بعد ان اظهرت انزيمات يمكنها ان تعمل خارج الخلية الحية، كانت الخطوة التالية هي تحديد طبيعتها الكيميائية الحيوية. لاحظ العديد من العاملين في وقت مبكر ان النشاط الانزيمي مرتبط بالبروتينات، ولكن العديد من العلماء (مثل الحائز على جائزة نوبل ريتشارد ويلشتتر) جادلوا ان البروتينات كانت مجرد ناقلات للأنزيمات الحقيقية وان البروتينات بحد ذاتها غير قادرة على التحليل. ومع ذلك، في عام 1926، أظهر جيمس بي سومنر ان انزيم يوريز هو بروتين نقي وبلور؛ قام سومنر بنفس الطريقة بالنسبة لإنزيم كاتالاز في عام 1937. تم إثبات الاستنتاج ان البروتينات النقية يمكن ان تكون انزيمات بشكل نهائي من قبل نورثروب وستانلي، الذين عملوا على انزيمات الهضم بيبسين (1930), تريبسين و كيموتريسين. حصل هؤلاء العلماء الثلاثة على جائزة نوبل في الكيمياء في عام 1946. نشر العديد من العلماء
جائزة نوبل في الكيمياء