Servizio civile regionale, sÃ¬ al progetto Acli - Bergamo News\nServizio civile regionale, sÃ¬ al progetto Acli\nL'iniziativa Ã¨ stata approvata dalla Giunta regionale su proposta dell'assessore alla Famiglia Giulio Boscagli\nPromuovere il Servizio Civile Nazionale in Lombardia in quanto complesso di risorse capaci di concorrere alla tenuta dei contesti sociali e di welfare a livello locale e\nQuesto l’obiettivo del progetto finalizzato a favorire lo sviluppo del servizio civile in Lombardia come strumento sociale, relazionale, educativo per il contrasto alla cosiddetta ‘vulnerabilità’, ossia la popolazione a rischio di povertà e di esclusione sociale.\nL’iniziativa, che sarà affidata per la sua realizzazione ad Acli (Associazioni Cristiane Lavoratori Italiani) Lombardia, è stata approvata dalla Giunta regionale su proposta dell’assessore alla Famiglia, Conciliazione, Integrazione e Solidarietà sociale Giulio Boscagli.\nNonostante i drastici tagli alle risorse statali destinate al sociale, che hanno portato alla riduzione dei 299,6 milioni di euro del 2008 ai 113 milioni del 2011, Regione Lombardia ha finanziato con 265.000 euro questa iniziativa di promozione del Servizio Civile, che si articolerà sia con azioni rivolte ai giovani e alle scuole, sia come strumento capace di ‘fare sistema’ con altri momenti di sensibilizzazione regionali, nazionali e internazionali del pubblico e del privato sociale.\nIl Servizio Civile sarà presentato come un ‘patrimonio’ dei cittadini, coinvolgendo non solo i giovani ma anche le loro famiglie, il mondo della scuola e dell’educazione, la società civile.\nIl progetto – che avrà una durata di 18 mesi – avrà una Cabina di pilotaggio, composta da tecnici della Direzione generale Famiglia, Conciliazione, Integrazione e Solidarietà Sociale della Regione Lombardia e di Acli Lombardia, che si occuperà della progettazione di dettaglio, dello stato di avanzamento lavori e dei risultati conseguiti. Sarà istituito anche un Coordinamento tecnico operativo, che seguirà la gestione delle attività previste e il loro monitoraggio.\nSono previsti almeno 25 incontri informativi nelle scuole superiori, con particolare attenzione alle scuole di Milano e provincia.\nLe attività avranno inizio dopo la firma di un’apposita convenzione tra Regione Lombardia e Acli Lombardia.


“Chissà”: è il nuovo singolo di Denise Manno - AgorART\n“Chissà”: è il nuovo singolo di Denise Manno\n“Chissà” (etichetta discografica Io Dischi/management Team Media Group) è il nuovo singolo di Denise Manno, in uscita in radio e in digitale a partire da oggi. In contemporanea online anche il videoclip.\nIl singolo, scritto dalla stessa Denise, nasce come sfogo durante i sei mesi di permanenza di Denise presso il Cedial di Palermo, centro per la cura dei disturbi del comportamento alimentare (DCA). Proprio per questo “Chissà” è un tendere la mano in musica a tutte quelle persone che si sentono sole, fallite o escluse dal mondo. Quello dei DCA, infatti, è un problema diffusissimo e spesso sottovalutato che l’artista si propone di mettere in evidenza: “Un mostro che si è insinuato silenziosamente nella mia vita spegnendola giorno dopo giorno. – dice l’artista – Un racconto in cui descrivo perfettamente il mio stato d’animo ogni volta che quelle vocine tormentavano la mia mente. Con il tempo ho imparato ad accettarle, ascoltarle da un’altra prospettiva ma soprattutto a colorarle, perché ero stanca di vedere tutto grigio.”\n“L’uscita del singolo, per mia iniziativa, è stata pensata proprio per il mese di dicembre – prosegue l’autrice – e sarà un piccolo regalo che farò a tutte quelle persone che come me, soffrono o hanno sofferto di DCA. So come ci si sente a non condividere la gioia di un pasto caldo in famiglia durante le cene natalizie, so bene quanto sia dura avere una casa stracolma di cibo e non poter minimamente toccarlo davanti agli altri. Nel mio caso, il ‘binge eating’ mi portava ad abbuffarmi di nascosto, quindi godermi il cibo con la mia famiglia era impossibile ormai. Credo fortemente che dicembre sia il mese più bello dell’anno. Natale è sempre stata la mia festa preferita, si festeggia, si ride, ci si diverte tutti insieme, purtroppo però, per molte persone è solo un incubo. Voglio dare loro speranza, luce e amore, perché in realtà non é mai la fine.”\nChi è Denise Manno?\nDenise Manno, cantautrice ventiquattrenne siciliana, esordisce a tredici anni pubblicando video sketch e cover dei suoi artisti preferiti su Youtube e Facebook, facendosi notare dal pubblico e partecipando in seguito a concorsi ed esibizioni sui palchi in giro per la Sicilia. Nella sua storia personale ci sono stati dei momenti difficili legati a disturbi DCA, superati grazie alla musica e condivisi con la sua community sui social, che conta oltre 4 milioni di views tra TikTok e Instagram e quasi 500k su Youtube. A marzo del 2021 esce il singolo “Kleopatra”, brano in cui la cantatrice palermitana sperimenta diversi Egipt sound e racconta un po’ di sé, della sua musica e del messaggio che vuole far arrivare a tutte le persone che la seguono.\n# Chissà# Denise Manno# in digitale# in radio# nuovo singolo# nuovo video# segnalazione


Sibaritide. Operazione dei carabinieri sull'intero territorio\nSibaritide. Operazione dei carabinieri sull’intero territorio\ndi Informazione e Comunicazione · Pubblicato 20 Maggio 2018 · Aggiornato 20 Maggio 2018\nLe ultime 24 ore a Corigliano Calabro sono state all’insegna dei controlli a 360°.\nNello specifico i militari della Compagnia Carabinieri di Corigliano Calabro da venerdì sera fino a sabato notte hanno effettuato perquisizioni, controlli stradali rinforzati, applicato le ordinanze comunali contro le meretrici, anche mediante l’ausilioin volo garantito da un velivolo dell’8^ Nucleo Elicotteri Carabinieri di Vibo Valentia, che ha supportato i militari impegnati via terra.\nNei serrati controlli stradali sono stati molti i risultati conseguiti: 91 veicoli fermati, 107 persone identificate, una decina di contravvenzione elevate. In particolar modo 4 redatte nei confronti di veicoli colpiti da fermi amministrativi, due nei confronti di soggetti che guidavano senza aver mai conseguito lapatente di guida ed in un caso, addirittura, il trasgressore, P.P., 31 anni di Mirto, commetteva nuovamente la stessa infrazione nell’ultimo biennio, per il qual motivo oltre la sanzione amministrativa di 5 mila euro, scattava la denuncia penale all’A.G. Sempre durante un posto di controllo veniva fermato anche G.B., 29 enne di Castrovillari, il quale sottoposto agli accertamenti presso il locale ospedale per acclarare se fosse sotto gli effetti di sostanze stupefacenti, risultava positivo sia agli oppiacei che ai cannabinoidi. Per tale motivo veniva denunciato all’A.G. ed il veicolo sottoposto a sequestro.\nI controlli si estendevano anche lungo la S.S. 106 fra i Comuni di Corigliano e di Cassano all’Ionio per applicare le ordinanze contro il meretricio ed arginare il pericolosissimo fenomeno dei “clienti”che si fermano lungo l’importante arteria stradale a contrattare le prestazioni sessuali, creando pericolo agli altri utenti della strada I militari ausonici sanzionavano cinque meretrici e diversi uominitrovati in atteggiamenti inequivocabili con le meretrici.\nDurante due distinte perquisizioni domiciliari, invece, rispettivamente i militari della Tenenza di Cassano all’Ionio e della Stazione di Trebisacce, denunciavano a piede libero altrettante persone per detenzione abusiva di munizioni. La prima scattava nei confronti di F.M., cassanese di 30 anni, incensurato, in quanto veniva trovato in possesso di otto cartucce cal. 38 mai denunciate, custodite all’interno di una cassaforte, mentre la seconda veniva eseguita nei confronti di M.V. ultraottantenne di San Lorenzo Bellizzi (CS), in quanto venivano rinvenute 18 munizioni cal. 6,35 mai denunciate. Tutte le munizioni così trovate venivano sottoposte a sequestro penale.