Sam Holbrook az Appalachian League-ben kezdte a bírói karrierjét 1990-ben, majd a Midwest, Carolina, Texas, Eastern és International League-ben, mielőtt 1996 júniusában debütált a Major League-ben. Holbrook az 1996-as szezonban az Amerikai Ligában dolgozott, majd három szezonban a Nemzeti Ligában. 1999-ben egyike volt a 22 bírónak, akiknek a lemondásait elfogadták (egy sikertelen szövetségi tárgyalási taktikában), és 2002-ben újra felvették, azóta mindkét főligában játszott játékokat. Holbrook öt Divíziós Sorozatban (2005, 2007, 2010, 2013, 2019), négy Liga Bajnoki Sorozatban (2008, 2009, 2011, 2012) és három Világsorozatban (2010, 2016) játszott.
, 2019). 2004-ben ő bírálta az MLB All-Star Game-t is. Holbrookot 2017 februárjában nevezték ki a MLB csapatfőnökének. 2017-ben Greg Gibson, Jim Wolf és D.J. Reyburn csatlakozott a csapatához.