🆙 Quelle assurance - Les meilleurs contrats d'assurance vie - Loi Pinel / Garantie Accidents de la Vie / Rachat de Crédit\n🆙 Quelle assurance – Les meilleurs contrats d'assurance vie\nLa vie est pleine de dangers (événements heureux ou malheureux). Pour tout prédire à l'avance, il est impossible de s'assurer à 100% que tout se passera. Personne ne connaît l'avenir et n'est en sécurité dans des circonstances imprévues. Un imprévisible, en fait indéterminé et imprévisible, de manière inattendue et souvent incohérente; c'est un événement qui n'était pas prévu "(Tel que défini dans le dictionnaire Larousse). Comment pouvez-vous vous protéger des tensions de la vie? Afin de répondre à cette demande, les assureurs ont créé une couverture spéciale. Vous avez donc la possibilité de vous inscrire "accident" ou "garantie d'accident" (NAV). C'est une sorte d'assurance, pas obligatoire. Vous êtes libre de décider si vous en avez besoin ou non, même si cela est fortement recommandé.\nQu'est-ce que l'assurance accident?\nSelon la loi, l'assurance-accidents interfère également avec la protection de l'assuré et éventuellement de sa famille (conjoint et enfant à charge) en cas d'accident de la vie quotidienne malheureux et imprévisible. Ainsi, les assureurs indemnisent les victimes si la personne responsable de l'accident ne peut pas être identifiée ou si la personne responsable de l'accident est la personne responsable de l'accident.\nla sélection "Garantie d'accident de vie (GAV)" une étiquette proposée par un groupe d’assurances comprenant un panier de garantie minimale avec un système d’exploitation commun à tous les assureurs qui la signent. Selon le groupe d’assureurs, les contrats et les garanties proposés sont différents. Il est probablement possible d’utiliser le complément de santé ou de sécurité sociale, etc. Dans ce cas, vous n'avez pas besoin de toutes les garanties fournies pour l'assurance accidents. GAV s'applique uniquement aux accidents de la vie courante qui ne sont pas couverts par une autre couverture.\nAssurance accident: risques couverts\nGAV verse une indemnité pour les préjudices corporels suivants résultant de la vie quotidienne:\nAccidents domestiques tels que brûlures, vagues, artisanat, horticulture, empoisonnement, etc.\nLes accidents sont des activités de loisirs telles que le sport, les voyages, etc.\nCatastrophes naturelles et / ou technologiques telles que tempêtes, avalanches, tremblements de terre, effondrement d'un magasin, etc.\nAccidents médicaux – il s'agit d'une garantie de "perte de survie" ou de "courte durée de vie".\nAttaques et / ou attaques.\nVeillez à ce que certains risques puissent être exclus de l'assurance accidents. Par exemple, GAV ne couvre jamais systématiquement les accidents de la route et les accidents. D'autres risques peuvent également être exclus du contrat, en fonction du type de garantie que l'assureur a souscrit, tels que les sports extrêmes. La police d’assurance accidents offre également des garanties supplémentaires telles que:\nla Garantie optionnelle, "Garantie Dommages Garantie". Ceci est pour vous indemniser si vous ne pouvez pas pratiquer des loisirs ou du sport après un accident\nla "Dommages de règlement" ce qui correspond à la perte de chance d'un projet familial suite à un handicap\nla garantie "dommage esthétique". En cas de modification de l'apparence physique de l'assureur, la victime sera indemnisée du préjudice subi\na. t "Préjugé école / université / formation"pour compenser l'interruption du processus d'étude.\nAssurance accidents: niveaux de couverture\nLe contrat d'assurance de base contre les accidents stipule souvent que l'assureur indemnisera la victime si l'invalidité permanente résultant des dommages survient au moins 30% avant l'accident. Encore un taux d'invalidité plus bas peut être négocié 5%.\nLe but de cette indemnisation est d’améliorer les blessures corporelles subies dans le contexte de la vie professionnelle et personnelle, mais dans la vie matérielle et familiale. En cas de décès de la victime (l'assuré), l'assureur assume la couverture morale et économique des bénéficiaires du contrat (la famille). Tu devrais le savoir aussiLes accidents sont couverts lorsqu'ils surviennent dans l'un des pays de l'Union européenne, en Suisse ou dans d'autres pays du monde, si leur séjour est inférieur à 3 mois (sans visa). Le délai de soumission d'une offre d'indemnisation est en moyenne d'au plus 5 mois à compter de la date de la notification de l'accident (ou du décès), et l'assureur devra verser une indemnisation au plus tard un jour. après le consentement de la victime (ou de ses bénéficiaires). Dans le même temps, le montant maximal de l'indemnisation de la victime est de 1 000 000 EUR.\nIl n'y a pas de temps d'attente lors de la signature d'un contrat d'assurance vie. Il est donc couvert immédiatement dans des circonstances imprévues. En outre, certains frais supplémentaires occasionnés par un accident peuvent parfois être indemnisés par l’assureur, tels que les coûts liés au logement ou à l’ajustement du véhicule, ainsi que les frais d’assistance permanente fournie par un tiers et la perte de revenus dans les salaires futurs.\nComment pouvez-vous annuler un contrat d'assurance contre les accidents en cas d'insatisfaction?\nSi vous n'êtes pas satisfait de l'assurance accident actuelle, rien ne l'empêche comparer des organisations concurrentes avec des GAV. En effet, les comparateurs en ligne vous aident à trouver la meilleure assurance vie et accident sur le marché aujourd'hui. Le but est d'aider Choisissez l'assurance accident qui répond le mieux à vos besoins.\nUne fois que vous avez trouvé une offre d’assurance accidents qui convient à votre vie et offre une meilleure protection contre les dangers de la vie quotidienne, continuez résiliation de l'assurance en cours. Il y a deux scénarios:\nou résilier l'assurance-accidents dans le délai annuel,\nou se termine à tout moment en respectant les Préavis de 2 mois dans les conditions générales du contrat.\nLes cas d'annulation hors délai sont également déterminés par la loi (article L.113-6 du code des assurances):\nchangement de résidence, changement de position ou de mariage, changement de profession, retraite ou cessation définitive d'activité\nen cas d'augmentation de la prime d'assurance en dehors du cadre légal. La loi n'est pas obligée de l'accepter\nEn cas de modification unilatérale du contrat\nVous en aurez toujours besoin envoyer la lettre recommandée contenant l'accusé de réception à l'assureur. En cas de résiliation après le paiement annuel, joignez les pièces justificatives en votre possession. Tout d'abord, conservez une copie de votre email et notification réception.\nUn exemple de lettre sur la résiliation d'une assurance accident\nCoordonnées de l'assureur\nObjet: Résiliation du contrat d'assurance accidents\nJe vous informerai que j'ai l'intention de résilier le contrat … … je vous défendrai contre les accidents de la vie … pour la raison suivante (le cas échéant):\nJ'ai signé ce contrat il y a moins de deux semaines et je suis admissible à la Loi sur les assurances L 112-9\nLe contrat …\nLa modification du contrat ne me convient pas\nLa prime a augmenté\nMa situation personnelle a changé avec le mouvement, la retraite, etc. Due (spécifiez la date de l'événement et ajoutez un document justificatif).\nJe vous souhaite une bonne réception. Veuillez agréer, Monsieur, madame, l’expression de mes salutations distinguées.\nVous trouverez ici une garantie d'accident de la vie:\n🆙 Loi Pinel Simulation – Comment signaler mon investissement dans Pinel Law?\n🔝 Indemnisation – Quel est le numéro de téléphone de la filiale de Pacifica au Crédit Agricole?\nChien Malade Se Cache\nSanté Animale Pdf\nMutuelle Pour Les Chien\nℹ Loi Pinel Explications – Louer une nouvelle propriété\nCategory: Garantie Accidents de la Vie Étiquettes : assurance, contrats, d39assurance, les, meilleurs, Quelle, vie, x1f199\n🆙 Loi Pinel 2019 – Loi Pinel 2019 – Comment le programme Pinel sera-t-il né en 2019?\n🔝 Loi Pinel Nouveautés – Êtes-vous contre la loi Pinel? Laissez votre avis\n✅ Rachat de crédits – La Banque Postale – La Banque Postale – Taux Attractif


Rabais Flotte pour les collaborateurs de l’entreprise Bony Tapissier Décorateur | Rabais flotte\nConditions de flotte Bony Tapissier Décorateur\nRaison sociale: Société Bony Tapissier Décorateur\nL’étude de votre demande pour les collaborateurs de la société Bony Tapissier Décorateur est gratuite. Notre commissionnement est pris en charge par l’agence ou le revendeur automobile qui fera l’effort de vous gagner comme client.\nSi vous décidez d’établir un partenariat avec un constructeur automobile pour la société Bony Tapissier Décorateur, la durée sera généralement d’une année et le rabais sera révisé à la hausse ou à la baisse à la date anniversaire. Les conditions sont négociées par le siège ou le responsable régional qui communiquent votre rabais à tout le réseau. Vous pouvez toutefois faire une demande spéciale si vous jugez que ce rabais est insuffisant à comparer d’une marque concurrente par exemple\nQue vous soyez gérant de l’entreprise Bony Tapissier Décorateur ou collaborateur, nous négocions avec vous la meilleure transaction automobile.\nVous êtes collaborateur de la société Bony Tapissier Décorateur et souhaitez acheter un véhicule neuf de marque Audi grâce votre remise d’entreprise? Nous vous accompagnons dans les démarches afin de vous garantir le rabais optimal\nVous êtes collaborateur de la société Bony Tapissier Décorateur et souhaitez acheter un véhicule neuf de marque Mercedes-Benz grâce votre remise d’entreprise? Nous vous accompagnons dans les démarches afin de vous garantir le rabais optimal\nVous êtes collaborateur de la société Bony Tapissier Décorateur et souhaitez acheter un véhicule neuf de marque BMW grâce votre remise d’entreprise? Nous vous accompagnons dans les démarches afin de vous garantir le rabais optimal\nVous êtes collaborateur de la société Bony Tapissier Décorateur et souhaitez acheter un véhicule neuf de marque MINI grâce votre remise d’entreprise? Nous vous accompagnons dans les démarches afin de vous garantir le rabais optimal\nLa société Bony Tapissier Décorateur, sa direction et ses collaborateurs peuvent prétendre à un rabais flotte sur l’achat d’un véhicule neuf chez de nombreux constructeurs automobiles.\nEn Messerin, route de l’Etraz 101, 1197 Prangins\nBony Bruno, de France, à Gex (France)


Par bobinfo Le 19 décembre 2017, 13:52\nNouveau Site ....? Je suis completement abasourdi de la nouvelle facture du site .\nOn ne peut voir le transporteur , les heures , si les taxes départ sont incluses ...\nPeut-etre que je suis trop habitué à l'ancen format ...\nPour le moment je pense que c'est un grand pas en ARRIERE...\nProgrammeurs , je vous pose la question : avez-vous fait des focus group pour voir ce que les usagers\nPar Kessy-rabais Le 19 décembre 2017, 18:29\nNous sommes présentement en train d'analyser certains ajustements pour faciliter la recherche des utilisateurs. Si vous avez d'autres commentaires constructifs, nous vous invitons à nous en faire part.\nPar bfsc600 Le 19 décembre 2017, 21:25\nC'est ce que l'ont appel de la grosse merde qui ne fonctionne pas a moitié\nPar bfsc600 Le 19 décembre 2017, 21:30\nJe fait une recherche pour un forfait vers le sud et quand je clic ou je veux allez..... aucun choix...... bravo au concepteur pour un site qui ne fonctionne pas du tout.\nPar michelpoi Le 20 décembre 2017, 10:17\nPour kessy le site ou je vais présentement en plus d'afficher les heures de vols nous donne la distance en kilomètre ainsi que le temps de déplacement à partir de l'aéroport ce serait une bonne idée je crois pour votre site. Souvent on se question sur la situation du club quand c'est un endroit ou on n'est pas familier. Si on hésite entre deux club et qu'un des ces clubs nécessite deux heures d'autobus contre 15 minutes pour l'autre ça peut orienter la décision


