La plej signifa rilato de la vivo de Hepburn estis kun Spencer Tracy, ŝia kunstelulo en naŭ filmoj. En ŝia aŭtobiografio, ŝi skribis, "Ĝi estis unika sento, kiun mi havis por [Tracy]. Mi farintus ion ajn por li". En sia aŭtobiografio, ŝi skribis, "Ĝi estis unika sento, kiun mi havis por [Tracy]. Mi farintus ion ajn por li". Lauren Bacall, proksima amiko, poste skribis pri kiel "blinde" enamiĝinta Hepburn estis kun la aktoro. La rilato poste estis diskonigita kiel unu el la legendaj amaferoj de Holivudo. Renkontiĝante kiam ŝi estis 34 kaj li estis 41, Tracy estis komence singarda de Hepburn, ne impresita de ŝiaj malpuraj ungoj kaj suspektante ke ŝi estis lesbanino, sed Hepburn diris ke ŝi "konis tuj ke [ŝi] trovis lin nerezistebla". Tracy restis edziĝinta dum sia tuta kariero.
konsideron por la familio de Tracy