La recherche sur les biomatériaux et ingénierie tissulaire comprend souvent des enquêtes à base de cellules in vitro, qui exigent des connaissances initiale du numéro de cellule de départ. Bien que les chercheurs de référence couramment leur densité de semis cela ne indique pas nécessairement le nombre réel de cellules qui ont adhéré à la matière en question. Ce est particulièrement le cas pour les matériaux ou échafaudages, qui ne couvrent pas la base de plaques de puits de culture cellulaire standard. Cette étude examine la fixation initiale de cellules souches mésenchymateuses humaines ensemencées à un nombre connu sur électrofilées poly (ε-caprolactone) fil après 4 h dans la culture. Électrofilées fils ont eu lieu au sein de plusieurs différents set-up, y compris les navires de bioréacteurs tournant à neuf tours, des inserts de culture cellulaire positionnés dans faible plaques à puits contraignantes et polytétrafluoroéthylène (PTFE) creux placés dans des boîtes de Pétri. Les deux derniers ont été soumis à des conditions soit statiques ou positionné sur une table à secousses (30 ° C, 5% CO 2, l'emplacement de cellules ensemencées a été déterminée par dosage de l'ADN cellulaire. Les échafaudages ont été retirés de leur emballage et placés dans du tampon de lyse. La fraction de milieu a été retiré et centrifugé de manière similaire - et le surnageant a été rejeté brisé culot avec du tampon de lyse. Le tampon de lyse a été ajouté à chaque récipient, ou bien, et gratté pour libérer les cellules qui peuvent être présents. Le test de l'ADN cellulaire a déterminé le pourcentage de cellules présentes à l'intérieur de l'échafaudage, les médias et les fractions ainsi. la fixation des cellules était faible pour tous les montages expérimentaux, avec le plus grand attachement (30%) pour les fils détenus dans des inserts de culture cellulaire et soumis à des secousses mouvement. Cette étude sensibilise au nombre réel de cellules attachées aux échafaudages indépendamment de la densité de l'ensemencement des cellules déclaré.\nLes échafaudages sont régulièrement développés et étudiés pour les applications de biomatériaux et ingénierie tissulaire. Comme tels, ils sont généralement ensemencées avec des cellules et leur comportement in vitro, caractérisé par des essais qui déterminent la prolifération cellulaire et du nombre de cellules, par exemple. Pour les expériences comme celles-ci, il est impératif que le nombre initial de cellules est connu et chercheurs déclarent souvent la concentration d'ensemencement en termes de nombre de cellules par ml ou 2 cm. Bien que ce est une bonne pratique, en particulier à des fins d'intensification, on ne tient pas compte du nombre réel de cellules qui adhèrent à la surface de l'échafaudage (qui est aussi dépendante des propriétés adhésives de la surface du biomatériau 1). Cela est particulièrement vrai pour les échafaudages qui ne couvrent pas l'ensemble de la base de la culture plaque de puits de cellule que les cellules pourraient tomber de la construction et, en raison de la nature souvent statique de l'expérience, peuvent ne jamais revenir en contact avec le matériau de porcelainereste. fils de fibres de électrofilées sont un bon exemple d'un échafaudage qui ne couvre pas la base du puits (figure 1A). Dans ce cas, plaques à puits de liaison faibles qui ne ont pas été traitées en surface devraient être utilisés pour empêcher les cellules de se fixer à la surface de la plaque et donc fausser les résultats de tout essai basé bien.\nPlaques à puits sont facilement utilisés pour l'ensemencement des cellules sur des échafaudages, mais ils ne sont pas la seule méthode disponible. Systèmes de culture cellulaire Rotary, un type de bioréacteur développé par la Division sciences de la vie à la NASA dans la fin des années 1980, peuvent même être utilisées pour ensemencer échafaudages dans un (3D) environnement tridimensionnel avec microgravité simulée. Ce type de bioréacteur reste un choix populaire auprès des chercheurs du monde entier et a été intégré dans les études pour la signalisation cellulaire 2,3, les cellules souches 4,5 et ingénierie tissulaire 6,7. Ce qui rend le bioréacteur rotatif préférable de plaques à puits est le maintiend'un environnement 3D, ce qui contribue à empêcher les cellules différenciées de se dé-différencier, comme ce est souvent le cas lorsqu'il est cultivé dans des conditions 2D conventionnels 8.\nCet article examine différentes techniques pour l'ensemencement de cellules souches mésenchymateuses humaines de poly électrofilé (ε-caprolactone) des fils de fibres comme fabriqué en Bosworth et al., 9 afin de maximiser le nombre initial de cellules attachées à ces échafaudages dans un délai de 4 heures. Pour la culture 2D, fils étaient solidement tenues dans plaques à puits ou poly-mesure (tétrafluoroéthylène) (PTFE) creux et conservés dans des conditions statiques ou agitées à 30 tours par minute. Pour la culture 3D, fils et les cellules ont été organisées dans les cuves de bioréacteur tournant à 9 tours.\nFabrication 1.Scaffold et stérilisation\nDissoudre dans PCL 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-isopropanol pour donner un 10% p / v de concentration. Comme décrit dans Bosworth et al, 9 electrospin la solution de polymère (parameters: 20 kV, 1 ml / h, 20 cm). Et de recueillir des fibres alignés sur le bord d'un mandrin rotatif (600 tpm). Avec un scalpel retirez le ruban de fibres recueillies et puis les couper en longueurs plus courtes - 3 cm (pour les creux et les vaisseaux rotatifs) et 4 cm (pour la culture cellulaire inserts) longueurs.\nEn utilisant des pinces fines bandes individuelles immerger dans de l'eau distillée et supprimer.\nEn tenant les deux extrémités entre le pouce et l'index; tourner manuellement la bande jusqu'à ce qu'il ressemble fil.\nPlonger brièvement ce échafaudage filiforme dans l'eau distillée et placer sur le nettoyage, carte non fibreuse à sécher.\nUne fois sec, le lieu individuellement dans des microtubes propres et ajouter 1 ml de 50% v / v d'éthanol dans de l'eau distillée. Fermer le couvercle et laisser reposer pendant 24 h.\nRemarque: Effectuez les étapes suivantes sous flux laminaire:\nPlacez microtubes dans une hotte à flux laminaire et aspirer la solution v / v 50%. Remplacer avec 1 ml 70% v / v d'éthanol dans l'eau distillée, à proximité couvercles et laisser reposer pendant 24 heures.\nRépéter à 90% et 100% v / v d'éthanol dans de l'eau distillée (1 ml volumes).\nLaver deux fois avec du phosphate échafaude une solution saline tamponnée (PBS), 24 h par lavage (2 x 1 ml).\nRetirer et remplacer PBS avec 1 ml de milieu de culture cellulaire. Remarque: Les échafaudages sont prêts pour une utilisation post-24 h.\n2. Détermination Espace Échafaudages de surface et le nombre de cellules\nUtilisation d'un logiciel d'imagerie microscope et la lumière, mesurer le diamètre du fil par électro long de sa longueur pour déterminer une valeur moyenne.\nSupposons que le fil pour être une tige cylindrique et une approximation de la surface en utilisant:\nOù A = Surface, r = rayon et h = longueur\nRemarque: La surface a été calculée à 18 902, 2 800 pm. En outre, il convient de noter que l'aire de surface réelle est plus grande que ce calcul que le fil est composé de plusieurs centaines de fibres fines, ce qui augmentera l'aire de surface. Par conséquent, un plus grand nombre de cellules devrait être en mesure de joindre à l'échafaud. Cependant, cela ne affecte pas une comparaison directe entre les groupes de test ont été réalisés.\nDéterminer le nombre maximal de cellules qui peuvent se attacher à la surface exposée de l'échafaudage par:\nRemarque: L'utilisation d'un logiciel de microscope et l'imagerie de lumière, le diamètre des cellules souches mésenchymateuses humaines a été déterminée à 20 um (en supposant cellules sont rondes), donc dans ce cas, le nombre de cellules = 60200.\n3. Échafaudages Set-up - Culture Cellulaire Inserts (figure 1A)\nSous flux laminaire, ouvrir les 6 puits inserts de culture de cellules stériles et séparer les anneaux avec des dents plus courtes des corps plus large annelé.\nPrenez le ring avec les dents pointant vers le haut. Drapé unedes échafaudages 4 cm sur le centre de l'anneau en vous assurant qu'il chevauche sur les deux côtés. Prenez le corps et la position annelé sur la couronne dentée et échafaudage et pousser vers le bas en veillant à l'échafaud reste en position et passe par le centre de l'insert de culture cellulaire.\nPlacez l'insert de culture cellulaire avec échafaudage dans le puits d'un puits 6, faible plaque de fixation.\nAjouter 10 ml de milieux de culture à l'échafaud.