\nInfine nella serata di ieri è stato tratto in arresto per detenzione di sostanze stupefacenti M.P., 25 enne cassanese, con diversi precedenti per reati in materia di stupefacenti.\nI militari della locale Tenenza durante la perquisizione dell’abitazione del pregiudicato concentravano la loro attenzione ad un magazzino di uso esclusivo dell’uomo, all’interno del quale vi era un grande tavolo da pranzo. Nello stesso, dopo essere stato dettagliatamente ispezionato, si scopriva che erano state celate diverse dosi di eroina. Esattamente in un interstizio dell’apertura centrale venivano trovate e sottoposte a sequestro penale sette dosi di eroina già tagliate per un peso complessivo di cinque grammi. Ma i ritrovamenti continuavano anche all’interno dell’abitazione, dove venivano scoperti in diversi punti tre bilancini di precisione. Per il cassanese scattavano le manette e dovrà comparire davanti le aule del Tribunale di Castrovillari per rispondere del reato di detenzione di sostanze stupefacenti del tipo “pesante”. (Comunicato )\nCARIATI: RINVENUTE 2000 PIANTE DI CANAPA INDIANA\ndi Informazione e Comunicazione · Published 26 Agosto 2015\nFINCALABRA: 189.000 € PER MANDARE IMPRESE AMICHE IN VACANZA IN CINA. SENZA PRODOTTI. SOLO SPRECO DI RISORSE. PRESENTE DELEGAZIONE DI ROSSANO E DINTORNI.\ndi Informazione e Comunicazione · Published 7 Dicembre 2015 · Last modified 30 Agosto 2016\nFusione. Bevacqua:”Dilazioni inammissibili”.\ndi Informazione e Comunicazione · Published 18 Gennaio 2018


Aforismi, citazioni e frasi - carne\n- AFORISMI E CITAZIONI - 'carne'\n2. Anche se uno è schiavo, è di carne come noi; nessuno infatti nacque mai schiavo per legge di natura; fu il caso che fece schiavo il suo corpo. (Filemone)\n3. Carne di porco ed uomini di guerra durano poco. (G. Verga)\n4. Chi semina nella sua carne, dalla carne raccoglierà corruzione; chi semina nello Spirito, dallo Spirito raccoglierà vita eterna. (S. Paolo)\n5. Colui che non è perfettamente morto a se stesso cade facilmente in tentazione ed è vinto in cose da nulla e disprezzabili. Colui che è debole nello spirito ed è, in qualche modo, ancora volto alla carne e ai sensi, difficilmente si può distogliere del tutto dalle brame terrene; e, quando pur riesce a sottrarsi a queste brame, ne riceve tristezza. (T. da Kempis)\n6. Colui che non si sottopone lietamente e spontaneamente al suo superiore, dimostra che la carne non gli obbedisce ancora perfettamente, ma spesso recalcitra e mormora. Impara dunque a sottometterti prontamente al tuo superiore, se vuoi soggiogare la tua carne. Infatti, il nemico di fuori lo si vincerà più presto, se sarà stato sconfitto l'uomo interiore. (T. da Kempis)\n7. E' tutta carne di porco che la salsa rende variata. (M. de Montaigne)\n8. I santi di legno scolpito hanno certo fatto più per il mondo che quelli in carne e ossa. (Georg C. Lichtenberg)\n9. Il vizio lascia nella carne come un'ulcera, un pentimento nell'anima, che sempre graffia e s'insanguina da sé stessa. (M. de Montaigne)\n11. la vera pace del cuore la si trova resistendo alle passioni, non soggiacendo ad esse. Non già nel cuore di colui che è attaccato alla carne, non già nell'uomo volto alle cose esteriori sta la pace; ma nel cuore di colui che è pieno di fervore spirituale. (T. da Kempis)\n12. Non c'è peggiore e più insidioso nemico dell'anima tua, di te stesso, quando il corpo non si accorda con lo spirito. Per avere vittoria sulla carne e sul sangue, devi assumere un totale e vero disprezzo di te. Tu hai ancora invece un eccessivo e disordinato amore di te stesso; per questo sei tanto esitante a rimetterti interamente alla volontà degli altri. (T. da Kempis)\n13. Numerosi sono coloro che ascoltano più volentieri il mondo che Dio, e seguono più facilmente i desideri della carne che la volontà di Dio. Il mondo promette cose da poco e che durano ben poco; eppure ci si fa schiavi del mondo, con grande smania. Io prometto cose grandissime ed eterne; eppure il cuore degli uomini resta torbido. (T. da Kempis)\n14. Occorre che la carne sia imbrigliata e costretta a stare soggetta, fino a che non sia pronta a tutto; fino a che non sappia accontentarsi, lieta di poche e semplici cose, senza esitare di fronte ad alcuna difficoltà. (T. da Kempis)\n15. Povertà, umiltà, abiezione, disprezzo circondano il Verbo fatto carne; ma noi dall'oscurità in cui questo Verbo fatto carne è avvolto comprendiamo una cosa, udiamo una voce, intravediamo una sublime verità. Tutto questo l'hai fatto per amore, e non ci inviti che all'amore, non ci parli che di amore, non ci dai che prove di amore. (S. Pio da Pietrelcina)\n16. Se non mangerete la carne del Figliolo dell'Uomo e non berrete il suo sangue, non avrete in voi la vita. Chi mangia la mia carne e beve il mio sangue ha la vita eterna, ed io lo risusciterò nell'ultimo giorno. (Gesù)\n17. Se ti senti ardere dalla febbre dell'impurità, accostati al Banchetto degli Angeli, e la Carne immacolata di Cristo ti farà puro e casto. (S. Cirillo)\n18. Se ti senti spinto dall'intemperanza, cibati della Carne e del Sangue di Cristo, che nella vita terrena praticò sì eccellentemente la sobrietà, e diventerai temperante. (S. Cirillo)\n19. Seppie e carne vaccina impoveriscono la cucina. (Proverbio pugliese)\n20. Vedo di solito che gli uomini, nei fatti che loro si presentano, si dilettano volentieri a cercarne la ragione che a cercarne la verità: lasciano là le cose, e si dilettano a trattar le cause. (M. de Montaigne)\n21. Noi siamo nauseati dalla guerra, noi non desideriamo combattere. Il pensiero di essa riempie ora di spavento i nostri cuori, eppure noi ci rimpianziamo di cadaveri. Simili a corvi, noi viviamo e ci nutriamo di carne, indifferenti alla sofferenza e al dolore che noi così facendo causiamo: se così noi trattiamo per sport o per profitto, animali privi di difesa, come possiamo sperare in questo modo di conseguire la pace di cui diciamo di essere così ansiosi? Noi preghiamo per essa, sopra ecatombi di massacrati, Dio, mentre oltraggiamo la legge morale. Così, la crudeltà genera la sua progenie: la guerra. (George Bernard Shaw)\ndelusa dessert diga\nAVG: 904.3865 (1103)


Elon Musk sfida il lockdown: finirà in carcere? | Hardware Upgrade\ndi Rosario Grasso pubblicata il 12 Maggio 2020, alle 10:41 nel canale Tecnologia\nElon Musk, CEO di Tesla, ha confermato di voler riaprire la fabbrica automobilistica della sua azienda in California, vale a dire l'iconico stabilimento di Fremont. L'istrionico imprenditore ha detto che supervisionerà di persona la riapertura delle linee di produzione. "Se qualcuno deve essere arrestato, chiedo che sia io" ha scritto su Twitter.\nMusk ha speso buona parte del weekend a scrivere post accusatori contro l'ordine restrittivo voluto dai funzionari della contea di Alameda al fine di limitare il contagio da Coronavirus. L'ordine ha limitato tutte le attività ad eccezione di quelle essenziali a livello precauzionale sulla scia delle misure intraprese nella maggior parte delle nazioni colpite dalla pandemia sulla base del modello italiano.\nLe limitazioni nella contea dove si trova la fabbrica Tesla sono in vigore da metà marzo e inizialmente Musk si è adeguato, predisponendo la chiusura della fabbrica in data 23 marzo. Ma nel fine settimana ha cambiato idea e ha iniziato a protestare in maniera vigorosa, presentando un ricorso contro l’ordinanza.\nIl Governatore della contea, Gavin Newsom, ha dichiarato di aver avuto "conversazioni molto costruttive" con i funzionari della contea e i rappresentanti di Tesla, sperando di poter offrire all'azienda garanzie per poter riaprire già dalla prossima settimana. Anche il supervisore della contea di Alameda, Scott Haggerty, ha dichiarato al New York Times che la contea e Tesla erano vicini ad un accordo in modo che la fabbrica riaprisse il 18 maggio. Ma per Musk è troppo tardi e nel fine settimana si è mosso come abbiamo appena raccontato.