El escuadrón fue formado como el 335o Escuadrón Real de Persecución Helénica (335 Βασιλική Ελληνική Μοίρα Διώξεως, 335 Β.Ε.Μ.Δ.), designado dentro de la Fuerza Aérea Real Británica como No 335 (Greek) Squadron, el 10 de octubre de 1941 en el aeródromo de Aqir en Palestina. Su primer comandante fue el líder de escuadrón Xenophon Varvaressos, y el personal fue provisto de un núcleo de pilotos griegos que estaban recibiendo entrenamiento en Irak, aumentado por otros que habían huido de Grecia. Inicialmente fue equipado con aviones Hurricane Mk I, y empleado durante el entrenamiento en tareas defensivas hasta enero de 1942. Posteriormente, el escuadrón fue trasladado a El Daba en Egipto, donde fue declarado totalmente operativo el 12 de febrero de 1942. El escuadrón comenzó a operar sobre el Desierto Occidental, donde operó continuamente hasta finales de 1942, participando en la protección de convoyes, escolta de bombarderos y roles de ataque terrestre. Entre junio y septiembre de 1942, fue reequipado con Hurricane IIBs. Bajo el mando del Comandante de Escuadrón Ioannis Kellas, el escuadrón participó en las operaciones aéreas de la Segunda Batalla de El Alamein; el 28 de octubre de 1942, el segundo aniversario de la invasión italiana de Grecia
, el escuadrón organizó un ataque de bombardeo contra el cuartel general del XX Cuerpo Italiano, una operación que fue un gran impulsor de la moral para los griegos expatriados.