\n4. Échafaudages Set-up - Fosse (figure 1B)\nSous flux laminaire, le lieu de poly (tétrafluoroéthylène) (PTFE) des creux dans des boîtes de Pétri individuelles et ajouter 10 ml de milieu de culture à l'auge.\nEn utilisant des pinces draper une des échafaudages 3 cm dans l'auge, en se assurant de sa longueur est parallèle au bord de l'auge plus.\n5. Échafaudages Set-up - bioréacteur navire (figure 1C)\nSous flux laminaire, verser 10 ml de PBS stérile à travers le récipient de bioréacteurprincipal port et laisser reposer pendant 10 min.\nRetirez le PBS et le remplacer par 8 ml de milieu de culture.\nEn utilisant des pinces, insérez un des échafaudages cm 3 dans le récipient via le port principal.\nFermez le port principal.\n6. Décompte Cellulaire\nCulture de cellules humaines souches mésenchymateuses (CSMh) dérivées de moelle osseuse conformément au protocole du fabricant jusqu'à quatre passage avant la récolte.\nAspirer le support à partir d'un flacon de 75 cm2 contenant des CSMh dérivées de moelle osseuse (passage 4, 80% de confluence).\nLaver les cellules avec du PBS 10 ml stérile et aspirer.\nAjouter 3 ml de trypsine et on incube le flacon à 37 ° C, 5% de CO 2 jusqu'à ce que les cellules sont délogés de la surface du ballon.\nAjouter 7 ml de milieu de culture pour inactiver l'enzyme et transférer ce volume total (10 ml) dans un tube de centrifugeuse.\nReprendre cette suspension cellulaire par aspiration et à plusieurs reprises pour disperser de manière homogène des cellules au sein de lamédias et agglomérats limite cellulaires (10 ml) de pipette.\nRetirer 20 pi de suspension de cellules et le transfert d'un hémocytomètre.\nPlacez le hémocytomètre sous un microscope optique et image au objectif x10.\nConcentrer le quadrillage et de compter le nombre de cellules dans les 4 x 4 places dans chaque coin de la grille et qui relèvent de la place et ceux qui traversent la main droite ou de la ligne de limite inférieure. Comptez pour chaque ensemble de 4 x 4 places (4 chefs d'accusation par grille).\nRépétez la remise en suspension et la cellule compte trois fois (étapes 6.6 à 6.9).\nCalculer le nombre de cellules moyen et déterminer le volume du support requis pour la remise en suspension de cellules (concentration de 60 200 cellules dans 200 ul). Par exemple, déterminer le nombre moyen de cellules de l'hémocytomètre et ensuite déterminer le nombre moyen global de cellules des trois chefs d'accusation distincts. Multiplier par 1 x 10 4 à envoyer nombre de cellules par ml, puis multiplié par le volume total de la suspension cellulaire pour donner àNuméro tal de cellules. Utilisez l'équation suivante pour déterminer le volume des médias nécessaires à la remise en suspension:\nCentrifuger la suspension de cellules à 241 xg pendant 5 min.\n7. Cellule semis\nAspirer les médias du tube centrifugé laissant le culot cellulaire et le remplacer par le volume des médias calculée.\nRemettre en suspension les cellules et les médias pour une même mélanger.\nEn utilisant une pipette Gilson P200, verser lentement 200 ul de suspension cellulaire sur chaque échafaudage en exécutant la pointe de la pipette le long de la longueur de l'échafaudage et en dessous de la surface du liquide de support. Laisser reposer pendant 20 min.\nPour les navires de bioréacteurs, dispenser 200 pi de suspension de cellules à travers le port principal. Haut-le 2 ml de milieu de culture restant par les ports de la seringue pour obtenir un volume total de 10 ml.\n8. expérimentale Démarrer\nTransférez les cuves de bioréacteur dans le bioréacteur RCCS-4DQ et mettre à tourner à neuf tours.\nTranSFER les plaques à puits avec des inserts de culture cellulaire et des creux à la plaque de shaker et mis à tourner à 30 tours par minute.\nTransférer les plaques de puits avec des inserts de culture cellulaire et les creux de la plate-forme d'un incubateur de cellules fixé à 37 ° C, 5% CO 2 (culture statique).\n9. ADN Assay\nPréparer des solutions - tampon de lyse, tampon 1x TE, normes d'ADN et de solution de travail de l'ADN cellulaire - selon les instructions du fabricant.\nAprès 4 heures, retirer les échantillons de l'incubateur et placer sous flux laminaire.\nRetirez les fractions de médias de tous les échantillons et les placer dans des tubes de centrifugeuse étiquetés séparément. Centrifuger les tubes 241 xg. Eliminer le surnageant et ajouter un tampon de lyse de 3 ml. Reprendre la solution pour rompre le culot cellulaire.\nEn utilisant des pinces supprimer les échafaudages et les placer dans des tubes à centrifuger contenant 3 ml de tampon de lyse (pour les échafaudages dans les cuves de bioréacteur, retirez l'échafaud avant l'aspiration du moidia). Pour échafaudages détenus dans des inserts de culture cellulaire, d'abord libérer l'échafaud en coupant l'échafaud près du bord de l'insert à l'aide d'un scalpel.\nAjouter 3 ml de tampon de lyse à chaque récipient d'échafaudage et gratter la surface (agiter vigoureusement pour les navires de bioréacteurs). Retirer le tampon de lyse et les placer dans des tubes de centrifugation marqués séparément.\nVortexer chaque tube de centrifugation pendant environ 1 minute pour assurer une agitation suffisante des cellules et le tampon et pour favoriser la lyse de la membrane cellulaire.\nDans une plaque à 96 puits noir, ajouter 100 pi de tampon de lyse pour chaque fraction de l'échantillon - échafaudage, les médias et bien (duplicate).\nDans l'obscurité, ajouter 100 ul de solution d'ADN de cellules dans tous les puits contenant le tampon de lyse et mélanger doucement.\nInclure les puits avec du tampon de lyse contenant pas de solution d'ADN et l'ADN de la cellule pour fournir un contrôle négatif et positif pour la plaque de puits.\nEn utilisant un lecteur de plaques de fluorescence, mesurer l'absorbance du puitss en utilisant une excitation 485 nm et émission à 520 nm.\nComparer les données à la courbe standard générée par les normes d'ADN selon les instructions du fabricant.\n10. microscope électronique à balayage (MEB) Fixation\nEffectuez les étapes suivantes sous flux laminaire: Après 4 h, retirez tous les échafaudages de leurs récipients et place dans une nouvelle plaque de 6 puits (puits séparés).\nLaver les échafaudages deux fois avec PBS.\nEffectuez les étapes suivantes sur le banc ouvert: Pour chaque puits, ajouter 2 ml de 1,5% v / v glutaraldéhyde dans du PBS pour assurer une couverture complète de l'échafaud.\nLaisser la plaque pendant au moins 30 min à 4 ° C pour la fixation des cellules.\nRetirer la solution de fixateur et laver les échafaudages deux fois avec PBS.\nDéshydrater les échafaudages avec des concentrations croissantes d'éthanol dans de l'eau distillée à partir de 50% v / v, puis 70% v / v et 90% v / v. Pour chaque concentration, immerger pleinement les échafaudages en solution (2 ml) et laisser reposer pendant 3 min. Jeter la solution et répéter.\nDéshydrater dans 100% d'éthanol en immergeant totalement les échafaudages en solution (2 ml) et en laissant 5 min. Jeter la solution et répéter.\nSécher chimiquement les échafaudages utilisant hexaméthyldisilazane (HMDS) dans une hotte. Plonger les échafaudages dans HMDS (2 ml) et laisser reposer pendant 5 min. Retirez les HMDS et répéter.\nRetirez les HMDS et permettent les échafaudages pour sécher. Monter les échafaudages sur disponibles dans le commerce talons SEM (dans ce cas des talons d'acier inoxydable avec onglets de carbone adhésives).\nPour faciliter la visualisation dans le SEM, enduire les échantillons à l'aide d'une coucheuse or pulvérisation pendant 2 minutes pour assurer une couverture mince et uniforme.\nPlacer les échantillons au sein du SEM et de visualiser les échafaudages cellulaires ensemencées en utilisant un faisceau d'électrons de 5 KeV.\nLes résultats mettent en évidence l'emplacement des cellules suivantes quatre heures après l'ensemencement pour chaque montage expérimental étudié. La figure 2A montre le pourcentage de cellules qui ont attaché à la surface de l'échafaudage pendant ce temps. Un facteur de conversion de 8,5 pg / cellule a été utilisé pour convertir le contenu d'ADN mesurée en nombre de cellules et donc de déterminer le pourcentage de cellules 10. Pour tous les semis set-up d'une enquête, le pourcentage de la fixation des cellules est relativement faible, avec la plus grande adhérence des cellules (30%) pour les échafaudages détenus dans des inserts de culture cellulaire et secoué à 30 tours (Insérer Shaker). Le plus bas adhésion (15%) était pour les échafaudages détenus dans les inserts de culture cellulaire et maintenu dans des conditions statiques (Insérer statiques).