\nNel fine settimana a Fremont sono state realizzate le prime auto dopo la quarantena e l'azienda ha chiesto a tutti i dipendenti in congedo di tornare al lavoro. I dipendenti che si sentissero a disagio possono rimanere a casa, ma in quel caso entrerebbero in un regime di congedo non retribuito. Già nelle scorse settimane Tesla aveva predisposto riduzioni di stipendio e congedi non pagati per 'gestire i costi' durante la pandemia.\nAltre case automobilistiche come Ford e General Motors hanno previsto di ripristinare la produzione negli Stati Uniti alla fine del mese. Avrebbero voluto farlo prima, ma devono affrontare la resistenza del sindacato dei lavoratori United Auto Workers.\n"Abbiamo comunicato a Tesla che può continuare con le operazioni di base minime fino a quando non concorderemo con loro un piano che possa essere attuato in conformità con l'ordine di sanità pubblica locale", si legge in un dispaccio diramato dalla contea di Alameda. Musk ha già risposto che sta valutando di spostare la produzione in Texas o in Nevada.\nSp3cialFx12 Maggio 2020, 10:48 #1\nPerché far lavorare in sicurezza i dipendenti quando lasci loro la possibilità di stare a casa senza stipendio?\nCmq il top è "ufficiale non elettoooo!1!!!". Un genio che diventa il più classico degli analfabeti funzionali quando prende in mano Twitter.\neureka8512 Maggio 2020, 11:07 #2\nIn carcere ? dipende a quale Loggia Neoliberale appartiene\nKappaEA12 Maggio 2020, 11:24 #3\nNon posso dire che sia giusto, ma posso capirlo. Come tanti imprenditori, con questa pandemia rischia il fallimento, e fallire per un azienda come la sua significa lasciare a casa migliaia di persone e famiglie.\nÈ un pò scegliere il male minore forse? non ne ho idea sinceramente, speriamo vada bene per tutti quelli che si trovano in questa situazione.\npabloski12 Maggio 2020, 11:39 #4\nSe fosse davvero preoccupato per l'azienda, non avrebbe lanciato quella shitstorm su Twitter pochi giorni fa, che è costata a Tesla la perdita di ben 15 miliardi di dollari di capitalizzazione.\nE lo sapete ( lo scrivo io, perchè tanto i media non ne parlano mai ) che sta svendendo tutto? Comprese le sue ville?\nMa mai possibile che non si riesca a capire che Musk è uno che butta idee lì, ci butta dietro miliardi ( prestati da banche e finanziatori vari ) e poi come va va? E infatti adesso le banche sono passate all'incasso, e il "nostro eroe" sta con le pezze al fondoschiena.\nQuest'ultima trovata poi...gli unicorni della Silicon Valley hanno bisogno di un bel bagno di realtà ( e di umiltà ).\nSputafuoco Bill12 Maggio 2020, 11:42 #5\nBravissimo Elon Musk!\nChiudere tutto è una pazzia che non serve a contener e il contagio, ma solo a distribuire fame, miseria, disoccupazione e morte.\nHo apprezzato molto anche il riferimento al funzionario "non eletto", dato che da quelle parti la rappresentanza popolare ha sempre un grande valore, e nessuno subisce il fascino per l'uomo forte o la dittatura.\nTesla deve riaprire subito, non ci sono scuse o alternative.\n300012 Maggio 2020, 11:56 #6\nChe cosa simpatica la gente che dà dell'incapace a una persona che ha realizzato così tante cose Perchè non ci fate vedere voi come si fa? Per non parlare poi della gente che nel 2020 crede ancora di prendere in giro il prossimo scrivendo 111!1-Gomblotto-sciikimiki Siete meglio voooooooooi\nMarko_00112 Maggio 2020, 12:10 #7\nalternative ci sono e le hanno pure calcolate (fonte CNN)\nper aver la mandria protetta servono, in usa, durante\ntutto il 2020 e buona parte del 2021, circa 5oo.ooo anime da\nsacrificare sull'altare del covid-19\nah! prima che me lo scriva\nse avesse un'incidenza del 3% sui 500k di sani senza patologie pregresse\n(che poi bisogna intendersi, i calcoli renali sono patologia pregressa\nma dubito che, se curati e/o operati, incidano più di tanto sul tenore\ndi vita di chi li ospita, idem per l'ipertensione, o per patologie cardiache\noperabili con stent o by-pass che consente la prosecuzione della vita quasi normale)\ncome è avvenuto in Italia, vogliono dire, in usa, 15.ooo\ndefunti in età tra i 20 ed i 50 anni.\nsenza contare quelli che passano per l'ospedale - non in intensiva -\nche posso portarsi appresso, una volta usciti, omaggi ai polmoni,\nal sistema circolatorio ed ai reni e che, al momento, non sono sicuri\nche ritornino alla normalità.\nin Italia - 2 mesi 4 regioni - quel 3% sono oltre 900 persone\nDinofly12 Maggio 2020, 12:12 #8\nDa questo post si evince chiaramente come tu non abbia la minima idea di come funzionino i mercati, come funzioni il sistema finanziario, di come funzioni una società come Tesla, di cosa significhi essere socio e cosa significhi essere amministratore.\nE che sull'onda della tua ignoranza parli a vanvera. Complimenti.\nDi sicuro sei nel paese giusto. L'ignoranza è alla guida delle menti e del paese.\nTakuya12 Maggio 2020, 12:13 #9\nIntravedo della sottile ironia\ncavaliereombra12 Maggio 2020, 12:43 #10\nA ben vedere nemmeno tu hai scritto alcunché su come funzionino i mercati, come funziona il sistema finanziario, come funzioni Tesla e cosa signifiochi essere socio o amministratore.\nHai semplicemente attaccato l'utente sopra.\nErgo non puoi dichiararti tanto migliore di lui e probabilmente anche te sei nel paese giusto, di quelli che son tuttologi e arroganti, ma solo da dietro un monitor e finché raggiungono Wikipedia e riescono a fare una ricerca su Google.\nA meno che ora ci spieghi tutto quanto hai elencato sopra per filo e per segno e ci confermi di essere un genio della finanza. Al che però c'è da chiedersi come mai non sei al posto di Musk, ma solo un utente qualsiasi.


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L'alimentazione mediterranea in vetrina, al Cibus Med\nLa più grande rassegna del “Mediterranean food”, Cibus Med, si terrà alla Fiera del Levante, a Bari, dal 3 al 5 Maggio 2005.\nCon oltre 450 espositori, 26.000 visitatori professionali, delegazioni provenienti da 25 paesi, Cibus Med rappresenta la più importante, nonché unica nel panorama fieristico mondiale, esposizione interamente dedicata all’alimentazione mediterranea.\nIn passerella ci saranno tutti i "protagonisti" della cucina mediterranea: la pasta, l’olio, le conserve vegetali, il vino. La tradizione e l’innovazione: il vecchio ed il nuovo, il buono ed il bello.\nParticolare attenzione sarà rivolta, in questa quinta edizione di Cibus Med, all'olio, a cui il salone dedica Oleum – Il percorso degli oli pregiati d’Italia, una rassegna fieristica interamente dedicata ai produttori di olio d’oliva. In contemporanea, inoltre, si terranno le fasi finali del Concorso Internazionale “Leone d’Oro”, giunto alla sua quattordicesima edizione. Organizzato dalla Corporazione dei Mastri oleari è ritenuto è il riconoscimento più prestigioso nel panorama internazionale e nel corso degli anni ha incoronato oli provenienti da tutto il mondo.\nSempre negli stessi tre giorni, e sempre a Bari, si terrà anche la prima Convention mondiale degli importatori del prodotto alimentare italiano, che vedrà la presenza per tre giorni di oltre cento importatori di prodotto alimentare italiano provenienti dai cinque continenti: la tre giorni di lavoro sarà occasione per incontrare le aziende espositrici della rassegna Cibus Med; per ascoltare dalla viva voce degli importatori le problematiche inerenti l’esportazione dei prodotti alimentari italiani; per entrare in contatto con nuovi mercati e nuove realtà economiche. Un’occasione unica che farà di Bari, appunto, per tre giorni la capitale dell’export alimentare italiano.