Blog WiFi / 3G / 4G / Hotspots – Altitude, fibre et FH\nblog novembre 03, 2010 Infrastructure, WiFi, Wimax\nVoici une bien belle présentation d’Altitude, sous la plume du site Les Numériques : Altitude est l’une des premières entreprises à avoir déployé du Wimax, avec 13 licences régionales et la gestion de 17 réseaux d’initiative publique. L’idée est de fournir 2 Mbps minimum par foyer, et des débits supérieurs aux entreprises (4 à 7 Mbps selon les cas).\nIl semble qu’aujourd’hui Altitude prenne un tournant, ne se contentant plus de couvrir en haut débit les zones isolées, mais souhaitant investir dans des réseaux fibrés FTTH (Fibre jusqu’à la maison), en s’inscrivant dans le Plan Très Haut Débit destiné à fournir, à l’horizon 2025, 100 MBps à chaque foyer.\nDavid El Fassy, PDG d’Altitude Infrastructure évoque ainsi le FTTH-FH, une fibre tirée depuis chaque habitation vers un point de collecte qui repart ensuite via des faisceaux hertziens haut débit. Ainsi, moins d’infrastructure pour déployer rapidement un réseau cohérent, avec des débits de 30 à 50 Mbps.\naltitude infrastructureles numériqueszones blanches


HTML tag <dfn>\nLe tag <dfn> est utilisé pour séparer le terme, qui est mentionné pour la première fois. Dans le navigateur, le contenu du tag est indiqué en italique.\nLe tag <dfn> est apparié; le contenu est écrit entre le tag ouvrant (<dfn>) et le tag fermant (</dfn>).\n
<dfn>HTML</dfn> (de l’anglais HyperText Markup Language — «langage de balisage hypertexte») — un langage de balisage standardisé pour les documents sur le World Wide Web. La plupart des pages Web contiennent une description de balisage HTML
\nL'élément <dfn> a un attribut a title. La valeur de l'attribut title est considéré comme le terme qui est défini.\n
Passez la souris sur pour voir la définition.
\nPassez la souris sur pour voir la définition.\ntitle Donne une définition au terme (affiché en cliquant le curseur).\nLe tag <dfn> supporte également les Attributs globaux et les Attributs d'événements.\nComment styler le tag HTML <dfn> ?\nPropriétés communes pour modifier le poids visuel/emphase/taille du texte dans le tag <dfn>:\nColoration du texte dans le tag HTML <dfn>:\nStyles de mise en page du texte pour la tag HTML <dfn>:\nAutres propriétés utiles pour le tag HTML <dfn>:


CES 2006 : HD-DVD et Blu-ray au coude à coude\nLas Vegas, CES 2006 : Après l’échec des négociations qui auraient permis de lancer un seul et unique format succédant au DVD, les industriels à l’origine des nouveaux standards ont purement et simplement décidé de continuer chacun leur route : Sony, Pioneer, Philips, Samsung et Panasonic pour le Blu Ray Disc, Toshiba, Sanyo, Intel, Thomson et Microsoft – entres autres - pour le HD-DVD.\nLe HD-DVD a de l'avance\nToshiba, maitre d’oeuvre du format HD-DVD, annonce le lancement pour le milieu de l’année aux états unis de deux platines au design ravageur. Aussi belles qu’abordables, ou presque, les HD-A1 et HD-XA1 seront commercialisées respectivement au prix de 500 $ et 800 $. On annonce une compatibilité complète avec tous les formats audio Dolby et DTS flux HD aussi. Du côté de la vidéo, le DSP intégré supporte les flux 720p et 1080i dans des les formats de compression variés : MPEG-4 AVC, VC-1, et MPEG-2. Entre HD-A1 et HD-XA1, la seule différence se situe au niveau du processeur audio plus sophistiqué et de la connectivité, plus complète sur le modèle onéreux.\nD’autres constructeurs sont également dans la course avec des produits présentés sous forme de prototypes, sans dates ni spécifications annoncés pour l’heure. C’est le cas de Sanyo, RCA / Thomson ou LG dont les machines devraient toutefois voir le jour courant 2006.\nCôté informatique, Toshiba et HP proposent des produits près pour recevoir le HD-DVD. Microsoft aussi, annonce la sortie d’un lecteur HD-DVD externe pour sa console nouvelle génération.\nOn notera que le format est supporté par Intel et Microsoft ce qui accentue sa présence sur les différents stands du salon.\nCoté softs, le HD-DVD est également supporté par de nombreuses majors. De nombreux films sont d’ores et déjà prévus : Million Dollar Baby, Harry Potter 4 The Goblet of Fire, Blazing Saddles, Full Metal Jacket, Jarhead, Sahara et Sky Captain and the World of Tomorrow. Studio Canal annonce également la sortie de Shakespeare in Love. Le consortium HD-DVD se fend d’une annonce impressionnante : 50 titres d’ici au mois de mai 2006. On distribue même des HD DVD de démo, sur certains stands commençant par M et finissant par … crosoft.\nLe Blu-Ray n’est pas loin\nEn termes de diversité de produits présentés sur le salon, et non en volume, le Blu-ray supplante largement le HD DVD. La première platine de salon à voir le jour dans les mois à venir sera la Samsung BD-1000, commercialisée au prix de 1000 $. Elle donnera accès à ce nouveau format HD ainsi qu’à la totalité des standards physiques (DVD-RAM, DVD+/-R/W) ou logiques (DVD Vidéo, DVD Audio, etc.).\nChez Pioneer, la platine BDP-HD1 sera disponible sur le marche US vers le mois de mai pour quelques 1800 $. Annoncée comme très performante, elle véhiculera des flux audio multi canaux haute définition et disposera de sortie vidéo compatibles 1080p. Une fonctionnalité Windows Media Connect permettra à l’utilisateur de relier sa platine à un ordinateur PC.\nD’autres constructeurs présentaient leurs platines mais aucune disponibilité ni spécifications n’étaient indiquées. Sharp, Sony (PS3 Incluse), Philips, Hitachi seront de la partie courant 2006.\nPour les contenus, Paramount annonce sans aucune date définitive la sortie des premiers titres : Four Brothers, Sahara , Aeon Flux Sky Captain & the World of Tomorrow, The Italian Job Tomb Raider, U2: Rattle and Hum, Sleepy Hollow, We Were Soldiers Manchurian Candidate.\nLa 20 th Century Fox commercialisera courant 2006 une vingtaine de titres avec notamment Fantastic Four, La ligue des Gentlemen Extra Ordinaires, le Baiser du dragon, l’Age de glace.\nLe HD DVD reste d’après ce que nous voyons ici, un peu en avance au niveau des titres et des produits qui seront commercialisés (très) prochainement. Toutefois, les forces peuvent basculer très rapidement : il suffit qu’un studio ou constructeur communique sur des dizaines de titres, ou un produit Blu Ray abordable, pour que soit affecté le fébrile penchant que peut avoir le public.\nBlu-ray et HD-DVD : autres articles


Recettes végétariennes de Citrons de L'Arbre-en-ciel\nLes recettes végétariennes de citrons du blog L'Arbre-en-ciel : 7 recettes végétariennes de citrons sont référencées sur le blog L'Arbre-en-ciel. (867 sur l'ensemble des blogs)\nPetites crêpes soleils thym-citron ☼ -\nL'Arbre-en-ciel 11/03/16 17:15\nL a nuit venait. Non pas la nuit naturelle, celle qui précède et suit le jour, non, la nuit totale. La Grande Étoile, celle qui éclairait et réchauffait la planète Thymonia, était en train de rendre son dernier rayon. Sa luminosité décroissait de jour en...\nPetites crêpes soleils thym-citron -\nLa nuit venait. Non pas la nuit naturelle, celle qui précède et suit le jour, non, la nuit totale. La Grande Étoile, celle qui éclairait et réchauffait la planète Thymonia, était en train de rendre son dernier rayon. Sa luminosité […] L’article Petites...\nLa nuit venait. Non pas la nuit naturelle, celle qui précède et suit le jour, non, la nuit totale. La Grande Étoile, celle qui éclairait et réchauffait la planète Thymonia, était en train de rendre son dernier rayon. Sa luminosité […]


Nouvelles des produits 2021 - Werth Messtechnik\nLa tomographie à rayons X gagne en puissance ; la technologie multicapteur devient encore plus flexible\nWerth Messtechnik, Gießen, Allemagne, présente un nouveau tube sub-microfocus dans le domaine de la tomographie assistée par ordinateur ainsi qu'un nouveau TomoScope XS d'une puissance de 500 W, particulièrement adapté aux mesures en ligne. La flexibilité de la famille d'instruments multicapteurs ScopeCheck® FB a été étendue par un troisième axe de capteur et une combinaison unique d'une unité rotative/inclinable et d'un capteur ligne chromatique.\nLe ScopeCheck® FB de Werth, qui présente une conception multiaxe Z pour une intégration parfaite de la technologie multicapteur, est maintenant disponible avec un, deux ou trois axes de capteur indépendants. Cela permet d'utiliser une gamme encore plus large de technologies multicapteurs sans restriction et sans changement de capteur fastidieux. Chaque capteur est monté sur son propre fourreau en Z, et les axes avec les capteurs non actifs sont placés dans une position de parking en dehors de la plage de mesure. Avec des plages de mesure allant de 530 mm x 500 mm x 350 mm à 2130 mm x 1000 mm x 600 mm, cette famille de machines est idéale pour mesurer un large éventail de pièces de grande taille.\nLa combinaison largement utilisée du traitement de l'image et du palpeur conventionnel est obtenue, par exemple, en utilisant le multicapteur breveté composé du Zoom Werth et du Palpeur Laser Werth dans le premier coulisseau et d'une tête rotative pivotante pour les mesures par palapge dans toutes les directions dans le second. Le Palpeur Fibre® 3D Werth brevetée, et le capteur de ligne chromatique ou une focale fixe de haute précision à grossissement constant peuvent être montés dans le troisième fourreau.\nMesure multi-capteurs avec traitement d'image et Werth Zoom (à gauche), palpeur mécanique sur tête orientable (au centre) et capteur de ligne chromatique (à droite) sur ScopeCheck FB (© Werth Messtechnik)\nComme presque tous les instruments Werth, le ScopeCheck FB® peut être équipé d'un axe rotatif/inclinable flexible. Le nouvel axe, doté d'une technologie de roulement spéciale, permet désormais d'effectuer des mesures multipoints sur des pièces 3D grandes, lourdes et complexes. Un axe de rotation/inclinaison pour la pièce remplace souvent les articulations complexes pour les capteurs et permet également d'accéder aux zones correspondantes de la pièce pour les capteurs plus grands. Des surfaces orientées différemment peuvent être alignées de manière optimale sur le système de capteurs et mesurées. Les axes de rotation/inclinaison peuvent être facilement montés dans n'importe quelle orientation en tant qu'accessoires.\nLes axes de rotation et d'inclinaison permettent de résoudre des tâches de mesure complexes\nExtension de la famille d'instruments TomoScope® XS\nAvec le Werth TomoScope® XS FOV 500, la tomographie haute performance est maintenant disponible au prix des machines à mesurer tridimensionnelles conventionnelles. Le tube à rayons X sans entretien, de conception monobloc, a une tension de 160 kV et fournit des résultats de mesure rapides avec une puissance de 500 W. La nouvelle machine bénéficie d'une garantie de deux ans sur le tube à rayons X et n'a pas de limites de temps d’utilisation. Elle permet également des mesures en cours de processus ou en ligne grâce au fonctionnement OnTheFly et à la reconstruction en temps réel. Elle se caractérise par la possibilité d'un chargement robotisé. Les interfaces avec les différentes solutions logicielles des entreprises peuvent être entièrement automatisées et intégrées. La configuration de base sans axes de mesure mobiles de la nouvelle unité convient à la plupart des applications pour des pièces jusqu'à une taille d'environ 150 mm.\nLes appareils TomoScope® XS et XS Plus sont équipés de tubes microfocus de conception monobloc avec une tension de 160 kV et une puissance allant jusqu'à 80 W pour des points focaux de l'ordre du micromètre. Les mesures multi-objets, combinées à la puissance relativement élevée du tube, permettent également des mesures en ligne, et hors ligne avec des exigences élevées en matière de résolution et de précision. Plusieurs petites pièces, comme des implants médicaux, peuvent être mesurées ensemble et les nuages de points de mesure seront automatiquement séparés dans le logiciel de mesure. Le temps de mesure n'est que de quelques secondes par pièce. Le tube micro-focus permet également d'atteindre une très haute résolution, ce qui est nécessaire pour la mesure précise de petits détails tels que les bavures.\nLe tube à rayons X sans entretien du TomoScope XS FOV 500 en version monobloc a une tension de 160 kV et fournit des résultats de mesure rapides avec une puissance de 500 W\nCombinaison d'un tube sub-microfocus et d'un tube microfocus à haute tension\nUne nouvelle solution combine un tube sub-microfocus avec un tube microfocus ayant une haute tension allant jusqu'à 300 kV à une puissance de 80 W pour former un système de mesure à deux tubes. Avec des taches focales de quelques micromètres, même les pièces de grande taille ou denses peuvent être mesurées avec une résolution et une vitesse élevées. En outre, l'instrument est équipé d'un capteur de point focal chromatique pour les mesures optiques.\nLe nouveau tube sub-microfocus, avec une tension de 160 kV et une puissance maximale de 30 W, permet d'obtenir une taille de tache focale inférieure à un micromètre en refocalisant le faisceau d'électrons. La résolution volumique réalisable est du même ordre de grandeur. Cela permet, par exemple, de mesurer la forme et l'interaction des particules.\nNouvelles fonctions logicielles pour la tomographie par ordinateur\nLes programmes de mesure pour les instruments TomoScope® peuvent maintenant être créés complètement hors ligne. À cette fin, le modèle CAO de la pièce, le matériau et les paramètres de mesure sont utilisés pour simuler le volume voxel de la pièce et le nuage de points, en tenant compte de la géométrie de l'appareil définie virtuellement dans les graphiques 3D. Grâce à la simulation, le programme de mesure créé est également très proche de la réalité dès le début et le processus de mesure peut commencer immédiatement. Les pièces peuvent maintenant être mesurées à n'importe quel endroit du faisceau de rayons X sans qu'il soit nécessaire de procéder à un étalonnage séparé du grossissement.\nL'autocorrection virtuelle VAK, basée sur la simulation du processus de mesure CT, peut maintenant aussi être utilisée pour la correction des artefacts du faisceau conique. Les mesures de référence montrent une réduction des artefacts de 90 % et une précision de mesure supérieure correspondante.\nAutre nouveauté : la laminographie oscillante et planaire, où la plage angulaire pour la capture des images de transmission est réduite, ce qui permet de mesurer des pièces présentant des rapports d'aspect importants, comme les cartes de circuits imprimés. L'affichage commun des écarts pour les comparaisons 3D globales et locales entre le nominal et le réel permet une évaluation plus facile des résultats de mesure.\nStructure fibreuse d'un filtre (à gauche) et profondeur de pénétration des particules (à droite, vue de l'intérieur de la pièce vers la surface) avec des dimensions de l'ordre du micromètre (© Werth Messtechnik)


