"

 Kysymys maltoosia sitovaa proteiinia koskevasta artikkelista 

Hei Victor,

Juuri nyt olen ratkaisemassa tätä ongelmaa tämän maltoosia sitovan proteiinimerkin osalta, löysin tämän artikkelin wikistä. Ja tässä on mitä kirjoitit:

""...Kun fuusioproteiini on saatu puhdistettuun muotoon, kiinnostava proteiini (X) pilkotaan usein MBP:stä spesifisellä proteaasilla. Proteiini X voidaan sitten erottaa MBP:stä kuljettamalla se uudelleen amyloosikolonnin läpi."""

Olisi hienoa, jos voisit selittää, miten ""Proteiini X voidaan sitten erottaa MBP:stä kulkemalla amyloosipylvään läpi uudelleen"", koska olen kokeillut sitä, eikä se toimi. Henkilökohtainen arvaukseni on, että koska MBP sitoutuu maltoosiin, se ei yksinkertaisesti sitoudu amyloosihartsiin / pylvääseen, ellei maltoosia ole poistettu etukäteen.

Kysymys kuuluu, miten maltoosi poistetaan MBP:stä. Davidson et al., Mechanism of maltose transport in Escherichia coli: Transmembrane signaling by periplasmic binding proteins (1992:

""Maltoosittoman MBP:n valmistelu

MBP puhdistettiin affiniteettikromatografialla ja dialysoitiin laajasti olosuhteissa, joiden laskettiin poistavan suurimman osan sitoutuneesta maltoosista. Joitakin kokeita varten MBP denaturoitiin 6M guanidiinihydrokloridissa (Gdn-HCl) ja joko dialysoitiin 6M Gdn-HCl:n kanssa tai johdettiin Sephadex G25 -kolonnin läpi, joka oli tasapainotettu 6M Gdn-HCl:llä, ennen kuin se uudelleenkyllästettiin dialyysillä 10mM KP1:n kanssa (pH 7,0). UV-differenssispektroskopia osoitti, että suurin osa MBP:stä oli maltoosivapaata."""

Toivottavasti kuulemme sinusta pian.

Martin"