Baada ya kuonyesha kwamba enzymes inaweza kazi nje ya kiini hai, hatua ya pili ilikuwa kuamua asili yao biochemical. wafanyakazi wengi mapema alibainisha kuwa shughuli enzymatic alikuwa kuhusishwa na protini, lakini wanasayansi kadhaa (kama vile Nobel laureate Richard Willstätter) alisema kuwa protini walikuwa tu wabebaji kwa ajili ya enzymes kweli na kwamba protini per se hawakuwa na uwezo wa catalysis. Hata hivyo, mwaka 1926, James B. Sumner alionyesha kwamba urease enzyme ilikuwa protini safi na crystallized yake; Sumner alifanya vivyo hivyo kwa catalase enzyme katika 1937. hitimisho kwamba protini safi inaweza kuwa enzymes ilikuwa dhahiri kuthibitishwa na Northropites na Stanley, ambao walifanya kazi juu ya digestive enzymes pepsin (1930), trypsin na chymotrypsin. Wanasayansi hawa watatu walikuwa tuzo ya Tuzo ya Nobel katika Biochemistry mwaka 1946. Ugunduzi huu uliongozwa na David Phillips, kwamba enzymes inaweza kuwa crystallized kwa mionzi ya mate, na kwamba protini kwa yenyewe hawakuwa na uwezo wa catalysis. Hata hivyo, katika 1926, James B. Sumner
Tuzo ya Nobel ya Kemia