\nUn grand nombre de cellules étaient présents au sein de la fraction des médias (figure 2B), notamment pour les inserts de culture cellulaire détenus dans des plaques de liaison faible (Insérer statiques) et des navires de rotation étant de 50% et 51%respectivement. Les échafaudages détenus dans les auges ont démontré un nombre élevé de cellules présentes dans le support lui-même - 48% des cellules pour Trough Shaker et 50% pour Trough statique.\nmicroscopie électronique à balayage a permis une évaluation visuelle des échafaudages cellulaires tête de série (Figure 3). Images représentant a relevé une présence limitée de cellules sur la surface fibreuse, indépendamment de l'ensemencement set-up. Cependant, un plus grand nombre de cellules et d'agglomérats de cellules étaient présents sur les échafaudages détenus dans les inserts de culture cellulaire et secoué à 30 tours (Insérer Shaker).\nFigure 1. expérimental ups, où électrofilées Fils est tenue dans; (A) des inserts de culture cellulaire et une faible plaque à puits de liaison; (B) poly (tétrafluoroéthylène) (PTFE) auge et boîte de Pétri; et (C) de récipient bioréacteur. Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 2. Emplacement des cellules 4 heures post-semis SUR DES PCL électrofilées Fils utilisant différents semis Set-up. (A) montre le pourcentage de cellules qui ont attachés à l'échafaud PCL (moyenne ± écart-type); (B) met en évidence le pourcentage propagation de emplacement de cellule dans les trois fractions - médias, bien et échafaudage (n = 4, les données présentées comme valeurs moyennes). Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 3. Représentant analyse au microscope électronique pour PCL électrofilées Fils avec mésenchymateuses humaines cellules souches, quatre heures après l'amorçage initial utilisant Différents montages expérimentaux. (Toutes les images à 1,000X agrandissement, barre d'échelle = 130 um.) Se il vous plaît cliquer ici pour voir une plus grande version de ce chiffre.\nÉlectrofilées matrices de fibres fabriqués à partir de biopolymères sont régulièrement utilisés pour supporter la fixation et la prolifération cellulaires pour des applications de biomatériau et / ou d'ingénierie tissulaire 11,12. Dans ces cas, les matrices sont souvent minces feuilles de fibres qui couvrent facilement toute la base d'une plaque de puits de culture cellulaire et ainsi sont en contact avec les cellules ensemencées qui améliore la fixation des cellules. Toutefois, si l'échafaud biomatériau ne couvre pas entièrement la base de la plaque bien, il ya de fortes chances qu'une grande proportion des cellules ensemencées ne sera pas rester en contact avec l'échafaud et, finalement, ne sera pas en mesure de joindre. Cette étude a examiné plusieurs méthodes différentes pour l'ensemencement de cellules sur des échafaudages qui ne couvrent pas la base de la plaque de puits, afin de déterminer une technique optimisée qui pourrait être recommandé pour les futures expériences à base de cellules.\nCinq différents set-up ont été étudiés (Figure 1): Scaffolds (électrofilé fils) a tenu en utilisant des inserts de culture cellulaire dans des plaques de faible et de liaison et soit maintenu dans des conditions statiques ou secoué à 30 tours; échafaudages placés dans les creux de PTFE étroites et détenus statique ou secouées à 30 tours; et échafaudages logés à l'intérieur des navires de bioréacteur à 9 tours. Déterminer le nombre de cellules qui avaient adhéré aux fils électrofilées par dosage de l'ADN a démontré un faible pourcentage de fixation pour tous les semis set-ups (figure 2); et ce est également confirmée à partir de micrographies électroniques à balayage (SEM) (figure 3). Plus l'attachement des cellules - 30% ou ~ 18060 cellules -Est observés pour les fils qui ont eu lieu dans les inserts de culture cellulaire et soumis à un mouvement continu. Fait intéressant, la fixation des cellules plus bas (15%) a été atteint pour les fils détenus par des inserts de culture cellulaire, mais gardés dans des conditions statiques, ce qui donnerait à penser que l'inclusion de mouvement radial a un effet positif sur le maintien des cellules en contact avec l'échafaud. Par Contre,il convient de noter que indirecte continue des flux de médias pourrait être responsable des agglomérats de cellules observées à partir des images SEM. La plaque d'agitation a été mis sur son réglage le plus bas - 30 tours - qui pourrait être une limitation à ce set-up. Utilisation d'un mouvement radial lente peut aider à prévenir ou réduire l'agglomération cellulaire et pourrait également améliorer la fixation des cellules comme les cellules connaîtront moins de force. Les expériences futures devraient se concentrer sur l'optimisation de la vitesse d'agitation idéal pour une meilleure fixation des cellules. Comportant un déplacement pour les fils détenus dans les creux n'a pas abouti à une tendance similaire, avec les deux scénarios qui donne 18% de fixation (~ 10 836 cellules); bien que cela puisse être dû à la flottaison partielle des échafaudages dans les auges (observé pour les creux placés sur la table à secousses), car ils ne ont pas été ancrés à la base. Flottante partielle de l'échafaudage empêchera pas de cellules qui ont coulé au fond de la cuve de venir en contact avec le matériau et adhérant. Pour tnotamment son set-up, la cuve a été logé dans une boîte de Pétri et un volume total de 10 ml de milieu ajouté. Les faibles dimensions de l'auge signifie que la majorité des médias est présent dans la boîte de Pétri et se il n'y a aucun mouvement, les cellules peuvent se éloigner de l'auge dans la boîte de Pétri et restent totalement hors de portée de l'échafaudage. Pour surmonter ces limitations, d'autres expériences devraient inclure une étape supplémentaire dans le protocole, les extrémités des échafaudages sont épinglés à la base des creux à l'aide de fines aiguilles stériles, car cela devrait empêcher leur flottaison et le mouvement (en particulier pour les échafaudages exposés à mouvement radial), qui devrait finalement conduire à une augmentation du nombre de cellules attachées à l'échafaud. 16% des cellules était attaché à des fils présents dans les récipients rotatifs. En dépit d'être une technique bien établie pour la culture 3D, les problèmes ne se posent à l'enlèvement des échafaudages du port principal de vaisseaux, ce qui peut avoir entraîné attac lâcheHED cellules perdues. Les navires qui se ouvrent complètement éliminerait ce problème; ils sont disponibles à l'achat, mais sont considérablement plus coûteux que les récipients jetables utilisés dans cette étude.\nCette étude démontre les problèmes actuels avec l'ensemencement échafaudages qui ne couvrent pas toute la base de plaques de puits de culture cellulaire standard. Ensemencement d'un nombre de cellules connu conduit à moins de un tiers de fixation à l'échafaud, en dépit de la superficie de l'échafaud en permettant à toutes les cellules d'adhérer. Cela pourrait avoir des conséquences néfastes dans d'autres tests cellulaires qui peuvent évaluer le comportement de la biocompatibilité et la cellule-matériau / cellule-cellule et les interactions avec l'échafaud comme un futur dispositif médical potentiel. Autres limites de l'étude peuvent inclure le 4 h point de temps - en dépit d'être suffisamment longue pour assurer l'ensemencement cellulaire initiale (cellules ont été montré pour fixer solidement à des substrats dans les 30 minutes 13,14,15), il peut être raisonnable dansvestigate des périodes subséquentes, la fourniture de cellules ne prolifèrent pas pendant un laps de temps plus long que ce serait autrement fausser le nombre de cellules de départ. La réduction du volume des médias, dans ce cas 10 ml, pourrait également améliorer le contact entre les cellules et échafaudage et, finalement, d'accroître la fixation des cellules. Les études futures devraient également envisager la viabilité des cellules que le processus d'ensemencement des cellules peuvent endommager les cellules et / ou la mort cellulaire 16. tests d'ADN cellulaire ne font pas de distinction entre les cellules viables et non viables, en tant que tel essai vivants / morts, par exemple, mettrait en évidence le niveau de viabilité.\nCette enquête vise à sensibiliser au nombre réel de cellules qui se fixent à l'échafaud, malgré l'ensemencement d'une quantité connue. Pour les études qui se appuient sur le nombre de cellules de départ, il est très important que les chercheurs savent exactement combien ce chiffre ne avez en fait adhérer au substrat d'intérêt.\nLes auteurs tiennent à remercier et à reconnaître le Conseil de recherches médicales pour le financement de cette recherche - MRC-FAP code subvention G1000788-98812.


