmy się bać “wariantu indyjskiego”, ale tracącej rozum władzy. To ona teraz robi wszystko, by stać się największym zagrożeniem.\nkula Lis 70 23.06.2021 14:14:18\nTytułem krótkiego wstępu i wyjaśnienia pragnę podkreślić, że wzmiankowany wariant „Delta” to tylko i wyłącznie nowa oprawa propagandowa dla wariantu „indyjskiego”, który pod tą nazwą się nie sprzedał. Twórcy „pandemii” wcześniej skorygowali błąd podstawowy zamieniając wersje ptasiej i świńskiej grypy na super mocarnego „koronawirusa”, potem tylko udoskonali obraz demona. Tak czy siak dwie rzeczy są pewne, o IV fali mówi się już wprost, dodatkowo Kaczyński straszy przymusowymi szczepieniami, a socjopatyczny ekonomista Niedzielski, aż przebiera nogami, tak mu się śpieszy do kolejnych obostrzeń. Istnieją bardzo poważne okoliczności, dla których rządzący najchętniej IV falę odpaliliby już dziś. Pierwsza to oczywiście koniec cyrku ze „szczepieniami”, zainteresowanie się zatrzymało w okolicach 50%, z czego najmniej 25% zostało zastraszone lub przekupione. Powód drugi to „taśmy Dworczyka” i chociaż póki co nie dzieje się zbyt wiele, to zachowanie samego Dworczyka wraz z resztą rządu i partii wskazują wyraźnie, że najgorsze dopiero przed nimi. O ile ktoś jest na tyle naiwny, aby wierzyć, że do skrzynki Dworczyka włamał się zespół radzieckich hackerów dowodzonych przez samego Putina, to będzie klepał te partyjne mantry i nic do niego nie dotrze. Cała reszta gołym okiem może dostrzec, że mamy do czynienia z wewnętrzną rozgrywką w ramach „Zjednoczonej koalicji”. Dworczyk komuś mocno zalazł za skórę albo Dworczyk jest narzędziem do wyeliminowania Morawieckiego. Wszystkie klocki układają się w tym kierunku, ujawniane mejle biją tylko i wyłącznie w obóz Morawieckiego. Będę się upierał, że jest to pokłosie nieszczęśliwej miłości albo złamanej kariery, krótko mówiąc to nie „ruscy agenci” tylko jakieś niespełnione ambicje lub namiętności odpaliły tę aferę. Obojętnie jak na to wszystko spojrzymy rozpoczął się jeden z ważniejszych wyścigów dla PiS. „Taśmy Dworczyka” w sezonie ogórkowym będą się sprzedawały doskonale, a przykryć je może jedynie IV fala i wariant „Delta”. Dlatego też do mediów wpuszczane są szczury, które straszą Polaków kolejnymi wizjami pomoru. Idealnie w takich przedsięwzięciach sprawdza się Niedzielski, jego wystarczy pokazać na konferencji albo wspomnieć nazwisko, reszta robi się sama. Gdy dodatkowo wyda z siebie jakieś dźwięki, bo on nie mówi, ale generuje samogłoski i spółgłoski, to sukces murowany. Tak też się stało dziś rano i „ewentualny powrót obostrzeń” wskoczył na top. Dodatkowo sygnały „pandemiczne” są wzmacniane zakulisowymi wypowiedziami Kaczyńskiego, który na wyjazdowym posiedzeniu PiS miał zapowiedzieć obowiązkowe „szczepienia”, jeśli naród nie przyjmie „dobrowolnej szczepionki”. Wprawdzie te przecieki zostały opublikowane przez „najgorszy sort” medialny, ale dokładnie to samo Kaczyński powiedział u „niepokornych” Karnowskich. Wyścig trwa i trwać będzie w takim tempie, w jakim będą ujawniane kolejne kompromitujące materiały. „Koincydencją czasową” nazwano wszystkie zgony po pierwszej i drugiej dawce „szczepionki”, w przypadku tych dwóch spraw również zachodzi koincydencja, ale taka prawdziwa. Im więcej przecieków ze skrzynki Dworczyka dostanie się do mediów, tym więcej będzie propagacji poziomej aerozolu „Delta”. Przed ostrą jazdą w tym kierunku Kaczyńskiego i PiS powstrzymuje tylko jedna rzecz. Gdyby teraz ostro podkręcili wskaźniki zachorowań, co nie jest żadnym problemem, to popsuliby propagandowy efekt „skuteczności szczepionek”. Poświęcą jednak tę „wartość”, jeśli będą mieli wyjścia. Jak się zacznie w rządowym i partyjnym przybytku palić na dobre, nikt nie będzie żałował róż. Kaczyński każe rzucić wszystko na jeden front, a większej armaty niż IV fala nie ma. Samo wprowadzenie lub tylko gadanie o obowiązkowych „szczepieniach” wywoła takie emocje społeczne, że przynajmniej część mejli przykryje. Wszystko wskazuje na to, że do IV fali prócz wszystkich dotychczasowych funkcji politycznych, będzie służyć jako gaśnica kroczącej afery.