Ham-sur-meuse les entreprises où il faut absolument travailler - avantages salariés\nAvantages et conditions de travail > Ham-sur-meuse\nTravailler à Ham-sur-meuse : les avantages à Ham-sur-meuse et les meilleures entreprises où travailler\nAvantage-Entreprise.com recense les avantages salariés et des avantages sociaux des employeurs qui disposent de leur siège social ou d'une antenne sur la ville de Ham-sur-meuse. Toutes les entreprises sont représentées, des TPE PME en activité sur Ham-sur-meuse aux plus grands Groupes. Le tableau des avantages salariés vous permet de choisir la meilleure entreprise à Ham-sur-meuse en fonction des avantages sociaux, des primes et autres avantages offerts à leur salariés. Vous pouvez aussi chercher parmis nos offres d'emplois sélectionnés sur la ville de Ham-sur-meuse et sa région.\nConsultez les avantages offerts par chaque employeur à Ham-sur-meuse et vérifiez les offres d'emploi disponibles.\nQuelle est la meilleure entreprise pour travailler sur Ham-sur-meuse\nPourquoi travailler à Ham-sur-meuse ? Voici les avantages salariés auxquels vous pouvez prétendre chez les entreprises localisées à Ham-sur-meuse et à ses alentours. Ces avantages sont calculés sur la base des entreprises disposant à minima d'un établissement ou d'une antenne sur Ham-sur-meuse et qui sont référencées par Avantage-Entreprise.Com.\nLes offres d'emploi à Ham-sur-meuse\nTrouver un travail à Ham-sur-meuse en consultant et en postulant aux offres des entreprises ci-dessous :\nPrès de Ham-sur-meuse\nLes avantages d'un emploi à Ham-sur-meuse


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Blog – Treasures of Lisboa\nPublié le avril 7, 2021 par Treasures of Lisboa Food Tours\nLisbonne vue du ciel, cela n’a pas de prix. Voir le contraste entre le ciel d’un bleu vif et la couleur ocre typique des toits de la ville est un vrai régal pour les yeux.\nAlors quoi de mieux que de profiter de ce spectacle avec un verre à la main ? Découvrez comment allier plaisir des yeux et régal pour les papilles avec notre liste des 5 meilleurs rooftops bars de Lisbonne.\nLe Food Tour est une expérience qui combine a là fois découverte culturelle et gastronomique d’une ville, d’une région, ou d’un pays.\nLe principe est simple : un guide local vous fera déguster des mets typiques dans différents restaurants, bars ou lieux insolites tout en vous faisant partager ses connaissances sur l’histoire des endroits visités.\nIcône de la gastronomie portugaise au même titre que le célèbre bacalhao, la sardine est devenu un des symboles de Lisbonne.\nVous pourrez la déguster dans tous les bons restaurants de la ville, même si nous vous conseillons d’attendre le mois de mai pour en profiter, elle n’en sera que plus savoureuse!


ZAZA JARDIM : Cette artiste brésilienne vient d’exposer au Carrousel du Louvre.\nZaza jardim ou les fibres de l’artiste… Dans le recyclable… Originaire de São Paulo, elle vit aussi à Paris la plupart du temps quand elle ne voyage pas.\nZaza pour les intimes, tour à tour poétesse, penseuse, artiste multi facettes est nommée “Artola recyclée“. Ses matières premières sont le papier. Les éléments employés, uniquement les pigments de couleur tels : la terre, l’eau, le soleil et la pluie.\nElle poursuit inlassablement sa recherche sur les fibres pour employer le papier au mieux de son art.\nSon étude du papier est l’héritage d’une technique ancienne de l’époque du “Papyrus brésilien” afin qu’elle puisse créer l’identité propre à la texture de l’œuvre qui s’impose comme sa marque perso à une nouvelle matière première en vue d’être utilisée dans l’art pour établir un dialogue universel.\nA savoir que les fibres ont des comportements différents selon le moment du papier et du type de fibre qui reflète une immense diversité.\nZaza croit dans la densité et la pigmentation. En trois ans, ce sont plus de deux mille oeuvres et plus de 40 techniques qui s’additionnent.\nZaza parcourt le monde librement au gré de ses envies. Elle se trouve en parfaite symbiose avec le choix du cheminement qu’elle décidé pour sa vie, même si elle a abandonné le confort de sa maison. C’est avec passion qu’elle vit le recyclage de la planète au quotidien pour l’expression de son art en totale conformité avec sa propre philosophie.\nEn 2012, elle crée un atelier au milieu de la forêt dans le sud de la France et produit des œuvres avec des pigments locaux du site de Lascaux. Sa recherche s’intensifie précisément dans les couleurs de la terre et de son contexte historique, que ce soit dans la nature autour de ce site pour documenter l’origine de ses empreintes digitales. Elle à été élue par le BIO de l’art français en qualité d’artiste du produit recyclé qui est un nouveau mode d’expression de l’art contemporain.\nZaza déclare “Toujours avec cette philosophie qui est l’expression fondamentale dans ce mouvement de pensées alchimiques : le recyclage. Une graine recyclée dans l’esprit d’une philosophie artistique, crée de toute évidence l’art Zazaismo.“\n“Un récit séculaire proche du dadaïsme, qui reconnaît penser vers une nouvelle approche de la prochaine génération… Ainsi, il est possible de faire de l’art à partir des fibres en tout lieu et quel que soit le pays“.\nZaza Jardim dispose d’une représentation officielle de l’AVA GALLERIA dont le siège est situé à Helsinki - Finlande. www.zazajardim.tumblr.com\nDe nombreuses expositions à son actif :\nPrêmio Tarsila do Amaral de Arte Contemporânea - Dezembro/2011 Principais Exposições Expos no Brasil: Prédio da Bienal - Arquishow abril/2010 Asia70 - Out/2010 Santa Gula Jan/2011 Mercearia jan/2012 Expos Mundo Carrousel du Louvre - Paris France junho/2012 Chartrier Ferriere - France Julho/2012 Helsinki agosto/ 2012 Carrousel du Louvre Paris - France outubro/2012 Carrousel du Louvre Paris France junho/2012 – 7, 8, et 9 junho 2013 Carrousel du Louvre Paris France\nÉcrit par François-Mary Bourreau (pour brasil-infos.com)\nPhotos fournies par l’artiste


Dogpile.com moteur de recherche?\nMai 6th, 2004, 3:33 pm\nMon père et moi avons eu une conversation au sujet de Google et Dogpile, il estime que Dogpile est le moteur de recherche de dieu (même si elle utilise les résultats de recherche de différents moteurs de recherche, y compris google) je suis en désaccord...htttp://dogpile.comDogpile a beaucoup changé depuis la première fois que je l'ai utilisé (je suppose pour le mieux), maintenant sa devient de plus en plus comme google. Il était assez unique et d'une liste des recherches les concernant à votre recherche (exemple: si vous cherchez "ford voiture", dans la liste, il pourrait avoir "ford mustang voiture»)Alors, que pensez-vous de dogpile.com? Il serait mieux si vous byitself examiné, puis il a examiné la comparaison avec les autres, parce que je ne veux pas entendre "des moteurs de recherche sucks, yahoo.com pour la vie. "BTW, personne ne dispose d'aucune information sur google tarification pour les gens supérieurs et / ou le haut du classement dans les résultats de recherche? Mon père dit que vous pouviez acheter votre rang et de verser de l'argent à Google pour être à la première place pour une recherche et que vous pouvez trouver à travers des lunettes de publicité options...Mais je ne pouvais pas trouver quoi que ce soit.\nMai 6th, 2004, 4:56 pm\nque moteur de recherche sucks, yahoo.com pour la vie!JKJe n'ai pas utilisé Dogpile pendant une longue période et, en général, bâton à la recherche de google. Je vois qu'ils ont un metsearch et de recherche pour les différents moteurs. Je suppose que cela peut être utile pour certaines personnes, mais pas quelque chose que je regarde, je pense seo recherche a fait de moi une certaine manière.Quant à payer pour les classements de la libre SERPS, ne l'a jamais passé et ne va se passer. S'il voit quelque chose, sur le paiement de ses plus élevé pour obtenir de positionnement dans la publicité payée, google adwords.\nMai 7th, 2004, 5:22 pm\nCes jours-ci, de son entre Google et Yahoo. Ils sont presque cou cou. La plupart se concentrent sur Google SEO cependant.Je pense que ce que vous parlez est AdWords, vous avez à payer pour que votre site soit répertorié. Sur Yahoo, Overture résultats au sommet de la liste parrainée également.\nMai 7th, 2004, 11:56 pm\nvotre père ont confondu mon placement indirect de garanties, aussi.c'est-à-dire les entreprises SEO prometteur d'une certaine place.J'utilise habituellement pour tout google, altavista, si je ne le trouve pas sur google (leur recherche d'images Google bat vraiment).\nMai 10th, 2004, 8:15 am\nVous savez montre Altavista Yahoo listings.\nMai 18th, 2004, 5:12 pm\neCommando a écrit: Ces jours-ci, de son entre Google et Yahoo. Ils sont presque cou cou. La plupart se concentrent sur Google SEO cependant.Je pense que ce que vous parlez est AdWords, vous avez à payer pour que votre site soit répertorié. Sur Yahoo, Overture résultats au sommet de la liste parrainée également. True-39,4% des recherches de passer par Google (plus une autre de 15,5% pour AOL, qui est alimenté par Google), et 30,4 par Yahoo. MSN est un gros morceau de whats reste.\nJuin 20th, 2004, 2:42 am\nJe suis de loin, un vrai fan de Yahoo. Pour moi, et peut-être seulement moi Yahoo est de loin le plus propre look. Lorsque je recherche les fichiers d'images comme le définissent les meilleures.Voici un autre vote pour YAHOO!\nInscription: Juin 21, 2004Messages: 32\nJuin 21st, 2004, 10:31 pm\nParlant de Dogpile j'étais simplement en regardant les prix et de l'homme Ils coûtent beaucoup! Jetez un coup d'œil...Étape 1: Entrez WebSites http://www.webhostsinfo.com $ 99.9510 Sous-Adresses1 année la listeSous-total 99,95 $Etape 2: PublicPlusSearchers garanti sur la liste desRéseau de partenaires de recherche. 49,98 $Sous-total 49 $. 98Etape 3: Sélectionnez les résultats de suivi $ 99.95Les titres et les descriptions de rapports $ 89.95Options Advanced Reporting. $ 79.95Sous-Total $ 269.85Etape 4: paiement refusé rapide 24 heuresla liste de réponse. $ 0,00Sous-Total: 0,00 $Tax $ 0.00Total $ 419.78Dave\nInscription: Sep 06, 2004Messages: 1\nSeptembre 6th, 2004, 3:44 am\nEst-ce que quelqu'un sais Dogpile.com source code?Je veux construire un site web qui ne sont les mêmes que Dogpile.com (à l'exclusion des éléments de fantaisie ..)il serait utile si quelqu'un peut me montrer les codes ou des liens qui montre le code source d'un tel site Web.merci\nSeptembre 6th, 2004, 3:55 am\nJe suis tout à fait comme la nouvelle génération de moteurs comme killerinfo et IceRocket.Dogpile est un tas de chiens?yahoo est OKGoogle est OKMSN n'est pas impressionnantaltavistas image / media recherches sont très bonnes.que pour le code source d'un moteur de recherche, je voudrais aussi.\nSeptembre 10th, 2004, 7:19 pm\nYahoo craint que si vous aimez le spam. Pour notre marché, les vingt premiers résultats de Yahoo sont pleins de sites avec un chapeau noir. Old school stuff too. Doorway pages, masqué, caché du texte, les balises spam, votre nom, de son là. Je pense que MSN devrait se concentrer sur Yahoo battre, pas google. Ils auraient une meilleure chance d'obtenir une plus grande part de marché de cette façon.\nMoteurs de rechercheDogpile.com moteur de recherche?


