Sam Holbrook aloitti tuomarin uransa Appalachian League -liigassa vuonna 1990, jonka jälkeen hän pelasi Keskilännessä, Carolinassa, Teksasissa, Itä- ja Kansainvälisissä liigoissa - ennen Major League -debyyttinsä tekemistä kesäkuussa 1996. Holbrook työskenteli vuoden 1996 kaudella American League:ssä, jota seurasi kolme kautta National League:ssä. Vuonna 1999 hän oli yksi 22 tuomarista, joiden ero hyväksyttiin (epäonnistuneessa liiton neuvottelutaktiikassa), ja hänet palkattiin uudelleen vuonna 2002, ja hän on tuomarin toiminut siitä lähtien molemmissa Major Leaguesissa. Holbrook on ollut tuomari viidessä Division Series -sarjassa (2005, 2007, 2010, 2013, 2019), neljässä League Championship Series -sarjassa (2008, 2009, 2011, 2012) ja kolmessa World Series -sarjassa (2010, 2016).
(EUVL L 347, 20.12.2019) Hän myös tuomitsi vuoden 2004 MLB All-Star -pelin. Holbrook nimitettiin MLB:n joukkueen päälliköksi helmikuussa 2017. Hänen joukossaan vuonna 2017 ovat Greg Gibson, Jim Wolf ja D.J. Reyburn.