A primeira división dos Estados Unidos que se desplegou en resposta ao ataque a Pearl Harbor, a 27a División partiu de Fort McClellan o 14 de decembro de 1941 para California para establecer posicións de bloqueo contra unha invasión marítima anticipada da costa suroeste dos Estados Unidos. Foron trasladados ao Teatro de Operacións do Pacífico e chegaron a Hawai, o 21 de maio de 1942, para defender as illas exteriores do ataque anfibio. A 165a Infantería e o 3o Batallón, 105a Infantería viron por primeira vez acción contra o inimigo durante o ataque e captura do atol Makin nas Illas Gilbert, 21-24 de novembro de 1943. Os 1o e 3o Batallóns do 106o Regimento participaron no ataque ao atol Eniwetok
19-26 de febreiro de 1944, volvendo a Oahu en marzo. Durante esta misión, o 2o Batallón, 106a Infantería desembarcou sen oposición na illa de Majuro, o 1 de febreiro, e completou a súa captura, o 3 de febreiro. A división comezou os preparativos para as operacións das Marianas o 15 de marzo. O día D máis 1, o 16 de xuño de 1944, os elementos desembarcaron de noite en Saipan para apoiar ás Divisións de Marines Segunda e Cuarta. A cabeza de praia foi establecida e o aeródromo de Aslito capturado o 18 de xuño. Os combates continuaron durante todo o mes de xuño. O xeneral de marines Holland Smith, insatisfeito co desempeño da 27a División, relevou ao seu comandante, o xeneral de Exército Ralph C. Smith, o que levou a recriminacións furiosas de altos comandantes do Exército, incluído o xefe de Estado Maior George C. Marshall. Durante unha batalla campal, o 7 de xullo, os xaponeses invadiron elementos da división nun ataque banzai, pero a resistencia organizada foi esmagada o día seguinte. Durante os meses de xullo e agosto, o 27 limpou os bolsillos illados nas montañas e os penedos de Saipan.