Twiga Beach: Foto Venerdì 18 Agosto nella discoteca più esclusiva\n1 novembre 2017 Discoteca Forte dei Marmi\nIl Venerdì sera in Versilia è il Venerdì del Twiga Beach.\nPer la tua notte in Versilia, scegli il meglio, scegli il Twiga.\nDiscoteca, ristorante e spiaggia Twiga Beach: info e prenotazioni via SMS o WhatsApp al ☎ 347.477.477.2 (risponde Luca).\nEcco i contatti del servizio di info e prenotazioni che c’è dietro alle più entusiaste recensioni Twiga Club. Prova il servizio che offre tutta l’assistenza che cerchi per trasformare la tua idea di serata a Forte dei Marmi in realtà. Tutto attraverso il tuo cellulare e senza neppure bisogno di fare una telefonata.\nProva adesso, invia il tuo messaggio e ricevi tutte le informazioni che cerchi: scritte, precise e chiare, con preventivi, link e menu.\nIn più puoi, allo stesso numero Twiga e con la stessa conversazione puoi riservare la tua cena o il tuo tavolo in tempo reale e ricevere la conferma scritta delle condizioni concordate.\nUn servizio che rende questo sito unico, non solo per la sua ottimizzazione web e per la cura del sui seo copywriting.\nIl divertimento Twiga Marina di Pietrasanta non si ferma…\nLa discoteca più esclusiva d’Italia ti aspetta in Versilia.\nClicca su inaugurazione discoteca Twiga e scopri la data del prossimo appuntamento firmato Twiga Beach…\nTwiga Beach: discoteca, ristorante e spiaggia a Forte dei Marmi.\nIl Venerdì il weekend delle discoteche Versilia comincia al Twiga Beach.\nLe foto Twiga Beach ti mostrano la punta dell’iceberg del divertimento che ogni sera raggiunge livelli altissimi al Twiga Beach.\nUna discoteca così esclusiva che solo chi prenota una cena o un tavolo si può garantire – rispettando i criteri di selezione per età e abbigliamento – l’ingresso. Qui, infatti, la stragrande maggioranza di coloro che NON hanno prenotato, ogni sera, restano per ore fuori dal locale, non riuscendo ad accedere al divertimento.\nInfo, prezzi Twiga, disponibilità e prenotazioni.\nQuello disponibile, solo attraverso questo questo sito è un servizio di info e prenotazioni davvero completo che può darti accesso a tutto: preventivi, disponibilità ma anche consigli e indicazione per essere tra gli ospiti più graditi del locale. Ecco come fare:\nFoto Venerdì Twiga Beach 18 Agosto in Versilia.\nEcco i volti del divertimento nella discoteca più esclusiva di Forte dei Marmi.\nTwiga Beach Club. Il leader nel mercato del divertimento nazionale e internazionale.\n“Twiga Beach” è il brand icona in tutto il Mondo di esclusività, divertimento e stravaganza. Valori che si concretizzano in serate uniche in grado di riscrivere – come un copywriter – le leggi del Mondo della Notte.\nIl Club di Marina di Pietrasanta rappresenta la concretizzazione dell’idea di spettacolarizzazione del divertimento firmata da Flavio Briatore. Al Twiga Beach tutto è show. In questo locale le bottiglie di champagne o superalcolico non si bevono semplicemente, ma creano un rito che scandisce il ritmo della serata. Persino la selezione all’ingresso è uno show, con folle fuori dal locale che desiderano entrare ma solo pochissimi fortunati alla volta che riescono a entrare. Anche per questo chi conosce il Twiga Beach e le sue regole preferisce prenotare una cena o un tavolo e accedere così al meglio che il locale ha da offrire.\nStorytelling: Luca B.\nArticolo precedenteDiscoteche VersiliaArticolo successivoTwiga Marina di Pietrasanta: Foto Sabato 19 Agosto


1. Valutazione del mobbing\nE’ importante distinguere il concetto di Stress Lavoro Correlato da quello di mobbing che non è una malattia, ma ne può essere la causa. La definizione della sentenza n. 3875/09 della Corte di Cassazione ...\n2. Valutazione ed elaborazione del burnout\nE’ importante distinguere il concetto di Stress Lavoro Correlato e il fenomeno conosciuto come Burn-Out. Il burnout si riferisce alle “halping profession”, ovvero tutte quelle professioni ...\n3. Valutazione del danno da lavoro stress correlato\nCos’è lo stress lavoro-correlato? Si definisce Stress , quello stato, che si accompagna a malessere e disfunzioni fisiche, psicologiche o sociali che consegue dal fatto che le persone ...\n5. primavera 2016: INCONTRI CON I MEDICI DI FAMIGLIA accreditati ECM\n6. primavera 2015: INCONTRI CON I MEDICI DI FAMIGLIA (accreditati ECM)\n7. autunno 2014-primavera 2015: INVITI AL BEN-ESSERE PSICOLOGICO - a SCUOLA\n... E 20/02/2015 Liceo Scientifico Statale "Galileo Galilei" di Selvazzano. Relatori: Alessandra Favaro, Marta Cogo, Lucia Ceschin L’ERA DEL FAR WEB 06/03/2015 Liceo Scientif ...\n8. Dipendenza da Internet\n9. Psicoterapia Individuale\n10. Valutazione Psichiatrica e Terapia Psicofarmacologica\n11. Lucia Ceschin\nPSICHIATRA - PSICOTERAPEUTA COGNITIVO-COSTRUTTIVISTA CURRICULUM\n12. Professionisti OLD\n2016 ott PRENDERSI CURA LE SFIDE DEL PAZIENTE ONCOLOGICO Orari Informazioni e proposte medici di famiglia Le cose cambiano Psicoterapia della famiglia smettere di fumare Gianluca Gorini GENITORI INSIEME A CODEVIGO Psicoterapia di gruppo depressione Professionisti OLD Le intermittenze del cuore specialisti Movimento e salute medico di base Seminario intensivo metodo Simonton ipnosi Corsi di ginnastica mentale attacco di panico sostegno separati desensibilizzazione Vincenza Argentiero


Michael Fassbender: prime foto da Steve Jobs - Webnews\nMichael Fassbender: prime foto da Steve Jobs\nAppare su Instagram una delle primissime immagini di Michael Fassbender nel ruolo di Steve Jobs, una perfetta ricostruzione del lancio dei computer NeXT.\nLa fase tormentata è finalmente finita per il nuovo film su Steve Jobs, dopo i problemi di sceneggiatura e le numerose défaillance di cast. Arrivano oggi le prime immagini semi-ufficiali di Michael Fassbender nel ruolo dell’iCEO, nel periodo dell’esilio in NeXT. Gli scatti, apparsi sulla piattaforma Instagram, proverrebbero direttamente dal set.\nLa fase sul campo è entrata nel vivo per la pellicola in corso di produzione, per la regia di Danny Boyle e la sceneggiatura di Aaron Sorkin. Nelle ultime settimane le macchine da presa sono state intraviste presso l’abitazione d’infanzia dell’iCEO, ma anche all’Opera House di San Francisco, forse per riproporre uno dei lanci storici targati Steve Jobs. Un fatto che sembra essere confermato dalle fotografie apparse sulla stampa, dei contenuti dal significato davvero inequivocabile.\nMichael Fassbender appare adagiato sullo schermo di un computer di colore nero, non un Apple ma un NeXT. Sulla locandina la scritta, tradotta dall’inglese, “L’informatica avanza al prossimo livello”, dove prossimo è proprio indicato dalla parola “NeXT”. Dalle ricostruzioni storiche, di conseguenza, è molto probabile che il set ricalchi la presentazione del primo computer di Steve Jobs in esilio, avvenuta nel 1988 sempre all’Opera House di San Francisco.\nMichael Fassbender Depicted as Steve Jobs in New Movie Set Poster http://t.co/Gm9pD5iN6h by @julipuli pic.twitter.com/j8K8SvMffs\n— MacRumors.com (@MacRumors) March 17, 2015\nCome si è già potuto appurare in precedenti immagini trapelate dal set, la somiglianza tra l’attore irlandese e il co-fondatore di Apple non è stravolgente, ma già questa locandina permette allo spettatore di immedesimarsi perfettamente nel ruolo. La prima impressione, infatti, è che la ricostruzione degli eventi fondanti per la vita dell’iCEO sia particolarmente fedele, soprattutto a livello estetico.\nLa pellicola è attesa per l’arrivo nelle sale statunitensi il prossimo 9 ottobre, mentre le tempistiche per il rilascio europeo non sono ancora ben note. Oltre a Fassbender, nel cast figurato Seth Rogen nel ruolo di Steve Wozniak, ma anche attori e attrici del calibro di Kate Winslet, Katherine Waterson e Jeff Daniels.\nSe vuoi aggiornamenti su Michael Fassbender: prime foto da Steve Jobs inserisci la tua email nel box qui sotto:


