A glükóz előállítása olyan vegyületekből, mint a piruvát, a laktát, a glicerol, a glicerát-3-foszfát és az aminosavak, gluconeogenesisnek nevezik. A gluconeogenesis piruvátot glükóz-6-foszfátra alakít át egy sor közbenső szervön keresztül, amelyek közül sok glikolízissel közös. Azonban ez az út nem glikolízissel történik visszafelé, mivel számos lépést nem glikolízissel rendelkező enzimek katalizálnak. Ez fontos, mivel lehetővé teszi a glükóz képződését és lebomlását, és nem tudja szabályozni, és megakadályozza, hogy mindkét út egy ciklusban futjon.
A gerinceseknek a zsírsavakból ketontesteket kell előállítaniuk, hogy helyettesítsék a glükózt olyan szövetekben, mint például az agy, amely nem tudja metabolizálni a zsírsavakat.