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Par conséquent, il est disponible sans ordonnance.\nEn tout cas, le fabricant et les nouvelles et les critiques sur Internet sont d’accord: le produit ne provoque pas d’effets secondaires désagréables selon le fabricant, de nombreuses critiques et le réseau.\nNaturellement, ceci est uniquement sûr, à condition que vous respectiez rigoureusement l’utilisation recommandée lors de l’utilisation, car le produit est extrêmement puissant.\nEbenso vous devez garder à l’esprit que vous commandez Poids mannequin uniquement auprès de revendeurs vérifiés - suivez notre service clientèle - pour éviter les contrefaçons. 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L’entreprise fournit toutes les données importantes concernant le temps d’utilisation et le dosage , ce qui signifie que vous triomphez sans effort\nDe cette façon, les clients réagissent à Poids mannequin\nPar l’utilisation de Poids mannequin, perdre du poids n’est plus du tout une difficulté.\nEn tout cas, vous pouvez certainement être sûr que vos résultats surpassent ceux des autres rapports de test et out après la première application, les résultats escomptés en matière de perte de poids se produisent.\nIl se peut que les effets de Poids mannequin se produisent quelques semaines plus tard ou soient plus faibles.\nVotre rayonnement positif se réalise que vous vous s’en sortez mieux. Dans les cas les plus fréquents, c’est sa propre famille qui remarque la transformation en particulier.\nRapports d’essai sur Poids mannequin analysés\nS’il est fortement conseillé de savoir s’il y a d’autres essais sur le produit. Les jugements indépendants rendus par des tiers sont la meilleure preuve d’un moyen de premier ordre.\nPour pouvoir nous faire une idée de Poids mannequin, nous intégrons les comparaisons directes, les critiques et les succès des clients. C’est pourquoi nous examinons maintenant les méthodes de traitement possibles:\nAvec Poids mannequin à destination\nL’expérience acquise sur Poids mannequin est étonnamment tout à fait engageante. Nous suivons le marché existant de ces produits sous forme de capsules, de baume et de différents outils depuis un certain temps déjà, nous avons acquis beaucoup de connaissances et testés sur nous aussi. Cependant, les études ne sont guère aussi positives que dans le cas des Poids mannequin.\nune silhouette durable, en bonne santé et en bonne santé\nMoins de poids sur les côtes vous deviendront plus actifs dans la vie quotidienne\nIl vous est possible de perdre du poids\nles cures de perte de poids qui vous attendent\nune silhouette féminine mince ou forte et les muscles masculins deviennent visibles\nLa perte de poids lors d’un plan de régime nécessite une grande persévérance. C’est ce qui distingue ce produit des produits comme The vert jeune intermittent.. Il est donc normal que la plupart des personnes concernées augmentent malgré tout.\nDans le cas où vous vous mettez à l’œuvre, vous encouragerez fermement les succès en utilisant des produits tels que Poids mannequin sans rien faire.\nEst-ce que vous avez des doutes d’être considéré comme un imposteur ? Vous êtes au-dessus de ça.\nPour le bonheur, les effets secondaires ne semblent pas être un problème. J’en arrive à ce résultat grâce à l’évaluation d’une grande quantité d’expériences utilisateur positives, ainsi qu’à la lumière d’une composition solide du produit.\nVous n’avez pas les moyens de faire ce dépôt bon marché et prometteur dans votre bien-être ? Si ce n’est pas important pour vous pour le succès enthousiasmant, ne l’achetez pas.\nPour finir, traverser la vie avec le personnage à la recherche, qu’est-ce que ce serait génial.\nJ’affirme que Poids mannequin est clairement impératif pour tous ceux qui ont échoué dans la perte de poids et que, dans la mesure où il y a des actions très favorables, il vaut mieux ne pas attendre trop longtemps et saisir encore aujourd’hui.\nVoici ce qui est clair - une course d’essai avec Poids mannequin est clairement une bonne idée !\nCe type de moyens très efficaces, comme Poids mannequin, n’est souvent que temporaire sur le marché, car le fait que les ressources naturelles puissent être aussi efficaces est ennuyeux pour le reste de l’industrie. Il faut donc frapper bientôt pour ne pas laisser passer l’occasion.\nLa possibilité d’acheter un produit aussi efficace auprès d’un fournisseur sérieux et pour un montant adéquat constitue une exception. Actuellement, il serait encore disponible pour le moment sur la boutique internet indiquée. En contraste avec les vendeurs alternatifs, vous pouvez avoir confiance sur cette page pour obtenir la préparation légitime.\nPoids mannequin vous intéresse ? Nous pensons que PhenQ est encore mieux !\nVous êtes-vous assez patient pour passer à travers le programme ? Tant que la récursion doit être « insurable », épargnez-vous l’effort. Malgré tout, il y a de bonnes chances que vous soyez suffisamment encouragés à traiter votre problème et à y arriver avec Poids mannequin.\nNous tenons à souligner une fois de plus qu’il faut être prudent dans la commande de Poids mannequin, compte tenu des vendeurs douteux qui imitent des innovations prometteuses.\nPour prévenir les composants inadaptés, les substances dangereuses et les prix d’achat trop chers lors de l’achat de l’article, nous ne vous soumettons que des articles testés et actuels.\nSi vous voulez commander de tels produits à des revendeurs en ligne tels qu’Ebay ou Amazon, nous vous signalons que l’authenticité et la discrétion ne sont en aucun cas garanties, d’après les témoignages dont nous disposons. Notre recommandation est donc de s’abstenir de ces distributeurs. En outre, vous ne devriez pas du tout essayer dans votre pharmacie. Dès que vous décidez d’essayer le produit, veuillez noter que vous utilisez également de facto la boutique que nous vous conseillons - aucun autre site ne permet de trouver un prix plus avantageux, plus de sécurité et d’anononymité, ou la certitude de savoir que vous obtenez vraiment Poids mannequin.\nIl est urgent de commander le plus grand nombre, puisque les économies sont donc les plus importantes et que tout le monde économise des commandes de suivi inutiles. Il s’agit d’une pratique courante, car une utilisation prolongée est la plus prometteuse.