Comune di San Casciano: piano degli investimenti triennale da circa 10milioni di euro - Il Gazzettino del Chianti e delle colline fiorentine\nIl sindaco Roberto Ciappi: "Lavoro progettuale premiato. Ci sono stati assegnati 660mila euro dalle linee di finanziamento del PNRR. Serviranno per le piazze di Mercatale e La Romola"\nLa piazza de La Romola\nSAN CASCIANO – “Azione e vicinanza, sono le due parole chiave che sintetizzano trasversalmente il percorso della giunta Ciappi”.\nL’amministrazione comunale di San Casciano fa il punto su bilancio di previsione 2022, bilancio triennale opere pubbliche, indicando un “modus operandi orientato a migliorare la qualità della vita del territorio e a riservare una particolare attenzione alle priorità delle frazioni, alle esigenze delle famiglie, degli studenti, dei lavoratori, dei cittadini e dei turisti”.\nÈ questo il percorso che segnerà gli obiettivi e le finalità del 2022, “forte di un’esperienza – dice ancora l’amministrazione comunale sancascianese – quella dell’anno precedente, che è stata caratterizzata da una presenza e da un lavoro senza sosta, tesi a fronteggiare l’emergenza e nello stesso tempo a dare fiducia e prospettiva attraverso iniziative e servizi che hanno trasmesso vitalità e infuso coraggio al territorio”.\n“Il 2021 è stato indubbiamente un anno complesso – dichiara il sindaco Roberto Ciappi – nel corso del quale abbiamo impiegato tutti gli sforzi possibili dal punto di vista economico e amministrativo-organizzativo a sostegno delle fasce più deboli della popolazione, un obiettivo che siamo riusciti a centrare grazie all’erogazione di misure puntuali e con la preziosa collaborazione della rete di solidarietà attivata con i cittadini e le tante associazioni locali”.\n“L’impegno del volontariato – aggiunge – si è rivelato fondamentale per fronteggiare le criticità economiche e sociali causate dello stato emergenziale. Voglio ancora una volta estendere un grazie di cuore a tutta la comunità che ha mostrato senso di responsabilità e spirito altruistico, senza il contributo di ciascuno e dei giovani volontari che si sono messi a disposizione nei mesi del lockdown non saremo mai riusciti a dare tutte le risposte di cui necessitava il territorio”.\n“Il tema centrale che ispira l’azione amministrativa – dicono ancora dal palazzo comunale – è rigenerazione urbana. Le opere pubbliche programmate e in corso di esecuzione nascono dalla scelta di riqualificare e valorizzare gli spazi e gli immobili pubblici esistenti in un’ottica di sicurezza, sostenibilità e qualità ambientale. Scuole, parcheggi, piazze e cimiteri sono al centro di vari interventi in fase di realizzazione”.\n“E’ in dirittura di arrivo – fa sapere il primo cittadino – l’intervento di riqualificazione della copertura della scuola dell’infanzia di Chiesanuova che è stata opportunamente coibentata, stiamo concludendo i lavori per l’ampliamento del cimitero della Romola con la realizzazione di 50 loculi e 200 ossari, ultime battute anche per la risistemazione del parcheggio di via dei Fossi che entro febbraio acquisirà una nuova pavimentazione in calcestruzzo architettonico”.\nA proposito di lavori pubblici, un’importante novità riguarda il PNRR.\n“Abbiamo ottenuto un importante finanziamento – precisa il sindaco Ciappi – pari a 660mila euro complessivi, nell’ambito delle risorse messe a bando dalle linee del PNRR, un risultato che premia il lavoro puntuale di ricerca di risorse pubbliche attuato con la professionalità della nostra macchina comunale, caratterizzata da alta competenza. La struttura del comune è una delle nostre migliori qualità”.\nL’amministrazione comunale destinerà tali risorse alla riqualificazione dei luoghi simbolo della socialità, identitari dei borghi chiantigiani: le piazze delle frazioni ed in particolare quelle di Mercatale e La Romola.\nQuanto al futuro il sindaco annuncia che “in questo senso a parlare sono i numeri del piano degli investimenti. Che per il triennio 2022-2024 ammontano complessivamente a circa 10milioni di euro”.


e.Scape Tasmanian Wilderness Cafe Gallery, St Marys - Ristorante Recensioni, Numero di Telefono & Foto - TripAdvisor\nIl/La migliore Gelaterie a St Marys\nSud Pacifico Australia Tasmania St Marys Ristoranti: St Marys e.Scape Tasmanian Wilderness Cafe Gallery\nN. 4 di 5 Ristoranti a St Marys 21 Main St, St Marys, Tasmania 7215, Australia+61 3 6372 2444+ Aggiungi sito web\nMostra anche MappaSatellite Gli aggiornamenti della mappa sono stati sospesi. Ingrandisci per vedere informazioni aggiornate. Reimposta lo zoom Aggiornamento della mappa in corso... Torna alla mappa Dettagli 4,5 6 recensioniEccellente51%Molto buono33%Nella media16%Scarso0%Pessimo0%Orari del ristorante + Aggiungi orariPUNTEGGI ServizioCucinaQualità/prezzoLOCALITÀ 21 Main St, St Marys, Tasmania 7215, AustraliaTutti i dettagli Migliorate questo profiloUn vegetariano può mangiare bene in questo ristorante?Sì No Non so Un vegano può mangiare bene in questo ristorante?Sì No Non so Questo ristorante è adatto ai bambini?Sì No Non so Consiglieresti questo ristorante per il brunch?Sì No Non so Questo ristorante è accessibile con sedia a rotelle?Sì No Non so Questo ristorante è adatto alle famiglie?Sì No Non so Un celiaco può mangiare bene in questo ristorante?Sì No Non so Consiglieresti questo ristorante per la colazione?Sì No Non so Questo ristorante offre cibo da asporto?Sì No Non so Questo ristorante dispone di Wi-Fi gratuito?Sì No Non so Grazie per l'aiuto. Condividi un'altra esperienza prima di partire. Scrivi una recensioneRecensioni (6)Valutazione Eccellente3Molto buono2Nella media1Scarso0Pessimo0Tipo di viaggiatoreFamiglieIn coppiaDa soloAffariAmiciPeriodo dell'anno Mar-MagGiu-AgoSet-NovDic-FebLingua Tutte le lingue Italiano (6)Inglese (6)Lingua Italiano (6)Inglese (6)Scopri i commenti dei viaggiatori: Questa recensione è stata tradotta dall'inglese con traduttore automatico Di cosa si tratta? Per ricevere consigli da un numero più ampio di viaggiatori, questa recensione è stata tradotta automaticamente in italiano e potrebbe non essere una copia perfetta dell'originale. Ci auguriamo possa esserti utile nella programmazione del tuo viaggio. Mostra traduzione automatica? SìNoAndi-SherrynSt Marys, Australia21Recensito 26 luglio 2016 Sorpresa..cambiamento di destinazione dell'edificioEsprimi un giudizio sulla traduzione.Grazie per aver inviato una modifica. Stiamo esaminando il suggerimento. Dai un punteggio Buona OK Poco chiara Migliora la traduzione Grazie per la tua valutazione\nQuesta recensione è stata tradotta dall'inglese con traduttore automatico Di cosa si tratta? Per ricevere consigli da un numero più ampio di viaggiatori, questa recensione è stata tradotta automaticamente in italiano e potrebbe non essere una copia perfetta dell'originale. Ci auguriamo possa esserti utile nella programmazione del tuo viaggio. Mostra traduzione automatica? SìNoAnet49TasLaunceston, Australia3028Recensito 5 gennaio 2016 tramite dispositivo mobile Modifica le mani...PiùEsprimi un giudizio sulla traduzione.Grazie per aver inviato una modifica. Stiamo esaminando il suggerimento. Dai un punteggio Buona OK Poco chiara Migliora la traduzione Grazie per la tua valutazione\nQuesta recensione è stata tradotta