Vanaf de eerste vorming in augustus 1861 werd het regiment bekend als een van de meest gedisciplineerde regimenten van Indiana vanwege zijn infanterie manoeuvres, die gebaseerd waren op Pruisische infanterie tactieken en trompetoproepen, en de algemene goede gezondheid van zijn mannen. Tijdens 1861 en 1862 waren de belangrijkste gevechten van het regiment de Slag bij Rowlett's Station, de Slag bij Shiloh, de Belegering van Corinth en de Slag bij Stones River. In 1863 nam het 32ste Indiana deel aan drie grote campagnes: de Tullahoma-campagne, de Chickamauga-campagne en de Chattanooga-campagne. In 1864 voegde het regiment zich bij de Atlanta-campagne en vocht in de veldslagen bij Resaca.
Adairsville, New Hope Church, Dallas, Pickett's Mill, Marietta, Kennesaw Mountain, Peachtree Creek, Atlanta, Jonesborough en Lovejoy's Station. De 32e Indiana voltooide zijn dienst in Texas, en werd op 4 december 1865 opgeroepen.