Publié : 30 Déc 2018 22:49\nJ'ai lu ceci ici : http://www.laufhund.ch/pdf/ct_rec_lievre_11_f.pdf\nRèglement suisse mais ils participent à la coupe d'europe alors cela doit être assez proche et il me semble avoir lu que des épreuves en duo existent également.\nPublié : 31 Déc 2018 10:32\nbjr 15 Chiens retenus qui dispose de 4h pour rapprocher, lancer et mener.\nPublié : 31 Déc 2018 11:38\nJe te remercie ça a le mérite de me donner des indications assez claires. Je crois que un des solos va passer sur les territoires de l'ACCA ou je chasse, de ce fait je connais bien les remises et autres chemins de refuite. Je me propose dans la mesure du possible de faire un compte rendu que je tiendrais à la disposition de ceux que ça intéresse.\nEncore merci à toi jésus.\nJerem as tu les races de ces quinze chiens qui sont sélectionnés. Merci.\nPublié : 31 Déc 2018 14:44\nQuelles sont les meutes et solo en lice?\nPublié : 31 Déc 2018 18:51\n4 heures !!! cela serait etonnant !\nPublié : 07 Jan 2019 17:50\nPour ceux que ca intéresse Harloup a publié la liste des solos et meutes avec les races des chiens et les nationalités des propriétaires.http://harloup.fr/\nPublié : 07 Jan 2019 22:43\nLes meutes françaises participant à la coupe d'Europe sur lièvre sont les 3 premières de la Coupe de France 2018 à savoir :\nBeagles à M. Tremolet\nBrunos du Jura à MM. Bouillat et Martin\nAriégeois à M. CAnezin\nLes remplaçants sont les 4e ex-aequo : Porcelaines à M. Zanandrea et Petits bleus à M. Sirgan\nLes solos sont uniquement des chiens étrangers (que je ne connais pas) puisqu'il n'y a pas de sélection en France sur ce mode de chasse.\nJe serai également présent à Auribail.\nPublié : 08 Jan 2019 06:39\nC'est dommage qu'il n'y ai pas de sélection solo en France. Il y a pas mal de concurrent solo, Le " vrai match" a l'air là.\nSi vous pouvez nous mettre des photos!!! J'ai vu qu'il y avait des races que l'on voit pas ou peu en France.\nPublié : 08 Jan 2019 22:54\nPour rappel , les pays qui présentent les chiens en "solo" ont souvent une interdiction de chasser en meute. C'est une raison suffisante , à mon avis , pour ne pas promouvoir la chasse "solo" chez nous .\nPublié : 09 Jan 2019 07:06\nJe ne vois pas pourquoi la chasse solo ne serai pas la bienvenue, pour ma part et ainsi qu'à beaucoups de collègues nous avons tjrs chassés en solo, tout le monde ne peux pas avoir la place d'élever une meute, et je peux te dire que les menées de nos chiens sont un vrai plaisir des oreilles et la qualité de nez de certains impressionante


Les restaurants à Gérone | Le blog de Gilles Pudlowski – Les Pieds dans le Plat\nRestaurants > Restaurants Catalogne > Restaurants Gérone\n1 restaurants à Gérone\nFiltres sélectionnés : Espagne ✖ Catalogne ✖ Gérone ✖ Restaurants ✖\nC/ de Can Sunyer 48 - 17007 Gérone\nMenu : 130, 160 €.\nTrouver un restaurant à Gérone. Tous les critiques sur les meilleurs restaurants insolites à Gérone : les restos coups de coeur à Gérone, ceux qu'on peut éviter également. Nos avis sur les nouveaux restaurants à Gérone. Nos restos à découvrir mais aussi les restaurants à Gérone les plus connus, les grandes tables et les bistrots. Réservez le restaurant à Gérone qui vous convient : le moins cher, le meilleur rapport qualité prix, ceux ou on se fait plaisir, les restaurant pour faire la fête ou encore ceux ou l'addition s'envole. Choisissez le meilleur restaurant à Gérone pour vous : ceux qui privilégient la cuisine de qualité, les restaurants de tradition, les restaurants modes, les cadres romantiques, les restaurants tendances, les restaurants historiques ou ceux dont la situation est exceptionnelle sans oublier les restaurants de passionnés, d'amoureux de la cuisine et bien entendu de chefs de talent qui font partager leur art et leurs plats pour le plaisir de tous.\nVous pouvez également chercher d'autres Restaurants à proximité : Restaurants à Barcelone


Berger SARL - Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil\nBerger SARL (Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil) l'entreprise spécialisée dans la pose de menuiserie, se situe à Ruy-Montceau près de Bourgoin-Jailleu dans le département de l'Isère. Depuis 2002, elle met à votre service son expérience dans le domaine de la menuiserie extérieure. Son équipe expérimentée assure l'installation de menuiserie bois, menuiserie PVC et menuiserie aluminium. BERGER SARL (Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil) possède l’agrément RGE QUALIBAT, pour que ses clients récupèrent leurs 30% de crédit d’impôt.\n(Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil)\nBerger SARL (Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil) pour vous conseiller et poser vos menuiseries extérieures, que ce soit pour une fenêtre, porte-fenêtre, un volet roulant ou battant, un portail, une porte de garage, une porte d'entrée ou encore un store intérieur ou un store extérieur ; faites appel à ses équipes spécialisées. BERGER SARL (Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil) vous propose des menuiseries standard et sur-mesure afin qu'elles s'adaptent à une maison en rénovation.\n(Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil), et vous pourrez, grâce à sa qualification RGE QUALIBAT, bénéficier du crédit d'impôt. Elle travaille principalement avec Somfy, Probai, Veka et Bieber pour la menuiserie PVC. BERGER SARL (Volet Roulant Solaire Saint Marcel Bel Accueil) à pour activité principale, la menuiserie générale, ainsi que la fourniture et pose de menuiserie bois, menuiserie PVC et menuiserie ALU : Fenêtre, Porte-fenêtre, Volet roulant et volet battant, Porte d'entrée, Portail, Clôture, Store intérieur et store extérieur, Installation de motorisation pour vos fermetures extérieures.


La Belgique achète 9 radars Squire bloc 2 aux Pays-Bas pour sa capacité ISTAR - À l'Avant-Garde\n30 novembre 2018 4 juillet 2019 Marie-Madeleine Courtial\nLa Belgique achète 9 radars Squire bloc 2 aux Pays-Bas pour sa capacité ISTAR\nLe ministre de la Défense Sander Loones a signé un MoU avec son homologue Ank Bijleveld pour l’achat de 9 radars Squire (crédit-photo NL Defensie)\nLa Belgique a acheté 9 radars Squire bloc 2 aux Pays-Bas pour sa capacité ISTAR.\nEn visite aux Pays-Bas, le nouveau ministre de la Défense Sander Loones a rencontré son homologue néerlandaise Ank Bijleveld à la Haye. Cette visite a été l’occasion de signer un contrat pour l’achat de 9 radars Squire bloc 2 via un memorandum of understanding (MoU). Ces nouveaux radars seront destinés au bataillon de Chasseurs à Cheval, la seule capacité ISTAR (Intelligence, Surveillance, Target Acquisition, Reconnaissance) de l’armée belge.\nLes radars de surveillance du champ de bataille actuels du type EL-1205 étaient arrivés en fin de vie a expliqué la DGMR, l’entreprise ne pouvant plus fournir des pièces de rechange et effectuer des réparations. Après avoir rendu des services au Kosovo et en Afghanistan, ils effectueront leur dernière mission au Mali au sein de la MINUSMA où est déployé actuellement un détachement multi-senseurs de 37 hommes du bataillon ISTAR. Les nouveaux radars seront mis en service durant le premier semestre 2019.\n« Le nouveau système est l’un des plus modernes sur le marché : il peut repérer et classer les piétons jusqu’à 12 km, jusqu’à 48 km même pour des véhicules à chenilles. Le SQUIRE bloc 2 détecte et classifie automatiquement, en outre, les drones et mini-UAV (Unmanned Air véhicules) dès 6 km, selon la taille de la plate-forme. Le système est utilisé, entre autres, dans le cadre de la protection contre le terrorisme et pour assurer la sécurité des événements à forte visibilité comme les sommets de l’OTAN ou de l’UE, ainsi que dans les opérations à l’étranger », précise la DGMR. Cet achat va renforcer la coopération entre les deux pays et faciliter l’interopérabilité.\nLes Pays-Bas avaient acheté 62 radars Squire à Thales Nederland en 2002. Le contrat comprenait la logistique et la formation. Ces radars Squire sont utilisés par la Landmacht et les Korps Mariniers. Lors du salon NIDV sur la Défense et la Sécurité à Rotterdam, Thales et le Defensie Materieel Organisatie (DMO) ont signé un contrat pour la mise à jour de 60 radars Squire le 22 novembre dernier. Les Pays-Bas doivent effectivement mettre à jour les systèmes de radar vers le « block 2 » avant de les livrer à la Belgique.\nPrécédent Tout comme la Belgique, les Pays-Bas concentrent leurs forces en Afghanistan\nSuivant Les contours de la mission d’assistance militaire belge au Niger se précisent