Mille et une bobines: Folie à l'italienne\nLes jours fériés qui tombent un dimanche sont un peu déprimants. Allons de l'avant, voulez-vous ? Puisque le Festival de Cannes débute mercredi prochain, j'ai cru intéressant de revenir sur l'édition 1966. Voilà cinquante ans, donc, la Croisette célébrait l'Italien Pietro Germi et Ces messieurs dames. Une comédie (un peu) trop folle pour moi...\nCannes ne remettait pas alors de Palme d'or, mais un Grand Prix international. L'histoire retient que Pietro Germi eut à aller chercher le sien sous les huées. Aux festivaliers mécontents, le réalisateur répliqua: "Pardon de vous avoir fait rire...". Pile-poil un demi-siècle plus tard, je dois bien avouer que Ces messieurs dames m'a fatigué plus qu'autre chose. Découpé en trois segments, le film montre d'abord de nombreux couples aller ensemble à une fête. L'occasion d'épingler une certaine société, à grands renforts d'allusions salaces et de moqueries réciproques. Mouais... les deux autres parties reprennent les mêmes personnages: un père de famille espère bâtir une relation adultère avec une petite vendeuse et une jeune ingénue conduit ses admirateurs au tribunal pour détournement de mineure...\nSigne de mon peu d'intérêt pour tout ça: j'ai dû consulter Wikipédia pour me souvenir du troisième pitch. Allez.. il est possible toutefois que cette proto-Palme obtienne vos faveurs, si vous goûtez les films à tiroirs emballés d'une certaine hystérie collective. Les comédiens s'en donnent manifestement à coeur joie et se lâchent totalement. Personnellement, je ne suis pas réceptif, mais je n'ai pas la science infuse - c'est juste ce type de comédies qui ne me correspond pas. Parce que, finalement, je connais encore mal l'histoire du cinéma italien, je veux bien croire que Ces messieurs dames corresponde également à une étape importante de son évolution. L'irrévérence débridée dont il témoigne a d'ailleurs quelque chose de sympathique. Disons donc pour résumer que je suis tout simplement passé à côté...\nFilm italien de Pietro Germi (1966)\nC'est moi qui suis allergique, peut-être: autre comédie italienne ancienne, Le pigeon (1958) m'avait laissé assez froid. Mamma mia ! J'en suis réduit à attendre d'autres prochains essais pour conclure. D'ici là, un mot encore pour souligner que Ces messieurs dames n'était pas seul au plus haut du Festival de Cannes 1966: il partageait son Grand Prix avec Un homme et une femme. Film que je préfère...\nQuand je vous dis que je n'ai pas la science infuse...\nLe film a ses admirateurs: Dasola, Eeguab et Lui, par exemple. J'ajouterai aussi Sophia Loren, présidente cannoise cette année-là...\nHello l'ami. J'allais écrire mon désaccord pour cette fois et je me suis apercu que tu avais déjà lu mon billet et gentiment mis le lien. Donc rien à rajouter sinon que j'ai découvert ce film il y a quelques années seulement. Et que dans les films à sketchs il n' y a pas que des réussites, les sketchs étant parfois très inégaux.Je ne déteste pas Un homme, une femme mais je préfère Ces messieurs dames. La coincidence des titres est amusante. A bientôt.\n8 mai 2016 à 12:28\nJ'ai trouvé aussi cette similarité de titres assez drôle, compte tenu que les deux films ont été "palmés" simultanément. En dehors de cette anecdote, la comparaison ne tient guère, à vrai dire.\nComme tu l'auras compris, je respecte le travail de Pietro Germi, mais je n'ai pas accroché au résultat. Peut-être que c'est lié au fait que je n'ai pas réussi à replacer le film dans son contexte ou parce que j'accorde trop d'attention à ce contexte. Bref... je suis content que ta chronique puisse constituer un juste contrepoint.\nMoi aussi, je n'aime pas trop les films à sketch (à la rigueur Les Monstres), et le seul Pietro Germi que j'ai vu (Divorce à l'italienne) m'avait un peu déçu.\nDans un genre plus mélancolique mais toujours avec l'esprit de satire de la comédie italienne, tu pourrais essayer de voir Une Vie difficile et Le Fanfaron de Dino Risi. J'apprécie tout particulièrement le premier (un chef-d'oeuvre), où Sordi est fabuleux. Il y a aussi La Grande Pagaille de Comencini qui est formidable (et puis, il y a à nouveau Sordi).\nToujours de Comencini, si tu aimes les films qui traitent de l'enfance, il y a aussi L'Incompris et Casanova, une adolescence à Venise de Comencini sont incontournables. Si tu vois le premier, pense à avoir une boite de mouchoirs à portée de main. Mais ce ne sont pas des comédies italiennes.\nPour revenir vers la comédie italienne justement, si tu aimes les comédies de groupe, Mes Chers amis de Monicelli devrait te ravir.\nEt si tu aimes Marcello et Sophia, il y a le jubilatoire Mariage à l'Italienne de De Sica.\nPour ressortir de la comédie italienne, mais toujours dans le cinéma italien, si tu aimes les metteurs en scène qui sont en même temps des esthètes, il y a les grands Fellini (dont j'aime par dessus tout Huit et demi) et les grands Visconti (dont j'aime par dessus tout, mais tu le sais déjà, Le Guépard). Et je ne parle pas des chefs-d'oeuvre néo-réalistes de De Sica et Rosselini (le voleur de bicyclette, etc.)\nEt puis, aujourd'hui, il y a Nanni Moretti, héritier parfois un peu dépressif de la comédie italienne dont Carnet Intime et Aprile sont de formidables bulles de bonne humeur et de mélancolie à la fois.\nBon, j'arrête cette liste à la Prévert, un peu fourre-tout et qui ne saurait de toute façon être complète. :)\nWaouh, ça, c'est du commentaire ! Ta liste n'est peut-être pas complète, amico mio, mais elle me donne de très nombreuses pistes d'exploration. Grazie mille a te !


[Spyworld Actu] Cybercriminalité : Défi mondial - 2e édition\nAccueil du site > Informatique > Cybercriminalité : Défi mondial - 2e édition\nCybercriminalité : Défi mondial - 2e édition\nMyriam Quéméner et Joël Ferry, Éditions Economica, Avant-propos d’Yves Charpenel, Préface du Général d’Armée Marc Watin-Augouard\nSortie le 20 mars 2009\nLutter contre la cybercriminalité est un enjeu majeur pour le monde actuel, avec bientôt 1,5 milliard d’internautes. L’arsenal juridique doit constamment s’adapter à cette criminalité organisée et internationale utilisant les ressources des technologies numériques et Internet comme cibles ou vecteurs d’infractions.\nL’esprit du Web 2.0, basé sur le partage de l’information banalise l’outil informatique et génère des failles largement exploitées par les cyberdélinquants pour usurper des identités, voler des données personnelles, voire créer des marchés parallèles.\nL’intérêt de ce nouvel ouvrage, enrichi et actualisé notamment avec des exemples étrangers, tient au regard très averti que les auteurs portent sur l’évolution du cybercrime et des réponses juridiques qui se mettent en place tant au plan national, européen que mondial.\nForts de leur expérience de magistrate et de colonel de gendarmerie qui les mettent au quotidien en prise directe sur ce domaine complexe, ils parviennent par leurs approches croisées à transmettre leur passion pour améliorer la mise en œuvre de la loi pénale.\nCet ouvrage s’adresse aussi bien aux internautes qu’aux acteurs économiques et aux professionnels du droit confrontés à ce domaine vaste et complexe qu’est la cybercriminalité.\nMagistrat au service criminel de la Cour d’appel de Versailles, expert pour le Conseil de l’Europe en matière de cybercriminalité, Myriam QUÉMÉNER a été sous-directrice au ministère de la Justice, notamment en charge de ce contentieux.\nColonel de gendarmerie commandant la section de recherches de Versailles, Joël FERRY a notamment servi à l’Office central de lutte contre la criminalité liée aux technologies de l’information et de la communication et à la Direction des affaires criminelles et des grâces.