\nPs...Że to nie “ruscy hakerzy” zhakowali skrzynkę Dworczyka, to jest najoczywistsza oczywistość. Gdyby to byli oni, to byliby najgłupszymi w świecie hakerami, żeby się tym natychmiast chwalić i nie tylko “spalać” sobie najlepsze źródło informacji szpiegowskich, ale także bardzo komplikować pracę na innych “kierunkach” hakowania. Podobnych argumentów przeciw “ruskim hakerom” jest znacznie więcej, ale poprzestanę tylko na tym, co powyżej. Konstatacja Pana Piotra, że to jest rozgrywka wewnętrzna PiS wymierzona w Morawieckiego jest (jak zazwyczaj) najbardziej uprawniona. Zapewne “stare PiS” ma już dość Morawieckiego, a perspektywa oficjalnego namaszczenia Morawieckiego na delfina samego Prezesa staje się dla owego “starego PiS” boleśnie realna (nieodległy kongres PiS). Więc przysłowiowa “walka buldogów pod dywanem” gwałtownie się nasila. Podzielam pogląd, że “wariant Delta” i “IV fala” mogą stać się argumentami w tej walce. Pytanie jednak, co wtedy zrobi “suweren”. Bo coraz bardziej wydaje się, że “suweren” ma już tego dość. Nie przeceniam co prawda naszego “suwerena”, bo życie niestety pokazało, że bliżej mu do psa, niż do orła. Ale wszelkie represje mają to do siebie, że jeśli z nimi przesadzić, to może nastąpić niekontrolowany wybuch. Idą więc chyba w Polsce ciekawe czasy. Myślę, że dotąd odpalono tylko niewielką część maili Dworczyka. Najciekawsze zostaną zaserwowane w kulminacyjnym punkcie rozgrywki. Swoją drogą system komunikowania się władzuni bardzo przypomina rozwiązania stosowane przez zorganizowaną przestępczość. To daje dużo do myślenia.\nkula Lis 70 23.06.2021 14:17:19\nJa się obawiam, że to jeszcze nie koniec akcji szczepień. Pod koniec wakacji/ jesienią (albo i wcześniej, kto ich wie), mogą zmajstrować IV falę. Tu się mogą nałożyć tradycyjne infekcje, choroby/ dolegliwości po szczepionkach i kto wie co jeszcze. Pewnie po takiej fali część pobiegnie po szczepionkę. Poza tym metody “soft” będą dalej rozwijane- idziesz do szpitala- musisz się zaszczepić, chcesz u nas pracować- zaszczep się, chcesz tu studiować- to samo. I ja nie mam złudzeń- nikt się nie będzie przejmował czy to zgodne z prawem czy nie. Prawdopodobnie zbliża się masowy wysyp skutków przyjmowania przez ludzi podawanych im preparatów eksperymentalnych. Nazywanie tego NOP było/jest/będzie semantycznym nadużyciem bo to nie są szczepionki! Nie mają nic wspólnego z s-c-2 jako wirusem, acz komuś się wydawało że na kolanie można uczynić człowieka “niewidzialnym” dla wirusa, bo takie było założenie tworzenia preparatów. W skali mikro badając skutki obserwuje się że przyrost zaczyna mieć charakter wykładniczy choć wobec oficjalnej skala testowanej mody, czy też oficjalnej skala podawania nieznanych substancji, niezauważalny. Za to istnieje szacunkowa korelacja pochodnych w funkcji czasu, pomiędzy kryterium ilościowym i jakościowym, w rozkładzie geograficznym, do ilości podań. Danym niestety blisko do spekulacji ze względu na wielkość zbioru, a nie ma możliwości przy politycznym zarządzaniu badania znaczącej stosunkowo do całości ilości przypadków. Z drugie strony mamy zgubny aparat uznaniowości choroby przez reprezentujących tzw medycynę bez potwierdzenia jej samej stosownym i dawno skutecznym badaniem.\nWersja skrócona? Prawdopodobnie dużo więcej pogrzebów będzie już wkrótce i zdaje się, że można zakładać, że to nie z winy Matki Natury.