இரண்டாம் நிலை எதிருடலை அலசும் இடைமத்தை கொண்டு நாம் விரும்பிய அளவில் நீர்த்து, அதனை முதனிலை எதிருடல் சேர்க்கப்பட்ட சவ்வினுள் சேர்க்க வேண்டும். பொதுவாக 1/1000 அல்லது 1/2000 கொண்ட அளவில் நீர்க்கலாம்.

இரண்டாம் நிலை எதிருடல் சேர்க்கப்பட்ட சவ்வினை ஒரு மணி நேரம் அறை வெப்பநிலையிலோ அல்லது 4C இரவு முழுவதும் நிலைநிறுத்தப்படவேண்டும். பின் சவ்வை, அலசும் இடைமத்தை கொண்டு 5-10 நிமிடம் என மூன்று முறை கழுவப்படவேண்டும்.

சவ்விற்குள் இடம்பெயர்த்தல் - Protein Blotting
தேவையான நுட்பம் மற்றும் பொருட்கள்:
இரண்டாம் நிலை எதிருடல் - Secondary Antibody
வெளி இணைப்பு