Faire arreter mon chiot de hurler et pour qu'il arrete de faire caca là où il dort ?\nCette question a été posée par keskijenni, le 01/12/2010 à à 12h22. *\nVous trouverez peut être plus d'information dans l'annuaire de Web-Libre, dans la catégorie Cocker américain.\nDunamis a écrit [01/12/2010 - 15h59]\nJe suis sidérée par l'ignorance dont tu fais preuve....\nkeskijenni a écrit [01/12/2010 - 12h22 - Avis,définition, témoignages et conseils sur le guide du savoir Web Libre.org]\nVoila depuis le 28 novembre (Dimanche) j'ai acquéri un chiot cocker américain sable de deux mois et demi, ce chien est lof et vient d'un élevage trés réputé.\nC'est un chien qui obéi trés bien et qui apprend trés vite, comme son prénom, assis, va te coucher, pas bouger, Non etc, mais par contre j'ai un gros soucis, il me suis partout depuis que je l'ai il est tout le temps dans mes pieds\nIl est dans la piéce du bas, n'ayant pas de choix il est dans un coin du salon a l'eccart, hors dés que je quitte ou la maison ou que je monte a l'étage il hurle pleure devient fou et il ne s'arrete pas, j'ai jamais vu un chiot aussi hystérique d'etre seul. J'ai donc essayer une caisse de transport pour le mettre dedans quand je m'en vais, c des hurlements incessant, j'ai essayer je suis monter en haut une heure sans faire de bruit sans qu'il me sente, il as hurler pendant une heure sans s'arreter une seule seconde, et que je dit hurler c'est faire le loup etc etc.\nEt a chaque fois que je le sors ou de la cage ou du parc a chiot il as fais caca et en mis partout, je lave et relave sans cesse tout, ses couvertures, ses doudous, ses jouets il me souille tout.. pourtant je le sors plusieurs fois par jours, touts les heures a peu prés.mais de stress il fait la ou il est, parfois meme il fait caca a coté de sa gamelle, normalement un chien ne fais jamais a coté de sa gamelle et de son couchage non?\nDonc j'ai vraiment besoin d'aide je n'en peux plus, je ne dors plus car il fait que de hurler, il va s'arreter une fois que je l'ai gronder a lui dire non, va s'endormir et va reprendre de plus belle deu heures aprés....aidez moi\nbetinaweb a écrit [01/12/2010 - 13h50 - Avis,définition, témoignages et conseils sur le guide du savoir Web Libre.org]\nC'est un bébé votre chien,vous ne pouvez le quitter comme ça sans le préparer.Il doit se sentir abandonné.\nIl faut lui apprendre.Vous essayez de l'ignorer quelques minutes avant de sortir puis vous partez mais pas trop longtemps au maximum 10,15 minutes.Au retour,vous faites de même,vous l'ignorez encore quelques minutes .Il faut qu'il s'habitue progressivement.Il faut beaucoup de temps pour élever un chiot,ça ne se fait pas en trois jours et ne le gronder pas pour ses besoins,il doit pour l'instant stresser,sortez le régulièrement et à heures fixes ,il faut qu'il prenne ses marques.\nVous ne pouvez pas tout lui demander en trois jours,il faut prendre du temps avec lui et répéter sans arrêt.Il finira par se conformer mais avec le temps.\nDunamis a écrit [01/12/2010 - 15h59 ]\nJe suis sidérée par l'ignorance dont tu fais preuve.\nIgnorance qui est source de mal-être pour ton chiot. Applique donc ces conseils de base :\n1/ On se renseigne sur le comportement d'un chiot/chien AVANT de s'en porter acquéreur\n2/ S'il subsiste des lacunes, il convient de demander conseil auprès de l'éleveur et de son vétérinaire.\nEt concernant ta pauvre boule de poils :\n1/ à 2,5 mois, il a en gros 2 ans en "âge humain". Tu laisserais un bébé de 2 ans seul ?\n2/ Un chiot apprend la propreté si on la lui enseigne. Il faut de 3 à 5 semaines si la maitresse prend le temps de s'y mettre avec patience et récompenses. Un chiot doit être sorti toutes les 2 heures et il ne sait pas clencher les portes : tu dois te lever avec lui.\n3/ L'élevage assure le type physique du chiot et l'absence de tares mentales ou de consanguinité. La propreté est un acquis.\n4/ Un bébé ne vit pas seul au départ. Jusqu'à 3 mois, il est conseillé de lui mettre un réveil sous son coussin (le tic-tac évoque le coeur de la mère) ou un tissu portant l'odeur de son lieu de naissance.\n5/ Un chiot qui hurle est en détresse, plus tu le gronde, pire c'est. Il faut le rassurer et être stable dans ses demandes. Il doit avoir des repères sécurisants\n6/ Enfermer un chien dans une caisse de transport pendant son absence s'apparente à de la maltraitance. Un chien a besoin d'espace, de défouloir, de jeux. Tu vas le rendre peureux et agressif.\n7/ Il ne faut pas laver les saletés de son chiot devant lui, sinon, il ocnsidère que tu es à son service.\n8/ Quand on prend un chiot, on prend des congés le temps qu'il se sente bien à moins d'avoir un ami qui puisse s'en occuper. Sinon, on s'abstient.\n9/ Avec ou sans bruit, ton chiot à un flair suffisant pour savoir si tu l'abandonne...comme l'a fait sa mère. Que tu le veuille ou non, pour lui, tu la remplace.\n9/ Ton chiot n'est pas hystérique, mais toi, tu tiens une sacrée couche !!!\nLeumas80 a écrit [01/12/2010 - 16h05 ]\nTout est dit Dunamis, je vote.\nREEL a écrit [01/12/2010 - 16h33 ]\nC'est dans le chien ou il y a le plus de conneries de dises! Commence par enfermer ton chien dans une caisse style cage de transport pour la nuit (en écourtant la tienne) et sort le au bout maxi de 5h00 en veillant à qu'il n'ai pas mangé aprés 19h00. Et on en reparle. Bon courage!\nkeskijenni a écrit [01/12/2010 - 16h36 ]\nMais biensur qu'avant de prendre le chiot je me suis renseigner j'ai passer des jours et des soirées a lire des livres, faire des recherches sur le comportement canin, des chiots et sur sa race le chiot je l'attend depuis un moment donc je suis preparer a le recevoir. J'ai attendu d'avoir une maison, avec un jardin clos, du temps de libre (car je travaille a mon compte je fais du domicile) donc je gére mon planning exprés pour déja d'une part avoir pris une semaine pour lui pour rester avec lui et pouvoir etre la pour justement lui apprendre a etre seul , petit temps par petit temps. je fais comme tous les comportementaliste et l'éleveur m'as dit, sortir cinq minutes, puis revenir ignoré puis aller le voir, puis le refaire et rallonger encore un peu, mais du moment ou je sors il pleure gémi, fais le loup dés le premier jour ou il est arriver. Pour la caisse c'est une amie éleveuse qui me l'as conseiller pour lui habituer pendant mes courtes absences, et oui les magasins ou on fait ses courses on accepte pas les chiens, je vais pas le prendre pour le laisser paf tout seul dans mon véhicule non. Donc pour la caisse il as étais habitué comme ca par son éleveur, c'est son lieu de couchage et de réconfort, mais aussi apparment pour l'habituer a devoir rester dedans le temps qu'on s'absente, ou si on part faire des concours (ce qui va arriver plus tard dans sa vie) Pour le faite de la laisser seul (comme vous dites non je ne laisserais pas un enfant de deux ans seul) mais y a des endroits ou on ne peux le mener, j'ai du aller au médecin, a la poste, aux courses, des temps trés court, ce n'étais pas toute une journée. Pour la propreté ca y a pas de souci, je le sors toutes les heures, aprés ses siestes, aprés ses repas, aprés une séance de jeux, je le félicite grandement dés qu'il fait, et quand il me fait dedans je ne dit rien si je ne le prend pa sur le faite, ou quand je le vois faire j'y dit Non ferme et le méne dehors pour lui montrer que c'est la uq'il faut faire, en aucun cas je ne le gronde la dessus ! Pour le reveil il as sous les couvertures, enrouler de plusieurs tissus et une toute petite veilleuse dans le salon.Pour le tissu de son lieu d'élevage je n'ai pas eu malheureusement... moi je lui met un habit avec mon odeur quand je le laisse seul . Pour les hurlements , j'ai penser qu'il fallais ignoré comme beaucoup me le disent (vétérinaire, éleveur) mais il n'arrete pas, et on m'as dit que voila le contraire de vous il ne fallais pas aller le cagoler car il associer, aboiements, ele vient, et qu'aprés ca devenais un cercle vicieux, alors excuser moi si persone ne dit la meme chose et que j'essaye de bien faire !!!!! Pour la caisse je ne savais pas que ca s'aparenter a de la maltraitance, vu que beaucoup le font et dont l'éleveur quand je l'ai récupérer il étais dans une petite caisse de transport avec un drap sur la caisse dans le coffre, il as fais caca dedans, donc ca ne vient pas depuis qu'il est ici son mal etre Pour les saletés quand il fait je le met hors de ma vu, dehors ou dans la piéce d'a coté et je nettoi sans qu'il me voit et met un surodorant pour éffacer ses odeurs fécales Pour la nuit je voudrai seulement éviter qu'il dorme dans la chambre , je veux garder la partie du haut de la maison hors de sa portée, il as tout le bas de la maison rien que pour lui. Si il pleure la nuit, il faut que j'aille le rassu\nkeskijenni a écrit [01/12/2010 - 16h41 ]\nrer ?? Jusqua ce qu il s endorme??\nkeskijenni a écrit [01/12/2010 - 16h54 ]\nEt vous dites que je suis limite c'est moi l'hystérique mais vous etes pas mal dans votre facon de répondre, les forums c'est toujours pareil, vous agresser les gens qui viennent tout simplement chercher des solutions des conseils, si je suis la c'est qu'il y a un probléme, je sais qu'il y a un probléme dans ce que je fait, si je suis la c'est que je l'admet, je veux juste des conseils et qu'on m'aide pour ce petit soit bien et heureux tout simplement. J'ai l'amour des betes comme vous ne pouvez imaginer alors avant de juger, on essaye de discuter si vraiment vous voulais m'aidser plutot que de me casser sur chacun de mes faits... Je suis pas la pour etre juger je suis la pour mon chiot pour l'aider a etre mieux\nDunamis a écrit [01/12/2010 - 17h12 ]\nNon, il ne s'agit pas de le bercer.\nMais il a subit un traumatisme d'une part en perdant sa mère et d'autre part en se retrouvant dans un lieu inconnu.\nSi lire des livres est instructuif, cela ne remplacera jamais l'expérience. La preuve que tu ne sais pas t'y prendre : tu l'enferme.\nQu'il soit ou non promi à des concours, il faut le faire progressivement. Là, il y a fort à parier que cela aura pour effet de e faire paniquer.\nDe plus, le premier point, quand on prend un chiot, ce n'est pas de lui apprendre à être seul mais de se sentir bien en le laissant prendre ses marques.\nIl suffit de laisser la caisse ouverte dans son "territoire" car il pourra se familiariser sans contrainte. L'inviter à y entrer par une friandise etc...\nEt il faut plus qu'aller vers lui seulement pour les "corvées" de type sorties, nourritures, nettoyage,...\nEssaies de travailler au rez-de-chaussée où il pourra rester à tes pieds et donc en contact avec toi.\nLe stéréotype du chien c'est de le figurer assis à côté de son maître, ce qui définie bien son attachement.\nD'après ce que tu dis, tu lui demande beaucoup trop de chose en peu de temps et surtout vu son âge.\nLa première étape devrait ressembler à ça :\n-Familiarisation avec le lieu et les personnes/ Propreté/ négation, félicitation.\nA vrai dire, il serait judicieux de laisser le chiot 24/48 heures sans l'ennuyer (hormis pour le sortir). Qu'il puisse faire son petit tour du propriétaire. D'ordinaire, il choisi lui-même un endroit calme où se reposer car ça fatigue le nouveau !\nIl est aussi possible que l'éleveuse l'ait sevré un peu tôt. Si tu as vu la mère, souviens-toi de sa silhouette : était-elle levretée ? alors le chiot a été sevré avant 2 mois. Hors, l'idéal, c'est 2 voire 3 mois.\npense aussi à le prendre dans vos bras juste pour le cajoler. asseyez-vous en tailleur et restez ainsi : soit il invite au jeu, soit il demande des papouilles. Prend un livre et reste là : tu seras disponible pour lui !\nJe ne crois pas tellement à la suprématie par autoritarisme : j'ai un chien de 40 kilos et quand elle me sollicite, je cède souvent, idem si elle chouine, je regarde ce qu'elle peut vouloir.\nEt un chiot n'est de toute manière pas posé car il a énormément de chose voir, sentir, comprendre. Alors on ne peut pas le qualifier d'hystérique.