Cuando Carlos II murió en 1685, el padre de Ana se convirtió en el rey Jacobo II de Inglaterra y VII de Escocia. Para consternación del pueblo inglés, Jacobo comenzó a dar a los católicos cargos militares y administrativos, en contravención de las Acciones de Prueba que estaban diseñadas para evitar tales nombramientos. Ana compartió la preocupación general y continuó asistiendo a los servicios anglicanos. Como su hermana María vivía en los Países Bajos, Ana y su familia eran los únicos miembros de la familia real que asistían a los servicios religiosos protestantes en Inglaterra. Cuando su padre trató de que Ana bautizara a su hija menor en la fe católica, Ana estalló en lágrimas. "La Iglesia de Roma es perversa y peligrosa", le escribió a su hermana, "sus imaginaciones <unk>la mayoría de ellas<unk> son claramente de idolatría". Anne se alejó de su padre y su madrastra, dándole trabajos a los católicos, en contravención de las Acciones de Prueba que estaban diseñadas para evitar tales nombramientos.
Acciones de prueba