Setelah menunjukkan bahwa enzim dapat berfungsi di luar sel hidup, langkah selanjutnya adalah menentukan sifat biokimia mereka. Banyak pekerja awal mencatat bahwa aktivitas enzimatik dikaitkan dengan protein, tetapi beberapa ilmuwan (seperti pemenang Nobel Richard Willstätter) berpendapat bahwa protein hanyalah pembawa untuk enzim sejati dan bahwa protein itu sendiri tidak mampu melakukan katalisis. Namun, pada tahun 1926, James B. Sumner menunjukkan bahwa enzim urease adalah protein murni dan mengkristalisasi itu; Sumner melakukan hal yang sama untuk enzim katalase pada tahun 1937. Kesimpulan bahwa protein murni dapat menjadi enzim terbukti secara definitif oleh Northropites dan Stanley, yang bekerja pada enzim pencernaan pepsin (1930), trypsin dan chymotrypsin. Ketiga ilmuwan ini dianugerahi Hadiah Nobel Kimia pada tahun 1946. Penemuan ini, yang diterbitkan oleh David Phillips, menunjukkan bahwa enzim dapat dikristalisasi dengan air liur, dan bahwa protein itu sendiri tidak mampu melakukan katalisis.
Hadiah Nobel dalam Kimia