\nPar contre, le soir est un moment propice aux calins. Il sera fatigué de sa journée et toi aussi.\nSache qu'un chien s'exprime à part entière : je vis avec mes parents et en tout, il y a 3 chiens. Ils grondent, vocalisent, aboient, hurlent, grognent, "parlent" et grimacent pour se faire comprendre. Même, et surtout la position de la queue et des oreilles indiquent ses pensées et ses émotions.\nAvec lui, ne pensez pas en tant qu'humain mais bien en tant que chien, leurs codes doivent être pris en compte.\nPour son bien-être, il faut qu'il se fie à toi comme tu te fie à lui, c'est un échange latéral. Pas un truc genre, "regardez j'ai un chien et il m'obéit" mais plutôt comme "je te respecte comme tu le fais avec moi, on se comprend"\nkeskijenni a écrit [01/12/2010 - 18h00 ]\nMerci pour ses réponses douces.... je veux simplement bien faire, mais je fais mal, c'est pour ca je me suis tourner vers des gens qui pourront me conseiller, mais les avis divergent tellement...\nMon chiot a deux mois et demi passer et as bien étais sevré, c'est un chien trés intelligent, moi dés le départ les pleurs j'ai pris ca pour un test venant de sa part, voir comment je réagi si il pleure voir si j'acourt.... j'ai peur de ca, qu'il soit trop habituer a me voir arriver quand il va pleurer, mais malheureusement dans le futur je ne pourrai pas etre la tous les jours...\nChez certain client oui je pourrai l'amener sans probléme, (je suis toiletteuse à domicile) et oui... je suis en contact tous les jours avec des chiens, je sais les faire beaux et les rendres bien avec leur hygiéne mais niveau éducation....\nDe toute facon je suis la pour apprendre, admettre mes erreurs, mais s'est en faisant des erreurs qu'on apprend non?\nDonc par exemple son coucher est en bas c un panier, j'ai ou le panier ou la caisse ou un gros parc a chiot en tissus qui peux rester ouvert ou fermer je peux lever le dessus qui as une fermeture ou l'enlever complétement et laisser une des petites portes ouvertes, dedans il as la place de mettre le panier les gamelles, enfin d'avoir son petit coin a lui...\nMon achat du parc c'etais pour qu'il ai son coin a lui quoi, qui l'ai un endroit ou il se sent tranquil quand il veux.\nAprés de le mettre dans le parc ou la caisse c'étais parcequ'on me disais de l'y habituer, et vu que j'ai deux minettes, assez peureuse encore du chiot j'avais peur que pendant mon absence elle l'attaque et lui fasse mal, ca peux aller vite... coup de griffe dans l'oeil ou autre.... Et les chats je peux pas les enfermer ele savent ouvrir les portes les coquines !!\nDonc c'étais déja peur qu'il se fasse attaquer par les chats le temps qu eje ne sois pas la.\nPSYCHO1 a écrit [01/12/2010 - 23h40 ]\nUn chiot, tout nouveau arrivé dans une maison, a besoin de présence et de réconfort.\nLui trouver un coin "tranquille et bien à lui" est une bonne idée, mais dans quelques temps, quand il aura compris que cette maison et "sa" maison.\nPour lui, le laisser au sous-sol alors qu'il y est tout seul, c'est une punition qu'il ne comprend pas et c'est pour cela qu'il hurle son désarroi et sa peur.\nComme l'a expliqué Dunamis, gardes le avec toi "à ton étage", occupes toi en car il a besoin d'une présence (et tu es un peu sa seconde maman) et le soir, après l'avoir sorti, tu le caresses en lui parlant doucement et tu vas avec lui vers son coin. Au fil du temps, il comprendra que c'est "sa chambre" et ne pleurera plus.\nSois patiente, il faut quand même laisser le temps au temps. Bon courage et tiens nous informés.\nPSYCHO1 a écrit [01/12/2010 - 23h50 ]\nPS .Tu sais, en ce qui concerne les éleveurs, c'est comme pour tout. Il y a ceux qui aiment les chiens et ceux qui ne font de l'élevage que pour l'argent que cela procure. Ne te bases pas seulement sur ce que t'a dit cet éleveur.\nPour tes deux chats, ils vont aussi s'y habituer. Pour l'instant ils le considèrent comme un intrus mais cela va s'arranger. Tu verras. Tu peux les laisser se cotoyer en surveillant du coin de l'oeil pour que, effectivement, il n'y ait pas un mauvais coup de griffe.\nTu sais, j'ai toujours eu chats et chiens et sans problèmes au bout de quelques jours.\nkeskijenni a écrit [02/12/2010 - 09h07 ]\nJe vient vous apporter des nouvelles =)\nBon j'ai enfin passer une douce nuit et mon chiot aussi =), on l'as amener en haut dans notre chambre j'ai mis son panier a coté du lit, il c'est endormi desuite et serreinement.\nA 4h30 j'ai senti qu'il tourner en rond op je l'ai pris l'ai amener dehors et pipi caca, wouaaa grosse félicitation , et op redodo jusqu'a 7H00 et pipi caca dehors =)\nLa solution étais celle que je voulais éviter mais au bout du compte tout le monde est content =)\nAujourd'hui je l'améne au vétérinaire , il as ses caca tout mou voir liquide, donc véto voir si c'est le chamboulement ou ses croquettes qu'il ne lui conviennent pas (rayal canin junior le paquet rose)\nDunamis a écrit [02/12/2010 - 12h06 ]\nJe suis ravies pour tout les deux. Tu verrasn dès qu'il sera plus serein la jurnée, tu pourra le replacer ailleurs, il s'y fera sans problème. Ritualise par un mot et une carresse. Avec ma crevette, je fait un calin du soir et au moment d'éteindre la lumière je lui dit "bonne nuit". Elle s'installe alors confortablement et dort en 15 minutes.\nSinon, les chiots s'adaptent bien à le marque de croquette que tu utilise pour peu que la transition avec les anciennes aient été faite.\nLe mieux, que certains éleveurs pratiquent, c'ets de donner 3/4 kg des croquettes qu'ils donnaient au chiot pour les mélanger aux nouvelles, ainsi, il n'y a pas de boulersement. Ou, encore mieux, garder la même marque de croquettes.\nSinon, il faut par ce temps là, donner une eau tempéré pour éviter les gastros. Et voir sur quoi il fait ses dents. Selon ce qu'il mange, ça peut ....activer.\nDésolée pour hier, avec ta formulation et tes explications, je me suis emportée en imaginant ton chiot enfermé dans une cage et sans relation affective. C'est visceral.\nIl y a tellement de gens qui prennent un chien sans savoir s'en occuper. Je sais qu'il y a une première fois pour tout le monde mais bon.\nkeskijenni a écrit [02/12/2010 - 13h19 ]\nBon j'ai amener first ce matin au vétérinaire pour la diarhée, elle m'as donner un petit traitement d'une semaine faut voir l'évolution, je pense que ca va aller déja la dessus, que bon ca dure depuis qu'il est arriver, sa me faisais du soucis.\nC'est pas grave pour tn premier post je comprend t'inquiéte pas , je suis pareil, moi d'imaginer un animal mal et pas bien ca me fend le coeur et je le sang qu'il fait qu'un tour !\nCe matin quand je me suis préparer, il as un peu pleurer pendant que j'étais en haut et du coup as fait caca, mais bon... ca doit etre son stress qui parle, il faut qu'il s'adapte et qu'il apprenne a supporter d'etre seul quelques minutes.\nOn as pas possibilité de mettre une photo pour vous le montrer?\nMon petit blondinet =)\nDunamis a écrit [02/12/2010 - 14h22 ]\nSi tu constate que ton chiot pleure, utilise un mot pour qu'il sache que tu t'éloigne un pneu mais que tu vas revenir.\nDu genre, "je reviens", ou "j'arrive". Tu le laisse dans une pièce, tu vas prendre un biscuit pour chien et tu reviens en le lui donnant. Ainsi, il assimilera une micro-absence à un fait positif.\nMais dès qu'il fait ses besoins dans la maison, tu lui dit "non" fermement et tu le met dehors en disant "sortir". Peu à peu, il associera ce terme à ses besoins et cela agira comme un déclencheur.\nTu pourras même le faire sortir avant de devoir monter à l'étage comme ça, il n'aura rien à déféquer.\nEt quand il ne fait rien, papouilles, on imagine pas comme c'est efficace.\nkeskijenni a écrit [02/12/2010 - 17h43 ]\nOui pour les besoins petit a petit j'arrive a controler quand il doit y aller, aprés les repas, aprés les dodo, aprés les jeux.\nJ'espére juste que ca va aller mieux cette diarhée peucheure doit etre pas bien\nEn tout cas il as une patate d'enfer et fait rire tout le monde, aujourd'hui on est aller chercher ses croquettes, il as vu sa copine la vendeuse, il as vu sa tata lol, il étais tout content, par contre avec les chiens il est super éffrayer, j'ai pas trop de chien dans mon entourage, c'est pour ca j'aimerai l'amener a une école de dressage pour qu'il soit en contact avec d'autres chiens et qu'il n'en n'est pas peur quoi.\nSinon pour la balade en laisse, je sais pas pourquoi il marche deux minutes puis pof s'assois et veux plus avancer, en dirais qu'il as peur, alors je l'appel je jou avec lui, il continu et pof s'arrete et veux rebrousser chemin...\nComment l'habituer et qu'il n'est pas peur quand il entend au loin un chien qui abois, ou un bruit de voiture ou moto, je pense s'est tous ses nouveaux bruits qu'il doit lui faire peur quoi ....\nMerci en tout cas de m'aider et me guider pas à pas\nPSYCHO1 a écrit [02/12/2010 - 18h38 ]\nC'est tout à fait normal, son comportement. Il débute, le petit. Il s'accoutumera progressivement à la laisse quand il aura compris que cela veut dire "se promener" ! C'est bien, quand il s'assoit, de l'appeler en s'accroupissant, cela le rassure et le fera avancer.\nPour l'habituer aux différents bruits, emmenes-le partout où il y a du monde, quitte à le porter au départ : en ville, au marché, etc ... plus il sera au contact des gens et des autres chiens, moins il sera effrayé et finira même par aimer cela.\nAu début, il voudra tout flairer : les pieds des gens, les roues de voitures stationnées, les autres chiens, un papier, une herbe, bref tout. Il a tout à découvrir et cela lui exercera en même temps le flair.\nLà encore, il faut y aller en douceur, progressivement. Ne vas pas le même jour l'emmener au marché, en ville puis dans un parc avec des enfants ! Il serait en over dose !\nFinalement, tu ne te débrouilles pas si mal avec ton First, tu vois bien. C'est vrai que quand on aime ...\nkeskijenni a écrit [03/12/2010 - 10h39 ]\nBon bin écoutez on as fait une nuit compléte cette nuit, first as dormi donc toujours au pied du lit, et as dormi toute la nuit, il s'est retenu jusqu'a ce qu'on se léve, je l'ai sorti et féliciter quand il as fait dehors pipi et caca =) =) =)\nLes cachets ont l'air de faire effet , ses selles ssont moulé a présent, c'est bien, il doit se sentir mieux et du coup fais beaucoup moins =)\nsinon j'ai une amie qui m'as amener sa bouledogue francaise a toiletter a la maison, et bin first as étais adorable, il c'est fait une nouvelle copine, fallais les voirs tous les deux, trop drole, first voulais tellement pas lacher la bouledogue qu'il nous as accompagner dans la sale de bain pour le bain =)\nTout se passe tellement mieux , je suis contente d'avoir essayer votre méthode "la douceur", la preuve sa marche vraiment, faudras juste plus tard l'habituer a ce qu'il soit seul parfois et aprés dormir hors de la chambre =) mais ca ce sera plus tard petit à petit\nPSYCHO1 a écrit [03/12/2010 - 11h53 ]\nJe suis contente pour vous deux. Avec de la douceur, on obtient tout (des chiens et des hommes) !\nopheliedu18 a écrit [16/07/2011 - 13h21 ]\nkeskijenny tu a acheter ou ton cocker j'ai moi même un cocker américain lof qui et noir et il est pas propre et est très peureux l'ancienne l'avait frapper et quand je vais me coucher la nuit mon cocker pleur répond moi stp je suis autant désespérer que toi\ncecilya59 a écrit [12/01/2012 - 21h24 ]\nbonjour aphélie j'ai bien compris ton petit message avec ton chien voila je suis éducateur canin a domicile voila je te répond a ton message si ton chien et en bas dans le noir c'est normale qui va pleure car si il la étai battu c'est normalle mai faux le laisser car surtout un cocker il et très têtu a obéir. voila je tes répondu a ton petit mot pour ton chien\nRépondre à keskijenni\n• Mon chien ne fait que hurler la nuit, que faire ?\n• Chiot trouvé sur un parking, que faire ?\n• Que dois-je faire si mon chiot mord les pieds ?