dall'inglese con traduttore automatico Di cosa si tratta? Per ricevere consigli da un numero più ampio di viaggiatori, questa recensione è stata tradotta automaticamente in italiano e potrebbe non essere una copia perfetta dell'originale. Ci auguriamo possa esserti utile nella programmazione del tuo viaggio. Mostra traduzione automatica? SìNoRosemary HAustralia13962Recensito 15 ottobre 2015 Ci sono un sacco di merci interessanti e esotiche a vedere mentre si mangia.PiùEsprimi un giudizio sulla traduzione.Grazie per aver inviato una modifica. Stiamo esaminando il suggerimento. Dai un punteggio Buona OK Poco chiara Migliora la traduzione Grazie per la tua valutazione\nQuesta recensione è stata tradotta dall'inglese con traduttore automatico Di cosa si tratta? Per ricevere consigli da un numero più ampio di viaggiatori, questa recensione è stata tradotta automaticamente in italiano e potrebbe non essere una copia perfetta dell'originale. Ci auguriamo possa esserti utile nella programmazione del tuo viaggio. Mostra traduzione automatica? SìNoDeanne LSt Marys, Australia3319Recensito 28 aprile 2015 Molto vicino a il miglior pasto che abbia mai mangiatoPiùEsprimi un giudizio sulla traduzione.Grazie per aver inviato una modifica. Stiamo esaminando il suggerimento. Dai un punteggio Buona OK Poco chiara Migliora la traduzione Grazie per la tua valutazione\nQuesta recensione è stata tradotta dall'inglese con traduttore automatico Di cosa si tratta? Per ricevere consigli da un numero più ampio di viaggiatori, questa recensione è stata tradotta automaticamente in italiano e potrebbe non essere una copia perfetta dell'originale. Ci auguriamo possa esserti utile nella programmazione del tuo viaggio. Mostra traduzione automatica? SìNowildy07Perth, Australia4811Recensito 8 novembre 2012 Ottime focaccine e tèPiùEsprimi un giudizio sulla traduzione.Grazie per aver inviato una modifica. Stiamo esaminando il suggerimento. 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Dai un punteggio Buona OK Poco chiara Migliora la traduzione Grazie per la tua valutazione\nAggiornamento elenco in corso… In zona Ristoranti nelle vicinanzePurple Possum135 recensioni A 0,11 km Mt Elephant Fudge52 recensioni A 0,14 km A Man's Cave Giftware/ The Bank Teahouse51 recensioni A 0,13 km St Marys Coachouse Restaurant15 recensioni A 0,09 km Attrazioni nelle vicinanzeGone Rustic Studio and Gallery11 recensioni A 0,25 km Eureka Farm70 recensioni A 12,85 km Evercreech Forest Reserve13 recensioni A 20,38 km East Coast Natureworld375 recensioni A 29,39 km Domande e risposteRicevi risposte dal personale della struttura e.Scape Tasmanian Wilderness Cafe Gallery e dai visitatori precedenti.Nota: la tua domanda verrà pubblicata sulla pagina Domande e risposte.Verifica: Regolamento per la pubblicazioneInviate\n21 Main St, St Marys, Tasmania 7215, Australia Località:


Anno Scolastico all'Estero | Programmi Exchange Student | VIVA\nHome/Mondo Insieme – Anno scolastico all’Estero\nMondo Insieme – Anno scolastico all’EsteroAndrea2019-08-30T11:00:04+00:00\nTi piacerebbe vivere un’esperienza indimenticabile nel Paese dei tuoi sogni, condividendo la quotidianità con una famiglia ospitante, frequentando una scuola locale ed immergendoti nella cultura e nello stile di vita del posto?\nVIVA, grazie alla partnership con Mondo Insieme, ti permette di trascorrere un anno scolastico all’estero in 40 destinazioni diverse, e sei tu a scegliere dove andare!\nPartecipare ad un programma di scambio culturale per un bimestre, trimestre, quadrimestre, semestre o anno scolastico ti aprirà molte porte del tuo futuro: vivrai un percorso unico ed emozionante, conoscerai meglio te stesso, acquisirai una più ampia maturità e sperimenterai nuove situazioni che nessun libro o scuola potranno mai insegnarti! Amplierai i tuoi orizzonti, ti metterai alla prova uscendo dalla comfort zone, e diventerai un Cittadino del Mondo!\nPerché solitamente si parla di Quarto Anno all’Estero?\nCon Quarto Anno all’Estero o Quarta Superiore all’Estero ci si riferisce al fatto che la maggior parte degli studenti decide di partecipare a questa esperienza culturale durante il proprio Quarto Anno della Scuola Superiore. Comunque, è permesso spendere il Terzo Anno all’Estero o a volte in casi particolari anche il Quinto Anno.\nTutti gli anni circa 10.000 studenti italiani decidono di vivere un periodo di Liceo all’Estero, e le partenze sono in aumento costante negli ultimi anni, segno che il passaparola degi ragazzi che tornano supporta la sempre maggiore attenzione rispetto a questo tipo di programma da parte delle famiglie italiane.\nPrendere parte ad uno scambio culturale significa, allo stesso tempo, dare e ricevere: riceverai tanto dal Paese che ti ospiterà e, contemporaneamente, diventerai ambasciatore dell’Italia, perché chi ti conoscerà si farà automaticamente un’idea della cultura italiana.\nEssere un Exchange Student è quindi un vero privilegio!\nLe famiglie ospitanti – selezionate dalle Organizzazioni locali secondo le modalità stabilite dai rispettivi governi – accolgono gli studenti come membri della propria famiglia, non come ospiti, e permettono loro di realizzare un grande sogno. Si crea un legame internazionale che durerà per tutta la vita.\nLa scuola che frequenterai farà parte dello stesso distretto o area della famiglia ospitante, sarà pubblica o privata, ti darà modo di conoscere nuovi amici, di imparare un altro metodo di studio e di confrontarti con una realtà scolastica diversa da quella italiana. Il programma è riconosciuto dal MIUR, Ministero della Pubblica Istruzione.\nDESTINAZIONI DELL’ANNO SCOLASTICO ALL’ESTERO\nÈ capitato a tutti di incantarsi davanti ad un planisfero e pensare: la mia prossima meta sarà…Il mondo è tutto da scoprire e per il tuo anno scolastico all’estero la scelta è davvero infinita:\nStati Uniti e Canada – da sempre le destinazioni più gettonate dagli Exchange Students di tutto il mondo – garantiscono incredibili possibilità di personalizzazione dell’esperienza;\nPaesi europei, a noi vicini ma così diversi tra di loro;\nPaesi asiatici – il cui fascino è in aumento, sia da un punto di vista culturale che linguistico ed economico;\nPaesi dell’Emisfero Sud, per un cambiamento totale, anche delle stagioni. Dalla vita Down Under alle meraviglie naturali del Sudafrica, fino al brio dell’America Latina.\nL’Anno ascolastico all’estero così come il semestre e il trimestre sono riconosciuti dal MIUR\nLo studente che scegliesse il programma Exchange student non perderebbe l’anno scolastico in Italia.\nIl Trimestre, Semestre e Anno all’Estero sono riconosciuti infatti dal Ministero dell’Istruzione, dell’Università e della Ricerca della Repubblica Italiana e regolati dalla Nota Miur 10.04.2013, Prot. N. 843.\nLa nota infatti evidenzia l’importanza che le esperienze di studio all’estero rivestono per gli studenti, e vengono considerate parte integrante dei percorsi di formazione e istruzione.\nLo studente in questi periodi risulta essere assente giustificato e verrà quindi riammesso presentando la pagella che verrà consegnata dalla scuola del Paese estero.\nL’Anno all’Estero, oltre all’apprendimento di una lingua straniera, consente anche di vivere un’esperienza di interscambio culturale e di contatto con una cultura straniera.\nSe vuoi avere tutte le informazioni e ottenere risposta a ogni tua domanda sull’Anno Scolastico all’Estero contattaci per organizzare un primo Colloquio Informativo Gratuito!\nPotrai conoscere uno dei nostri consulenti e farti un’idea realistica e completa!


