தடுக்கும் இடைமம்

1X TBS.

0.1% Tween மற்றும்

5%- கொழுப்பற்ற உலர்ந்த பால் or போவைன் சீரம் அல்புமின்

தடுக்கும் இடைமத்தை பயன்படுத்தி சவ்வினுள் பெயர்த்தப்பட்ட புரதங்களின் பின்புலத்தை தடுக்க அல்லது பூசுதல் வேண்டும். இதற்கு 5%- கொழுப்பற்ற உலர்ந்த பால் அல்லது போவைன் சீரம் அல்புமின் பாவிக்க வேண்டும். வேசுட்டர்ன் படிவில் இந்நிலை மிக இன்றியமையாதது ஆகும். தடுத்தல் அல்லது பூசுதல் என்னும் முறையால் சவ்வினுள் உள்ள பின்புலங்கள் (Background of the membrane) தடுக்கப்படுவதால், நாம் விரும்பாத புரதங்களை (Non-specific Binding) அறிதல் அல்லது காணுதல் நிலையில் தவிர்கலாம்.

இந்நிலை அறைவெப்பநிலையில் 1-3 மணி நேரமும், அல்லது 4C வெப்பநிலையில் இரவு முழுவதும் நிலைநிறுத்தப்பட வேண்டும். பின் சவ்வை அலசும் இடைமத்தை (1X TBS, 0.1% Tween) கொண்டு 5-10 நிமிடம் மூன்று முறை கழுவப்படவேண்டும்.

இரண்டாம் நிலை எதிருடல் - Secondary Antibody
அறிதல் அல்லது காணுதல்- Protein Detection
முதனிலை எதிருடல் - Primary Antibody
தடுத்தல்- Blocking