Regimentul a fost mobilizat în serviciul federal pe 12 iulie 1861, şi a plecat spre capitala războiului, ajungând de-a lungul Potomacului pe 25 august. La 21 octombrie, a fost angajat cu cea mai mare pierdere dintre toate regimentele federale în bătălia de la Ball's Bluff. În primăvara anului 1862, a făcut parte din Corpul II al Armatei Potomacului și l-a însoțit în timpul Campaniei Peninsulare, fiind angajat în Bătăliile de la Seven Pines.
, Staţia Savage, şi Glendale cu pierderi modeste. În aprilie 1862, Regimentul a fost atașat de 1st Company Massachusetts Sharpshooters, care a servit până în primăvara anului 1863. Petrecând cea mai mare parte a verii la Harrison's Landing, a plecat în august, la timp pentru a pierde a doua bătălie de la Bull Run. Regimentul s-a angajat apoi în campania din Maryland, unde a fost flancat cu sălbăticie de confederați în bătălia de la Antietam, pierzând peste 50% din cei 600 de oameni ai săi. În timpul bătăliei de la Fredericksburg, a fost ținută în afara asaltului principal asupra Marye's Heights și a suferit relativ puține pierderi. Bătălia de la Gettysburg a găsit regimentul angajat împotriva asalturilor Armatei Virginiei de Nord pe 2 și 3 iulie 1863, cu pierderi grele. Până în 1864, forța regimentului a scăzut, dar încă se confrunta cu campanii riguroase cu acțiuni în Bătălia de la Wilderness, Spotsylvania, Cold Harbor și Asediul Petersburgului. Până la 22 iunie, regimentul putea avea doar 75 de ofițeri și soldați. Acest mic grup a fost capturat în masă în acea zi când au fost depășiți de o forță confederată pe Drumul Plank din Ierusalim. Supraviețuitorii și eliberatorii condiționați au fost scoși din serviciul federal pe 26 iulie 1864, iar recruții și reînrolatorii au fost transferați la 20th Massachusetts Volunteer Infantry.