I MICRORNA E LA REGOLAZIONE DELLA SINTESI PROTEICA - PDF\nDownload "I MICRORNA E LA REGOLAZIONE DELLA SINTESI PROTEICA"\n1 Marco Marino I MICRORNA E LA REGOLAZIONE DELLA SINTESI PROTEICA INTRODUZIONE Sebbene le tecniche per analizzare i livelli di espressione degli RNA siano conosciute da almeno un paio di decine di anni i MicroRNA sono sempre stati poco considerati dagli studiosi per via della comune idea che l unico destino dei filamenti di RNA fosse quello di dare origine a proteine. In base a tale dogma tutti gli RNA di corte dimensioni venivano scartati, a volte venendo etichettati come miseri prodotti di degradazione di RNA più lunghi. Tale dogma è stato messo in crisi nel 1993 da Lee, il quale scoprì in C.Elegans le funzioni del gene Lin-4. Questo gene, essenziale regolatore della divisione cellulare allo stadio larvale, dava origine ad un RNA di 61 nucleotidi che veniva processato in un secondo tempo in un RNA più corto di 22 nucleotidi di lunghezza. Tale prodotto è risultato essere perfettamente complementare ad un tratto della regione 3 UTR del gene Lin-14 e, cosa strana, quando Lin-4 veniva espresso si assisteva alla scomparsa sia della proteina Lin-14 sia del messaggero dal quale veniva tradotta. Questa scoperta ha destato forte scalpore ma non è stata presa in debita considerazione poiché non esistono ortologhi di Lin-4 all interno delle altre specie (si è poi scoperto in seguito che ciò è dovuto alla divergenza tra le specie). Tale permanenza nell ombra è però bruscamente terminata nel 2000, quando, sempre in C.Elegans, il gruppo di Reinhart ha scoperto il gene Lin-7, gene con funzione analoga a quella di Lin-4 ma con un bersaglio tuttora sconosciuto. Tale gene presenta però ortologhi sia in Drosophila che nell uomo e tale scoperta ha di fatto iniziato la caccia ai MicroRNA, rivelando che anche gli RNA possono giocare un ruolo nella regolazione della sintesi proteica. Tuttora si conoscono circa 150 MicroRNA nell uomo, ma tale numero (secondo alcuni) è probabilmente destinato a crescere. TERMINOLOGIA Prima di iniziare a descrivere i meccanismi di biogenesi e di azione dei MicroRNA è opportuno fare una breve panoramica terminologica-funzionale sull argomento. Innanzitutto il termine più corretto per indicare IN GENERALE l insieme degli RNA di piccole dimensioni è smallrna (Rna piccoli). Tale famiglia si divide in quattro sottofamiglie, suddivisione che rispecchia le differenze qualitative e funzionali dei vari smallrna. Tali sottofamiglie sono: 1) sirna (Short Interfering RNAs): piccoli RNA a doppio filamento di nucleotidi generati da RNA a doppio filamento molto più lunghi (di solito un singolo RNA ripiegato ad hairpin). Tali RNAs mediano il silenziamento genico portando alla degradazione dell RNA messaggero cui sono PERFETTAMENTE complementari, oppure provocano il silenziamento della trascrizione andando a rimodellare la cromatina a livello delle sequenze codificanti i geni cui sono complementari. 2) MiRNA (MicroRNA): piccoli RNA lunghi nucleotidi codificati nel genoma di molti organismi. Tali RNA non sono però perfettamente complementari alla sequenza dell RNA bersaglio (uno o due mismatch) e di fatto ne provocano solo un blocco della traduzione senza causarne la degradazione 3) TncRNAs (Tiny Non Coding RNA): sono stati scoperti di recente in C.elegans e sono lunghi nucleotidi. Non possiedono una forte complementarietà di sequenza e sembrano non essere generati da hairpin sebbene molti di essi sembrano essere processati da Dicer. I tncrna non sono conservati nelle specie e non si conosce la loro funzione\n2 4) SmRNA Small Regulatory RNA): Sono gli ultimi ad essere stati scoperti e sono RNA a doppio filamento di 20 nucleotidi. Sono stati isolati da cellule staminali neuronali dell ippocampo di topi adulti. Questi RNA sono complementari a sequenze genomiche dette silencer neurone-specifici e sembrano essere utili per evitare che geni neuronali si esprimano in cellule che non neuronali. Nei neuroni invece funzionano al contrario reclutando proteine in grado di aumentare l espressione di geni neuroni-specifici. Tali smallrnas vengono trascritti dal genoma e possono essere organizzati in tre modi diversi: 1) Possono trovarsi clusterizzati in regione genomiche discrete ed essere regolati da un promotore proprio. Questi smallrna vengono trascritti in forma policistronica e clivati nelle forme attive in un secondo tempo. (Geni Hox e cluster del cromosoma 13 nell uomo) 2) Possono essere generati dagli introni di geni attivamente trascritti. In seguito allo splicing di mrna immaturi gli introni possono essere riciclati e usati come repressori dell mrna da cui derivano con un meccanismo di feedback negativo. In questo caso sono regolati dal promotore del gene da cui derivano 3) Possono anche trovarsi singolarmente sparsi nel genoma regolati da un promotore proprio e non essere parte di un cluster. BIOGENESI DEI MicroRNA La prima fase della biogenesi dei MicroRNA (e dei sirna) consiste nella trascrizione di una breve sequenza genomica da parte di una RNA polimerasi non ancora identificata. Tale trascrizione porta alla formazione dei cosiddetti primary MicroRNA (pri-mirna) la cui lunghezza può variare da qualche centinaia a qualche migliaia di basi. Tali pri-mirna, che contengo i mirna in forma policistronica, si ripiegano fino ad assumere una struttura terziaria presentanti diversi loop dai quali deriveranno successivamente i vari mirna. I pri-mirna vengono poi successivamente riconosciuti da Drosha (una delle RNAsi III presenti a livello nucleare) a livello dei loop e clivati nei pre-mirna (mirna immaturi) di lunghezza pari a circa 70 nucleotidi e caratterizzati da una peculiare estremità protruding al 3 di due nucleotidi. Tale struttura è importante per gli step di maturazione successivi in quanto il riconoscimento dei mirna da parte delle proteine coinvolte in tale processo avviene a livello di questa regione, caratteristica del clivaggio da parte delle RNAsi III. Drosha è presente solo in Drosofila e negli organismi superiori, indice che si tratta di una aggiunta recente in termini evolutivi, sebbene meccanismi come l RNA interference sia già presenti in lievito. Successivamente il pre-mirna viene riconosciuto dalla proteina esportina-5 a livello dell estremità protruding al 3 la quale ne premette la traslocazione nel citoplasma con un meccanismo Ran-GTP mediato. Il pre-mirna traslocato nel citoplasma viene riconosciuto da Dicer a livello della protrusione al 3. Il riconoscimento è mediato da un dominio di Dicer detto PAZ, molto specifico per le suddette protrusioni. Tale dominio è però un aggiunta recente alla struttura di Dicer poiché il Dicer di lievito non lo possiede suggerendo la presenza di altri metodi di riconoscimento del substrato. Il clivaggio da parte di Dicer completa la maturazione dei mirna e dei sirna nella forma finale di filamenti double-stranded di 22 nucleotidi.\n3 A questo punto i destini dei mirna e dei sirna si dividono: i mirna reclutano la proteina ago-1 (la quale possiede anch essa un dominio PAZ) che successivamente recluta le proteine Gemin3 e Gemin4 generando un complesso in grado di bloccare la traslazione dei ribosomi sull RNA messaggero bloccandone di fatto la traduzione ma non causandone la degradazione. I sirna invece reclutano lo stesso la proteina ago-1 (sempre perché possiede il dominio PAZ) ma quest ultima in questo caso recluta tutti gli elementi del complesso RISC portando alla fine alla degradazione del messaggero. Sebbene la proteina chiave coinvolta sia sempre la stessa (ago-1), come si può notare gli effetti sono profondamente diversi: ciò può essere causato dal fatto che il mirna, non essendo perfettamente complementare all mrna bersaglio, causi una distorsione della doppia elica RNA- RNA quando si lega al messaggero. Tale distorsione si riflette sulla struttura terziaria della proteina Ago-1 che finisce col reclutare cofattori diversi rispetto a quelli che recluta quando si trova a legare un sirna (RISC), il quale, essendo perfettamente complementare all mrna bersaglio, non genera di fatto distorsioni sulla doppia elica RNA-RNA e fa assumere alla proteina ago-1 una conformazione diversa.\n4 Concludendo: Il destino del mrna dipende dai fattori reclutati da Ago-1. Il reclutamento differenziale può essere spiegato con una diversa conformazione della proteina Ago-1a seconda della presenza o dell assenza di distorsioni nella doppia elica di RNA causata Da eventuali mismatch tra il messaggero e lo smallrna.