Synthesis, Functionalization, and Characterization of Fusogenic Porous Silicon Nanoparticles for Oligonucleotide Delivery | Protocol (Translated to French)\nNous démontrons la synthèse de nanoparticules de silicium poreux fusogène pour livraison efficace oligonucléotide in vitro et in vivo. Nanoparticules de silicium poreux sont chargés avec des siARN pour former le noyau, qui est recouvert par les lipides fusogène par extrusion pour former la coquille. Ciblage portion fonctionnalisation et caractérisation des particules sont inclus.\nAvec l’avènement de la thérapie génique, le développement d’un système de livraison efficace in vivo nucléotide-charge utile est devenu d’importation parallèle. Nanoparticules de silicium poreux Fusogène (F-pSiNPs) ont récemment démontré des gènes in vivo haute silence efficacité en raison de sa haute oligonucléotide chargement de capacité et la voie d’absorption cellulaire unique qui évite l’endocytose. La synthèse de F-pSiNPs est un processus multi-étapes qui comprend : (1) chargement et la fermeture des oligonucléotides charges utiles dans les pores de silicium ; (2) simultanée de revêtement et de dimensionnement des lipides coniques autour les carottes de silicium poreux ; et (3) la conjugaison de ciblage de peptides et de lavage pour éliminer les excès oligonucléotide, débris de silicium et le peptide. Uniformité de taille de la particule se caractérise par la diffusion dynamique de la lumière, et sa structure de noyau-enveloppe peut être vérifiée par microscopie électronique à transmission. L’absorption de fusogène est validée en chargeant un lipophile teindre, 1, 1'-dioctadecyl-3, 3, 3', 3'-tétraméthylindocarbocyanine perchlorate (DiI), dans la bicouche lipidique fusogène et traitant aux cellules in vitro d’observer pour la coloration par rapport à la membrane plasmique localisations endocytose. L’efficacité de silencieux de gène ciblage et in vivo ont été quantifiées précédemment dans un modèle murin de pneumonie à Staphylococcus aureus , dans lequel le peptide de ciblage devrait aider le F-pSiNPs à domicile pour le site de l’infection. Au-delà de son application dans l’infection à Staphylococcus aureus , le système F-pSiNP peut servir à livrer un oligonucléotide pour la thérapie génique d’un large éventail de maladies, y compris les infections virales, le cancer et les maladies auto-immunes.\nThérapie génique module l’expression de gènes spécifiques afin d’obtenir un résultat thérapeutique. Nombreux outils pour la modulation de gène ont été découverts et étudiés, y compris l’acide ribonucléique interférence (Arni) utilisant des oligonucléotides (p. ex., court interférence ARN (siRNA)1,2, microARN (miARN)3,4 ), ADN plasmides5,6, nucléases (p. ex., doigt de zinc, TALENS)7,8et CRISPR/Cas9 systèmes9,10. Alors que le mécanisme de chaque outil d’action est différent, tous les outils doivent parvenir à cytoplasme de la cellule ou le noyau actif. Ainsi, alors que ces outils se sont avérés pour induire un effet significatif dans la modulation de l’expression génique in vitro, l’efficacité in vivo souffre d’obstacles extracellulaires et intracellulaires. Dû au fait que les outils sont d’origine biologique, plusieurs enzymes et les systèmes d’autorisation existent dans notre corps qui ont la capacité de dégrader ou de supprimer les molécules étrangères11. Même dans le cas que les outils atteignent la cellule cible, ils souffrent d’endocytose ; un mode d’absorption cellulaire qui encapsule et emprisonne les outils dans les vésicules d’estomac comme acides qui se dégradent ou expulser les outils hors de la cellule. En fait, les études ont montré que les nanoparticules lipidiques sont mégacaryocyte via macropinocytose, dont environ 70 % de des siARN sont exocytosed des cellules dans les 24h d’absorption12,13. La majorité des siARN restant est dégradée par la voie lysosomiale, et en fin de compte que 1 à 2 % des siARN qui initialement pénètre dans la cellule avec les nanoparticules atteindre évasion endosomal potentiellement subir Arni13,14 .\nNous avons récemment développé des nanoparticules de silicium poreux fusogène (F-pSiNPs) qui ont un noyau chargés en siARN composé de nanoparticules de silicium poreux et un fusogène lipides coquille15. Les F-pSiNPs présente trois avantages majeurs sur les autres vecteurs d’oligonucléotide classiques : (1) un lipide fusogène revêtement qui permet aux particules de contourner l’endocytose et distribuer la surcharge ensemble directement dans le cytoplasme des cellules (contre le 1-2 % réalisé par mégacaryocyte particules13,14) (Figure 1) ; (2) haute emplissage de siARN dans la pSiNPs (> 20 % en poids par rapport à 1-15 % en poids par les systèmes conventionnels)15, qui dégradent rapidement dans le cytoplasme (une fois que les particules de base versé la couche lipidique via fusogène absorption) pour libérer le siARN ; et (3) ciblant la conjugaison de peptide pour domiciliation sélective à désiré types cellulaires in vivo.\nLe système F-pSiNP a démontré le silençage efficacité de gènes importants (> 95 % in vitro ; > 80 % in vivo) et un effet thérapeutique ultérieur dans un modèle de souris mortel de pneumonie à Staphylococcus aureus ; les résultats qui ont été publiées auparavant15. Cependant, la structure complexe du système F-pSiNP suppose une manipulation délicate et optimisation adaptée pour générer des nanoparticules homogène et stables. Ainsi, le but de ce travail est de présenter un protocole complet, ainsi que des stratégies d’optimisation pour la synthèse, fonctionnalisation et caractérisation de F-pSiNPs à utiliser dans l’administration ciblée des siRNAs pour un effet puissant gène silencieux.\n1. synthèse de nanoparticules de silicium poreux (pSINPs)\nAttention : Soyez toujours prudent lorsque vous travaillez avec de l’acide fluorhydrique (HF). Suivez tous les guides de sécurité selon sa fiche de données de sécurité (SDS), gérer les produits chimiques contenant du HF dans une hotte aspirante et porter les équipements de protection individuelle appropriés (PPE, gants doubles avec gants butyl sur l’extérieur, tablier de butyle avec blouse en dessous, visage protéger avec des lunettes de sécurité sous). Toutes les universités et les laboratoires de R & D nécessitent une formation spécifique sur la sécurité des HF avant utilisation. N’essayez pas de travailler avec HF sans l’approbation préalable de votre coordonnateur de sécurité laboratoire local, car les mesures de sécurité supplémentaires non décrites ici sont nécessaires.\nPréparation des solutions de gravure\nPour rendre la solution HF de 3:1 pour la gravure (utilisée dans les étapes 1.3 et 1.4), remplir un plastique gradué cylindre avec 30 mL de solution aqueuse HF de 48 % et de 10 mL d’éthanol absolu (EtOH). La solution doit figurer en plastique de haute densité (PEHD, par exemple), comme la HF dissout verre.\nPour faire un 01:29 solution HF pour le décollage (utilisé en étape 1.5), combler un plastique gradué cylindre avec 1 mL de solution aqueuse HF de 48 % et 29 mL d’éthanol absolu. La solution doit figurer en plastique de haute densité (PEHD, par exemple), comme la HF dissout verre.\nFaire la solution KOH de 1 M 10 % EtOH dissolution excès lb/po2 (utilisé dans les étapes 1.3 et 1.5).\nMise en place de la cellule d’etch\nDans un téflon etch cellule avec un 8,6 cm2 etch bien (zone est calculé en mesurant le diamètre de la surface de silicium disponible pour gravure à l’eau-forte dans le joint torique et calcul de la surface par A = πr2), placez en décroissant ordre (Figure 2 a) : (1) le Haut de téflon de cellule ; (2) un joint torique ; (3) un morceau de quart du cristal unique (1 0 0) - orienté p ++ - type plaquette de silicium découpée en quartiers (en utilisant un diamond cutter) ; (4) d’aluminium ; et (5) la cellule de téflon base avec vis serrées doucement pour éviter les fuites.\nRemplir le puits d’EtOH. Prenez une lingette et insérer dans l’interstice entre le téflon cellule dessus et la base. Si la lingette est sec après le retrait, la cellule d’etch est scellée. Si humide, la cellule fuit et serrez les vis plus loin jusqu'à ce que le scellé.\nÉlectropolissage la plaquette de silicium\nAmenez la cellule etch assemblé dans une hotte aspirante.\nRemplir le puits avec 10 mL de solution HF 3:1.\nReliez le coté positif de la feuille d’aluminium (électrode) de la cellule d’etch et brancher la borne négative à la platine bobine (contre-électrode), immergée dans la solution de HF 3:1 de la cellule d’etch pour compléter le circuit (Figure 2 b).\nExécuter un courant constant à 50 mA cm-2 pendant 60 s. Une fois etch est terminé, retirer la cellule du circuit et rincer soigneusement à l’aide d’une seringue HF 3:1. Rincer avec EtOH trois fois.\nDissoudre à la couche gravée en remplissant le puits lentement avec 10 mL de 1 M KOH. Attendez jusqu'à ce que le bouillonnement disparaisse.\nRincez bien le KOH avec de l’eau trois fois, puis avec EtOH trois fois.\nGravure électrochimique couches poreuses en plaquette de silicium\nExécuter une source de courant d’une onde carrée, avec current density inférieure de 50 mA/cm2 pour 0,6 s et haute densité de courant de 400 mA/cm2 pour 0,36 s répété pour 500 cycles.\nUne fois etch est terminé, retirer la cellule du circuit et rincer soigneusement à l’aide d’une seringue HF 3:1. Rincer avec EtOH trois fois.\nLevage-hors de la couche poreuse de la plaquette de silicium\nRemplir le puits avec 10 mL de 01:29 solution HF.\nExécuter une constante de 3,7 mA/cm2 pour 250 s. Une fois etch est terminé, retirer la cellule du circuit. La couche pSi peut-être avoir des ondulations visibles indiquant le détachement de la plaquette de silicium cristallin. Doucement, nettoyez le 01:29 solution HF et rincer avec EtOH trois fois, puis avec de l’eau trois fois.\nÀ l’aide d’un embout de la pipette, crack fermement la circonférence de la couche de pSi pour le détachement complet. Vous utilisez EtOH, recueillir les fragments de lb/po2 (copeaux) du téflon etch cellule dans une barque de pesage. Transférer les puces dans un flacon de verre. Les puces de pSi peuvent être conservés à température ambiante dans EtOH pendant plus de 6 mois pour le stockage.\nDissoudre à n’importe quel silicium poreux restant sur la plaquette en remplissant le puits lentement avec 10 mL de 1 M KOH. Attendez jusqu'à ce que le bouillonnement disparaisse.\nRépétez les étapes 1,3-1,5 jusqu'à ce que l’épaisseur de la plaquette entière a été gravé.\nSonification couches poreuses pour la formation de nanoparticules\nRemplacer le solvant de la fiole de verre contenant des puces lb/po2 de EtOH à 2 mL de l’eau distillée.\nBien refermer le bouchon et sceller à l’aide de parafilm.\nPlacez le verre flacon dans un bain sonicateur et suspendu de telle sorte que le volume de copeaux de pSi est complètement submergé sous la surface.\nLaisser agir pendant 12 heures à 35 kHz et puissance de RF de 48W. Pour éviter toute perte d’eau importante pendant la sonication, placez une fiole jaugée remplie d’eau, inversé de sorte que l’ouverture du ballon touche la surface de l’eau du bain.\nPlacer le flacon de verre sur une surface plane pendant 1 h permettre de plus grandes particules de s’installer au fond. Récupérer le surnageant à l’aide d’une pipette. la suspension contient pSiNPs sub-100 nm.\n2. préparation du film lipidique fusogène\nPréparation de la solution mère de lipides\nSous une hotte, faire des stocks de 10 mg/mL de lipides en hydratant DMPC, DSPE-PEG-MAL et lipides DOTAP dans le chloroforme. Ces solutions mères peuvent être conservées à-20 ° C pendant 6 mois sous seing parafilm serré.\nRéalisation du film lipidique de coniques\nRemarque : La composition fusogène faite des lipides, DMPC, DSPE-PEG et DOTAP, dans un rapport molaire de 76.2:3.8:20 et 96.2:3.8:0, respectivement.\nDans un flacon en verre, mélanger 72.55 μL de DMPC, 15,16 μL de DSPE-PEG et 19.63 μL de DOTAP de pipetage.\nFacultatif : Pour le marquage fluorescent de la couche lipidique, en outre ajouter 20 µL de DiI dissous dans EtOH à une concentration de 1 mg/mL.\nPlacer la fiole dans une hotte avec un bouchon lâche pour permettre le chloroforme s’évaporer du jour au lendemain. Le feuil sec sera une substance de type gel dure nuageuse au fond de la cuvette.\n3. chargement et la fermeture des siARN dans pSiNPs\nPréparation du chlorure de calcium chargement stock\nDissoudre 1,11 g de CaCl2 dans 10 mL d’eau exempte de RNAse pour faire une solution de2 CaCl 2 M.\nCentrifuger la solution à > 10 000 x g pendant 1 min régler les agrégats et recueillir le surnageant à l’aide d’une pipette. Vous pouvez également filtrer la solution à travers un filtre de 0,22 µm.\nPréparation des siARN chargement stock\nHydrater ou diluer des siARN à 150 µM dans l’eau sans RNAse. Cette solution-mère peut être aliquotée et conservés congelée à-20 ° C pendant au moins 30 jours, étant donné qu’il ne subit pas de cycles de gel-dégel fréquents.\nChargement des siARN dans pSiNPs avec le chlorure de calcium\nPréparez un bain glacé sonication.\nMoins de 15 min ultrasonication, délicatement prélever 150 µL de siRNA et 700 µL de 2 M CaCl2 dans 150 µL de pSiNP. Veillez à laissez le couvercle du tube microcentrifuge ouvert pour la production de gaz.\nRetirez le tube contenant 1 mL de calcium chargés en siARN enduit pSiNPs du sonicateur.\n4. revêtement pSiNPs de siARN chargés avec des lipides fusogène\nPréparation de la trousse d’extrusion de liposome\nRemplir un grand bécher avec l’eau distillée. Trempage en polycarbonate 1 membrane (pores de 200 nm) et 4 supports de filtre par eux flottant à la surface de l’eau. Assemblez les liposomes extrusion en suivant les instructions du fabricant\nHydratant le film lipidique avec siARN chargé pSiNps\nHydrater le film lipidique séchées dans le flacon de verre avec 1 mL de pSiNPs de calcium chargés en siARN enduit obtenu à l’étape 3.3.3. Pipetter jusqu'à ce que tous les lipides film ont soulevé du fond de la cuvette et ont mélangé à une solution homogène nuageuse.