Se extrajo ADN desde la muestra de sangre utilizando el kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega). Se realizó RPC utilizando los partidores EHR-OUT1 y EHR-OUT214 que amplifican el gen 16S ARNr de los géneros Ehrlichia y Anaplasma. La amplificación se realizó mediante el método de "touch down PCR", que consiste en 14 ciclos de denaturación por 30s a 95°C, anillamiento por 30s a 74,4°C (decreciendo la temperatura 0,5°C por ciclo) y extensión por 90s a 72°C14. Luego 19 ciclos de denaturación por 30s a 95°C, anillamiento por 30s a 67,4°C y extensión por 90s a 72°C, para terminar con una extensión final de 300s a 72°C utilizando 2,5 μL de ADN en un volumen final de reacción de 25 μL. El fragmento obtenido de aproximadamente 1.000 pares de bases se sometió a una nueva amplificación por RPC anidada utilizando partidores internos específicos para Ehrlichia spp GE2F y EHRL3-IP214. Para ello se utilizó 1 μL de la reacción anterior en un volumen final de 25 μL. La amplificación consistió en 35 ciclos de denaturación por 30 s a 95°C, anillamiento por 30 s a 50°C y extensión por 30 s a 72°C, para terminar con una extensión final de 300 s a 72°C. Se obtuvo la banda esperada de 120 pares de bases, que sugiere la presencia de Ehrlichia spp. Para identificar la especie de Ehrlichia se secuenció el producto de la primera RPC con el partidor reverso EHR-OUT2 obteniendo un fragmento de 210 pares de bases. Esta secuencia mostró homología de 100% con la cepa de E. canis (DQ915970.1) reportada en Perú en el año 200715. Se construyó un árbol filogenético basado en las secuencias del gen 16S ARNr utilizando el método del vecino más próximo (Neighbor-Joining); la matriz de distancia se calculó a través del método Kimura (two-parameter) con un análisis de confianza (bootstrap) de 1.000 replicaciones. El árbol filogenético se realizó utilizando el software MEGA 4.023.