\n5 Come può la cellula interrompere il meccanismo di silenziamento? Tuttora il meccanismo esatto non si conosce, tuttavia si ipotizza il reclutamento di una RNAasi T che cliva l estremità protruding al 3 generando un estremità blunt non più riconosciuta dai domini PAZ e portando allo smembramento dei complessi attivi (o rendendo i mirna e i sirna invisibili agli effettori). DROSHA E IL COMPLESSO MICROPROCESSOR Contrariamente a quanto spiegato sopra, Drosha non è enzimaticamente attivo se non viene reclutato in un complesso proteico ben preciso. In particolare Drosha può essere reclutato all interno di due complessi proteici distinti: uno definito grande (large) e uno piccolo (small). Il complesso grande comprende 19 polipeptidi tra cui RNA-associated proteins (elicasi, ribonucleasi, proteine con domini di legame all RNA) e la famiglia delle proteine coinvolte nel sarcome di Ewing, mentre il complesso piccolo comprende solo Drosha e la proteina DGCR8, che deleto provoca la sindrome di DeGeorge. Tale scoperta è stata fatta mediante trasfezione in cellule Hek293T con il costrutto Flag-Drosha ed eseguendo successivamente una IP con anticorpo α-flag. È il complesso più piccolo ad essere stato definito Microprocessor in quanto si è dimostrato essere sufficiente per processare i pri-mirna in pre-mirna. Tale osservazione è supportata da tre risultati sperimentali: 1) Microprocessor purificato mediante IP α-flag mostra una forte attività catalità in vitro.\n6 2) Coimmunoprecipitazione con α-flag dei costrutti flag-dgcr8 mostrano la presenza di Drosha e la purificazione di Microprocessor usando i costrutti Flag-DGCR8 mostra la medesima attività enzimatica in vitro. 3) L attività catalitica può essere ricostituita in vitro con Drosha e DGCR8 ricombinanti.\n7 DGCR8 è una proteina evolutivamente conservata che contiene un dominio di legame ad RNA a doppio filamento e un dominio WW in grado di legare una regione ricca in proline di Drosha. La sua delezione provoca la sindrome di DeGeorge. Riguardo al complesso grande non si sa molto: è grossomodo della stesse dimensioni del complesso SWI-SNF ma poco si sa dire sulla sua funzione. Non si può escludere una sua attività nella processazione dei mirna in quanto se ne rivela una debole attività in vitro e inattivazione di alcuni suoi componenti in vivo mostra solo un lieve calo dei livello di MiRNA maturi, non però paragonabili agli effetti dell inibizione di DGCR8. E probabile che il coinvolgimento del complesso grande nella maturazione dei mirna sia solo marginale e che tale complesso venga usato solo nel processamento dei RNA pre-ribosomiali (come già dimostrato). In ogni caso l enzima Drosha rappresenta un chiaro esempio di come l attività di un enzima sia dovuta al pool di cofattori che vengono reclutati con esso. PREDIZIONE DEI mirna A LIVELLO GENOMICO La capacità dei mirna di essere attivi anche senza una perfetta complementarietà di sequenza ha profonde implicazioni sia nella determinazione dello spettro dei geni bersaglio sia nel loro uso tecnico nel silenziamento genico. Tuttora esistono molti approcci bioinformatici per predire la struttura dei mirna, soprattutto per determinare se una sequenza gnomica può dare origine o meno ad un mirna.\n8 Uno dei server più usati è MFOLD: esso, immettendo una sequenza genomica come imput, è in grado di predire con un piccolo margine di errore se essa può dare origine ad un pri-mirna. I criteri usati nell analisi sono: - dimensioni della finestra di nucleotidi da considerare - lunghezza del loop - match tra le basi (numero ed estensione) - numero ed estensione dei mismatch - variazioni alle estremità 3 o 5 (le quali, fornendo regioni di riconoscimento per le proteine effettrici sono soggette a constrain strutturali maggiori) Ogni parametro viene valutato con uno score e tanto più alto è lo score finale tanto è probabile che quella sequenza gnomica dia origine effettivamente ad un pri-mirna. Un approccio più rapido può consistere nell usare BLASTN per cercare la sequenza di un mirna all interno di un genomi di specie diverse, al fine di identificarlo direttamente dall intero genoma. Tale approccio può rivelarsi estremamente impreciso data la divergenza di sequenze tra le specie. TECNICHE DI ANALISI DELL ESPRESSIONE DEI mirna Ci sono tre motodologie per analizzare i livelli di espressione dei mirna: il primo consiste nell eseguire un classico northern blot con una sonda contro il mirna di interesse, il secondo prevede l uso dei microarray e il terzo consiste nell applicare una metodologia abbastanza recente chiamata MIRmasa. ANALISI MEDIANTE MICROARRAY Recentemente è stata messa a punto una variante del microarray classico per poterlo ottimizzare nei confronti dei mirna, in particolare per garantire che tale approccio possa identificare un mirna direttamente dal suo precursore. Per ottenere ciò sono stati disegnati due chips di DNA contenenti le sequenze MIR (microrna) attualmente conosciute introducendole in frammenti di 60-mer in varie condizioni. Il primo chips è stato usato per vedere se i MIR venivano riconosciuti all interno dei loro precursori: per ogni MIR sono state scelte le loro regioni upstream e downstream presenti nel genoma e come controllo sono stati usati frammenti con mutazioni all interno e al di fuori delle sequenze dei MIR e/o fiancheggiati da sequenze non umane (per discriminare i MIR in condizione di precursori o MIR singoli). Tale chip di controllo è stato ibridizzato con lcrna (labeled crna) di HeLA cells come controllo e si è visto dare un segnale proporzionale all abbondanza dei mirna in tali cellule. Il secondo chip è stato usato per discriminare la sensibilità della tecnica di fronte ad alcune variabili tra cui la disposizione dei MIR, la loro localizzazione all interno della sonda (NB: le sonde sono di 60 nt mentre i mirna sono lunghi 20 nt) e la presenza di mismacht. Sono state usate anche sonde contenenti MIR in singola, doppia e tripla copia. Il chip includeva un totale di 150 MIR umani presentati in varie situazioni e/o fiancheggiati da sequenze non umane. Risultati: la comparazione tra sonde contenenti il precursore+mir e sonde MIR+sequenze non umane davano segnali simili mentre precursori senza MIR o con forme di essi troncate davano segnali sensibilmente minori o addirittura nessun segnale. Mismatch nelle regioni esterne ai MIR non causavano perdita di segnale mentre mismatch all interno dei MIR provocavano un forte calo del segnale. Controlli con solo sequenze esterne non davano segnale. Il secondo chip includeva MIR in tre posizioni diverse all interno delle sonde per valutare se la posizione dei MIR aveva importanza: MIR localizzati al 5 della sonda davano segnali forti mentre MIR al 3 davano segnali più modesti (a parità di sequenza). Ciò può essere spiegato con il fatto che le sonde venivano legate al supporto del chip a livello delle regioni 3 per cui tanto più il MIR si trovava al 3 della sonda (e quindi alla base del chip) tanto più il segnale risultava smorzato dal supporto. MIR in duplex o triplex (doppia o tripla copia) davano ancora segnali più bassi, probabilmente a causa di autoquenching dei fluorofori usati. L introduzione di mismatch al 5 causavo un forte calo del\n9 segnale mentre l introduzione di mismatch al 3 causavano un decremento più modesto (ovviamente a parità di mismatch). E stato eseguito anche un test di ibridazione a 60. L aumento di temperatura aumenta le condizioni di stringenza nell ibridazione e si è osservato che in tale condizione l introduzione anche di un solo mismacht all interno della sequenza dei MIR abbatteva il livello del segnale. Con tre mismacht il segnale praticamente si azzervava. Ciò può avere due importanti applicazioni: innanzitutto è possibile discriminare i mirna dai sirna e inoltre è possibile analizzare la diversa espressione tissutale dei vari mirna in quanto mirna con anche solo una base di differenza hanno espressioni tissutali diverse (è quindi una analisi molto più sensibile del northern).\n11 ANALISI MEDIANTE MIRMASA Questa semplice tecnica è stata inserita da un paio d anni nello studio dell espressione dei mirna (o dei sirna). L estratto totale di RNA viene incubato contemporaneamente con due sonde: una complementare ad una metà del mirna di interesse marcata con un fluoroforo (capture oligo), l altra complementare all altra metà del mirna e marcata con biotina (detection oligo). Dopo l incubazione di esegue una purificazione con sfere ricoperte di streptavidina e si catturano i detection oligo. Se nell estratto non sono presenti i mirna di interesse si purificano solo i detection oligo e non i capture oligo per cui la frazione purificata non emette luce se stimolata con le lunghezze d onda dei fluorofori usati, se invece i mirna sono presenti essi ibrideranno contemporaneamente le due sonde e la purificazione con le biglie selezionerà sia i detection oligo, sia i mirna che i capture per cui il purificato sarà fluorescente (indice di presenza del mirna di interesse). Inoltre è una tecnica quantitativa: l intensità del segnale è direttamente proporzionale alla quantità di mirna presenti nell estratto totale.\n12 BIBLIOGRAFIA: MicroRNA expression detected by oligonucleotide microarrays: System establishment and expression profiling in human tissues Omer Barad,1,3 Eti Meiri,1,3 Amir Avniel,1,3 Ranit Aharonov,1 Adi Barzilai,1 Isaac Bentwich,1 Uri Einav,1 Shlomit Gilad,1 Patrick Hurban,2 Yael Karov,1 Edward K. Lobenhofer,2 Eilon Sharon,1 Yoel M. Shiboleth,1 Marat Shtutman,1 Zvi Bentwich,1 and Paz Einat1,4 mirnas on the move: mirna biogenesis and the RNAi machinery Elizabeth P Murchison and Gregory J Hannon1 The Microprocessor complex mediates the genesis of micrornas Richard I. Gregory*, Kai-ping Yan*, Govindasamy Amuthan, Thimmaiah Chendrimada, Behzad Doratotaj, Neil Cooch & Ramin Shiekhattar The RNAi revolution Carl D. Novina and Phillip A. Sharp