În februarie 1567, reședința lui Darnley a fost distrusă de o explozie, iar el a fost găsit ucis în grădină. James Hepburn, al 4-lea conte de Bothwell, a fost considerat în general a fi orchestrat moartea lui Darnley, dar a fost achitat de acuzație în aprilie 1567, iar în luna următoare s-a căsătorit cu Mary. După o revoltă împotriva cuplului, Mary a fost închisă în Castelul Loch Leven. La 24 iulie 1567, a fost forțată să abdice în favoarea fiului ei de un an. După o încercare nereușită de a recâștiga tronul, a fugit spre sud, căutând protecția verișoarei sale de rang întâi, odată îndepărtată, Regina Elisabeta I a Angliei.
Mary, ce faci?