\nPoser une barre magnétique dans le flacon de verre et placer le flacon sur une plaque chauffante pour chauffer les particules à 40 ° C (ou assez haut au-dessus de température de transformation de phase des lipides pour maintenir les lipides dans la phase cristalline liquide plus fluidique) tandis que magnétiquement en agitant la solution pendant 20 min.\nLe pSiNPs de lipides enduit pour contrôle de la taille d’extrusion\nAspirer le 1 mL de solution de lipides enduit pSiNP-siARN dans la seringue de l’extrusion. Insérer une seringue vide sur un côté de l’extrudeuse et la seringue remplie à l’autre extrémité.\nExtrusion de Begin en poussant sur le piston lentement pour les particules d’une seringue, à travers la membrane en polycarbonate et dans l’autre. Répétez 20 fois. Si le piston est coincé, la filtre et la membrane peuvent être obstrués. Démonter l’extrudeuse et remplacer les supports de la membrane et le filtre. Si le problème persiste, diluer les particules jusqu'à ce que l’obstruction est gérable.\nRecueillir les particules extrudées dans un tube de microcentrifuge.\n5. conjugaison de ciblage des peptides\nConjugaison de peptide de ciblage pour revêtement de lipides\nPréparer le stock de peptide avec un 1 mg/mL de concentration de peptide dans de l’eau exempte de RNAse.\nDans le tube de microcentrifuge contenant fusogène lipides enduit pSiNPs, ajouter 100 µL de 1 mg/mL de bouillon de peptide et pipette doucement. Maintenir le tube statiques à température ambiante pendant 20 min (alternativement, > 2 h à 4 ° C).\nPour enlever les excès peptide ou siRNA et autres excipients, lavez dans un filtre centrifuge de 30 kDa par rotation à 5 000 x g à 25 ° C pendant 1 h. centrifugeuse deux fois plus avec 1 mL de PBS sous le même paramètre.\nResuspendre le pSiNPs final fusogène peptide conjugué de lipides enduit dans du PBS à la concentration désirée. Les particules peuvent maintenant être aliquoté et congelé à-80 ° C pour le stockage d’au moins 30 jours.\nUne synthèse réussie des coniques pSiNPs devrait produire une solution homogène, légèrement opaque (Figure 3 a). Échec d’optimiser le ratio et la concentration de pSiNPs : siARN : CaCl2 peut conduire à l’agrégation lorsqu’il se charge (Figure 3 b). Comme les particules sont extrudés à travers les 200 membranes nm, le diamètre moyen hydrodynamique de la pSiNPs fusogène mesurée par DLS devrait être environ 200 nm et le potentiel Zéta moyenne environ + 7 mV tel qu’illustré à la Figure 4. Après modification de surface avec des peptides de ciblage, le diamètre hors tout devrait être augmenté pour être sous 230 nm et la moyenne potentiel Zéta a diminué jusqu'à -3,4 Mt15. Aucun écart large à la taille de l’extrusion est indicative d’extrusion ayant échouée (dparticule >> dextrusion), ou l’échec de chargement (dparticule << dextrusion). Agrégations peuvent aussi être évaluées à l’aide de listes de distribution. En outre, les aliquotes congelés doivent être décongelés, une seule fois, comme le gel-dégel répété cycles perturbent la membrane lipidique et de fusion d’intraparticular et de groupement (Figure 4). Comme le montre la Figure 4 a , pSiNPs coniques peuvent être stockés pendant 30 jours et décongelés sans provoquer de changements structurels. Toutefois, répété des cycles de gel-dégel d’une aliquote unique causent grave agrégation (d >> 1 000 nm) et dans les 4 jours du cycle journalier (Figure 4 b), donc il est conseillé que les particules soit aliquotés à usage unique volumes.\nFusion peut être confirmée par l’étiquetage les lipides coniques avec le DiI lipophile (étape 2.2.2) et en observant la localisation in vitro à l’aide de la microscopie confocale. D de la figure 1 montre la fusion réussie, où les lipides de la pSiNP fusogène la DiI de transfert vers la membrane plasmique et sont localisées indépendant des lysosomes. La fusion échoue montrera la localisation DiI dans le cytoplasme de la cellule et la co-localisation avec les lysosomes (Figure 1C).\nFigure 1 : système de nanoparticules de silicium poreux Fusogène (F-pSiNP). (un) schéma montrant endocytose absorption de nanoparticules classiques et provocation policière endosomale ultérieures. (b) schéma montrant fusogène absorption du F-pSiNPs et livraison cytosolique de la charge utile de siARN. (c) image microscopique Confocal de Carpentier-3 cellule qui a mégacaryocyte fusogène non pSiNPs qui ont été chargés avec DiI colorant lipophile. Carpentier-3 cellules ont été cultivés à la confluence de 80 % dans une plaque 6 puits et traitement avec 10 µL de nanoparticules et incubés à 37 ° C en 5 % CO2 pendant 15 min. Les cellules étaient fixe du paraformaldéhyde à 1 % pour être monté sur lames de verre au DAPI, séchés et conservés à l’obscurité jusqu'à ce que l’examen par microscopie confocale. (D) confocal image microscopique d’une cellule de Carpentier-3 qui a repris fusogène pSiNPs qui ont été chargés avec DiI colorant lipophile. Les cellules étaient pré-teint avec LysoTracker Green pendant 1 h à 37 ° C à 5 % de CO2 conformément aux instructions du fabricant. Les cellules sont ensuite lavées PBS trois fois et ont été traités avec 10 μL de particules chargées DiI pendant 15 min. Les cellules sont lavées avec du PBS trois fois pour éliminer les particules qui n’ont pas repris, et les puits ont été contenant 1 mL de PBS et prises immédiatement pour l’imagerie de cellules vivantes par microscopie confocale ; DAPI représente tache nucléaire et Lysosome lysosomal coloration par LysoTracker Green ; barre d’échelle représente 10 µm. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 2 : Etch installation cell. (a) schéma montrant etch composants cellulaires et ordre d’assemblage ; et (b) schéma du programme d’installation pour la gravure électrochimique de silicium. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 3 : photo du produit final de F-pSiNP. (un) succès synthèse montrant une solution homogène et nuageuse ; (b) synthèse infructueuse montrant l’agrégation des particules (jaune). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 4 : cycle gel-dégel répétés de fusogène pSiNPs provoquer l’agrégation. (a) moyenne taille et potentiel Zéta de fusogène pSiNPs reste stable pendant 30 jours lorsque dégelé une fois après congélation ; (b) moyenne taille et potentiel Zéta de la pSiNPs fusogène montre signes d’agrégation et de perte d’intégrité structurale dans les 4 jours après avoir subi quotidiennement des cycles de gel-dégel. Barres d’erreur représentent déviation standard (n = 5). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 5 : schéma de la synthèse de nanoparticules de silicium poreux. Schéma montrant la gravure électrochimique de plaquette de silicium (étape 1.4), décollage de la couche poreuse (étape 1.5), sonication de la couche poreuse en particules et collection de nanoparticules de silicium poreux (pas 1.6). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nSynthèse de nanoparticules de silicium poreux est illustrée à la Figure 5. L’étape critique dans la synthèse des pSiNPs coniques est à l’étape de chargement (étape 3). Si les nanoparticules fusogène agrégez post-synthèse (Figure 3), la raison peut être en raison de ce qui suit : (1) actions de chlorure de calcium ne préparait pas homogène, donc étape 3.1.2 doit être soigneusement suivi ou raffiné ; ou (2) le rapport de pSiNP : siARN : CaCl2 ou la concentration d’une ou plusieurs des trois composants ne soient pas optimale. Réoptimisation à partir de la concentration de CaCl2 est proposée (p. ex., modification de 2 M à 1 M ou 3 M). En outre, il est important de s’assurer que le CaCl2 provient du même fournisseur, comme nous avons trouvé que le même produit chimique provenant de différents fournisseurs abouti à des pH inférieur à l’étape de chargement et incapacité à charger des siARN. Les pSiNPs peuvent également être concentrés, dilué, ou encore dégradées avant le processus de chargement en laissant les particules en suspension dans l’eau exempte de RNAse pendant 2 jours après l’étape 1.6.6.\nAprès chargement, le lipide revêtement souvent conduit à mal à extrusion en raison de la concentration ou la densité des particules (étape 4). Si la membrane de l’extrusion est bouchée, forçant l’extrusion peut déchirer la membrane. Colmatage, démonter l’extrudeuse et remplacer la membrane et le prend en charge avec un nouvel ensemble si la perte de boucher est faible. Si la perte est importante, puis diluer la suspension de particules et laisser agir pendant 30 avant s l’extrusion. Si le problème persiste, il est conseillé de ré-optimisation de la taille pSiNP et rapport de charge afin de minimiser les agrégats. Enfin, nous suggérons de filtrage de la suspension de particules à travers un filtre de 0,22 µm-pores pour éliminer toute contaminants ou les agrégats avant cell ou traitement par les animaux. Le filtrage est conseillé surtout si les particules ont été synthétisés dans un environnement non stérile, ou après décongélation une aliquote congelée des particules.\nLa fusogénicité des particules peut-être être validée par microscopie confocale (tel qu’illustré en Figure 1 c, d) et en microscopie électronique des cellules traitées avec les particules d’observer des carottes de lipide-hangar silicium poreux dans le cytoplasme 15.\nLe pSiNPs coniques et son protocole de synthèse ont quelques limitations. Pour in vitro gene silencing des applications, les pSiNPs fusogène présentés ont prouvé d’induire > 90 % d’efficacité défiant dans une gamme de lignées cellulaires à la dose de 100 nM ; dont la lignée de cellules de neuroblastome de souris Neuro-2 a, la lignée de cellules de cancer de l’ovaire humain Carpentier-3 et la lignée de cellules et de macrophages notoirement difficile à transfecter RAW 264.7 souris. Cependant, nous avons observé > 50 % d’efficacité défiant à aussi peu que 25 dose nM, ce qui était comparable à celle de Lipofectamine. Alors que les lipides cationiques est nécessaire au minimum pour réduire l’effet cytotoxique, nous avons déjà démontré son innocuité à une dose de lipides de plus élevé que 1 mg15. De gènes in vivo silencing des applications, les pSiNPs fusogène sont limitées par la sélectivité. Car les lipides cationiques attirent électrostatiquement à toute membrane de la cellule, les particules doivent être utilisés comme local thérapeutique ou être surface modifiée avec une portion de ciblage (par exemple, peptides, anticorps, etc.). Le protocole de synthèse pour fusogène pSiNPs est actuellement optimisé et limité d’ARNsi seulement. La même méthode a été vérifiée avec succès charger miRNA et l’hypothèse pour pouvoir charger les ARNm, cDNA et autres grandes charges de nucléotides, mais celles-ci doivent encore être optimisé.\nLe travail présenté apporte une contribution significative au champ de la thérapie génique. La norme standard de silençage génique in vitro est le Lipofectamine 2000. Nous avons démontré que la pSiNPs fusogène peut induire effet knockdown de comparable, si pas plus élevé, rendement15. L’avantage majeur de la pSiNPs fusiogènes sur Lipofectamine 2000 est sa capacité à être utilisé pour des applications in vivo avec injections systémiques. Alors que les autres agents, tels que Invivofectamine 3.0, ont été commercialisés pour des utilisations in vivo, ils conviennent uniquement pour la livraison du foie et nécessitent des siARN modifiés chimiquement (avec ou sans débords ou dans la structure des acides nucléiques verrouillés (LNA)) pour augmenter stabilité et spécificité. 16 , 17 , 18 cependant, la pSiNPs fusogène peut être mis à jour le post-synthèse de conjuguer ciblage moitiés avec simple thiol-maléimide chimie, dans lequel un groupe thiol du peptide de ciblage (qui effectue une cystéine supplémentaire à cette fin) lie un carbone double-collé dans le ring maléimide à la fin des lipides pégylé dans le revêtement de coniques. En outre, la masse de haute efficacité de chargement et de livraison vers le cytoplasme cellulaire réduit au minimum la nécessité d’une spécificité intracellulaire et atteint forte gene silencing effet avec siARN non modifié15. Un inconvénient de la pSiNPs coniques, c’est que le protocole de la synthèse est un processus de plusieurs jour qui est plus complex que les agents de transfection disponibles dans le commerce. Cependant, alors que les produits de référence doivent être fraîchement préparées avant la transfection d’obtenir les meilleurs résultats, le pSiNPs fusogène peut être aliquotés et congelés pendant au moins 30 jours sans pour autant diminuer l’efficacité défiant.\nPour cette méthode, les applications futures comprennent l’optimisation de chargement et de livraison de plus grandes charges utiles acide nucléique, tels que l’ARNm et des ADNc. En outre, livraison du complexe protéine-sgRNA CRISPR/Cas9, ou un cocktail de l’ARNm de Cas9 et sgRNA, est également une option de développement, car le système est optimal pour le chargement de charges anioniques. Dans l’ensemble, le système de F-pSiNP est un nanoplatform modulaire pour la thérapie génique traiter les maladies au-delà des infections, y compris les infections virales, le cancer et les maladies auto-immunes.\nMJS est un scientifique fondateur de Spinnaker Biosciences inc. et a une participation dans la société. Bien que cette subvention a été identifiée pour la gestion des conflits d’intérêts fondée sur la portée globale du projet et ses avantages potentiels à Spinnaker Biosciences, Inc., les résultats de recherche inclus dans la présente publication particulière peuvent ne pas nécessairement se rapportent aux intérêts de Spinnaker Biosciences inc. Les conditions de cette entente ont été examinées et approuvées par l’Université de Californie, San Diego, conformément à sa politique de conflit d’intérêts. D’autres auteurs n’ont rien à divulguer.\nCe travail est soutenu par les National Institutes of Health à travers contrat no R01 AI132413-01.