octobre 2015 : Tous les messages - Moi Petite Maman\nIl y a quelque temps, j'ai reçu le baume nuit calme de Gifrer. Je me suis donc fait une joie de le tester avec ma Esther qui ne faisait toujours pas ces nuits. Les premières nuit de test, je n'ai pas vue grand changement, mais au bout de quelques nuits, elle a commencé à me faire une nuit complète, puis quelques jours plus tard, une nouvelle nuit complète et maintenant, elle me fait plusieurs nuits complète consécutive. Sur le coup, je n'ai pas fait le rapprochement, mais maintenant, je pense que c'est très certainement... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 12:33 - Gifrer - Commentaires  - Permalien [#]\nPetit Beguin, connaissez-vous ? Petit Beguin est une marque de vêtements pour enfants et bébés que j'ai découverte récemment. J'en ai beaucoup entendu parler, mais je n'avais jamais véritablement étais voir leur site, jusqu'au jour ou... Au premier abord, je me suis dit, tien, c'est mignon ça, puis hooo ça aussi et une chose en entrainant une autre, je me suis imaginé mes poupettes dans ces vêtements et j'ai littéralement craqué, j'ai compris pourquoi tant de gens en parlé autant. La première chose qui m'a plu avec Petite... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 08:46 - Petit Beguin - Commentaires  - Permalien [#]\nIl y a environs un mois, j'ai reçu un super Matelas Junior Soft de Kadolis.Ce matelas mesure 90cm par 190cm et pas moins de 17 cm d'épaisseur, et petit plus, il est dehoussable avec une zippette. Il est fabriqué en Espagne et bien sûr, comme tous les matelas de Kadolis, il est garanti 5 ans.Le petit plus de ce matelas, c'est qu'il est garanti par le label Öko texstandard 100, ce qui veut dire qu'il n'y a aucun produits chimique.Je dois dire qu'il est tombé à pic, Rachel passait justement en lit de grande, adieu le... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 09:00 - Kadolis - Commentaires  - Permalien [#]\nVoilà un sujet bien délicat, je parle de celui de la sensualité et la sexualité après l'arrivée de bébé.Avant toute chose, il faut préciser qu'il n'y a pas de dâte pour s'y remettre, chaque femme est différente, chaque femme a un corps différent et chaque femme vie l'arrivée de bébé différemment. Le retour à la sensualité et la sexualité sera différent pour chacune d'entre nous. Certaines pourront y reprendre goût rapidement alors que d'autres auront besoin d'un certain temps. Beaucoup de facteurs entre en... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 09:12 - Phylosophie maternelle - Commentaires  - Permalien [#]\nLa boutique en ligne Maison ecolo\nIl y a quelque temps, j'ai découvert une nouvelle boutique en ligne très sympa, c'est Maison ecolo. C'est une boutique qui propose des produits les plus biologiques et naturel possible. Maison ecolo sont très pointilleux sur la composition, la provenance et la certification des produits que le site propose. Maison-Ecolo.com c’est plus de : 3500 produits écologiques sélectionnés 20 marques partenaires 15 labels indépendants 7000 commandes en France et en Europe 5 000 conseils et partages d’expériences chaque année avec nos... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 08:40 - Maison ecolo - Commentaires  - Permalien [#]\nSuavinex de chez Freekidds\nSuavinex est une marque de petite puériculture espagnole qui débarque en France. Freekkids commercialise quasiment la totalité des produits de la marque. Lors du salon babycool, je suis allé faire un tour sur leur stand, et quel stand ! Malheureusement, je ne retrouve pas mes photos, mais je peux vous dire que c'était un délice pour les yeux, ce stand était magnifique. Sur le stand, j'ai pu discuter avec l'adorable Helke, elle m'a présenté la marque et m'a montré l'étendue des produits commercialisés. Je suis même... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 10:05 - Freekidds - Commentaires  - Permalien [#]\nIl y a quelque temps, j'ai découvert une super boutique, c'est Babyzen Shop by Pépindepomme. C'est une boutique spécialisée dans les produits de la marque Babyzen. J'ai trouvé cette boutique en faisant des recherches dans l'intention de faire l'acquisition de LA poussette, la yoyo de Babyzen. En me baladant sur la boutique, j'ai d'abord trouvé leurs prix tout à fait raisonnables, mais ce qui m'a surtout frappé, c'est la quantité d'accessoires proposée concernant les poussettes de la marque. Il y a de tout, une chancelière en 5... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 08:35 - Babyzen Shop by Pépindepomme - Commentaires  - Permalien [#]\nLe gel lavant pour bébé de Coslys\nIl y a quelque temps, j'ai eut la chance de pouvoir tester le gel lavant pour bébé de Coslys.Coslys est une marque de produits de soin et d'hygiène biologique commercialisé par Le comptoir des LysCoslys propose 7 produits pour bébé.- le lait de toilette- l'eau nettoyante- le gel lavant- le cosmousse- la recharge pour cosmousse- la crème hydratante- le bioliniment La particularité de tous ces produits, c'est qu'ils sont à l'abricot biologique.Pour ceux qui me connaissent, j'ai beaucoup les produits de soins biologiques.... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 08:32 - Coslys - Commentaires  - Permalien [#]\nIl y a quelques semaines, j'ai eut la chance de pouvoir tester quelques produits Pharmavie, mais d'abord, Pharmavie, c'est quoi ?En quelques mots, Pharmavie, c'est une enseigne qui regroupe les offres des produits de parapharmacie des pharmacies en ligne. Elle regroupe quand même 800 pharmacies, avec 3 500 pharmaciens et 6 000 préparateurs en pharmacie, ce n'est pas rien tout de même, et tout ça, réparti dans toute la France.Leur truc en plus, c'est qu'ils possèdent leur propre marque de produit de parapharmacie, ce qui à un gros... [Lire la suite]\nLe parc de Monsieur Bébé\nJ'ai testé récemment le parc en bois 6 faces de Monsieur Bébé.À peine était-il arrivé à la maison que je me suis empressé de la monter. Bon coté montage, la notice est très clair, en lisant la notice, le montage parait super simple, et il l'est pour quelqu'un de normal, mais pour moi, Pierre Richard dans l'âme possédant deux mains gauches, ce fut une autre histoire. J'ai dû mettre environs 1h pour le monter, oui, je le sais, je ne suis pas doué. Une fois le parc monté, j'étais fier de moi, il est super grand, idéal pour ma petite... [Lire la suite]\nPosté par Moi Petite Maman à 09:00 - Monsieur Bébé - Commentaires  - Permalien [#]


Les salles réservées aux Grands Voisins – Les Grands Voisins\nLes salles réservées aux Grands Voisins\tMises à disposition de la communauté des Grands Voisins par l’association Aurore, ces salles ont vocation à accueillir des temps forts de la vie des associations du site, et les moments de réunion et de collaboration entre Voisins. Elles sont modulables et facilement accessibles par l’entrée du bâtiment de l’Oratoire, au 72 avenue Denfert-Rochereau.\nA l’entrée du bâtiment de l’Oratoire, la Discothèque est un lieu agréable où les boiseries et le carrelage ont résisté à l’usure du temps. Cet espace tout en longueur est éclairé par deux hautes fenêtres offrant des vues sur le jardin de l’Oratoire.\nBâtiment Oratoire, au rez-de-chaussée. Accessible aux personnes à mobilité réduite.\n– 1 salle donnant sur le jardin de l’Oratoire\n– Surface : 69 m²\n– Hauteur sous plafond : 5m\n1 WC + 1 point d’eau à proximité (accueil du bâtiment Oratoire)\nCet espace agréable possède de larges fenêtres offrant des vues sur la cour de l’Oratoire. Espace fonctionnel et au calme, c’est l’endroit idéal pour organiser vos rendez-vous professionnels et réunions de travail.\n– 1 salle\n– Surface : 25 m²\n– Hauteur sous plafond : 4m\nTables et chaises – Cafetière et bouilloire\nEn vous rendant à l’accueil du bâtiment de l’Oratoire au 72 avenue Denfert Rochereau\nEn envoyant votre demande à l’adresse reservations@aurore.asso.fr\n• Location et privatisation


Commenter la réponse de Adeline. Le programme permet bien sûr de se connecter aux machines distantes sécurisées utilisant le protocole SSH. Chris 94 Messages postés Date d’inscription mardi 8 janvier Statut Contributeur Dernière intervention 18 janvier 7 mai à Signaler Commenter la réponse de Cortomal Signaler Commenter la réponse de Didier-V.\nMerci, Val, d’avoir expliqué comment vous vous en êtes sortie. Capable de gérer un mode serveur pour …. Disponible à la fois sur ordinateur Windows et macOS et mobile Android et iOSTeamviewer est un utilitaire permettant de prendre le contrôle d’un appareil à distance, via Internet. Il vous permettra de partager des fichiers multimédia entre utilisateurs. Il permet de se connecter à distance sur un serveur pour y télécharger des fichiers. Mozilla Firefox est une solution alternative sérieuse aux autres navigateurs, …. Signaler Commenter la réponse de thiezen.\nCapable de gérer un mode serveur pour …. Chris 94 Messages postés Date d’inscription mardi 8 janvier Statut Contributeur Dernière intervention 18 janvier 25 oct.\nJ’ai même pu aller jusqu’à la version File Zilla 3. Il gilezilla de se connecter à distance sur un serveur pour y télécharger des fichiers. Sa bibliothèque multimédia sera facile à utiliser et déjà connue ….\nBanchedolyn – 12 juil. MacOS Posez votre question Signaler.\nFilezilla est bien sur mon bureau 3: Commenter la réponse de Didier-V. Excellent, il a un taux de …. Alors que la configuration de …. Commenter la réponse de dadas. Signaler Commenter la réponse de Cortomal Très simple à manipuler, fileziloa logiciel est gratuit pour un usage privé. Éditeur – Tim Kosse.\nJ’ai lu à un endroit sur les élément que contenanient cette dernière version de Fillezilla: Le niveau de compression peut être ajusté selon vos besoins.\nIl vous permettra de partager des fichiers multimédia entre utilisateurs. Signaler Commenter la réponse de Didier-V. Commenter la filfzilla de Adeline. Bonjour, une filezzilla note, plus qu’une question. Chris 94 Messages postés Date d’inscription mardi 8 janvier Statut Contributeur Dernière intervention 18 janvier 7 mai à Des semaines que je cherchais l’astuce!\nYour email address will not be published. Chris 94 Messages postés Date d’inscription mardi 8 janvier Statut Contributeur Dernière intervention 18 janvier 13 mars à Dernière mise à jour – 29 March Ouf, de même, ça fait 10 fois que j’essaie, mais avec ton lien ça a marché.\nSinon, je vois que la version Filezilla 3. Mozilla Firefox est une solution filwzilla sérieuse aux autres navigateurs, …. Son interface très claire et intuitive vous convaincra.\nEn effet, Teamviewer vous permettra de créer fileilla ….\nSignaler Commenter la réponse de Chris Note Pas encore de vote. Filrzilla Commenter la réponse de thiezen.\nJe clique quand même sur OK et la version s’ouvre mais Télécharger vidéo Youtube tilezilla tablette et mobile Créer une adresse Gilezilla Supprimer fileilla compte Facebook. Sécurisé, fiable, rapide et bien plus encore, ….


