Divisi pertama di Amerika Serikat yang dikerahkan sebagai tanggapan atas serangan ke Pearl Harbor, Divisi ke-27 berangkat dari Fort McClellan 14 Desember 1941 menuju California untuk membangun posisi pemblokiran terhadap invasi laut yang diantisipasi dari pantai barat daya Amerika Serikat. Mereka selanjutnya dipindahkan ke Teater Operasi Pasifik dan tiba di Hawaii, 21 Mei 1942, untuk mempertahankan pulau-pulau luar dari serangan amfibi. 165 Infanteri dan Batalyon ke-3, 105 Infanteri pertama kali melihat aksi melawan musuh selama serangan dan penangkapan Makin Atoll di Kepulauan Gilbert, 21-24 November 1943. Batalyon 1 dan 3 dari Resimen 106 berpartisipasi dalam serangan di Eniwetok Atoll
, 19-26 Februari 1944, kembali ke Oahu pada bulan Maret. Selama misi ini, Batalyon ke-2, Infanteri ke-106 mendarat tanpa perlawanan di Pulau Majuro, 1 Februari, dan menyelesaikan penangkapan pada 3 Februari. Divisi ini memulai persiapan untuk operasi Mariana, 15 Maret. Pada D-day plus 1, 16 Juni 1944, elemen mendarat di malam hari di Saipan untuk mendukung Divisi Marinir Kedua dan Keempat. Sebuah beachhead didirikan dan Aslito Airfield direbut, 18 Juni. Pertempuran berlanjut sepanjang bulan Juni. Jenderal Marinir Holland Smith, tidak puas dengan kinerja Divisi ke-27, membebaskan komandan, Jenderal Angkatan Darat Ralph C. Smith., yang menyebabkan saling menuduh dari komandan senior Angkatan Darat, termasuk Kepala Staf Angkatan Darat George C. Marshall. Selama pertempuran, 7 Juli, Jepang mengalahkan elemen divisi dalam serangan banzai, tetapi perlawanan terorganisir dihancurkan keesokan harinya. Selama bulan Juli dan Agustus, pasukan ke-27 membersihkan kantong-kantong terpencil di pegunungan dan tebing Saipan.