\nkula Lis 70 23.06.2021 14:21:00\nRodzaj opłaty Wartość Opłata ryczałtowa za gotowość do transportu sanitarnego realizowanego przez jedną osobę 960 zł za dobę\nJeśli na to wszystko nałożymy 100% dodatku “kowidowego” do podstawowych pensji lekarzy, pielęgniarek i ratowników, które tylko w ich medialnych i internetowych wypowiedziach wynoszą klika tysięcy złotych, to rzeczywiste 50 000 – 70 000 zł dla lekarza, 10 000 -12 000 zł dla pielęgniarki i tyle samo dla ratownika, deje pełen obraz brudnego biznesu. Szpital w Legnicy od tygodni szuka lekarza, płacąc 54 000 zł miesięcznie i w tę stawkę nie jest wliczony dodatek „kowidowy”, mimo to chętnych brak! Tak się „przypadkowo” składa, że najgłośniej o „pandemii” krzyczą nie politycy, ale „dzielni”: lekarze, pielęgniarki i ratownicy, jednym słowem „służba zdrowia”. PiS z Niedzielskim zbudowali tak patologiczny system, skutkujący masową zbrodnią na życiu i zdrowiu Polaków, że słynni „łowcy skór” z Łodzi, to są przedszkolaki i detaliści. “Medykom kowidowym” opłaca się nic nie robić, udawać leczenie, a najbardziej uśmiercać pod respiratorem. Co jest najgorsze? Ta zbrodnia jest bezkarna, autoryzowana przez „państwo” i „medyczne autorytety”, a ludzi, którzy to ujawniają ściga Naczelna Izba Lekarska, GiS i prokuratura. https://www.kontrowersje.net/kowidowi-lowcy-skor-1920-zl-za-gotowosc-1054-respirator-54-000-lekarz-10-12-000-pielegniarka-i-ratownik/\nPs... Zapomniałeś jeszcze o jednej wycenie “procedury” medycznej. 189 PLN za dobę “rehabilitacji pocovidowej”. Już trwa nabór podmiotów “leczniczych” oraz chętnych. 189 PLN za 1 dobę/1 “rehabilitowany”. Zalecany przez NFZ czas “rehabilitacji” to 4-6 tygodni. Nie wszyscy znajomi króliczka jeszcze się napchali, zatem “łańcuch dostaw” usług “covidowych” został rozszerzony. Oczywiście rehabilitacja ambulatoryjna, nie stacjonarna.\nkula Lis 70 23.06.2021 14:33:57\nW aspekcie finansowym ta hucpa została rozplanowana wręcz wzorowo – to nie jakaś siermiężna amatorszczyzna tylko od razu widać profesjonalną rękę wiadomego pochodzenia. To są takie weszki żerujące na najbardziej podstawowym instynkcie czyli strachu przed śmiercią. Rób co ci mówimy bo inaczej umrzesz. Ale oni tego nie wymyślili. Rząd to zrobił. Konkretne osoby, konkretne nazwiska. Nie mogę pojąć, że narracja o nadmiarowych zgonach nie może się przebić do mainstreamu. Na razie luzują, bo nastroje społeczne grożą wybuchem a niedawno wyszczepiona milicja robi bokami. Taka przerwa na regenerację. Już planują czwartą falę i oczywiście następny lockdown. 15 sierpnia się zbliża i trzeba będzie zepsuć narodowi kolejne święto. Zapewne myślą już o piątej fali od 1 listopada do Sylwestra. Komentarz kobiety z filmu obrazuje o co chodzi w tym cyrku i do czego to wszystko zmierza:\nPoznali się na bandytach. W Indiach wieśniacy nie chcą szczepić się ani poddawać się testom. Film jak ludzie gonią Policję w Indiach z wiosek i rzucają w nich kamieniami !\nkula Lis 70 23.06.2021 14:38:18\nkula Lis 70 23.06.2021 14:39:48\n@Kmieć Covid był testem IQ. Ci głupi będą wysterylizowani … i nie będą przekazywać dalej swojej głupoty.\nŻyjemy w alternatywnym wszechświecie. Wirus w odwrocie od kilkunastu dni a ludzie giną w szpitalach setkami dziennie. Czyżby ratowanie budżetu bo emeryci to ewidentna strata finansowa dla ZUS a młodsi ze słabszym zdrowiem też drenują służbę zdrowia? Niech idą do piachu póki jeszcze dodatki kowidowe funkcjonują. Lekarzom motto i toast do piwka przy pizzy: zdrowie naszych zmarłych. To teraz możemy się domyślać dlaczego Niedzielski nadal nakazuje nosić chorobotwórcze i śmiercionośne maski na świeżym powietrzu. Aby nie nastąpił bunt w stworzonym przez niego systemie należy dostarczać stały strumień pacjentów cierpiących na schorzenia oddechowe. Zawsze można ich “właściwie” wytestować na covid, na przykład poprzez zwiększenie ilości cykli replikacyjnych w testach PCR. Jak już są pacjenci, to można utrzymywać karetki w gotowości, zapełniać łóżka i uruchamiać niszczące płuca respiratory. Tak działa taki system. Ciekawe, czy kartonowe państwo spróbuje kiedykolwiek ukarać jego twórców i beneficjentów. Opatrzność to zrobi na pewno.\nkula Lis 70 23.06.2021 14:45:10