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Forum motomag - Discussion : Sur le terrain, le déploiement des radars automatiques a (...)\nle 30 octobre 2012 à 07:30\nQuand les micros sont ouverts, les représentants de l’État annoncent le déploiement de 4.250 radars automatiques sur le territoire français en 2013. Sur le terrain, l’affaire semble plus compliquée. La preuve en Loire-Atlantique, où les radars discriminants et les radars tronçon sont à l’arrêt.\nle 30 octobre 2012 à 20:30\n"Tant qu’il y aura suffisamment de conducteurs pour se faire flasher ....."\nça veut dire quoi ça ? que tous les conducteurs flashés sont des fous de vitesse ,qu’ils le méritent bien et qu’ils n’avaient qu’à faire attention ?\nEt bien non, la majorité sont des conducteurs responsables qui se font juste avoir par ces pièges à fric.\nLa plupart du temps on ne sait même plus à quelle vitesse on doit rouler : pour exemple, mon dernier pv : j’étais persuadé de pourvoir circuler à 70 et, grande surprise lorsque je vois le flash, je découvre avec un rappel 250m plus loin, que c’était limité à 50 kmh...ils ont de l’humour en plus !\nLa majorité des ces radars ne sont que des pièges à touristes, c’est tout simplement lamentable.\nDe nos jours, si tu ne veux prendre aucun risque, faut rester chez soi !\nDonc, pour conclure, si ces radars flashent autant, c’est surtout grâce aux petits malins qui ont bien étudiés les situations où ils savent très bien qu’il y aura de nombreux clients ! CQFD.\nle 30 octobre 2012 à 19:26\nSi il y’a du retard à l’allumage sur les radars fixes en Loire-Atlantique, par contre, je peux vous assurer que les radars hiboux embarqués dans les bagnoles fonctionnent à merveille.\nJe viens d’en faire les frais. 55 km/h retenu pour 50 km/h sur une sortie d’agglo hyper large ... les enf.... !\nDangereux délinquant routier que je suis, la prochaine fois que je m’arrête satisfaire un besoin naturel, ce sera au pied d’un de ces totems ! Na !\nFaut pas énerver les usagers de la route comme ça ...\nle 30 octobre 2012 à 19:09\nGrâce à qui ? Et bien si tu crois en dieu, c’est sa faute puisqu’il ne nous a pas rendu infaillibles.\nAllez, on la fait à la façon d’un problème d’école primaire.\nSi l’Etat implante un radar où circulent 10000 véhicules par jour, et que 0.5% de ces conducteurs sont dans leurs pensées au moment où ils passent devant ce radar, et se font chopper pour quelques km/h. Sachant qu’un radar coute 80000 euros, que ces automobilistes vont payer 45 euros d’amende, au bout de combien de jours sera-t-il rentabilisé :\nsi les frais de traitement de l’infraction s’elevent à 5 euros ?\ns’ils s’elevent à 10 euros ?\ns’ils s’elevent à 20 euros.\nQuestion subsidiaire : existe-t-il des placements bancaires aussi rentables ?\nle 30 octobre 2012 à 16:10\nTant qu’il y aura suffisamment de conducteurs pour se faire flasher de sorte que les radars restent rentables, je vois pas pourquoi l’état se priverait d’une telle manne financière !!\nD’ailleurs, si ces radars flashent autant, c’est grâce à qui ? Hein ?\nle 30 octobre 2012 à 11:05\nle gouvernement précédent ne s’encombrait pas de telles considérations. Il flashait, et tant pis si c’etait injustifié ou illégal.\nle 30 octobre 2012 à 10:29\nLoire Atlantique ? Décidément, la poisse poursuit ce pauvre Ayrault, en ce moment...\nle 30 octobre 2012 à 09:35\nOù va notre pognon ? Ca, c’est la vraie question. Bravo Nicolas.


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Nicolas HULOT répond aux questions du MONDE sur l'actualité à propos de la stratégie... - thierry billet\nNicolas HULOT répond aux questions du MONDE sur l'actualité à propos de la stratégie de la transition écologique notamment. Un point de vue qui écarte la tentation d'une relance du programme électronucléaire, ce gouffre financier insondable qui nous menace avec la remise en état des centrales existantes et l'aventurisme de nouveaux EPR...\nJe comprends la crainte, la souffrance, l’angoisse de millions de citoyens, mais je comprends aussi la difficulté du gouvernement à faire face à une situation qui n’a pas d’équivalent. C’est une crise totalement inédite, fluctuant au jour le jour et avec des paroles divergentes de scientifiques. Dans ce bruit de fond, l’exercice démocratique et politique est sur la corde raide. Ce qui m’intéresse, c’est ce que l’on peut faire en amont des crises et les enseignements que l’on peut en tirer ensuite, mais, lorsqu’on est au cœur du vortex, il faut faire preuve d’un minimum de solidarité et d’unité. Mais j’espère que cette crise sanitaire ne fera pas d’ombre à d’autres crises, comme la crise écologique. Elle doit au contraire l’éclairer, notamment sur la nécessité de mettre des moyens en amont, quand on peut encore atténuer le choc.\nCe que les experts nous disent, c’est que ce projet de loi en l’état n’est pas à la hauteur des enjeux et de nos engagements : ni de l’objectif de réduire nos émissions de 40 % d’ici à 2030 par rapport à 1990, et encore moins du nouvel objectif européen de les abaisser d’au moins 55 %. Sur tous les sujets, qu’il s’agisse de la rénovation des bâtiments, de la fin des véhicules polluants ou des aides d’Etat dont ont bénéficié les grandes entreprises pour se relever de la pandémie, c’est toujours le plus petit dénominateur commun qui est employé. C’est dommage parce que l’important travail de la convention citoyenne donnait l’occasion au gouvernement de se rattraper pour la fin du quinquennat. Tout n’est pas joué puisqu’il y a encore le travail du Parlement. Mais le problème, c’est que l’écart énorme entre les promesses politiques et la réalisation des promesses aggrave la défiance entre le citoyen et le politique, ce qui sape notre démocratie.\nL’Etat vient d’être condamné pour « carence fautive » dans la lutte contre le dérèglement climatique. Quelle portée ce jugement peut-il avoir ?\nIl y a une valeur historique, car la justice rappelle l’Etat à l’ordre. Elle répète, là encore, que la République et l’Etat ne peuvent pas faire des promesses qu’ils ne mettent pas en œuvre.\nPensez-vous que le projet de loi pour intégrer l’environnement dans l’article Ierde la Constitution aboutira ?\nJe ne crois pas qu’il y aura un référendum avant la fin du quinquennat, même si je peux me tromper. Sur le fait de parvenir à réunir les deux chambres sur un texte qui ne soit pas simplement symbolique, je n’en mettrais pas ma main au feu, non plus…On n’a pas besoin seulement de symboles, on a besoin de leviers, notamment juridiques, pour pérenniser l’action. Cela serait un acte structurant d’inscrire cette phrase dans la Constitution.\nQuels sont les principaux verrous à la transition écologique ?\nD’abord, il y a le problème de la méthode : quand on se fixe des objectifs à 2030 ou a fortiori 2050, il faut des points de passage pour les réaliser. Mois après mois, il faut regarder où l’on en est et adapter les moyens en fonction des réussites et des échecs. En France, il n’y a jamais de rappel à l’ordre si l’on n’est pas dans les clous. Cela implique aussi d’anticiper les secteurs et les personnes qui vont être affectés par ces évolutions et de les accompagner. Une mutation, une transition, ou une métamorphose, comme le dit Edgar Morin, ça s’organise et se planifie. Sinon, nous arrivons à une impasse. Au moment où on remet à l’ordre du jour le commissariat au plan, ce dont je me réjouis, je me désole de ne pas avoir entendu une seule fois François Bayrou[haut-commissaire au plan depuis septembre 2020] et les autres responsables politiques parler de la transition écologique et sociale. Après, il y a la question des moyens, normatifs, réglementaires et législatifs. Quand on ne met pas dans la loi la sortie du glyphosate, on ne s’en fixe pas la contrainte. Et la contrainte n’est pas l’ennemie de la créativité, elle en est la condition. Il y a aussi la question des outils, des marchés publics, le levier des accords commerciaux. C’est toute une stratégie qu’il faut mettre en œuvre sur le « comment ». Enfin, il y a une question de cohérence : quand on demande à nos agriculteurs de réduire les pesticides, de ne pas utiliser d’OGM, et que, dans le même temps, on en importe grâce à des traités de libre-échange et que l’on s’autorise à exporter certaines substances dangereuses comme l’atrazine, on crée des distorsions. On n’est alors pas dans les bonnes conditions pour respecter les objectifs.\nEn matière de transition énergétique, pensez-vous qu’il faille construire de nouveaux réacteurs nucléaires ?\nMa position sur le nucléaire n’a pas changé, elle s’est même confortée. Le nucléaire est un puits sans fond sur le plan économique, on ne maîtrise plus aucun coût, ni dans le démantèlement, ni pour le « grand carénage », ni sur les nouveaux EPR.,Il y a une fuite en avant que je ne comprends pas. L’argent que l’on met dans ce domaine ne sera pas mis ailleurs, et notamment dans l’efficacité énergétique. On a abandonné ce point crucial de la transition énergétique qu’est la réduction de notre consommation.\nComment avez-vous interprété le rapport de RTE et de l’AIE sur le scénario 100 % renouvelable ?\nJe n’affirmerai pas que la France pourrait pourvoir, en l’état, à l’ensemble de ses besoins en énergie avec 100 % de renouvelables dans un délai court. Mais ce rapport confirme que, sur l’électricité, c’est techniquement possible. Il faut continuer progressivement à diminuer le parc nucléaire en fonction de la réduction de notre consommation et du développement des renouvelables.\nSouhaitez-vous porter ces objectifs et être candidat à la prochaine présidentielle ?\nJ’ai une telle conscience de la gravité et de la complexité de la situation que le prochain locataire de l’Elysée aura à gérer qu’à aucun moment je ne prétends être cette personne-là. Mon rôle sera collectif, pas personnel. Il n’y aura pas d’homme ou de femme providentiel. Il y aura un socle citoyen qui va faire émerger un certain nombre de propositions, d’aspirations. Qui pourra l’incarner ? Ce sera un collectif de personnes.\nSoutiendrez-vous un ou une candidate ?\nCe n’est pas à l’ordre du jour. Parlons des idées, des projets mais aussi des moyens. Il faudra distinguer qui est vraiment écologiste, qui remet à plat un modèle qui épuise et un modèle qui concentre. On jugera sur le « comment ». A titre personnel, si quelqu’un sort de l’ombre et me semble avoir la crédibilité, la confiance, la probité, l’honnêteté, le sang-froid et l’énergie, je serai ravi !\nVoterez-vous à la primaire des Verts ?\nLe contexte international, avec l’arrivée de Joe Biden à la Maison Blanche notamment, vous paraît-il plutôt favorable à l’action climatique ?\nIl ne faut pas attendre de miracle mais le multilatéralisme, mis à l’épreuve par Donald Trump, va pouvoir retrouver un peu d’éclat et d’efficacité. J’ai vu la rapidité avec laquelle le président Biden a décidé de revenir dans l’accord de Paris, et l’ancien secrétaire d’Etat John Kerry [nommé représentant spécial des Etats-Unis pour le climat] est un allié. Il aura, je pense, une diplomatie offensive sur le sujet. Mais où est passée la diplomatie écologique de la France ? Lors de la préparation de la COP21, du temps de François Hollande, la diplomatie n’était pas seulement économique, et nos diplomates s’étaient d’ailleurs mobilisés avec beaucoup d’enthousiasme. A l’international, Emmanuel Macron est présent. Il a une constance dans l’interpellation, la mobilisation. Mais cela se fait au gré d’événements. Notre diplomatie quotidienne, courante, me semble très silencieuse par rapport à ce qu’elle a été. On n’entend pas Jean-Yves Le Drian [le ministre des affaires étrangères] sur ces sujets-là.\nAu niveau européen par exemple, la France peut-elle encore peser pour rendre la politique agricole commune plus ambitieuse ?\nNous sommes dans un paradoxe incroyable. Jamais nous n’avons eu de conjoncture aussi favorable pour transformer de manière apaisée le modèle agricole français. Il y a une demande sociétale de produits de qualité et de proximité. Il y a aussi une possibilité de diversifier les revenus des agriculteurs, en les rémunérant pour réhabiliter la biodiversité, stocker du CO2, produire de l’énergie renouvelable. On peut mettre fin à nos importations de produits protéagineux et donc améliorer notre souveraineté alimentaire. On a l’argent de la PAC [politique agricole commune]. Tous les paramètres sont réunis, mais où est la vision ? Il y va de notre modèle agricole comme de notre modèle économique : ce n’est pas d’ajustements à la marge dont on a besoin mais de programmer sa mutation complète. De passer d’un modèle intensif en intrants à un modèle intensif en emplois. Donc, oui, la France peut encore jouer un rôle, mais, pour l’instant, elle n’est pas sortie de cette confrontation stérile entre enjeux environnementaux et enjeux socio-économiques.\nPensez-vous qu’il reste quelque chose de l’idée du « monde d’après », qui semble avoir disparu des débats ?\nLors du premier confinement, je voyais émerger une forme de sagesse. J’osais encore espérer que c’était un mal pour un bien et que, une fois sortis de cette crise, que j’espérais plus courte, on en tire un certain nombre d’enseignements. Aujourd’hui, je n’en suis plus aussi certain. Il y a eu un monde d’avant et il y aura un monde d’après, qui ne sera plus le même. Mais le sera-t-il d’une manière bénéfique ou toxique ? Sera-t-on capable de mobiliser des moyens et de transgresser certaines règles qu’on s’impose en amont des crises ? Pourra-t-on avoir un vrai débat sur ce qu’on fait de la dette, sur les financements ? Saura-t-on être disruptifs ? Honnêtement, je n’en sais rien. Mais on ne sortira pas de cette accumulation de crises par le haut avec des outils et des méthodes conventionnels.\nLE MONDE 7 février 2021 propos recueillis par Audrey Garric, Abel Mestre et Perrine Mouterde